高效液相色谱法氨基酸标样的分析实验
高效液相色谱法测定氨基酸
脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国）1.2 药品与试剂16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。
脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。
批号：2013、2013、2013.乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。
2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。
）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。
2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。
取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。
高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法研究
[检验医学]高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法研究仲岳桐,何彩,陈春晓摘要:目的 应用高效液相色谱法测定食品中氨基酸。
方法 使用带自动衍生功能的自动进样器进行在线衍生,梯度分离,利用二极管阵列-荧光检测器串联分析。
结果 在线衍生技术克服了离线手工衍生的偏差,双检测器联用技术能有效提高定性的可靠性和定量的准确性。
结论 研究的方法测定重复性好,灵敏度高,定性定量准确,结果满意。
关键词:高效液相色谱;氨基酸;食品中图分类号:TQ460.7 文献标识码:B 文章编号:1009-9727(2008)1-132-03Determination of amino acids in foods by high performance liquid chromatography.ZHONG Yue-tong,HE Cai,C HEN Chun-xiao.(Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen518020,Guangdong,P R China) Abstract:Objective To determine amino acids from foods by high performance liquid chromatography Methods Food samples were collected and determined by using autoinjector with online derivati on function,gradient elution program and tandem de tectin g technicque Results The online derivation technicque overcame the deviation arised from manual operating and serial de tectin g technicque could enhance both reliabili ty and accuracy of determinati on Conclusion The method is accurate,quati tativelyand qualitatively as well as a reproductive and satisfactory resultsKey w ords:High performance liquid chromatography;Amino acids;Foods氨基酸分析是食品成份分析的重要组成部分,其研究对象可分为生理体液和食品两大部分,检测方法一般可分为氨基酸分析仪法、离子色谱法、高效液相色谱法等。
高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸含量
高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸含量一、本文概述本文旨在探讨高效液相色谱法（HPLC）在大豆中游离氨基酸含量测定中的应用。
作为一种重要的植物蛋白来源，大豆中的氨基酸组成对于其营养价值及食品工业应用具有重要意义。
游离氨基酸作为大豆蛋白质水解的产物，其含量直接反映了大豆的蛋白质质量和营养价值。
因此，准确测定大豆中游离氨基酸的含量对于评估大豆品质及开发高附加值产品至关重要。
高效液相色谱法作为一种高效、准确的分离分析技术，在氨基酸分析领域具有广泛应用。
本文将详细介绍高效液相色谱法的基本原理、样品处理方法、色谱条件优化以及结果计算与分析等方面的内容，并通过实验验证该方法的可行性和准确性。
本文还将讨论高效液相色谱法在大豆游离氨基酸含量测定中的优势及局限性，以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
二、实验材料与方法（1）大豆样品：选择新鲜、无病虫害、无杂质的大豆作为实验材料，经过清洗、烘干、破碎后备用。
（2）试剂：实验所需试剂包括高效液相色谱仪用流动相（如乙腈、甲醇等）、衍生化试剂（如OPA、FMOC等）、标准品氨基酸等，均为分析纯或更高纯度。
（3）仪器：高效液相色谱仪（配备紫外检测器或荧光检测器）、离心机、涡旋混合器、水浴锅、移液枪等。
（1）样品处理：称取适量大豆样品，加入适量的水或缓冲液，进行匀浆处理。
然后，将匀浆液进行离心，取上清液作为游离氨基酸提取液。
（2）衍生化处理：取一定体积的游离氨基酸提取液，加入适量的衍生化试剂，进行衍生化反应。
衍生化反应的目的是将氨基酸转化为易于检测的衍生物，提高检测灵敏度和准确性。
（3）高效液相色谱分析：将衍生化后的样品进行高效液相色谱分析。
选择合适的流动相和色谱柱，设置合适的检测波长或激发/发射波长，记录色谱图和峰面积。
（4）数据处理：根据标准品氨基酸的色谱图和峰面积，绘制标准曲线。
然后，根据样品的色谱图和峰面积，结合标准曲线，计算样品中游离氨基酸的含量。
本实验采用高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸的含量，通过样品处理、衍生化处理、高效液相色谱分析和数据处理等步骤，实现对大豆中游离氨基酸的快速、准确测定。
高效液相色谱技术在氨基酸分析中的应用
高效液相色谱技术在氨基酸分析中的应用氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，其在生物体内具有重要的生理功能。
因此，对氨基酸的分析研究十分重要。
高效液相色谱技术（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种现代化的色谱分析技术，通过对样品中的化合物进行分离和定量分析，广泛应用于各个领域。
在氨基酸分析中，HPLC技术的应用发挥了重要作用。
首先，HPLC技术在氨基酸分析中具有较高的灵敏度和分辨率。
通过选用合适的色谱柱和优化分析条件，HPLC可以对样品中的氨基酸进行有效的分离和检测。
同时，HPLC技术还具有较高的灵敏度，能够实现对微量氨基酸的定量分析。
这使得HPLC技术能够满足对氨基酸分析中高精度和高灵敏度的要求。
其次，HPLC技术在氨基酸分析中具有较强的选择性。
通过选择不同的色谱柱、流动相和检测方法等，可以实现对不同氨基酸的选择性分离。
这使得HPLC技术能够同时对多个氨基酸进行分析，为氨基酸组分的定量和鉴定提供了可靠的手段。
此外，HPLC技术还可以与其他检测方法（如质谱联用）相结合，进一步提高分析的选择性和准确性。
第三，HPLC技术在氨基酸分析中具有较高的分析效率和快速性。
相比于传统的氨基酸分析方法，HPLC技术具有分析速度快、样品处理简单等优点。
它可以通过自动进样系统实现对多个样品的同时分析，大大提高了分析效率。
同时，HPLC技术还可以借助软件进行数据处理和分析，进一步加快氨基酸的分析速度和结果解释。
最后，HPLC技术在氨基酸分析中还具有较强的应用前景和广泛的应用领域。
随着生物学、医学、化学等领域的发展，对氨基酸的研究需求越来越大。
HPLC技术作为一种灵活、高效的分析方法，与其他分析技术相结合，有望在氨基酸分析中发挥更大的作用。
例如，在食品行业中，HPLC技术可用于分析和监测食品中的氨基酸含量，保证食品的质量和安全。
在医学领域，HPLC技术可用于检测人体内的氨基酸水平，对疾病的诊断和治疗提供重要依据。
饲料中氨基酸的测定高效液相色谱法
《饲料中氨基酸的测定高效液相色谱法》河南省地方标准编制说明一、编制的目的和意义氨基酸是羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后的化合物，氨基酸分子中含有基和氨羧基两种官能团。
与羟基酸类似，其可按照氨基连在碳链上的不同位置而分为α-，β-，γ-...w-氨基酸，但经蛋白质水解后得到的氨基酸都是α-氨基，它们是构成动物营养所需蛋白质的基本物质，是维持动物生长所必需的营养物质，其种类和含量是评价饲料蛋白质营养价值的根本指标，测定饲料中的氨基酸具有非常重要的意义。
随着畜牧养殖业的迅猛发展，对饲料营养成分分析也提出了更高的要求。
饲料分析已从比较单一的高含量营养成分，如蛋白质、脂肪等的总量分析，深入到比较复杂的微量营养素，如多种氨基酸、维生素、微量元素及饲料中的有害物质等分析。
目前，饲料产品国标中氨基酸的测定采用的是离子交换柱后茚三酮衍生色谱法。
但众所周知，该方法使用的氨基酸自动分析仪价格昂贵（约70万左右），专属性强，只能分析氨基酸，且分析速度慢。
而采用高效液相色谱法测定氨基酸，具有价格便宜，分析速度快、灵敏度高、操作简便的特点，其次，目前很多实验室都配置了高效液相色谱仪，其价格易于接受（约10万左右），而且它的分析范围很广，可测定饲料中的氨基酸、维生素、碳水化合物、脂肪酸、有机酸、添加剂(风味剂、防腐剂等)和有害物质(如黄曲霉素、棉酚和农药残留等)，因而实现了一机多用的可能。
相比于目前国标方法GB/T 18246-2000《饲料中氨基酸的测定》规定的氨基酸分析方法，高效液相则具有较好的通用性，应用范围广且市场占有率高，利于推广。
随着高效液相色谱技术的日趋成熟和普及，高效液相色谱法必将成为各检测机构测定氨基酸含量的主要方法。
二、任务来源及编制原则和依据2.1 任务来源根据河南省质量技术监督局文件《河南省质量技术监督局关于下达2017年第四批河南省地方标准制修订计划的通知》豫质监标发〔2017〕355号的要求，由河南海瑞正检测技术有限公司负责对项目编号为20174210667的河南省地方标准《饲料中氨基酸的测定高效液相色谱法》的起草、制定工作。
发酵饲料原料氨基酸测定方法
发酵饲料原料氨基酸测定方法发酵饲料是一种常见的饲料形式，通过微生物的发酵作用，可以将一些廉价的原料转化为高质量的饲料。
而饲料中的氨基酸是动物生理功能的基本组成部分，也是评价饲料质量的重要指标之一。
因此，准确测定发酵饲料中氨基酸的含量对于饲料生产具有重要意义。
常用的发酵饲料原料氨基酸测定方法主要有以下几种：一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是一种常用的氨基酸测定方法。
该方法通过将样品溶解并进行适当的预处理后，将氨基酸分离并通过色谱柱进行定量分析。
这种方法具有准确度高、灵敏度高、分析速度快等优点，被广泛应用于发酵饲料中氨基酸的测定。
二、气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的氨基酸测定方法。
该方法将样品中的氨基酸通过酸水解等预处理方法转化为气体化合物，然后通过气相色谱仪进行分离和定量分析。
这种方法具有分离效果好、分析速度快等优点，但对于一些热稳定性较差的氨基酸，需要进行适当的保护处理。
三、生化分析法生化分析法是一种传统的氨基酸测定方法，主要通过酶促反应将样品中的氨基酸转化为其他化合物，并通过光度计等仪器进行测定。
这种方法操作简便，灵敏度较高，但对于一些特殊的氨基酸，可能存在反应不完全的情况，影响测定结果的准确性。
以上三种方法在发酵饲料中氨基酸测定中都有其独特的优势和适用范围。
在选择合适的方法时，需要考虑样品的特性、测定的准确度要求、设备的可用性等因素。
此外，为了提高测定结果的准确性，还需要注意样品的采集和保存，避免外界污染和氨基酸的降解。
总结起来，发酵饲料原料氨基酸测定方法包括高效液相色谱法、气相色谱法和生化分析法等。
选择合适的方法可以准确测定发酵饲料中氨基酸的含量，为饲料生产提供科学依据，提高饲料的质量和营养价值。
同时，为了保证测定结果的准确性，还需要注意样品的采集和保存等实验细节。
综上所述，发酵饲料原料氨基酸测定方法对于饲料生产具有重要意义。
高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸
高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸1氨基酸氨基酸是类似于蛋白质的有机化合物，也是人体代谢过程中不可或缺的物质，具有重要的生理功能，人们发现它对人体健康有重要作用。
氨基酸分为线粒体氨基酸和细胞质氨基酸，它们可以通过液相色谱（HPLC）和其他技术进行测定。
2高效液相色谱化学发光检测法高效液相色谱化学发光检测法(HPLC-FLD)是一种非常常用的检测方法，是在液相色谱的基础上添加了化学发光探测器。
它具有高灵敏度、高分离度和快速分析等优势，得到了广泛应用。
在研究氨基酸中，HPLC-FLD可以较为准确地检测和分离氨基酸，从而实现对氨基酸浓度的准确测定及调整。
3工作原理HPLC-FLD工作过程是：在分析柱内，将水，乙腈，乙醇等溶剂混合，氨基酸将在柱中混有不同的动力学行为。
当氨基酸离开柱时，经测量氨基酸在化学发光探测器上发出的发光信号，可以计算出它们的相对浓度，从而判断氨基酸含量。
4检测步骤（1）样品准备：样品中含有氨基酸的各种溶液，需经过提取，稀释或洗脱处理等，以便于之后的检测。
（2）色谱层析：把样品按照一定的色谱层析方式，分离不同的成分，从而使不同的成分分离出来。
（3）发光测定：在这一步，人们可以利用HPLC-FLD测定氨基酸。
首先，样品将通过有机溶剂组合作用，激活发光反应，然后将样品通过化学发光探头的发光状态记录下来，并计算概率密度，最终得出样品中氨基酸的含量和比例。
5优势HPLC-FLD在检测氨基酸中有很多优势：（1）可以快速准确地检测氨基酸；（2）可实现高灵敏度和高分离度；（3）化学发光探头具有长寿命、可靠以及易于操作等优势；（4）可克服外界因素对分析结果的影响；（5）可以长时间连续检测，勤奋节约成本。
6结论HPLC-FLD是一种高效的技术，在检测氨基酸方面具有较高的准确性和效率，它不但能够用于氨基酸的检测，还可用于其他有机物分离和测定，在生物和药物领域都有广泛应用。
高效液相色谱法测定氨基酸
脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国）1.2 药品与试剂16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。
脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。
批号：2013、2013、2013.乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。
2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。
）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。
2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。
取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。
高效液相色谱的使用及氨基酸标样的分析
高效液相色谱的使用及氨基酸标样的分析高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代化分析仪器，广泛应用于生化分析、药物分析、环境监测等领域。
HPLC相比传统色谱具有分离速度快、分离效果好、选择性高、灵敏度高等特点，可对复杂的混合物进行快速、准确的定性和定量分析。
氨基酸是构成蛋白质的基本单位，HPLC可以快速、准确分析氨基酸，具有重要的科研和实际应用价值。
HPLC的使用可分为以下几个步骤：1.样品制备：样品制备是HPLC分析的重要步骤，包括样品的提取、纯化、前处理等。
而对于氨基酸的分析，通常需要先将样品中的氨基酸转化为荧光染料或二硫醇衍生物，以提高检测灵敏度。
2.柱的选择：根据分析目标和样品性质，选择适合的色谱柱。
常见的色谱柱有反相柱、离子交换柱、大小分子排阻柱等。
对于氨基酸的分析，通常选择反相柱进行分离。
3.流动相：选择合适的流动相是HPLC分析的关键，流动相的组成对分离效果有很大的影响。
对于氨基酸的分析，常用的流动相是缓冲溶液，如甲醛-磷酸盐缓冲液、醋酸-磷酸缓冲液等。
4.梯度洗脱：丰富样品之间的分离效果，可以采用梯度洗脱。
梯度洗脱是通过调节流动相中溶剂的组成和洗脱速率来实现样品的高效分离。
5.检测方法选择：根据不同的分析目标，选择合适的检测方法。
常见的检测方法有紫外检测、荧光检测、电化学检测等。
对于氨基酸的分析，常用的检测方法是荧光检测，因为部分氨基酸具有固有的荧光性质。
6.数据分析：使用专业的色谱软件进行数据分析和结果解读，如峰面积积分、峰高度积分、峰形比较等。
氨基酸的分析常常使用HPLC进行，具体步骤如下：1.样品制备：将氨基酸标样依次溶解在适量的溶剂中。
2.色谱柱选择：根据需要选择合适的色谱柱，如反相柱。
3.流动相制备：根据需要选择合适的缓冲溶液作为流动相。
4.进样：使用自动进样器或手工进样器将样品注入进样口。
5.梯度洗脱：通过调节流动相中溶剂的组成和洗脱速率，进行梯度洗脱。
高效液相色谱法测定氨基酸口服液中L-色氨酸的不确定度评定
； 期
Ｃ ＩＣＡＬ ＡＬＹＳＩＳ Ｍ ＥＴＥＲＡＧＥ 化学 ＡＮＤ 分析 计量 ＨＥＭ ＡＮ
Ｖ Ｉ ２１ ＮＯ． ｏ． ． ２
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Ｋｅ ｗｏ ｄ Ｌ－ ｙ ｔｐ ａ ； Ｌ ； ｍｉｏ－ｃｄｏ ａ ｑ ｉ ； ａ ｕ ｅ ｎ ｎ ｅ ａｎ ｙ ｙ ｒｓ － ｐ ｏ ｈ ｎ ＨＰ Ｃ ａ ｎ － ｉ ｒ ｌ ｉ ｕ ｄ ｍｅ ｓ ｒ ｍｅ ｔ ｃ ｒ ｉ ｔ ｔ ｒ ａ ｌ ｕ ｔ
色 氨 酸 通 常 以游 离 或 结 合 态 广 泛 存 在 于生 物
称 取 约 ５Ｏ ｇＬ 色氨 酸 标 准 品 ， 水溶 解 并 准 确 ． ｍ 一 ０ 用
０ｍＬ 于 ℃冰箱 中保存 ； 体中， 是人类和动物必需的 ８ 种氨基酸之一 。人体 定 容 至 ５ ， ４ 不能制造它 ， 而必须从膳食 中摄取【２ １］ ，０色氨酸对生 甲醇 ： 色谱纯 ； 水： 超纯 水 ， 电阻率 为 １． Ｍｎ ・ ｍ ； ８２ ｃ 物 的生 长 和 氮平 衡 非 常重 要 ， 氨酸 缺 乏或 代谢 错 色 误 会 引起 一 系列 疾 病 ； 一 方 面 ， 氨 酸 也 可作 为 另 色 氨基 酸 口服液 ：０ｍＬ 支 ， １ ／ 市售 。
二极管阵列检测器 ， 国 Ｗａ ｒ 公司； 美 ｔｓ ｅ 三 色氨酸纯度标准物质 ： Ｂ Ｅ １０６ ， 一 Ｇ Ｗ（） ０２０ 纯度
高效液相色谱仪测定发酵液中的氨基酸含量
高效液相色谱仪测定氨基酸的含量1 L--色氨酸含量的测定1.1实验仪器与试剂色氨酸样品，甲醇，高效液相色谱仪，0.03%KH2PO4溶液1.2 HPLC色谱分析条件流动相为0.03%KH2PO4溶液（A）-甲醇（B），线性梯度淋洗，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm。
1.2标准溶液的配制精密称取色氨酸标准标准品50mg，置100ml容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。
1.3标准直线的制作精密称取色氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml 中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以色氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。
1.4发酵液中样品中色氨酸含量的测定取发酵液，稀释配制成约500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
2L-精氨酸含量的测定2.1实验仪器与试剂L-精氨酸标准样品，乙腈，高效液相色谱仪，磷酸二氢铵。
PH计，磷酸，2.2HPLC色谱分析条件流动相: 以磷酸二氢铵溶液( 称取磷酸二氢铵1.15g, 加水800m 溶解后, 用磷酸调节pH 值至2.0±0.1, 加水稀释至1000ml ) - 乙腈为流动相，线性梯度淋洗; 柱温为30℃检测波长为206nm；进样量：25μl。
2.2标准直线的制作精密称取精氨酸标准标准品50mg，置100ml 容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。
精密称取精氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml 中含精氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以精氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。
2.3发酵液中样品中精氨酸含量的测定取发酵液，稀释配制成约500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl 进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
柱前衍生高效液相色谱法测定氨基酸
［］ ．ｅ ｇＧ Ｊ ｕｈ ，． ａ Ｗｉｉ ｅ，．． ｉ ２ Ｃ Ｄ Ｊ ，． Ｈ ｇｅ ＥＶｎ ｒｇ Ｋ ＪＷｌ ｏ ｎ ． ｓ ｅｎ ｎ －
ｓｎＪＣ ｒｍ ｔｇ．２１３５１８） ｏ ， ｈｏ ａ ｒ，４ ，４（９２． ． ｏ ［］ ． ． ｉ ｉ ｓ ａ ，Ａ ｖｎｅ ｉ Ｃ ｒｍ ｔ ｒｐｙ ， ３ ＪＣ Ｇｄ ｎ ｅ ｌ ｄ ｇ ｔ ． ｄａｃ ｎ ｏ ａｏ ａｈ ｓ ｈ ｇ
氨基酸不稳定， 特别是甘 氨酸、 赖氨酸衍生物的信号 衰减很快， 此法多用于全自动的在线衍生（ｎｌｅ。 ｏ－ｎ） ｉ ４Ｏ Ａ法分析配合饲料氨基酸回收率较低， ．Ｐ 这可能 是配合饲料中的盐分影响了衍生（） ０ ｌ。
一、 邻苯二甲醛 Ｏ Ａ） Ｐ 法
邻苯二甲醛（Ｐ 衍生法， Ｏ Ａ） 早在１７年就由 ９１ Ｒ ｔ 提出， ｏｈ 由于其灵敏度比茚三酮法高出十倍， 故
Ａ － Ｈ ＋Ｄ ｎｙ Ｃ Ａ Ｎ － ａｓ －ｌ Ｃ Ａ Ｎ ２ ａｓｌ ｌ Ａ Ｈ Ｄ ｎｙ Ｃ＋Ｈ ｌ ｌ
从仪器设备上讲， 均采用两元梯度淋洗， 需要两 台高压液相色谱泵， 紫外或荧光检测器等。 分析柱多 采用反相Ｃ８ Ｆ Ｃ法以反相Ｃ柱居多。 １ ＭＯ 柱， ８ 从仪器 生产厂家看， 惠普公司和吉尔森公司采用 Ｏ Ａ与 Ｐ Ｆ Ｃ结合法（ ， ｔｓ ＭＯ ２ Ｗａ ｒ公司则建议采用 ＰＴ ５ ） ｅ ＩＣ 法， 并推出了专用的氨基酸分析柱Ｐｃ－ａ 及衍生 ｉ Ｔｇ ｏ 工作站，Ｋ Ｌ Ｂ公司则认为 Ｏ Ａ Ｆ Ｃ和 ＰＴ Ｐ ＭＯ ＩＣ三 法均可使用。 在实际应用中，Ｐ Ｏ Ａ和Ｆ Ｃ在生理 ＭＯ 体液中应用较多， 而在食品和饲料工业中ＰＴ ＩＣ法 占主导地位。 据Ｆｒ 统计结果表明， ｓ ｔ 每年采用Ｏ Ａ Ｐ 法大约分析８０个生理体液样品，ＭＯ ＩＣ和 ００ Ｆ ＣＰＴ
高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化及应用
高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化及应用一、前言氨基酸是构成生物体蛋白质的基本单元，具有重要的生物学功能，如构建细胞结构、参与免疫反应以及转运、储存等多种生命活动。
而测定氨基酸含量的方法有很多种，其中，高效液相色谱法（HPLC）具有高灵敏度、高分辨率、快速分离、定量准确、重现性好等特点，因此被广泛应用于氨基酸分析领域。
本文重点介绍了高效液相色谱法测定氨基酸含量的原理、优化及应用。
二、方法原理高效液相色谱法是利用固体相、液相以及流动相间相互作用的分离技术，它通过改变固体相和液相的化学性质和物理性质，通过不同流动相的渗透能力与氨基酸分子的分子量、极性、结构特征等因素的相互作用，实现对氨基酸化合物分离、检测和定量的目的。
三、优化方案1.色谱柱的选择色谱柱的选择直接影响着 HPLC 法测定氨基酸含量的敏感度和分离效果。
常用的色谱柱有离子交换柱、反相柱、手性柱。
2.氨基酸样品的制备氨基酸的提取方法主要有：硫酸-氯化氢法、热酸解法和酶切法。
其中前两种方法操作简单，容易控制，常用于高精度测定。
3.流动相的优化流动相中添加适量的酸或碱，有利于提高分离度和氨基酸的稳定性。
同时加入有机物质类的前处理，在未来进行样品的提取、清洗等操作，有助于减少基础样品产生。
4.色谱条件的优化尽量缩短柱温度，降低流速，减少相互扰动，提高分辨率。
通常，正向向柱洗液的浓度可逐渐提高，也可采用反向洗液以加速洗脱。
四、实验结果分析实验结果显示，优化后的 HPLC 法测定氨基酸含量其灵敏度、准确度、重现性等指标均有了明显的提高，特别是样品前处理及流动相的优化方案都有利于提高样品的稳定性和可检出性。
五、应用展望高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化方案在氨基酸分析领域具有广泛的应用前景。
在临床医学、食品安全、环境污染等领域，测定氨基酸含量对于人类健康与生产活动具有重要意义，因此优化后的 HPLC 法测定氨基酸含量将被广泛应用于相关领域。
总之，高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化方案既有理论指导又有实验可行性，为实现准确测定氨基酸含量提供了新思路和新途径。
高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中的酪氨酸和色氨酸含量
８ ５ ） ， 甲醇一 水一 冰醋酸（ ３ ３ ： ６ ６ ： １ ） ， 乙腈一 ０ ． ０ １ ｍ ｏ １ ］ Ｌ磷 酸二 氢钾 （ 三 乙胺调
ｐ Ｈ＝ ６ ． ５ ）（ ５ ５ ： ４ ５ ） ， 甲醇 一 水一 三 乙胺 （ ４ ０ ： ６ ０ ： ０ ． １ ） ， 甲醇 一 水一 冰醋酸 （ ４ ６ ： ４ ３ ： １ ） ，
谱 柱 为 奥 泰 公 司 Ｃｌ ８色 谱 柱 （ ２ ５ ０ ｍ ｍｘ ４ ． ６ ｍｍ， ５ ｍ ） ： 乙腈一 甲醇 一 ２ ０ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ
乙腈一 ０ ． ０ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ的磷酸氢 二钠一 磷酸 （ ２ ０ ： ８ ０ ： ０ ． ０ １ ） 不 同比例 的流动相 ， 结果 以乙腈一甲醇一 ２ ０ ｍ ｍｏ ｌ ／ Ｌ磷酸 二氢钠溶液 （ 磷酸调 ｐ Ｈ ３ ． ５ ￣ ０ ． １ ） （ ５ ： ５ ： ９ ０ ） 为流 动相， 供试品各峰分离效果最好 ， 故选用 乙腈一 甲醇一 ２ ０ ｍｍ ｏ Ｉ ／ Ｌ磷酸二氢钠 溶液 （ 磷酸调 ｐ Ｈ ３ ． ５ ￣ ０ ． １ ） （ ５ ： ５ ： ９ ０ ） 为流 动相。复方氨基酸注射液 中色 氨酸 和 酪 氨 酸 的含 量 为标 示 量 的 ９ ５ ％一１ ０ ５ ％。 ■ 参 考文献 【 １ １ 焦庆才 ， 赵根 海， 刘均忠， 刘茜． Ｌ 一 色氨 酸工业化技术研 究进展Ｉ Ｊ Ｉ ． 发 酵科技通讯， ２ ０ １ ０（ ４ ） ．
３讨 论
分别考察 乙腈一甲醇一 ２ ０ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ磷酸 二氢钠溶液 （ 磷酸调 ｐ Ｈ ３ ． ５ ￣ ０ ． １ ）
（ ５ ： ５ ： ９ Ｏ ） ， 乙腈 一 甲醇 一 ２ ０ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ磷 酸 ： 二 氢钠溶液 （ 磷酸调 ｐ Ｈ ３ ． ５ ￣ ０ ． １ ）（ １ ０ ： ５ ：
高效液相色谱法测定食物中氨基酸含量 北京液相色谱仪分析案例
食物中氨基酸含量的高效液相色谱法测定一、简介测定食物中氨基酸含量一般采用氨基酸分析仪，柱后衍生测定，但氨基酸分析仪价格昂贵，分析时间长，且只能用于分析氨基酸，限制了氨基酸分析技术的广泛应用。
七十年代以来，柱前衍生高效液相色谱法开始应用于氨基酸的测定。
液相色谱通用性强，检测灵敏度高,可用于多种物质的分析。
南京科捷应用研究所采用柱前衍生紫外检测的方法对几种食物中的16种氨基酸进行了测定。
二、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置LC-10Tvp高压恒流泵：2台SPD-10Tvp紫外检测器：1台SCL-10Tvp 系统控制器：1台7725i手动进样阀： 1套色谱工作站：1套（VI2010、N2000、N3000选用）液相色谱柱：1支（C18 4.6*250mn,5um）微量进样器：1支（50ul/100ul）进样支架：1只（进样阀用）三、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是南京科捷分析仪器有限公司为了快速地满足多样化的客户需求，在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化，利用美国先进技术开发设计，国内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。
LC-10Tvp等度高效液相色谱仪实现了人机对话，可实时对仪器的运行状态进行监控，并可对潜在和已出现的故障做出判断，同时提供在线解决方案。
该仪器也全面实现了远程的准无人操作，大大提高了仪器的使用效率，同时通过高精度的AS1000自动进样系统，实现自动化进样，最大程度抑制了样品的交叉污染，提供样品分析精度。
LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。
主要特点丰富的功能——符合客户对分析的不同需求硬件具有VP功能，记录维护信息和操作记录，符合GLP/GMP要求；系统控制器增具有时钟、温度计、湿度计等人性化设计的功能。
卓越的性能——满足客户对仪器的严格要求检测器采用进口氘灯、光电池以及1200条/mm凹面光栅组成的双光束单色器；精密加工的双透镜流通池，控制波长调节的高精度微处理器以及双路高速的采样频率，确保了低噪声、低漂移及超高灵敏度等特点。
高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中的酪氨酸和色氨酸含量
促进人体蛋白质代谢正常 ， 纠正负氮平衡， 补充蛋白 质， 加快伤 １ ２愈合的作用。 氨基酸（ Ａ ｍ ｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ） 是构成蛋白质的基本单位， 赋予蛋 白质特定的分子结构形
态， 使他 的分子 具 有生化 活性 ＿ 田 。蛋 白质 是生物 体 内重要 的活 性分子 ， 包 括催 化
分别考察乙腈一水（ ７ ５ ： ３ ５ ） ， 水一 甲醇（ ２０ ： ８ ｏ ） ， 乙腈一 ０ ． ０ １ ｏｏ ｔ ｌ ・ 的磷酸溶液 （ ８ ０ ： ２ ０ ） ， 水一 甲醇一 三乙胺 （ ２ ０ ： ８ ０ ： ０ ． ０ １ ） ， 乙腈一 甲醇－ ２ ０ ｍｍ ｏ ｌ ／ Ｌ磷酸二氢钠溶液 （ 磷酸调 ｐ Ｈ ３ ． ５ ： ｔ － ０ ． １ ） （ １ 晒： ８ ５ ） ， 以 Ａ磷 酸 二氢 铵溶 液 （ 称取 磷 酸 二 氢铵 １ ． １ ５ ｇ ， 加 水８ ０ ０ ｍ 溶解 后 ， 用 磷 酸调 节 ｐ Ｈ值 至 ２ ． ０ ￣ － － ０ ． １ ， 加 水 稀释 至 １ ０ ０ ０ ｍＤ— Ｂ甲醇 梯
科 学 理 论
高效液相色谱法测 定复方氨基酸注射液 中的 酪氨酸和色氨酸含量
张秀杰， 周 红 静
（ 哈尔滨松鹤制药有限公司） 摘 要： 复方氨基酸注射液是一种透 明、 无色或微黄色的澄明液体 ， 适用于不能 口服或 经肠道补给营养， 以及营养不能满足需要的患者。本文采用高
校液相测定 了复方氨基酸注射液 中酪氨酸和色氨酸 的含量 ， 以 Ａ磷酸二氢铵 溶液 （ 称取磷酸二氢铵 １ ． １ ５ ｇ ， 加水 ８ ０ ０ ｍ溶解后， 用磷酸调节 ｐ Ｈ值 至 ２ ． ｏ 土 Ｏ ． １ ， 加 水 稀 释至 ｌ ｏ ０ Ｏ Ⅱ ｄ ） 一 Ｂ 甲醇 梯 度 洗 脱为 流 动 相 ， 检测波长为 ２ ８ ０ ｎ ｍ： 本 方 法 可 用 于 复方 氨 基 酸 注 射 液 中 色氨 酸 和酪 氨 酸 的 含 量 测 定 。 关键词 ： 复方氨基酸注射液； 高效液相 ； 含量
液相色谱仪测氨基酸
（二）试剂： 乙腈（重蒸馏）； 丙酮（重蒸馏）； 丹磺酰氯丙酮溶液：称取1.0克丹磺酰氯溶于10毫升丙 酮中。使用时吸取0.1毫升此溶液用8毫升丙酮制备而 成。贮存于冰箱中，工作液当天配制； 缓冲溶液（pH=0.5）: 称取 8.4 克碳酸氢钠溶解于 1000毫升水中后使用； 0.5mol/L氢氧化钠溶液； 0.01mol/L盐酸溶液及6mol/L盐酸溶液； 6mol/L氢氧化钡溶液；
（ 2 ）衍生物制备及其测定：将上述干燥制备的样 品加入 40 微升 pH=10.5 缓冲溶液，接着加入 100 微升丹磺酰氯工作试剂，紧密封住管口，充分 振摇 15 分钟，将样品管在 100℃ 水浴中加热 2 分 钟，取出冷却。吸取 1 毫升以 1 ： 1的比例相混合 的甲、乙两种流动相的混合溶液于样品管中， 充分振摇15秒，吸取10微升左右的此样品溶液注 入液相色谱柱内，记录色谱图。
四、分析步骤 1、样品处理与测定 （1）蛋白质的水解：称取1毫克的蛋白质样品或相 当于1毫克蛋白质的样品于玻璃管中，加入1毫升 6mol/L盐酸后用磨口封口或烧结封口，移入 110℃恒温箱中加热16小时，取出冷却。用微量注 射器取20微升水解样液于小玻璃管中，加入10微 升正亮氨酸作为内标溶液，并在水浴中蒸发干 燥。
五、结果处理
1. 2. fi=Ais标/Ai标 W氨基酸（%）=[（fi*Ai）/Ais]*[mis/m]*100
3.式中Ais标—氨基酸混合标准样品中内标物的峰面积； 4.Ai标—氨基酸混合标准样品中每种氨基酸i标准物的峰面 积； 5.fi—为某氨基酸i标样的峰面积相对于内标样品的峰面积 的校正因子； 6.Ais、Ai—分别为内标及氨基酸组分i的峰面积； 7.mis—进入色谱内样液中内标物重量（微克）； 8.m—进入色谱内样液中样品重量（微克）。
高效液相色谱法测定氨基酸操作流程
高效液相色谱法测定氨基酸操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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氨基酸分析实验报告
氨基酸分析实验报告一、实验目的本实验旨在对给定样品中的氨基酸进行定性和定量分析，了解样品中氨基酸的种类和含量，为进一步的研究和应用提供数据支持。
二、实验原理氨基酸是含有氨基和羧基的有机化合物，在一定条件下能与某些试剂发生特异性反应。
本实验采用了高效液相色谱法（HPLC）进行氨基酸分析。
HPLC 基于不同氨基酸在固定相和流动相之间的分配系数差异，实现分离和检测。
三、实验材料与仪器1、实验材料待分析样品：＿____标准氨基酸溶液：包括 20 种常见氨基酸的标准品。
衍生化试剂：邻苯二甲醛（OPA）和9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）。
流动相：A 相为醋酸钠缓冲液（pH 65），B 相为乙腈甲醇（60:40）。
2、实验仪器高效液相色谱仪（配备紫外检测器）。
离心机。
移液器。
容量瓶。
分析天平。
四、实验步骤1、样品预处理称取一定量的样品，加入适量的盐酸进行水解，使蛋白质中的肽键断裂，释放出氨基酸。
将水解后的样品溶液进行离心，取上清液备用。
2、衍生化反应取适量的上清液，加入 OPA 和 FMOC 进行衍生化反应，使氨基酸转化为具有紫外吸收的衍生物。
3、色谱条件设置色谱柱：C18 反相色谱柱。
流动相梯度洗脱程序：0 10 min，A 相 90% 70%，B 相 10% 30%；10 20 min，A 相 70% 40%，B 相 30% 60%；20 25 min，A 相 40% 0%，B 相 60% 100%；25 30 min，A 相 0%，B 相 100%。
流速：10 mL/min。
检测波长：338 nm（OPA 衍生物）和 262 nm（FMOC 衍生物）。
4、标准曲线绘制分别配制不同浓度的标准氨基酸溶液，进行衍生化反应后，按照上述色谱条件进行分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
5、样品分析将衍生化后的样品溶液注入高效液相色谱仪进行分析，根据标准曲线计算样品中各氨基酸的含量。
五、实验结果与分析1、标准曲线20 种常见氨基酸的标准曲线均具有良好的线性关系，相关系数 R²均大于 099。
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一、目的要求
1、熟悉高效液相色谱仪的结构、分离原理和操作程序。
2、掌握氨基酸标样的分析方法、原理。
二、实验原理
氨基酸与PITC发生反应生成的衍生物，在254nm处有最大吸光值。
氨基酸衍生物进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积可进行定性和定量。
该方法是柱前衍生法中的一种。
PITC方法的反应方程式如下图所示：
三、实验仪器和试剂
1、仪器：
高效液相色谱仪（带紫外检测系统和记录系统）。
2、材料：
氨基酸标样
3、试剂：
衍生液：
异硫氰酸苯酯：甲醇：三乙胺：水（V/V）=1：7：1：1
正己烷、乙腈、乙酸、乙酸钠
以上试剂中乙腈为色谱醇，水为二次蒸馏水，其它为分析醇。
四、实验步骤
1、柱前衍生步骤：
（1）将100ul衍生液加入100ul氨基酸标样或样品中，震荡使混合均匀，室温放置1小时。
（2）反应液中加入200ul正己烷，充分震荡后放置使分层。
（3）取下层溶液用一次性滤膜过滤器（0.45ul）过滤。
（4）取滤液5ul注入HPLC。
2、分离条件的设定
（1）色谱柱：Shim-pack VP-ODS 4.6mm x 15cm
保护柱：Shim-pack GVP-ODS4.6 mm x 1cm
（2）流动相：
A液：0.1M乙酸钠pH6.50（用乙酸调整，500ml乙酸钠中约加2滴乙酸）。
B液：乙腈/水=4/1
（3）流量：1ml/min
柱温：36℃
检测波长：254nm
（4）梯度洗脱程序：
TIME(min) FUNC VALUE
0．01 BCONC 10
3 BCONC 10
21 BCONC 39
21.01 BCONC 80
25 BCONC 80
25.01 BCONC 10
35 STOP STOP
3、数据采集打开real-time CS analysis软件采集数据并对数据进行分
五、实验数据及处理结果
六、实验讨论：
1、本次实验的注意事项有哪些？
结果：
①、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um 或更细的膜过滤)。
②、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
③、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
④、每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
⑤、气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
⑥、如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
2、高效液相色谱仪的结构示意图：
七、思考题解答：
1、试述反相离子对色谱的分离机理。
答：①、固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；
②、流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；
③、基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。
亲和力大，保留时间长；
a、阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H +
b、离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH-
2、试述本实验氨基酸分析的基本原理和方法，除了本方法外，还有那些氨基酸分析方法？答：①、离子色谱（IC）；
②、离子交换色谱法（IEC）。