高效液相色谱法分析(三聚氰胺)原始记录1

高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺

高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。

三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。

本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。

1 实验部分1.1 仪器与试剂LC1600高效液相色谱仪（含UV1600紫外-可见检测器1台，P1600高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。

1.2 标准品溶液配制精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。

根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。

1.3 样品前处理称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。

取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC 测定溶液。

1.4 色谱条件：色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）流速：1.0ml/min波长：240nm温度：40℃进样量：20μl2 实验结果2.1 精密度实验取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。

高效液相色谱测定牛奶中的三聚氰胺

高效液相色谱测定牛奶中的三聚氰胺的成功案例
摘要：建立了浊点萃取法（CPE）对牛奶样品进行净化和浓缩后用高效液相色谱（HPLC）检测的方法。

本实验采用酸（CCl3COOH）结合非离子型表面活性剂Triton X-100对牛奶进行破乳，以非离子表面活性剂聚乙二醇600（PEG 600）作为萃取剂，研究牛奶中三聚氰胺的萃取行为。

实验确定的破乳方法和CPE方法的优化条件：Triton X-100的浓度为 2 %（W/V），CCl3COOH的浓度为2 %（W/V），100 ℃水浴加热10 min；PEG 600的浓度为13 %（W/V），Na2CO3和Na2SO4的浓度分别为0.5 %（W/V）和26 %（W/V），平衡温度70 ℃，平衡时间30 min。

在上述实验条件下，牛奶样品的加标回收率80 %以上，相对标准偏差为2.1 % ，定量限为0.9 μg/kg，小于国家规定的定量限(2.5 μg/kg)。

该方法简便、快速、灵敏度高、污染少。

关键词：三聚氰胺；浊点萃取；表面活性剂；高效液相色谱
1.仪器配置
2.色谱图
1三聚氰胺的标准色谱图
2加标牛奶样品色谱图
3.方法使用范围
南京科捷分析仪器应用研究所研发本方法——高效液相色谱法，主要用于乳制品中三聚氰胺的检测，具有灵敏度高，操做简单等特点。

此方法显示图谱清晰明了，结果准确，可广泛用于对乳制品的质量监控等领域。

高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺

高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺一、实验目的1、掌握反相离子对色谱法测定奶制品中三聚氰胺的原理和方法。

2、了解复杂样品进行色谱分析时前处理的方法和必要性。

二、实验原理三聚氰胺是一种常见的化工原料，有毒，若人体大量摄入，将引起泌尿系统结石等疾病。

2008年9月，三鹿奶粉事件发生后，三聚氰胺的危害被深入广泛的认识，同时食品安全问题也更加受到重视与关注。

反相高效液相色谱（RP-HPLC ）具有分离效率高，分析速度快，灵敏度高等优点，而且仪器较简单、工作条件要求较低，在有机物的分离与测定中有极为广泛的应用。

但三聚氰胺是强极性物质，在反相色谱柱上保留能力很弱，难以达到分离的目的。

三聚氰胺具有弱碱性，在酸性溶液中能形成阳离子。

若在流动相中加入与具有两亲作用的阴离子，则可与三聚氰胺形成具有疏水作用的离子对，从而使保留能力明显增强，达到与干扰组分分离的目的，这就称作离子对色谱。

测定阳离子一般采用烷基磺酸盐作为离子对试剂，测定阴离子一般采用烷基胺类作为离子对试剂。

奶制品的组成较复杂，一般含有大量的蛋白质和脂肪类物质，若不经过预先的分离处理，不仅干扰三聚氰胺的检出，还会对色谱柱造成一定的损伤，因此对待测样进行分离，纯化等预处理是十分重要的。

加入重金属离子可使蛋白质变性、凝聚，从而沉淀分离。

脂类和高级脂肪酸可在酸性条件下通过乙酸乙酯、乙醚、氯仿等的萃取除去。

反相离子对色谱测定三聚氰胺的定量下限约为0.1mg·L -1。

对于更低浓度的试样，需要使用灵敏度更高的色谱-质谱联用技术。

但由于仪器昂贵，维护较复杂，色谱-质谱联用技术的应用受到了限制。

通过阳离子交换树脂可使溶液中的三聚氰胺得到富集，从而有效的改善检出限。

近年来发展的固相微萃取技术将净化除杂和分离富集等步骤简化合并，使色谱分析试样前处理的效率有了显著的提高。

三、试剂与仪器试剂：PbAc （AR ） 0.2 mol·L -1（乙酸酸化），乙酸乙酯（AR ），乙酸（AR ），甲醇（AR ），氨水（AR ），732型强酸性离子交换树脂（40~60日）色谱流动相：A 、乙腈（色谱纯）；B 、KH 2PO 4（GR ） 0.05 mol·L -1；C 、H 3PO 4（GR ） 0.5 mol·L -1；D 、十二烷基磺酸钠（AR ） 0.2 mol·L -1仪器：P230型高效液相色谱仪，配UV 检测器；ODS C-18 色谱柱标样：三聚氰胺（纯度大于99.5%），用水配制成1.001g L -⋅标准储备液，4℃保存。

固相萃取-高效液相色谱法测定牛奶中的三聚氰胺

用高效液相色谱法测定．结果表明，三聚氰胺的标准曲线为ｙ－４４７７１．２ｘ＋４５６３．８，相关系数ｒ－－０．９９９５，检测限为０．０５ｍｇ／ｋｇ。回收率）０９７．６％一１００．４％。该方法操作简单，精密度和回收率高，可满足奶粉中三聚氰胺的准确定性和定量
１．５样品的制备
称取新鲜牛乳５ｇ，加入２０ｍ１０．１％三氯
乙酸提取液，充分混匀，加入５ｍ１２％乙酸铅溶液，均质ｆ２ｍｉｎ）或超声２０ｍｉｎ，ＩＯ０００ｒｐｍ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清液５ｍｌ过混合型阳离子交换小柱（ＰＣＸ）。待样液完全流出后分别用３ｍｌ甲醇和３ｍｌ水活化固相萃取柱，取上述提取液５ｍｌ过固相萃取柱，使提取液以不低于１ｍｌ／ｍｉｎ的流速通
（ＨＰＬＣ）［、液相色谱一质谱法（ＨＰＬＣ．ＭＳ）ｔ、气相色谱一
质谱法（ＧＣ．ＭＳ）ｔ】、毛细管电泳法（ｃＥ）、胶体金免疫层析法和酶联免疫法等。２００８年１０月，国家标准
液并将小柱抽干。用５ｍ１５％氨化甲醇（ｖ／ｖ，５ｍｌ氨水＋９５ｍｌ
蛋白质，每１００ｇ牛奶中添加Ｏ．１ｇ三聚氰胺，就能提高０．４％蛋白质，因此三聚氰胺也被人称为” 蛋白精” 。三聚氰胺被摄入人体内遇到胃酸时会溶解，但是排到尿中会再次结合形成结晶，可能堵塞肾小管，随着结晶在体内含量的增多，如果不能排除，积累到一定的程度后形成结石，给肾功能带来极大的损害甚至肾衰竭而死亡。蛋白精给奶制品业带来了巨大的冲击。卫生部等５部门关于三聚氰胺在食品中的限量值的公告（卫生部公告

高效液相色谱法测定饲料及食品中三聚氰胺的研究

高效液相色谱法测定饲料及食品中三聚氰胺的研究目的:建立用高效液相色谱-二极管阵列法(HPLC-DAD)测定饲料及食品中三聚氰胺残留量的方法。

方法:样品经提取分离后,用HPLC-DAD法测定,外标法定量。

色谱条件:C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-辛烷磺酸钠溶液(柠檬酸调节pH至 3.0,10∶90),流速为 1.0 ml/min;进样量为20 μl;柱温为35℃;190~400 nm波段扫描,检测波长为236 nm。

结果:三聚氰胺在0.5～10.0 μg/ml 范围内线性关系良好,相关系数R=0.999 98。

最低检测浓度为0.05 μg/ml,回收率在89.28%～96.89%范围内,RSD<3.5%。

结论:该方法简便、快速,能满足饲料及食品中三聚氰胺残留量的检验工作需要。

[Abstract] Objective: To establish a method for the determination of melamine residue in feed and food using high performance liquid chromatography-diode array detection (HPLC-DAD). Methods: After the sample was extracted and cleaned, melamine was analyzed by HPLC-DAD. Using C18 column (150 mm×4.6 mm, 5 μm), acetonitrile and 10 mmol/L sodium octanoate solution (adjusted pH to 3.0 with acetic acid, 10∶90) were used for this method. The flow rate was 1.0 ml/min and DAD detection at 236 nm. The temperature of the column was 35℃. Results: The linear range was 0.5-10.0 μg/ml, and the correlation coefficient was 0.999 98. The limit of melamine ranged from 89.28%-96.89% with relative standard deviation (RSD) less than 3.5%. Conclusion: The results indicate that this method is simple and quick, and can meet the requirement for determination of melamine in feed and food.[Key words] Melamine; Diary products; Feed; Egg; HPLC三聚氰胺是一种重要的含氮杂环有机化工原料,为尿素后加工产物,主要用途是作为生产三聚氰胺甲醛樹脂(NF)的原料,而且还能用作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂。

饲料及食品添加剂中三聚氰胺的高效液相色谱-质谱法检测

普通蛋白质含氮量只有16%，但三聚氰胺含氮量可达66.7%，为提高饲料中蛋白质的含氮量，部分非法分子将三聚氰胺添加到饲料和食品中。

动物长期摄入含三聚氰胺的饲料，会产生很大的毒性作用。

动物会不仅出现肾衰竭而死亡，而且会危害人体健康。

我国明令禁止在任何饲料中添加以三聚氰胺等为原料的“蛋白精”。

检测三聚氰酸的常用方法有GC-MS/MS 法、LC-MS/MS法、HPLC法等。

目前只有农业行业有对饲料中三聚氰胺残留的标准，国家标准尚没有。

GC-MS法、HPLC法是农业行业标准中的规定方法。

GC-MS 法的前处理比较繁琐，需衍生化。

饲料及食品添加剂中有复杂的基质成分，存在许多干扰因素，影响检测结果。

本文优化质谱条件，应用高效液相色谱-质谱法（HPLC-MS），为从源头控制饲料及食品安全提供保障。

1　材料与方法1.1　仪器与试剂　三聚氰胺分析纯，不低于99.5%的纯度。

称取10 mg三聚氰胺，使用10 mL容量瓶，设置三聚氰胺标准溶液，作为标准储备液，用流动相定容。

分析纯为甲酸、乙醇。

使用仪器为安捷伦1100LC-Trap-XCT系统。

1.2　处理样品　在批发市场购买饲料与食品样品。

粉碎样品，将5 g样品放入具塞锥形瓶中。

加入20 mL体积比1∶1的水-乙醇溶液，含体积分数0.1%的甲酸。

10 min超声波振荡，然后过滤，使用20 mL上述提取液再次提取残渣。

过滤，合并滤液。

定容至 5 mL。

使用氮吹仪上浓缩，使用滤膜0.45μm过滤。

1.3　检测条件　质谱条件：扫描范围为m/ z44-150。

4.0×105Pa的雾化器压力，97.4 V的毛细管出口电压，3909 V的毛细管电压，正离子化模式的电喷雾电离，9 L/min的干燥气流量，0.5 V的碎裂电压，350℃的干燥气温度。

色谱条件：体积比5∶95，流动相为乙腈-0.1%甲酸。

色谱柱Kromasil-C18柱，5μm，4.6 mm×250 mm，进样量5μL，0.4 mL/min的流速。

固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量

固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种无机化合物，常用于工业制造和农业生产中，然而高浓度的三聚氰胺会对人体造成严重危害，特别是对婴儿和幼儿的影响更为严重。

由于近年来液态奶中三聚氰胺事件的频繁发生，因此对液态奶中三聚氰胺含量的检测显得尤为重要。

固相萃取一高效液相色谱法是目前常用的一种高效、准确的检测方法。

本文将介绍使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的方法和结果。

二、实验材料和仪器1. 实验材料：液态奶样品、甲醇、乙腈、乙酸、二氯甲烷、硅胶2. 仪器：高效液相色谱仪、固相萃取柱、离心机、显微天平、pH计、紫外可见分光光度计等三、实验方法1. 样品处理：首先将液态奶样品样瓶放在冰箱中冷藏，取出一定量的样品后使用显微天平称取出适量样品，并将其加入样品离心管内。

然后加入适量的甲醇，进行振荡混合，最后使用离心机离心沉淀，得到混合物的过滤液。

2. 固相萃取：将得到的过滤液加入到固相萃取柱中，使用甲醇等洗脱混合物，得到固相萃取柱的萃取液。

3. 色谱分析：将获取到的固相萃取液置于高效液相色谱仪中进行色谱分析，根据三聚氰胺的特征峰进行定性和定量分析。

四、实验结果经过实验验证，使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的结果显示，样品中三聚氰胺的含量为xmg/kg，达到了食品卫生安全标准。

五、实验结论通过该实验结果可以得出结论：固相萃取一高效液相色谱法是一种准确可靠的测定液态奶中三聚氰胺含量的方法。

该方法操作简便，结果准确，可以满足食品安全检测的需求。

六、实验改进尽管该方法已经得到了实验结果的验证，但在实际操作中还是存在一些可以改进的地方。

例如固相萃取柱的选择、色谱分析条件的优化等方面可以进行进一步的改进，以提高该方法的灵敏度和稳定性。

固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量

固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种有机化合物，化学式为C3H6N6，是一种白色结晶性固体，可溶于水和乙醇，主要用作工业生产中的原料，如氰酸酯树脂、氰酸脂和脲醛树脂等。

但由于其高氮含量，三聚氰胺还可以在一定条件下成为一种良好的氮肥料。

三聚氰胺在奶制品中的使用引起了广泛的争议。

2008年，中国发生了因三聚氰胺被加入奶粉中而导致大量儿童发生尿路结石的事件，震惊了全国。

由于三聚氰胺过量摄入会对人体肾脏造成严重危害，因此对奶制品中三聚氰胺的含量进行准确检测和控制成为了至关重要的工作。

二、实验目的本实验旨在利用固相萃取-高效液相色谱法对液态奶中三聚氰胺进行含量测定，以确保奶制品中三聚氰胺的安全性。

三、实验原理固相萃取技术是一种分离和富集化合物的方法，其原理是利用吸附剂（固相萃取柱）对样品中的目标化合物进行富集，并通过一系列的洗脱步骤将目标化合物从吸附剂上洗脱出来。

在本实验中，我们将使用固相萃取技术将液态奶中的三聚氰胺富集到吸附剂上，并进行洗脱处理以得到纯化的三聚氰胺化合物。

高效液相色谱法是一种分离和定性化合物的方法，其原理是利用固定在色谱柱上的填料对化合物进行分离，通过流动相的作用使化合物在填料中进行逐步分离，并通过检测器对分离后的化合物进行检测和定量。

在本实验中，我们将使用高效液相色谱法对洗脱后的三聚氰胺进行检测和定量分析。

四、实验步骤1. 样品准备：将液态奶样品装入适当的容器中，以备后续的固相萃取处理。

2. 固相萃取：将样品经过预处理后注入固相萃取柱中，利用固相萃取柱对三聚氰胺进行富集。

3. 洗脱处理：使用洗脱液将固相萃取柱中富集的三聚氰胺进行洗脱处理，得到纯化的三聚氰胺化合物。

4. 高效液相色谱分析：将洗脱后的三聚氰胺样品注入高效液相色谱仪中，利用色谱仪对三聚氰胺进行检测和定量分析。

5. 数据处理：根据高效液相色谱仪得到的检测结果，计算出液态奶中三聚氰胺的含量。

五、实验结果根据实验数据分析，我们得到了液态奶中三聚氰胺的含量为x mg/L。

高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺

高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。

三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。

本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。

1 实验部分1.1 仪器与试剂LC1600高效液相色谱仪（含UV1600紫外-可见检测器1台，P1600高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。

1.2 标准品溶液配制精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。

根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。

1.3 样品前处理称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。

取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC 测定溶液。

1.4 色谱条件：色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）流速：1.0ml/min波长：240nm温度：40℃进样量：20μl2 实验结果2.1 精密度实验取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。

超高效液相色谱_串联质谱法测定水产品中三聚氰胺残留量(1)

超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中三聚氰胺残留量林荆郑宇张金虎吴文凡赵建晖(福清市出入境检验检疫局,福建福清 350300)摘要建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-M S/M S)快速测定水产品中三聚氰胺残留的方法。

采用AC QU I TY U PLC BEH H IL I C色谱柱(100mm 2.1mm,1.7 m),流动相为乙腈-0.5mmo l/L乙酸铵溶液(0.1%甲酸),流速为0.3mL/m i n。

采用电喷雾质谱检测,以正离子模式5m in完成质谱分析。

实验结果表明,三聚氰胺在水产品中的检测限为0.05m g/kg,在0.05~0.50m g/kg添加水平时的加标回收率为63%~90%,测定结果的相对标准偏差均小于7.2%(n=6)。

关键词三聚氰胺水产品超高效液相色谱-串联质谱三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工中间产品,这种化学品常用于生产塑料、胶水和阻燃剂,是建筑业中常用的防火材料。

人长期摄入三聚氰胺会造成生殖、泌尿系统的损害,并可进一步诱发膀胱癌。

三聚氰胺是一种禁止用于食品及动物饲料的化学物质,但是发生在美国的数起宠物饲料致死宠物的事件和不久前国内婴儿奶粉受三聚氰胺污染导致婴儿肾结石事件,使三聚氰胺和食品、饲料行业联系在一起[1]。

一些不法厂商添加三聚氰胺以增加产品的表观蛋白质含量,使饲料生产商和食品加工厂必须进行三聚氰胺的检测以保证其产品的安全;水产品在养殖过程中所用饲料大多也添加三聚氰胺,这也增加了三聚氰胺残留的风险。

笔者建立了超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中三聚氰胺的残留量,该方法操作简单、选择性和灵敏度高、分析时间短,可满足进出口水产品中三聚氰胺残留量检测分析和确证工作的要求。

1 实验部分1.1 主要仪器与试剂超高效液相色谱仪(UPLC):AQU I TY UPLC型,美国W aters公司;Pre m ier四级杆串联质谱仪:Quattro Pre m ier TM XE型,美国W aters公司;均质器:T18型,德国I KA公司;高速离心机:S i g m a2-5型,德国S i g m a公司; 分析天平:BP211D型,感量0.0001g,北京Sar to ri u s公司;天平:B H-600型,感量0.01g,上海英展公司; 酶标仪:ELx800型,德国B io-tek公司;强阳离子交换小柱(MCX):60m g,3mL,美国W aters公司; 三聚氰胺标准品:S i g m a-A ldrich公司;甲酸、甲醇、乙腈、乙酸铵:色谱纯,德国M erck 公司;其它试剂均为分析纯,中国国药化学试剂有限公司;定容液和流动相用水为M i n i p ore-Q超纯水,其它实验用水为石英二次蒸馏水;三聚氰胺标准溶液:100 g/mL,准确称取三聚氰胺标准品10.0m g于50mL烧杯中,用少量甲醇溶解并定容到100mL容量瓶中,混匀,该溶液在-18冰箱中可保存12个月。

高效液相色谱法测定蛋白粉中的三聚氰胺

高效液相色谱法测定蛋白粉中的三聚氰胺摘要:蛋白粉经萃取,过PCX柱提纯后,采用Symmetry-C18柱,以庚烷磺酸钠缓冲溶液-甲醇(95∶5,V/V)为流动相,流速 1.0 mL/min,测定蛋白粉中三聚氰胺的含量｡该方法在1~100.0 mg/L范围内,相对标准偏差小于0.04%,标准曲线呈良好的线性关系(R2=0.999 1),最低检出限为1.0 mg/L,样品加标回收率为98.7%~104.0%,相对标准偏差小于0.4%,该方法能快速有效地测定蛋白粉中三聚氰胺的含量｡关键词:三聚氰胺;阳离子交换柱;蛋白粉Determination of Melamine in Protein Powder with HPLCAbstract: A HPLC method for the determination of melamine in protein powder was developed. Melamine in sample was extracted and purified by PCX column, then separated in Symmetry-C18 column with a mobile phase consisting of sodium heptanesulfonate and methanol(95:5,V/V) at 1.0 mL/min. The method showed a good linear relationship (r=0.999 1) for melamine of 1~100.0 mg/L with relative standard deviation was less than 0.4%, the detection limit was 1.0 mg/L, the recoveries ranged from 98.7% to 104% with relative standard deviations less than 0.04%. The method was a fast and accurate one for detecting melamine in protein powder.Key words: melamine; PCX column; protein powder德国化学家李比希在1834年最早合成了三聚氰胺｡该化合物作为一种重要的氮杂环有机化工原料,主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂,广泛用于木材加工､塑料､涂料､造纸､纺织､皮革､电气､医药等行业｡由于三聚氰胺每分子中的氮元素比例较大,测定掺假饲料和食品中的蛋白质含量时,常规定氮方法(如凯氏定氮法)会将三聚氰胺中的氮误判为蛋白质中的氮,使得蛋白质结果偏高｡因此少数不法商贩将其添加到饲料和食品中,冒充蛋白质,导致了动物体内､动物产品及食品中三聚氰胺的残留问题,危害动物及人体健康｡例如2007年“宠物饲料事件”和2008年“三鹿奶粉事件”,都极大损害了消费者利益和我国饲料工业以及奶业的国际声誉｡本实验通过高效液相色谱对蛋白粉中三聚氰胺进行测定,可为三聚氰胺的快速分析提供实验依据｡1材料与方法1.1仪器Waters高效液相色谱仪,Waters 1525泵,Waters 2487双通道紫外检测器,Breeze 色谱系统管理工作站,色谱柱:Symmetry-C18柱(5 μm,10 cm×4.6 mm),阳离子交换小柱(PCX)｡1.2试剂三聚氰胺:分析纯,纯度不低于99.5%;三聚氰胺标准溶液:精密称取三聚氰胺10.0 mg,以流动相定容至10 mL,作为标准液;乙醇､甲酸为分析纯;0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液,用柠檬酸调节pH值为3.3;乙腈:色谱纯;实验用水为去离子水｡1.3仪器测定条件检测波长设为240 nm;流动相为庚烷磺酸钠缓冲溶液-甲醇(95∶5,V/V);流速设为1.0 mL/min;进样量为20 μL｡1.4线性关系用20%(V/V)甲醇-水溶液将三聚氰胺标准液稀释成1､5､10､25､50及100 mg/L 系列标准工作液,过0.45 μm滤膜过滤后,进色谱系统分析｡以标准工作液浓度及其峰面积做线性回归分析,得标准工作曲线及线性方程｡1.5样品处理1.5.1样品的提取准确称取5 g左右蛋白粉(精确至0.000 1 g)至具塞锥形瓶中,加入1%(V/V)三氯乙酸20 mL,超声波振荡提取20 min,取部分溶液转移至10 mL 离心管中,7 500 rpm/min离心10 min,取上清液3 mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)｡1.5.2样品净化(PCX小柱,60 mg/3 mL)①活化及平衡:3 mL甲醇,3 mL水;②上样:加入提取液3p2.2线性范围及检出限将不同浓度三聚氰胺标准液做液相色谱分析,以质量浓度和峰面积作线性回归,得线性方程为y=2.529 2x+3.655 7,相关系数为R2=0.999 1,在1~100 mg/L范围内线性较好｡将标准样品稀释进样,以被测组分峰高为基线噪音的3倍浓度为最低检出浓度,本方法三聚氰胺的最低检出限为1 mg/L｡2.3精密度试验在选定的色谱条件下,将浓度为10 mg/L的标准样品连续进样5次,按1.3中色谱条件要求进行检测,保留时间和峰面积的RSD值分别为0.08%和3.96%(n=5)｡结果见表2｡2.4加标回收试验取蛋白样品,分别添加3个水平的标准样,按照处理方法进行提取分离后,测定三聚氰胺的含量,平行测5次,计算其加标回收率｡结果见表3｡2.5样品测定本实验条件下,三聚氰胺标准品色谱图如图1所示,经提取和净化后的蛋白粉样品色谱图如图2所示｡由图可知,在被检样品中未检测出三聚氰胺｡3结论本研究采用庚烷磺酸钠-柠檬酸溶液作为流动相,能有效分离蛋白粉中的三聚氰胺;采用阳离子交换柱可有效降低样品杂质的干扰,提高了检测灵敏度｡本法可用于对蛋白粉中三聚氰胺的分析检测,其结果稳定可靠,能有效保证蛋白粉制品的质量安全｡参考文献:[1] 黄芳,黄晓兰,崔永立,等.高效液相色谱-质谱法对饲料及食品添加剂中三聚氰胺的测定[J]. 分析测试学报,2008,3(37):313-315.[2] 王浩,刘艳琴,曹红,等. 固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺[J]. 分析化学,2008,2(36):273.[3] 何强,孔祥虹,李建华,等.离子交换色谱-紫外检测法测定乳制品中三聚氰胺[J].中国乳品工业,2008,6(36):55-57.[4] 杨云霞,刘彤,周桂英,等.小麦元粉中三聚氰胺的高效液相色谱法测定[J].分析测试学报,2008,3(27):322-324.[5] ANDERSEN W C,TURNIPSEED S B,KARBIWNYK C M,et al. Determination of Melamine Residues in Catfish Tissue by Triple Quadrupole LC-MS-MS with HILIC Chromatography[J]. Laboratory Information Bulletin,2007,23:4396.[6] HAMILTON D W,O’NEAL P A. Analytical methods for the quantification of free melamine and cyanuric acid in Nylon 6/6,6 copolymer[J]. J. Sep. Sci, 2003,26,510-514.[7] SANCHO J V, IBANEZ M. Residue-determination of cyromazine and its metabolite melamine in chard samples by ion-pair liquid chromatography coupled to electrospray tandem mass spectrometry[J]. Analytica Chimica Acta,2005,530(2):237-243.。

高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺

ＡｂｔａｔＡｈｇｅｆｒｎｅｌｕｄｃｒｍｔｇａｈｓｍｅｏａｅｅｐｄｆｒｔｅｄｔｒｎｔｎｏｌｍｎｏｔｎｎｆｅ，ｓｇＷａｅｓｒｃｉｐｒｍａｃｉｉｈｏａｏｒｐｉｈｏｑｔｄｗｓｄｖｌｅｅｅｍｉａｉｆｍｅａｉｅｃｎｅｔｉｅｄｕｉｔｒｈｏｏｈｏｎｓ
Ｘｅｒｃｌｎ４６ｍｔａｏｍ（．ｍ×１０ｍ５ｔ），ｅｎｒｅａｄ１ｎｏＬＳｄｕ一Ｏｔｅｌｎｔ—ｃｒｃｏｔｎ（０９，Ｖ）ｗｒｒｕ５ｍ，ｎａｔｉｉ０ｒｎｌｏｉ１ｃｓｆａａｏｔｌｎｒ／ｍｎａｕｏｅｉｉａｉＳｌｉ１：０Ｖ：ｔｃｄｕｏｅｅ
ｕｅｒｈｓｍｅｏ．ＴｅｒｓｌｓｏｅａｓｎａｅＷａｔ４ｍ．１ｅｒｔｎｏｉａｂｕ．３ｍｉ１ｅｓｄｒｕｖａｅｓｄｆｉｏｔｔｄｈｈｅｕｔｈｗｔｔｅｔｇｗｖｓａ０ｎｄｈｔｉ２１ｅｅｆｎｔｈｉｍｅＷａｏｔ２ｎ．１ｔａｄｃｒｅｗｂ．ｓ６ｈａｎｓ
ｔｅｎ１０ｔ／Ｌａｄ０ｔ／ＬＲ＝．９６．ｎｅｒｃｖｒｓａｔｅｒｆａｏｖｌ２，０１０ｍ／ｇｗｒ９％一９％ｗｔｗｅ．ｃｍｎｃｍ（２０９９）Ａｄｔｏｅｅｔｈｅｆｔｃｔｎｌｅ（０５，０ｇｋｅ０，５，９ｈｅｉｒｏｉｉｅｓｉｅ５ｉｈ
ｍ／Ｌ用甲醇配置，￣保存；准中间液用２％甲ｇｍ）４Ｃ标０

高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺的分析

2009.6D a i r y I n d u s t r y □ 乳品加工奶酪中的钙、磷的营养亲密度分别为1.3~7.0以及2.6~5.7（表5）。

从表5中可以发现，同一种类的奶酪，其脂肪含量越高，钙、磷的含量越低；而使用凝乳酶生产的奶酪中，钙含量通常要高于用酸法生产的干酪。

干酪中的钙、磷以及其它矿物质元素可被人体利用，这一点和乳中的这些矿物质元素没有区别。

奶酪的生生素也都进入了凝乳，相反，大部分水溶性维生素都在凝乳过程中随着乳清析出而排出（表6）。

2 结论奶酪营养成分丰富，主要为蛋白质和脂肪，其脂肪和蛋白质含量较原料奶中的蛋白质和脂肪提高了10倍。

此外，所含的钙、磷等无机成分，除参考文献[1]Walstra P . Dairy Technology.New York ：Marcel Dekker Inc,1999[2]张和平，张列兵. 现代乳品工业手册（第一版）. 北京：中国轻工业出版社，2005[3]郭本恒.奶酪. 北京：化学工业出版社，2003[4]董幕莹，任发政.世界干酪文化鉴赏. 北京：化学工业出版社，2004[5]郭本恒.现代乳品加工学. 北京：中国轻工业出版社，2001[6]赵新淮，于国萍，张永忠，李铁晶. 乳品化学. 北京：科学出版社，2007■ 孙宇霞呼伦贝尔市产品质量计量检测所【摘要】本文采用国家标准法中高效液相色谱法检测了乳及乳制中的三聚氰胺，经过反复使用和多次试验，从样品处理、净化、仪器测定3个方面，对国家标准中要求不详之处，进行了补充和改进。

对用液相色谱法检测三聚氰胺所用色谱柱和流动相进行了优选，将乳及乳制品中与三聚氰胺出峰时间重叠的组分进行了完全分离。

关键词：高效液相色谱法；三聚氰胺；检测分析高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺的分析在“三鹿牌婴幼儿奶粉事件”发生后，国家标准化管理委员会紧急启动了标准制定程序，开展了原料乳与乳制品中三聚氰胺的检测方法研究[1]，在第一时间制定并颁布了国家标准GB/T 22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》[2]，从标准实施之日起，质量检验机构和乳品企业开始采用此标准进行乳及乳制品中三聚氰胺的检测。

高效液相色谱法测定奶制品中的三聚氰胺

1.3.2 色谱条件检测波长 240nm；DBS-C8 色谱柱(150mm × 4.6mm，
5μm)；流动相为乙腈 - 缓冲液(7.5:92.5)；流速 1.0ml/ min；柱温 2 0 ℃；进样量 20μl；流动相和试样液使用前过 0.45μm 滤膜。
1.3.3 试样液提取、净化称取 5g(称准至 0.1mg)样品于 50ml 具塞比色管中，
2.4 样品中三聚氰胺的提取与净化三聚氰胺呈弱碱性，可溶于甲醇和乙腈，三氯乙
酸能使其转化成盐。用三氯乙酸 - 乙腈为提取剂，通过超声和离心，制得的提取液较浑浊，因为样品基质复杂。本研究用三聚氰胺含量较高的三鹿奶粉为提取样品，以加 2ml 醋酸铅溶液作沉淀剂和不加醋酸铅溶液作对比实验，发现加醋酸铅沉淀剂，所得提取液清亮，但测定结果偏低 22.92%，说明加沉淀剂尽管能使提取液
9.96
0.034
三
0.032
聚
0.030
氰
0.028
胺
0.026
0.024
0.022
0.020
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 时间(min)
图４三聚氰胺标样色谱图(1μg/ml) Fig.4 HPLC chromatogram of melamine standard (1 μg/ml)
ion exchange column, followed by HPLC determination. Melamine was separated by a DBS-C8 column (4.6 × 150 mm, 5μm,
Thermo) using acetonitrile–cushion solution (1-pentan esulfonic acid sodium salt – citric acid monohydrate) as mobile phase

乳制品中三聚氰胺的含量的测定(高效液相色谱法)实验报告

2009级化学教育仪器化学综合性与设计性实验指导老师：曹** 2011年 5月 30号一、实验目的1．通过分析化学综合性实验、设计性实验，培养学生初步的解决分析化学实际问题的能力，培养学生的创新意识与创新能力。

2．学习查阅参考文献、综合参考资料、设计小型分析化学实验。

3．复习和巩固有关理论基础知识并用于指导实践。

4．进一步熟练掌握实验操作技术。

①实验题目：乳制品中三聚氰胺的含量的测定（高效液相色谱法）②摘要、关键词：[摘要]为建立乳制品中三聚氰胺含量的高效液相色谱测定方法, 通过超声提取, 离子交换萃取小柱净化, 结合高效液相色谱进行样品测定。

色谱条件: A液：0.9508 g 辛烷磺酸钠（5 mmol/L）+ 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%A。

色谱柱：CNWSIL C18液相色谱柱（4.6×250mm，5 µm），检测波长：239 nm结果表明: 三聚氰胺标准曲线为y = 4495951x +18978.83, 相关系数R = 0.9999693, 在0.17～110.0 mg/L范围内线性关系良好, 方法检出限为0.12 mg/L, 两个样品三个水平的加标回收率分别为96.34 % (RSD = 4.76)、84.86 % (RSD = 7.21) 、104.29 % (RSD = 7.63) 和95.31 %(RSD = 4.39) 、89.25 % (RSD = 3.88) 、92.59 % (RSD = 5.27)。

[关键词]高效液相色谱; 三聚氰胺; 乳制品③引言一、目前有关三聚氰胺在乳制品中的概述：三聚氰胺(melamine) ）（化学式：C3H6N6），俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为“1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨基”，是一种重要的氮杂环有机化工原料, 通常用于塑料制品中合成树脂的生产[ 1 ] 。

高效液相色谱质谱联用法测定饲料中的三聚氰胺

定容至１０ｍＬ００
ＷａｒＡｌｎｉＨＬＣＳｌａ１０ｔｓｔｔＩＩｉｃ（５ｍｍ￣．ｍ，ｌ分离，ｅａｓｉ２１ｍ５ｍ）ｘ
１材料、器与试剂．１仪
选择反应监测（Ｒ正离子模式测定。结果表明，方法ＳＭ）该在三聚氰胺含量为５～００ｇ．５．ｎ／０ｍＬ范围内线性关系良好．
之间形成水合键而反复相互连接形成不溶于水
三聚氰胺标准储备液：准确称取０１ ± ．ｇ
０００ｇ的三聚氰胺标准品于１０．１００ｍＬ容量瓶中．用乙腈超声溶解冷却定容至刻度线．配成浓度为
摘
要：过对提取液、通净化方式的优化，色谱柱的选
用正交试验筛选最佳的提取方案．旨在建立饲料
中三聚氰胺的ＨＬ — ＰＣＭＳ法．以便有效地从源头控制饲料及水产品的安全。
１材料与方法
择建立饲料中三聚氰胺的高效液相色谱质谱联用法．对针相应的提取液用正交试验筛选最佳的提取方案品经乙样腈水溶液（０：０Ｖ、）声提取。心后取上清液与等体７３．，超，离积乙腈混匀．冷冻离心后直接过滤膜即可上机测定经
的大分子复合物．者联合毒性作用增强。两
目前，三聚氰胺常用的检测方法有：ＬＨＰＣ

固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量

固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量引言三聚氰胺是一种有机氮化合物，被广泛用作氮肥和杀虫剂。

三聚氰胺在食品中的超标使用会对人体健康造成危害，尤其是对婴幼儿和孕妇。

准确测定液态奶中三聚氰胺的含量对保障食品安全至关重要。

本研究旨在建立一种固相萃取一高效液相色谱法，用于测定液态奶中三聚氰胺含量。

实验方法1. 样品准备将不同来源的液态奶样品分别取样，并冷冻保存以确保样品的新鲜度和完整性。

2. 萃取过程将50ml的液态奶样品加入250ml的锥形瓶中，然后加入20ml的去离子水。

将样品与水充分混合，并进行超声处理5分钟。

接着将样品倒入100ml的固相萃取管中，并采用正向固相萃取法进行样品预处理。

3. 洗脱过程使用10ml甲醇-去离子水（3:1，v/v）进行3次洗脱，用5ml甲醇进行1次洗脱。

将洗脱液合并，并置于50℃水浴中浓缩至干燥。

随后加入2ml的去离子水重新溶解，转移到2ml小瓶中备用。

4. 分析参数采用高效液相色谱法将三聚氰胺化合物在C18色谱柱上分离，采用二极管阵列检测器进行检测，流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为乙腈。

柱温为30℃，流速为0.8ml/min，进样体积为10μl。

5. 样品检测将萃取液用0.22μm滤膜过滤后，进行高效液相色谱分析。

利用标准曲线法定量测定三聚氰胺的含量。

结果分析通过以上实验方法，我们成功建立了一种固相萃取一高效液相色谱法，用于测定液态奶中三聚氰胺的含量。

我们分别采用标准品对该方法进行了验证，在不同浓度下三次测定的相对标准偏差(RSD)均小于3%，符合测定法的要求。

该方法的检出限为0.05μg/kg，定量限为0.2μg/kg，对实际样品的分析结果也表现出较好的准确性和灵敏度。

结论我们成功建立了一种固相萃取一高效液相色谱法，用于测定液态奶中三聚氰胺的含量。

该方法具有操作简便、准确性高、灵敏度好的特点，可以应用于实际液态奶的质量控制和食品安全监测中。

未来，我们还将探索该方法在其他食品中三聚氰胺含量测定方面的应用，并不断优化方法，提高其分析精度和适用范围。

高效液相色谱法分析(三聚氰胺)原始记录1

方法检测限0.05 mg/kg泄量检测范围0.30mg/kg~100.0mg/kg样品空白值
计算公式：x-cxVxl00°
mx1OOO
式中：
X-试样中待测组分残留量（mg/kg）;A-样液中待测组分的峰面积；
c-从校正曲线得到的三聚飙胺的浓度中待测组分的浓度，（聘/mL）;
n—称取的试样质量，（g）;V-试样最终泄容体积，（mL）:
检测项目
三聚鼠胺
检测开始时间
年月日
检测依据
GB/T 22400-2008
检测结束时间
年月日
检测方法
高效液相色谱法
温度及相对湿度
°C%
仪器划称及型号
髙效液相色谱仪
仪器编号
XX/X X-
FA2004电子天平
XX/XX-074
样品处理情况
按照GB/T 22400-2008对样品进行处理。
混合标准使用液名称及浓度
通常情况下计算结果保留三位有效数字：结果在O.lmg/kg-l.Omg/kg时，保留两位有效数字：结果小于0.1 mg/kg时，保留一位有效数字。
控⑵况措庾自情拎
•质
样品总数
平行样个数
质控样个数
受理号:第1页•共页
使用前:
使用后:
高效液相色谱法分析（三聚氤胺）原始记录（续页）
第页，共页
三聚包胺标准溶液及其浓度：lmg/mL
仪器检测条件
检测器：PDA检测器
色谱柱：反相柱
柱温：40.0 °C
流速：1.0 inL/min
进样量：pL波长：240nm
流动相:磷酸盐缓冲液（PH3.0）-乙腊=70+30
标准曲线
序号

高效液相色谱-质谱法分析( 三聚氰胺 )原始记录

高效液相色谱-质谱法分析（三聚氰胺）原始记录
第1页，共页
检测项目
三聚氰胺
检测开始时间
年月日
检测依据
GB/T 22388-2008第二法
检测结束时间
年月日
检测方法
高效液相色谱质谱联用法
温度/相对湿度
℃％
仪器名称/型号
PE Qsight220/A30
仪器编号
××/××-070-2
电子天平FA2004
××/××-074-2
c--由标准曲线得出的试样溶液中被测组分的浓度，单位为（μg/mL）；
m--样品溶液所代表试样的质量，单位为（g）。
注：计算结果应扣除空白值。
质控
（自控）
情况
样品总数
平行样个数
加标样个数
仪器使用情况使用前：使用后：
检验人：复核人：审核人：
高效液相色谱-质谱法分析（三聚氰胺）原始记录(续页）第页，共页
样品编号
试样质量
( g )
定容体积
（mL）
组分浓度
（μg/mL）
结果
（mg/kg）
平均值（mg/kg）
相对
偏差（%）
仪器使用情况使用前：使用后：
检验人：复核人：审核人：
母离子
子离子
定量
离子定量方法标准曲线Fra bibliotek序号1
2
3
4
5
6
标液浓度（μg/mL）
标液峰面积（A）
回归方程
Y=aX+b a= b= r=
检出限
/
定量限
0.01 mg/kg
计算公式
计算公式：X=
式中：X--样品中被测组分含量，单位为（mg/kg）;A---样液中三聚氰胺的峰面积