肠杆菌科鉴定(全)
肠杆菌科鉴定(全)(精品)
多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌
与人类感染有关的肠杆菌科细菌有31个菌属， 其中临床标本中常见的菌属有15种
克雷伯菌属
爱德华菌属
邻单胞菌属
变形杆菌属
普罗威登斯菌属 沙门菌属
伯
臭鼻亚种
菌 ➢ 肺炎克雷伯菌（K. pneumonia鼻e）硬结亚种
属 ➢ 产酸克雷伯菌（K. oxytoca）
➢ 解鸟氨酸克雷伯菌（K. ornitThhiisnporloyptoiscaal ）is base on
➢ 植生克雷伯菌（K. planticola1s6）eSqurDeNncAinagndanrpdocBargbeonne
试验
摩根摩根菌 摩根菌(生物1群)
赖氨酸
-
+
动力
+
-
4.塔特姆菌属的鉴定
苯丙氨酸
H2S 枸橼酸盐 鸟氨酸 靛基质
+
-
-
-
-
5 .苯丙氨酸阳性组菌属鉴别索引图
苯丙氨酸+
+
H2S
－
靛基质
+
－
枸橼酸盐
+
－
普 通 变 形 杆 菌
鸟氨酸 侧金盏花醇 靛基质
+
－+
－+
－
奇 异 变 形 杆 菌
潘 氏 变 形 杆 菌
➢ 河生肠杆菌生物群1
3.肠杆菌属各种的鉴别
试 验 坂崎杆菌 阴沟杆菌 产气杆菌 格高菲杆菌
赖氨酸
－
－
+
肠道杆菌的分离鉴定
300
≤13
14~16
≥17
≤28
－
≥29
≤12
13~14
≥15Байду номын сангаас
≤12
13~14
≥15
≤11
12~14
≥15
≤13
14~22
≥23
≤15
16~20
≥21
≤12
13~16
≥17
七、肠道杆菌血清学鉴定
原理：细菌作为颗粒性抗原在相应抗体作用下可形成肉 眼可见的凝集颗粒。
可疑菌落 -阴性
可疑菌落 +阳性
标本
SS培养基
②
①
P
N ③
Name time 小辫法
④ 分区划线法
注意：每划完一个区进行下一区之前取菌环要灭菌
粪便标本接种： 标本：1）病人粪便（阳性标本）； 2）正常人粪便（阴性） 培养基：SS平板 操作：将SS平板上分两个区，分别接种病人和正 常人标本。 要求：使用正确的画线方法，必须培养出单个菌落以备后续实
氨苄西林
AM
ATCC25922 金黄色葡萄球菌
10
ATCC25923
大肠埃希氏菌
庆大霉素
GM
ATCC25922 金黄色葡萄球菌
10
ATCC25923
链霉素
S
大肠埃希氏菌 ATCC25922
10
金黄色葡萄球菌
红霉素
E
ATCC25923 肺炎链球菌
15
ATCC49619
磺胺甲基异 噁唑
SMX
金黄色葡萄球菌 ATCC25923
葡磷胨水 （绿色盖） E.a
葡磷胨水 （绿色盖） E.coli
肠杆菌科鉴定
菌1
样品1、样品2的黑色菌落纯化培养后均呈现“A/A” （上下层呈现黄色），可初步确定为大肠杆菌。 样品1中的接种三支红色菌落的双糖铁培养基中出现黑 色物质，初步确定为乙型副伤寒杆菌。样品2中的接种的 三支红色呈现“K/A”，推断是痢疾或伤寒杆菌。
生化反应鉴定
推断：根据样品 1、样品2的黑色 菌落的糖发酵试 验和动力学反应 情况，进一步确 定了黑色菌落属 大肠杆菌 根据糖发酵试验 和动力学反应， 也进一步确定样 品1的红1、2、3 都是乙型副伤寒 杆菌，样品2红1 红2是伤寒杆菌或 痢疾杆菌。
注：R1-1表示菌1红色1管
药敏试验：
根据药敏试验现象可见，痢疾杆菌和伤寒杆菌对一些 药物具有耐受性，而一些药物也能抑制其生长。
• 第五小组的鉴定实验结论：
• 从上的一系列实验鉴定出样品1、样品2的 黑色菌落是大肠杆菌，样品1的单一红色菌 落均为乙型副伤寒杆菌，样品2的红1和红2 为痢疾杆菌。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
+
+ -
-
-
生化反应鉴定（观察现象）：
血清学鉴定
观察结果： 在血清学鉴定中可见样品1的R1-1、 R1-2、R1-3四张滴加了伤寒杆菌 血清的玻片出现凝集现象，同时我 们发现在一张滴加了痢疾血清的玻 片也出现了R2-2，R2-1的凝集现 象，从而否定了上面生化反应鉴定 的R2-1、R2-2可能为伤寒杆菌的 推断，所以R2-1、R2-2为痢疾杆 菌。
肠杆菌科细菌鉴定
临医13（2）班第八小组
组员：张艺 1304505212 古仲嘉 1304505214
植瑞恩
1304505215
游裕婷
1304505216
EMB
1、初步推测平板上的黑色 （带金属感）菌落为大肠杆 菌，红色的单个菌落为痢疾 或伤寒杆菌
肠杆菌科细菌的培养与鉴定
－
＋＋
－
－
普通变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F ＋ ＋ － －/+ ＋
＋
＋－
－
－
奇异变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ +/－ +/－ ＋
＋
＋－
＋
－
志贺菌
K/A － － － F －/＋ ＋ － － ＋
－
－－
－
－
沙门菌
K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ － ＋ ＋
－
－＋
＋ +/－
注：A：产酸；K：产碱；+：90%以上菌株阳性；-：90%以上菌株阴性；+/-： （50-90）%菌株阳性；-/+：（50-90）%菌株阴性；沙门菌与志贺菌除鉴定到种以 外，还应进行和特异性血清凝集实验鉴定血清型。
大肠埃希菌生化鉴定反应结果
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
革兰染色为阴性杆菌，大小为(0.3-1.5) μm×(0.66)μm。单个、成双或短链状排列。可见透明环状荚膜。
革兰阴性杆菌荚膜
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
在血琼脂平板上培养18-24h，形成较大、粘、圆形、凸 起、灰白不溶血的大菌落。
沙雷菌属(Serratia)
血平板上形成光滑、湿润、圆形、中心呈颗粒状的菌落。 大多不透明，可呈现白色、粉色、红色菌落。
血平板上黏质沙雷 菌落形态
巧克力平板上黏质 沙雷菌落形态
总
结
肠杆菌科细菌生化鉴定反应选择：氧化酶、触酶、克氏双 糖铁、半固体、甲基红、V-P、枸橼酸盐、苯丙氨酸脱氨 酶、硝酸盐、尿素、赖氨酸脱羧酶(LYS)、鸟氨酸脱氨酶 (ORN)、精氨酸脱氨酶(ARG)。
肠杆菌科的鉴定
肠杆菌科的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。
1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。
1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。
1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。
1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。
血标本不要冷冻。
1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。
2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。
4、试验方法及原理：4.1 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。
结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。
注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。
（2）．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。
所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。
若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。
4.2 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。
结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。
4.3 尿素培养基方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：培养基变红为尿素阳性，不变色为阴性。
4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：有细菌生长培养基变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。
4.5 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。
结果：培养基变紫色为阳性，黄色为阴性。
长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法
长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类革兰氏阴性菌，广泛存在于土壤、水体和动植物体内，包括一些重要的致病菌。
长春阴沟是一个具有特殊环境的地方，肠杆菌科的检测和鉴定成为了评估环境污染和食品安全的重要手段。
以下是长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法。
1. 样品采集与处理：从长春阴沟中采集水样、土壤样或者其他可能存在肠杆菌科的样品。
样品应当采集之后立即送往实验室进行处理，以避免结果的误差。
2. 培养基选择：选择适合肠杆菌科生长的培养基，例如大肠杆菌选择性琼脂培养基（MacConkey Agar）、肠球菌选择性琼脂培养基（Xylose Lysine Deoxycholate Agar）等。
3. 接种与培养：取样品进行接种，可以通过涂布法、点刺法或浸渍法进行。
接种后，将培养基置于适宜温度（通常为37摄氏度）下培养一定时间（通常为24-48小时）。
4. 形态观察：观察培养物的形态特征，肠杆菌科菌落常常呈现出光滑且圆形的形态。
5. 肽聚糖酶试验：常用的肠杆菌科鉴定方法之一是进行肽聚糖酶试验。
该试验通过检测菌落中的特定酶活性来判断是否属于肠杆菌科。
如甲基红-VP试验、氧化/发酵糖试验等。
6. 生化特性鉴定：可以通过测定菌株的生化特性，如产气性、产酸性、利用特定碳源等来鉴定肠杆菌科细菌。
常用方法包括三糖铁琼脂（TSI）培养基试验、尿素氨酶试验、甲基红-VP试验等。
7. 分子生物学方法：近年来，利用PCR、基因测序等分子生物学技术也被广泛应用于肠杆菌科的鉴定。
通过检测菌株的DNA序列可以更加准确地确认肠杆菌科的种类。
总之，通过样品的采集、培养、形态观察、生化特性鉴定和分子生物学方法，可以对长春阴沟中的肠杆菌科进行鉴定。
这些基本方法在评估环境污染和食品安全方面起到了重要作用。
肠杆菌科的检验 微生物实验
实验三：肠杆菌科的检验一、接种细菌：MAC培养基接种大肠埃希菌和变形杆菌，SS培养基接种福氏志贺菌和乙型副伤寒沙门菌，采用分区划线法，放在35℃温箱中培养18—24h。
二、观察肠道杆菌在MAC和SS平板上的菌落形态。
1、SS平板：1）福氏志贺菌形成无色、半透明、光滑、湿润、突起、直径为1—2mm大小的菌落；2）乙型副伤寒沙门菌为中心带黑褐色，其余部分为半透明、光滑、湿润、突起的小菌落2、MAC平板：1）大肠埃希菌形成红色、圆形、凸起、边缘整齐、多数为光滑型的菌落。
中等大小。
2）变形杆菌为圆形、扁平、无色、半透明的菌落。
三、涂片、革兰染色将玻片分为四个区域，并分别标记，将四种肠道杆菌分别在四个区域内的生理盐水中研磨，待其自然干燥后固定，采用“改良快速法”进行染色，结果如图所示：福氏志贺菌乙型副伤寒沙门菌变形杆菌大肠埃希菌G-杆菌G-直杆菌，较细长G- 杆菌G-直短杆状显微镜检查特征为革兰阴性杆菌，肠杆菌科多数细菌的形态及染色性相似，根据形态及染色性难以相互鉴别。
四、生化试验：1、氧化酶试验（纸片法）：在滤纸条上滴一滴氧化酶试剂，用无菌接种环挑取待测菌落在滤纸条上滴了试剂的部位研磨，；滤纸变为红色则为阳性，不变色为阴性，结果表明，以上四种肠道杆菌的氧化酶试验均为阴性。
2、接种KIA、MIU上。
五、2、微量生化：六、沙门菌、志贺菌的血清学鉴定：1、在洁净载玻片上两端分别滴加一滴志贺菌四种多价血清和福氏四价血清，各取一环志贺菌在两种血清上研磨10S，观察两组结果均出现肉眼可见的凝集物，提示该菌为福氏志贺菌。
2、采用同上方法，在洁净玻片上分别在其两端滴加一滴沙门菌多价O（A—F）和Hd血清，各取一环待测菌与之混合，研磨10S，几分钟后观察两组结果，出现肉眼可见的颗粒状凝聚物表示该菌为乙型副伤寒沙门菌。
七、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。
肠杆菌分离鉴定
肠杆菌分离鉴定
第1页
试验目标
熟悉待检菌培养特征及菌落特点 掌握待检菌革兰氏染色特征 掌握肠杆菌判定方法
肠杆菌分离鉴定
第2页
试验材料
待检菌 革兰氏染液 肠杆菌科生化判定管 肠杆菌科生化判定手册
肠杆菌分离鉴定
第3页
试验内容
观察待检菌菌落特征并统计 对待检菌进行革兰氏染色并统计其染色
特征
肠杆菌分离鉴定
第4页
试验内容
肠杆菌科细菌判定程序
G杆菌
O/F(F)
氧化酶（—）
肠杆菌科生 化判定管
肠杆菌分离鉴定
第5页
试验内容
.氧化酶试验 （1）原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶
系统最终呼吸酶。
（2）试剂：1%盐酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯 二胺。
（3）方法：常见方法有三种； 1）菌落法：直接滴加试剂于被检菌菌落上。 2）滤纸法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。 3）试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取 菌涂于试剂纸上。
肠杆菌分离鉴定
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试验汇报
统计待检菌菌落特征及革兰氏 染色特征
统计生化判定管结果及细菌判 定结果
肠杆菌分离鉴定
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肠杆菌分离鉴定
第6页
试验内容
（4）结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为 阳性。为确保结果准确性，分别以铜绿假单胞菌和大 肠埃希菌作为阳性和阴性对照。 （5）应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌（不 动菌属和嗜麦芽窄食单胞菌）判别，前者为阴性，后 者为阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。
肠杆菌科鉴定(全)
主讲人：王曦晖
整理ppt
一.分布
9版伯杰鉴定细菌手册分为24个属， 108个种 现增加到31个属,常见的15个属 1.占临床分离菌总数50% 2.占G-杆菌总数80% 3.占败血症50% 4.占尿路感染70
整理ppt
二.临床意义
有些菌属对人类有明显的致病作用 1、鼠疫耶耳森菌--引起烈性传染病 2、 埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、
法玛丽枸橼酸杆菌 （C. farmeri）
整理ppt
1.枸橼酸杆菌属各种的鉴别
➢注意：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类资料
整理ppt
2.爱德华菌属各种的鉴别
整理ppt
3.埃希菌属种的鉴别
整理ppt
临床意义 (Clinical Significance)
赖氨酸
鸟氨酸 －
－
+
－
菌 产 靛基质
菌 阴 丙二酸盐 枸橼酸盐
山梨醇 菌 多
Байду номын сангаас
气+
－ 沟 + －－
+
－
+源
肠菌 产 山梨醇 肠 菌 鼻 菌 臭菌 哈 山梨醇 菌 贩 菌 阴 肠
杆酸 + － 杆 硬 鼻 夫 －
+崎
沟杆
克 菌肺菌红
雷 炎色 伯 克沙
雷雷 伯
结 克 尼菌 格 阿拉伯糖 肠
肠
克 雷 亚 高－
苯丙，葡盐, 枸, 硝, 赖, 鸟, 氨对, 山, 肌,
侧, 吲哚
硝酸盐还原
+
嗜麦芽
整理ppt
－ 不动
概 述
科的特征
种属鉴定
硝酸盐还原＋ 葡萄糖发酵 氧化酶 －
肠杆菌科(Enterobacteriaceae)细菌鉴定
肠外感染：泌尿系统最常见的病原菌，以及其他各类 感染包括菌血症、肺部感染、腹膜炎、腹部手术继 发感染等。
肠内感染：
肠毒素性大肠杆菌（ETEC）：质粒介导，LT、ST
肠致病性大肠杆菌（EPEC）：O55、O111等血清 型
肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）：
肠出血性大肠杆菌（EHEC）：溶原噬菌体编码 Vero毒素（VT-1，VT-2），常致溶血尿毒综合症 （HUS）。代表菌O157：H7。
肠凝集性大肠杆菌（EaggEC）：无LT，ST，不 能用血清分型。
• 生长特性：
培养基，环境，染色，同肠杆菌科特点；
菌落形态：
BAP：圆，光，湿，灰白，某些菌株溶血；
选择培养基：通常，发酵乳糖，有色菌落，EMB 上有金属光泽。
• 实验室鉴定：
初步鉴定； KIA：A/A，产气，H2S（-）； IMVC：+ + - -
菌落形态：
普通培养基：光滑型，粗糙型，
选择培养基：无色，透明或半透明（宋内 氏可迟缓发酵乳糖）
• 实验室鉴定(laboratory identification)：
初步鉴定(preliminary identification)： ✓ 选择培养基上可疑菌落 ✓ KIA：K/A - -，动力-
特殊病程: 标本采集：未使用抗生素前提下 第一周分离阳性 血液90% 粪便10% 第三周分离阳性 血液50% 粪便85% 尿25%
使用抗生素后：骨髓，玫瑰疹
• 生长特性(growth characteristic)
染色：G-，直杆，较细长，周鞭毛
菌落形态：
普通培养基：光滑型，粗糙型
选择培养基：略小，乳糖不发酵， 多数可产H2S（SS上菌落中央黑色）
肠杆菌科生化检测
吲哚（靛基质，无
色），与对二甲基氨 大
伤
基苯甲醛结合生成玫 肠
寒
瑰色的吲哚。本实验
主要用于肠杆菌科细
菌的鉴定。
尿素酶实验
原理：有些细菌能产生 尿素酶，将尿素分解、 产生2个分子的氨，使 培养基变为碱性，酚红 呈红色（指示剂）。
少数有荚膜
固体：S 透明菌落
周鞭毛(志贺氏菌无） 液体：均匀浑浊
菌毛
Company Logo
生化反应：活泼 生化鉴定-乳糖发酵 致病菌：不发酵乳糖 非致病菌：发酵乳糖
抗原结构复杂 O抗原、H抗原和荚膜抗原。 抵抗力 对理化因素抵抗力不强。 易变异 易出现变异菌株，最常见的是耐药性变异。
肠杆菌科生化检测
LOGO
概述
肠杆菌科:是一群生物学性状相似的G-杆菌，寄 居于人和动物的肠道。
目前已有44个属，170多个种。 多数是肠道的正常菌群 少数为致病菌，可引起人类肠道传染病 机会致病菌致病
Company Logo
肠杆菌科的共同特点
形态与结构
培养
G- 杆菌
兼性厌氧或需氧
无芽胞
营养要求不高
单糖发酵实验
胶塞颜色 红 黄 蓝 白 黑
指示剂：溴甲酚紫
红 pH 5.2-6.8
黄-紫
（产酸变黄）葡乳麦甘蔗Βιβλιοθήκη Department of
葡 乳麦 甘 蔗
Department of
葡 乳麦 甘 蔗
Department of
副甲
葡乳 麦甘 蔗
吲哚实验
原理：有些细菌具有
色氨酸酶，能分解蛋
白胨中的色氨酸产生
加入乳糖：当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌 带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫 黑色菌落，并带有绿色金属光泽。
糖发酵试验肠杆菌科鉴定的基本方法
糖发酵试验肠杆菌科鉴定的基本方法
糖发酵试验是一种常用的肠杆菌科鉴定方法，其基本步骤如下：
1. 首先准备含有对应糖类的培养基，如葡萄糖、乳糖、果糖、蔗糖等。
每种糖类分别制备一组。
2. 取不同菌落形态的待测菌涂于相应的糖类培养基表面。
同时在每种糖类培养基上均涂上一株阴性对照菌（如大肠杆菌）和一株阳性对照菌（如肠球菌）。
3. 培养板置于适宜的环境温度下进行培养。
4. 观察培养板上菌落的生长状况和糖类的发酵情况。
如果待测菌菌落周围出现黄色或者其他酸性产物，则表明该菌可以发酵对应的糖类。
5. 根据发酵结果，判定待测菌属于肠杆菌科。
6. 鉴定结果还可以进一步进行分子生物学检测，比如PCR扩增、序列检测等。
需要注意的是，糖发酵试验不是一种特异性非常高的鉴定方法，可能会存在一些假阳性结果。
因此，为了提高鉴定的准确性，还需要结合其他鉴定方法进行综合分析。