血液中同型半胱氨酸的检测及意义

血液中同型半胱氨酸的检测及意义

发布时间02年09月11日09时20分卫生部临床检验中心肖飞郭健

由于同型半胱氨酸检测技术的发展，对其研究逐渐深入，近年来的研究表明同型半胱氨酸可以作为判断心务管疾病危险性的独立指标，并认为与传统的指标相比，同型半胱氨酸具有更高的应用价值。本文综述了同型半胱氨酸的测定方法和临床意义。

1同型半胱氨酸的代谢过程

人体内同型半胱氨酸作为蛋氨酸代谢的中间产物，其本身并不参与蛋白质的合成。蛋氨酸分子含有S甲基；在与ATP作用生成S腺苷蛋氨酸后，可通过各种转甲基作用为体内已知的约50多种具有重要生理活性的物质提供甲基。S 腺苷蛋氨酸在甲基转移酶作用下将甲基转移至另一物质后，生成S腺苷同型半胱氨酸，后者进一步脱去腺苷，生成同型半胱氨酸。而同型半胱氨酸则可通过N5甲基四氢叶酸转甲基酶（EC1.1.1.68）及其辅酶维生素B12的催化作用，接受N5甲基四氢叶酸提供的甲基，重新生成蛋氨酸。而此过程又是已知的体内能利用N5甲基四氢叶酸的唯一反应。故同型半胱氨酸与体内一碳单位代谢有着密切关系。另外，同型半胱氨酸在胱硫醚-β-合成酶（EC4.2.1.22）催化下也可与丝氨酸缩合生成胱硫醚，后者近一步生成半胱氨酸和α酮丁酸。

2影响同型半胱氨酸水平的因素

血浆中的同型半胱氨酸约70%与白蛋白结合，为结合型。其余的游离型则主要以二硫同型半胱氨酸和以二硫键结合的同型半胱氨酸-半胱氨酸化合物形式存在，只有少量以还原型同型半胱氨酸存在于血浆中。我们通常所指的是总的同型半胱氨酸浓度。

影响同型半胱氨酸水平最主要的因素莫过于遗传与食物营养缺乏。遗传因素主要包括N5甲基四氢叶酸转甲基酶及胱硫醚-β-合成酶的基因发生突变，引起酶的活性降低，从而导致高同型半胱氨酸血症。现在已经证明N5甲基四氢叶酸转甲基酶的缺陷，在体内叶酸缺乏的情况下，可以引起同型半胱氨酸浓度的明显升高。而根据Mudd等的研究，由遗传缺陷引起的胱硫醚-β-合成酶的活性降低，可导致血浆中同型半胱氨酸的浓度超过正常值的十倍左右。

对近1200名老人的研究表明，体内同型半胱氨酸的水平与饮食有着密切的关系，血浆中维生素B6、B12和叶酸的浓度越低，其同型半胱氨酸的浓度越高。由于动物蛋白中蛋氨酸的含量比植物蛋白约高三倍左右，可以产生较多的同型半胱氨酸，因此可对人体的动脉组织造成损伤。

其它因素包括性别、年龄、肾功能的损害、以及服用影响叶酸和B族维生素的药物，都可影响同型半胱氨酸的水平。尤其是肾功的损害，会严重影响那些含硫氨基酸的排出，因为肾小管内皮细胞的胱硫醚-β-合成酶对同型半胱氨酸的转化作用，被认为血液中的非蛋白结合型同型半胱氨酸很重要的代谢途径。

3同型半胱氨酸与心血管疾病

目前，对同型半胱氨酸的致病机理方面已经有了较为深入的研究。虽然过量胆固醇沉积是造成动脉壁损伤的直接原因，但是临床上胆固醇的水平并不能作为动脉粥样硬化疾病的指标，这是因为胆固醇在动脉壁的堆积与多种脂蛋白，尤其是低密度脂蛋白和高密度脂蛋白有着密切的联系。根据研究，如果当体内同型半胱氨酸代谢紊乱，浓度升高，就会形成同型半胱氨酸巯基内酯，可与低密度脂蛋白形成复合体，随后被巨噬细胞吞噬，形成堆积动脉粥样硬化斑块上的泡沫细胞。而且，同型半胱氨酸还可自发氧化，形成超氧化物和过氧化氢，这些产物会导致内皮细胞的损伤和低密度脂蛋白的氧化，并可造成血管平滑肌持续性的收缩，引起缺氧，从而加速动脉粥样硬化的过程。

不仅如此，同型半胱氨酸自发形成的巯基内酯化合物，可以和反式视黄酸共同引起血小板的凝集，与此同时，同型半胱氨酸巯基内酯还可引起血栓素（TXB2）以及PGF1αR的形成。这样就会促进血凝块的形成，从而引起临应酬上常见的梗塞性疾病。这在动物实验中也得到了验证。

当然，同型半胱氨酸还可通过其它一些途径诱发心血管疾病。它可诱导血管平滑肌细胞中新的mRNA的形成，使动脉壁平滑肌细胞增殖，并造成动脉内皮细胞的脱落，加速粥样硬化的过程。另外，由于S腺苷同型半胱氨酸是依赖S 腺苷蛋氨酸的甲基化反应潜在的抑制物，所以同型半胱氨酸浓度的升高，会影响体内许多物质的甲基化过程，从而影响机体的正常代谢。

4同型半胱氨酸的检测方法

目前，同型半胱氨酸最主要的两种检测方法是高效液相（HPLC）方法以及荧光偏振免疫检测（FPLA）方法。但已经有采用酶联免疫技术测定同型半胱氨酸的报道。

4.1 HPLC法HPLC方法多采用柱前衍生化荧光检测技术。由于同型半胱氨酸在血液中以多种形式存在，所以标本的收集和处理就比较重要。所采集的抗凝血液应立即分离出血浆。

Pastore等提出的衍生化方法较为简单，该法的衍生化过程全部在高效液相自动加样器内进行。首先将含有硼氢化钠、二甲基亚砜和氢氧化钠的溶液，含有EDTA和二巯基苏糖醇的溶液，以及1-辛醇，盐酸溶液共同加入标本中，室温下混匀1分钟后，加入含有衍生化试剂bromobimane的缓冲液，混匀1分钟后进样。色谱柱采用150mm×4.6mm的反相C18柱,进样前用pH3.6的硝酸铵和甲酸铵缓冲液平衡,然后用乙腈进行梯度洗脱.半胱氨酸和同型半胱氨酸的保留时间分别为3.76和4.14分钟。此方法灵敏度高，最低检测限可达50nmol/L,在其线性范围内相关系统γ>0.99;批内不精密度为3.3%,批间不精密度为4.9%(n=10);分离效果好,不仅能分析血液中的多种含硫氨基酸,还能对尿液标本进行测定。

但是，由于bromobimane衍生化的产物较多，会产生较多的杂峰。故目前也有不少研究人员使用特异性高的SBD-F作为衍生化试剂，但这种试剂以光不稳定，应避光操作，增加了操作的复杂性。不过，也有研究人员使用其它试剂进行柱后衍生化，紫外检测方法，但其操作较为复杂。

4.2荧光偏振免疫检测（FPIA）法FPIA法灵敏度高，检测速度快，但价格昂贵，故短时间期内不易普及。进行该检测时。首先也要用二巯基苏糖醇将结合型同型半胱氨酸还原出来，然后通过物异性的S腺苷同型半胱氨酸合成酶催化同型半胱氨酸转变为S腺苷同型半胱氨酸类似物，对特异性的单克隆抗体进行竞争性结合，引起示踪物偏光性的改变，从而检测出同型半胱氨酸的浓度。这种方法检测速度每小时可达20个标本。

4.3酶转换免疫测定法这种方法也需要将同型半胱氨酸先转化为S腺苷同型半胱氨酸，然后加入辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，最后加入辣根过氧化物酶的底物，并在450nm处检测。加入蛋氨酸与半胱氨酸对检测结果均无影