人类性染色质小体的制备与观察(新)
实验五 人体细胞Barr氏小体的制备与观察
间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大小的反光极强 的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观察结果 可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核 膜较远或接近核中央制备与观察
一、实验目的
掌握 X - 染色质鉴别方法，识别 X - 染色质的 形态特征及部位。
二、原理
巴氏小体，又叫巴尔体（Barr body），指雌性动物的体细胞在间期 时，在核膜内面的一块染色很深的染色质。巴氏小体实际上是浓缩 了的X染色体，其上的基因不转录。 哺乳动物的雌性细胞有两个X染色体，其中一条来自母方，另一条 来自父方，在胚胎发育的早期，这两个X染色体中的一条浓缩形成 巴氏小体，因此雌性哺乳动物的体细胞中都含有一个巴氏小体和一 个能转录的X染色体，而雄性哺乳动物的体细胞有一条可转录的X 染色体和一条Y染色体。随着细胞分裂，巴氏小体也要复制，但上 面的基因从不转录。如果这个动物是三倍体，体细胞中也只有一个 能转录的X染色体，其余的X染色体都会浓缩形成巴氏小体。 巴氏小体只有女性有，巴氏小体数=X染色体数-1。
三、材料
人口腔黏膜细胞
四、方法步骤——人体细胞Barr氏小体的制备与观察 用灭菌牙签刮取口腔黏膜细胞； 涂片与风干（涂抹一下，不要来回涂）； 染色及压片（滴卡宝品红压片）： 染色10min后，盖上盖玻片，一头蒸馏水冲 洗，另一头用滤纸吸干。
五、观察结果——Barr body
观察人不同形态的X-染色体，并绘图
人类性染色质标本的制备和观察
内容步骤
实验一
（二）X染色质标本的制备与观察
1、制作过程： 取材（漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标
本） → 涂片 → 染色（滴1～2滴染液） → 盖片（染色5-8min） → 压片（吸去多余染液） → 镜下观察
2、观察（高倍镜）
实验一
1、几对基本概念 2、X染色质形成机制——Lyon假说
实验一
X染色质
实验一
Lyon假说:
（1）正常女性体细胞内仅有1条X染色体有活性，另 一条X染色体在遗传上是失活的，在间期细胞 核中高度螺旋化而呈异固缩的X染色质。
（2）X染色体失活发生在胚胎早期。 （3）X染色体失活的随机性和恒定性。
实质：失活的X染色体 意义：X染色体的剂量补偿 X染色质的数目=X染色体数-1
（2）识别X染色质的标准：（高倍镜下） 位置：紧贴核膜内侧缘，轮廓清楚，唯一深染的小体 大小：直径为1-1.5um，即小于核直径的1/10 形态：一般为平凸形，三角形或为卵圆形
实验一
内容步骤
实验一
（二）X染色质标本的制备与观察
1、制作过程： 取材（漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标
本） → 涂片 → 染色（滴1～2滴染液） → 盖片（染色5-8min） → 压片（吸去多余染液） → 镜下观察
人类性染色质标本的制备、 分析和PTC尝味实验
实验一
目的与要求
1. 掌握：人类间期细胞核中性染色质的形成 机制。（重点，难点）
2.熟悉：X染色质标本的制作方法；熟悉人类 间期细胞核中性染色质的形态特征和分布。
3.了解： PTC尝味实验方法及这种单基因遗传 性状的遗传规律。
内容步骤
人类X染色质的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要：人类X染色质（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。
根据X染色体失活与Lyon假说，雌性哺乳动物的两条X染色体中，只有一条X染色体有转录活性，另一条X染色体无转录活性，呈固缩状，形成X染色质。
失活发生在胚胎发育早期，且失活是随机的。
本实验以人口腔颊部粘膜细胞、发根毛囊细胞为材料制备X染色质标本，通过硫瑾染色、压片等方法观察巴氏小体。
本次试验的目的是掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位，了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1.引言1.1巴氏小体人类有23对染色体，其中22对为常染色体，另一对为性染色体。
女性为XX，男性为XY。
X与Y染色体有一部分是同源的，在减数分裂时可以相互配对，其余部分则不同源。
Y 染色体含有很少的基因，而X染色体则含有大量的基因。
男性与女性的常染色体数目是一样的，所含有的基因数目也相等；但是女性含有两条X染色体，而男性一条X一条Y，因此女性性染色体所携带的基因剂量远高于男性，然而研究发现女性伴性遗传基因的表达剂量与男性是大体相同的，其原因可以用剂量补偿效应解释。
剂量补偿效应(dosage compensation effect)的定义: 在XY性别决定机制的生物中，使性连锁基因在雌、雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。
也就是说，在雌性和雄性细胞里，由X染色体基因编码产生的酶或其它蛋白质产物在数量上相等或近乎相等。
剂量补偿存在两种情况，雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活)，只有一条X 染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的；另一种是X染色质的转录速率不同，如果蝇雌性细胞中两条X染色体都有活性，但它们的转录速率低于雄性细胞X染色体的转录速率。
人类性染色质小体的制备和观察
箭头所示为巴氏小体（女性细胞[左]中存在，男性细胞[右]中没有）
六、注意事项
1．在实验中取材时应该注意安全； 2．如果用毛囊细胞进行试验，采样前应清 洗头发，因出油后拔漱口数次，用洁净牙签 从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次， 第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片 上。 固定：口腔粘膜细胞加入新配置的固定液 （95%乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min （固定液勿干）以上，空气干燥。
3）染色、制片 滴加染液，室温10min（勿干）； 在95%的酒精中分色1-3分钟； 在无水乙醇中继续分色两次，每次1分钟 用二甲苯透明两次，每次约3分钟； 加盖玻片，压片。
巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构，是1条X染 色体呈异固缩状态所形成，各实验室所统计的观察率不尽 相同，从30％一50％不等，有些实验室中在男性的细胞 中发现X小体有2%的出现率，但小体结构不规范、典型。 巴氏小体常位于核膜内侧。直径为1μm左右，其形状有微 凸形、三角形、卵形、短棒形和双球形等。观察时需注意 巴氏小体与细胞的比例。 正常女性细胞中仅可观察到1个巴氏小体，而正常男性细 胞中无巴氏小体或仅在个别细胞中有不典型的巴氏小体存 在。
2）固定 口腔粘膜细胞加入新配置的固定液（95% 乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min以上，空 气干燥。
2）固定 毛囊细胞-拔取一根毛根比较大的毛发，在一张干 净的载玻片中央滴一滴45%的醋酸，静置约5分钟， 待毛根稍软后，用镊子尖把外层毛囊的组织细胞 轻轻刮下，弃去毛干。将细胞用解剖针在载玻片 上均匀摊平，并在空气中晾干。 实验改进意见：拿起上述发根的梢部，将其上毛 囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的 目的。（若用刀片或镊子将毛囊细胞刮下，可造 成细胞的堆积，同样会出现多层细胞的现象。1根 发根的毛囊细胞可以转移到3-4张载片上，以达到 充分利用实验材料的目的。观察时又可以看到清 晰的单层涂布细胞，便于观察统计。）
实验九 人类染色质体的检测
实验九人类染色质体的检测
一、实验目的
1．了解X染色质体形成的机理；
2．观察巴氏小体的位置和形态并绘制几种巴氏小体；
3．观察男性Y小体的特征。
二、实验准备
（按每实验小组2人准备）
1．仪器
显微镜1台、倒置显微镜一台（通用）、冰箱1台（通用）、荧光显微镜一台（通用）干燥箱1台（通用）
2．器械（均放在小磁盘内）
镊子2、解剖针2、剪子2、玻片架1、
3．药品（4人一套）
醋酸洋红、1mol HCl、0.05%吖啶橙（通用）、二甲苯（通用）[均分装在60ml滴瓶]、蒸馏水10L（通用）
4．耗材
载玻片4、盖玻片6、滤纸2、牙签2、口杯1、擦镜纸1本（通用）、
5．材料
口腔上皮细胞
三、实验原理
Lyon假说：
1．哺乳动物雌性动物个体中的2条X染色体必定有一条失活，成异固缩状态——X染色质体；
2．失活的X染色体来源是随机的，可能来自父亲，也可能来自母亲；
3．失活发生在4000~6000个细胞时。
一旦X染色体失活，不再发挥作用。
四、实验步骤
1．X染色质体的鉴定
清水漱口→用牙签刮取少许口腔上皮细胞→涂于干净玻片上→洋红染色20~30min→盖盖玻片→覆滤纸→压片→吸去多余染液→低倍观察→高倍镜下绘图→计算女性中有X染色质体的数目和百分率。
另：可分别拔取男、女各一头发→将发根毛囊细胞涂与干净玻片上，其他方法同上。
2．Y小体的观察
清水漱口→用牙签刮取少许口腔上皮细胞→涂于干净玻片上→滴一滴吖啶橙染液→迅速在荧光显微镜下观察Y小体→绘图
五、作业
1．绘女性X染色质体图
2．计算正常女性具有X染色质体的数目
3．描述Y小体的结构和特征。
13：人类性染色质制备与观察liuchunhua
了解X染色质检测方法及其意义； 了解X染色质的形态特点；
初步掌握镜下X染色质的识别方法；
1949年，Barr在猫神经元核仁附近发现一种染色很深的小体。仔细研 究发现这种小体出现在多数雌猫神经元中，而在雄猫的神经元中则极 少出现。他以更多的动物组织做了深入的研究，结果发现食肉类、偶 蹄类、灵长类（包括人类）等动物的不同组织的体细胞中，同样显示 这种性别差异。Barr称这种小体为核仁随体（现在我们通常称之为 Barr小体，性染色质小体，或X染色质。下文统称这种小体为X染色质 ），并推论这种小体是由性染色体的异染色质衍化来的；
X染色质数目=X染色体数目-1 通过毛囊、口腔上皮细胞，羊水细胞等间期细胞的性染 色质检查，可判断个体的核性别，此方法快捷、简便， 在临床上可作为性别异常疾病的一种辅助诊断。
（1）巴尔小体是一个失活的X染色体，失活的过程就称为 莱昂化（lyonization）； （2）在哺乳动物中，雌雄个体细胞中的两个X染色体中有 一个X染色体在受精后的第16天（受精卵增殖到5000-6000 ，植入子宫壁时）失活； （3）两条X染色体中哪一条失活是随机的； （4）X染色体失活后，细胞继续分裂形成的克隆中，此条 染色体都是失活的； （5）生殖细胞形成时失活的 X染色体可得到恢复的。 1974年Lyon又提出了新莱昂假说，认为X染色体的失活是 部分片段的失活。
内面的团块状结构，直径约1um，染色程度较其他 染色质深。其形态不一，常呈三角、半圆、平凸或 球形。利用放射自显影技术研究发现，女性的两条 x染色体中有一条DNA复制延迟，称迟复制x。迟复 制的x染色体在间期时表现为x染色质。当细胞内有 一条以上x染色体时，在间期时除一条x染色体外， 其余的x染色体均表现为x染色质，因此间期细胞核 中的x染色质数目等于x染色体数减去1。
9人类性染色质小体的制备与观察
人类在受精后的第16天（受精卵分裂到 5000-6000），植入子宫壁时发生lyon化。
剂量补偿：
由于雌性细胞中的两个X染色体中的一 个发生异固缩（也称Lyon化），失去活性， 这样保证了雌雄两性细胞中都只有一条X染 色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物 的量保持在相同水平上。这种效应称为X染 色体的剂量补偿。
➢ 进一步研究发现，其他雌性哺乳动物（包括人 类）也同样有这种显示性别差异的结构。而且不 仅是神经元细胞，在其他细胞的间期核中也可以 见到这一结构，称之为巴氏小体，也称为X染色 质。大小在1µm左右，呈三角形、卵形、短棒形 等。
研究发现，间期核内X染色质的数目总是 比X染色体的数目少1。
进一步研究表明： X染色质是一条异染 色质化（兼性异染色质）的X染色体，在间 期复制要比其他的染色体晚。
知识回顾 Knowledge Review
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实验十 人类性染色质小体 的制备与观察
实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验方法 注意事项 实验作业 思考问题
掌握莱昂假说和X染色体剂量补偿的含义。
掌握观察与鉴别X染色质的简易方法，识别 其形态特征及所在部位，为进一步研究人 体染色体的畸变与疾病提供参考依据。
发现
➢ 1949年，Barr在雌猫的神经元间期细胞核中首 次发现一种染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没 有。
达，则产生橙黄色毛斑。
Y染色质
正常男性的间期细胞用荧光染料染色后， 在细胞核内可出现一荧光小体，直径为0.3-1μm左右，称为Y染色质。 Y染色质在间期 也呈现异固缩状态。Y染色体长臂远端部分 为异染色质，可被荧光染料染色后发出荧 光。这是男性特有的，女性细胞中不存在。 细胞中Y染色质的数目与Y染色体的数目相 同。
中山大学人类X染色质标本的制备与观察报告
人类X染色质标本的制备与观察张皓予1533５20３一、实验目的1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。
２、正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。
3、说明人体细胞中核内Ｘ染色体的数目与性染色体数目之间存在的关系。
二、实验原理Ｘ染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。
在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。
用苯酚品红改良染液染色后,便可观察到染色较浓,多位于核膜内侧缘,呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形,直径约１μm大小的小体。
女性细胞核中出现率为40％~60%。
Baｒr与Berｔｒam首先(1949)在雌性猫的神经细胞核中发现,在多数核中部有一个小的深染的小体,而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体,此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类与灵长类等动物的多数组织细胞中存在,而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex ｃhｒomaｔin),或称为“巴氏小体”(Baｒｒboｄy)。
这种小体常位于核膜的内表面,呈Fｅｕlｇe ｎ阳性反应,表明就是DNA的成分,有证据表明,性染色质的存在就是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体,其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质。
但如果一个男人有XXY染色体,那就会有一个性染色质,虽然表现为男性。
同样,ＸXＸ的三体应当有两个巴氏小体。
因此,性染色质实质上就是一个失活的X 染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来？目前,已有许多证据证明,在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化,成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明,失活的X染色体的固缩周期与其它染色体就是不同步的,它在S期就是晚复制的。
此外,人们也已发现,晚复制的这根X染色体常位于核的边缘,这个位置也正好就是巴氏小体出现的位置。
三、实验仪器与试剂１.仪器与用具显微镜,水浴锅,牙签,载玻片,盖玻片,镊子,吸水纸。
人类X染色体的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要：本实验旨在掌握鉴定人类X染色质的方法，通过将人体口腔颊部粘膜细胞和毛囊细胞解离、染色等步骤制片，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位。
同时了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1引言：1949年加拿大学者Barr和Bertram在一些雌猫神经原细胞核中, 发现在核膜内缘有一个染色较深的近似三角形的小体, 在雄猫中没有发现。
根据后来的深入研究发现，这个染色较深的小体和性别有关。
直到1971年巴黎会议上正式被命名为X 染色质。
以后的研究表明巴氏小体是一个异染色质化的失活的x 染色体。
在正常的男性细胞中只有一个X 染色体,是正常有活性的, 因此男性细胞中没有巴氏小体。
而在正常女性细胞中有二个X 染色体, 其中一个正常, 另一个异染色质化因此在女性细胞中可见到一个巴氏小体。
巴氏小体的个数= X 染色体个数一1 ，大都出现在核膜边缘。
性染色质在人类中，正常男性个体出现的比例约为1%，正常女性约为17-39%，在由性染色体数目异常而引起的性别畸型( X O 除外) 患者的细胞中, 可见到一个或一个以上巴氏小体。
因而通过巴氏小体检查可鉴别胎儿的性别和诊断性染色体异常引起的遗传疾病。
1961 年, 英国遗传学家Lyon 根据前人和自己的研究发表了莱昂假说, 明确提出了单个X染色体随机失活从而在两性间保证X 连锁基因转录水平一致的论点, 并为现在的科学家所普遍接受。
普遍认为, 巴氏小体的形成是与一个非编码RNA XIST 的大量且特异表达有关, 大量的XIST 顺式作用在其中一条X染色体上, 引发了该条染色质的广泛甲基化从而导致异染色质的形成, 使其上的基因出现表达沉默现象。
2 实验材料和方法：2.1实验材料和仪器：1）显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、牙签；2）硫瑾染液；3）1mol/L的HCl、蒸馏水；4）口腔颊部粘膜细胞和毛囊细胞。
实验三 人类染色质体的检测
实验三人类染色质体的检测一、实验目的1．通过人口腔粘膜细胞性染色质的观察学习有关异染色质、功能性异染色质、x 染色体失活等有关知识，2.学习性染色质制备、观察与分析的方法。
二、实验原理早在六十年代，Barr和Bertram在雌性猫的神经细胞核中发现，在多数核中部有一个小的深染的小体，而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体，此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类和灵长类等动物的多数组织细胞中存在，而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex chromatin)，或称为“巴氏小体”(Barr body)。
这种小体常位于核膜的内表面，呈Feulgen阳性反应，表明是DNA的成分(图1)，有证据表明，性染色质的存在是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体，其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质．但如果一个男人有XXY染色体，那就会有一个性染色质，虽然表现为男性。
同样，XXX的三体应当有两个巴氏小体。
因此，性染色质实质上是一个失活的X染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来?目前，已有许多证据证明，在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化，成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明，失活的X染色体的固缩周期与其它染色体是不同步的，它在S期是晚复制的。
此外，人们也已发现，晚复制的这根X染色体常位于核的边缘，这个位置也正好是巴氏小体出现的位置。
三、实验准备1.器材：显微镜，镜油瓶，镊子，擦镜纸，漱口杯(灭菌)，压舌板(灭菌)，清洁玻片、盖玻片。
2.试剂：二甲苯，5N HCl，1％硫堇水溶液，蒸馏水、封固剂；酒精：50％，70％，95％，纯酒精。
四、实验步骤（一）材料的获得从自己的口腔粘膜取材，有两点需要特别注意的事项。
首先载片要绝对清洁，否则在操作过程中上皮细胞会脱落，导致实验失败。
中山大学人类X染色质标本的制备与观察报告
人类X染色质标本的制备与观察张皓予15335203一、实验目的1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。
2.正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。
3.说明人体细胞中核内X染色体的数目和性染色体数目之间存在的关系。
二、实验原理X染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。
在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。
用苯酚品红改良染液染色后，便可观察到染色较浓，多位于核膜内侧缘，呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形，直径约1μm大小的小体。
女性细胞核中出现率为40%~60%。
Barr和Bertram首先（1949）在雌性猫的神经细胞核中发现，在多数核中部有一个小的深染的小体，而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体，此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类和灵长类等动物的多数组织细胞中存在，而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex chromatin)，或称为“巴氏小体”(Barr body)。
这种小体常位于核膜的内表面，呈Feulgen阳性反应，表明是DNA的成分，有证据表明，性染色质的存在是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体，其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质。
但如果一个男人有XXY染色体，那就会有一个性染色质，虽然表现为男性。
同样，XXX的三体应当有两个巴氏小体。
因此，性染色质实质上是一个失活的X 染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来?目前，已有许多证据证明，在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化，成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明，失活的X染色体的固缩周期与其它染色体是不同步的，它在S期是晚复制的。
此外，人们也已发现，晚复制的这根X染色体常位于核的边缘，这个位置也正好是巴氏小体出现的位置。
三、实验仪器与试剂1.仪器与用具显微镜，水浴锅，牙签，载玻片，盖玻片，镊子，吸水纸。
人类性染色质标本制作
实验材料 器材：染色缸，显微镜，载玻片乙醇，甲醇，冰乙酸，流堇染料，乙醚，
香柏油，甲醇冰乙醇固定液等。
材料：带有毛囊的发根。
实验步骤
1、取材 取2 ～3根头发，要带有完整的毛囊组织。 加1滴40%醋酸软化毛囊，5 ～ 2、软化与涂片
10min后，刮下毛囊，弃发干，涂片1cm2大小，烘 干。 3、固定 4、水解 加固定液2 ～3滴，晾干。 放入5N HCL中10min，自来水冲洗2min，
人类性染色质标本的制 作与观察
实验目的
一、了解X染色质的不同检测方法及意义。 二、掌握X染色质的形态特点。
三、初步掌握显微镜下X染色质的识别方法
实验原理
人类性染色质（sex chromatin boby）是在间期 细胞核中染色体的异染色质部分显示出来的一种 特殊结构，其包括X染色质和Y染色质。 Lyon假说：英国遗传学家Mary Lyon 在1961年 首先提出了上述X染色体失活假说，即Lyon假说 其要点是：①雌性哺乳动物细胞内只有一条X染 色体有活性，另一条失活并固缩，后者在间期细 胞表现为性染色质；②失活发生在胚胎的早期； ③失活是随机的，即失活的X染色体既可来自父 亲也可来自母亲，但一个细胞某条X－旦失活， 由该细胞繁衍而来的子细胞都具有同一条失活的 X染色体。
剂量补偿效应：使细胞核中具有两份或两份以上基因 的个体和只有一份基因的个体出现相同表型的遗传效 应。 对于性染色体来讲，包括人类在内的哺乳动物雌 性个体的每一体细胞中有两条X染色体，所以在X染色 体上的基因剂量有两份，而雄性个体只有一条 X染色 体，基因剂量只有一份。剂量补偿效应使 X连锁性状 的表现在雌雄个体之间并无不同。1932年美国遗传学 家H.J.马勒首先在果蝇中发现了这种效应，并把它看 作是维持雌雄两性生物基因表达的一致所特有的一种 遗传效应。
人类X染色质的制备与观察
姓名系年级学号日期科目遗传学实验题目人类X染色质的制备与观察人类X染色质的制备与观察摘要：巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染色小体，在遗传学、细胞观察方面有重要意义。
希望通过实验掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位；了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
本实验中通过取人口腔颊部上皮细胞与发根毛囊细胞进行硫堇染色、显微观察识别巴氏小体并进行计数，来描述巴氏小体的形态，并统计其在不同性别人体细胞中的出现率。
引言1949年，加拿大学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现。
他以更多的动物组织做了深入的研究，结果发现有袋类、偶蹄类、食肉类、灵长类（包括人类）等动物的不同组织的体细胞中，同样显示这种性别差异。
Barr称这种小体为核仁随体，现在我们通常称之为巴氏小体。
Barr推论这种小体是由性染色体的异染色质衍化来的。
20世纪60年代前后，根据对性染色体异常病人的X染色体与X染色质数目的关系的研究发现，X染色质数等于一个个体的X染色体数减1。
进一步的研究表明，一个X染色质是一条异染色质化的X染色，在间期其DNA的复制要比其他的染色体晚（Morishima，1962）。
在一个个体中，究竟是来自父本还是来自母本的X染色体失活，则是随机的，这种随机失活是生物体内的剂量补偿机制（Lyon，M.，1962）。
从上述我们可以看出X染色质是一种包含结构基因的异染色质，这种异染色质通常称为兼性异染色质（facultative chromatin）。
因为X染色体的失活是个比较复杂的生物学问题，目前对这一现象仍然存在着一些难以解释的疑点。
例如：是否所有组织的全部细胞中，在任何时间都存在这种X小体？失活的X小体是如何进行复制的?虽然对X小体存在着一些不同看法，但目前X染色质的检查，在医学遗传的研究中，临床和法医诊断上仍具有一定的意义。
人类X染色质的制备与观察
人类X染色质的制备与观察姓名摘要：X染色质（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm、贴近于核膜边缘的染色小体。
在本实验中，我们选取口腔粘膜、头发根鞘细胞制备X 染色质，通过染色、压片等方法观察巴氏小体在细胞核内的分布及形态等特征，目的是通过实验掌握观察与鉴定人类X染色质的方法、在显微镜下正确识别X染色质的形态特征及所在部位，以及了解X染色体失活的有关假说和失活X染色体上的基因所控制的遗传性状的特点，为进一步研究人类染色体畸变与疾病的关系提供基础方法、为遗传病临床诊断提供参考。
通过此次实验，我们达到了实验预期，取得了良好的实验效果。
关键词：X染色质（巴氏小体）、口腔黏膜细胞、头发根鞘细胞1.引言X染色质小体（或称巴氏小体、性染色质小体、X小体等）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm、贴近于核膜边缘的染色小体。
巴氏小体在细胞分裂间期细胞核中出现异固缩现象，表现出浓缩、染色深、无活性的特点。
巴氏小体在细胞分裂期可形成正常的染色体形态，但复制时间比有活性的X染色体稍迟一些。
巴氏小体在正常女性体内是由女性两个X 染色体中的一个失活形成，位于间期细胞核中，紧贴核膜内缘，大小约1～1.5 μm，呈现三角或椭圆形小体。
巴氏小体在女性体内数量为X染色体数减1。
”1949年，Barr在猫神经元核仁附近发现一种染色很深的小体，他仔细研究发现这种小体出现在大多出现在雌猫神经元中，雄猫的神经元中则极少出现，即这种小体与性别有关。
Barr称这种小体为“核仁随体”，并推测小体是由两条性染色体的异染色质衍化来的。
他以更多的哺乳纲的代表性动物的不同组织做了观察，结果发现有袋类、偶蹄类、翼手类、食肉类、灵掌类（包括人类）的多种组织的体细胞中，同样显示这种性别差异（即雌雄二型现象）。
观察X染色质小体数在当时成为检测X染色体数是否产生变异的快捷方法。
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染色
卡宝品红染色 1.在晾干的玻片上直接滴上染料，染色10分 钟。 2.在95%的酒精中分色1-3分钟。 3.在无水酒精中继续分色两次，每次1分钟。 4.用二甲苯透明两次，每次约3分钟，直接加 盖玻片封片（或用树胶封片）后观察。
观察
• 观察X染色质要用油镜。
结果辨析
在光学显微镜下可见到X染色质为一结构致密、轮廓清 楚染色较深的小体。人类的X染色质常附着于核膜内侧， 这个位置就是晚复制的X染色体所处的位置 （Morishima,1962）。大小约在1μm左右，呈三角形、卵 形、短棒形或者双球形。一般说来，在动物细胞中，X染 色质可以处于三个位置：靠近核仁，靠近核膜，或者自由 地处于核区内。这种位置，对于每一种来说是相对固定的。 处于核膜内侧的X染色质在压片时完全可能被压在核 的中央。这种情形下，X染色质容易与核中其他的着色的 结构相混。为保险计，我们通常只计数接近于核膜的小体。 还应注意一个问题，并非在所有的正常女性细胞中都 能看到巴氏小体，用正常女性的组织制片，统计200-400 个没有破损、形态正常的细胞，可观察到具巴氏小体的细 胞比率约在30%-50%。但这一比率在不同实验之间差异 较大。
实验报告
1.绘图。 2.分析实验结果可能的成因。
进一步的问题
• Barr发现性染色质时，用的实验材料是 猫的神经元细胞。要制备这种片子程序较 复杂。我们是否可以用猫的体毛做材料重 复一下他的实验呢？另外，大鼠、小鼠等 常用的实验动物，试试看，我们是否可能 用同样的方法将“先生”与“女士”区分 开？
实验目的
1. 了解并掌握运用卡宝品红染色制备并观察X染色质小体的 方法。 2. 了解并掌握选择两种材料制备并观察X染色质小体的方法。
获取实验材料
1. 口腔黏膜细胞： 取一干净的载玻片，用记号笔在即将涂细胞的一面作 个标记。先用水将口漱净，尽可能除去口中的杂物。然后 用牙签钝头在口腔一侧用力刮取，弃去第一次得到的刮取 物，在同一部位继续刮取（这样就可取得深层的表皮细 胞），将刮得的细胞涂抹在干净载玻片上，反复几将从， 使玻片上的材料尽量厚些。 勿令玻片上的材料干燥，迅速将玻片插入装固定液的 染色缸中固定30分钟以上。如果让材料在空气中干燥，会 使细胞变形。拿刚涂抹的玻片直接插入固定液中，当然会 使许多材料丢失，但粘在玻片面上的细胞足够观察之需。 固定后将载玻片在空气中晾干，这样，细胞就可以紧贴在 玻片的表面。
通常用口腔粘膜、头发根鞘、外周血细胞等制备X染 色质。由于取材方便，方法简单，X染色质检测广泛应用 于性别畸形的诊断中。检查羊水细胞的X染色质，还可在 产前诊断胎儿性别。 在人类细胞中，还存在另一种异染色质小体，这就 是Y染色质，Y染色体在间期也呈现异固缩状态。Y染色质 如何检测呢？研究发现，Y染色体长臂的远端经过荧光染 料喹吖因（quinacrine）染色后，可发出明亮的荧光，这 种荧光在间期细胞中表现为一个明亮的荧光点，直径约在 0.3-1um。在多数情况下，其他的染色体不显荧光或不具 有如此强的荧光，因此，这种荧光亮点就成了检测Y染色 质的一种方法。用于制备X染色质的材料同样可用于制备 Y染色质。 制备两种染色质的方法有多种，Schwarzacher （1974）曾对此做过详尽的综述。在本实验中，我们将选 择两种材料、两种染r follicle cell）： 拔取一根毛根比较大的毛发（头发或其他部位，如手 臂上的毛发均可；如可能，尽量选用白色或浅颜色的毛发， 这样在制片中就可减少色素的干扰）。在一张干净的载玻 片中央滴一滴45%的醋酸，将毛根浸渍其中。静置约5分 钟，待毛根稍软后用镊子尖或解剖针尖将外层毛囊的组织 细胞轻轻刮下（用力太大，则可能将毛发上的色素细胞一 起刮下，影响制片效果）。弃去毛干。用解剖针将载玻片 上的组织细胞均匀摊平。摊平的材料在空气中晾干。
人类性染色质小体的制备与观察
1949年，Barr在猫神经元核仁附近发现一种染色很深的小体。仔 细研究发现这种小体出现在多数雌猫神经元中，而在雄猫的神经元中 则极少出现。他以更多的动物组织做了深入的研究，结果发现食肉类、 偶蹄类、灵长类（包括人类）等动物的不同组织的体细胞中，同样显 示这种性别差异。Barr称这种小体为核仁随体（现在我们通常称之为 Barr小体，性染色质小体，或X染色质。下文统称这种小体为X染色 质），并推论这种小体是由性染色体的异染色质衍化来的。 Barr的推论是正确的，但他并沿岸有弄清这小体竟是1条X染色体 还是2条X染色体的异染色质形成的。这是因为间期的染色体在核中伸 展成丝状，异染色质虽可染上较深的颜色，但无法辨别它究竟是一条 染色体或仅是一条染色体或仅是染色体的一个片段。20世纪60年代前 后，根据对性染色体异常病人的X染色体与X染色质数目的关系的研 究发现，X染色质数等于一个个体的X染色体数减1。进一步的研究表 明，一个X染色质是一条异染色质化的X染色，在间期其DNA的复制 要比其他的染色体晚（Morishima，1962）。在一个个体中，究竟是 来自父本还是来自母本的X染色体失活，则是随机的，这种随机失活 是生物体内的剂量补偿机制（LYON，M.，1962）。从上述我们可以 看出X染色质是一种包含结构基因的异染色质，这种异染色质通常称 为兼性异染色质（facultative chromatin）。