药品微生物学检验技术
微生物检测技术的使用方法和实验操作技巧
微生物检测技术的使用方法和实验操作技巧微生物检测技术是一种重要的实验手段，用于分析和检测环境、食品、药品等领域中的微生物污染情况。
本文将介绍微生物检测技术的使用方法和实验操作技巧，以帮助读者更好地理解和应用这一技术。
一、微生物检测技术的使用方法1. 样品准备在进行微生物检测之前，首先需要准备样品。
样品可以是环境中的空气、水质、土壤等，也可以是食物、药品等。
样品准备的关键是保持其在检测之前的原样性，并确保样品中微生物的数量能够被准确检测。
2. 样品处理样品处理是为了提取样品中的微生物，常用的方法有离心、过滤、稀释等。
离心用于分离样品中的大颗粒物质，以便更好地检测微生物；过滤则可以去除样品中的大颗粒物质和悬浮微生物，使样品更易于处理；稀释则是为了使微生物数量在适宜检测范围内。
3. 微生物培养微生物培养是为了增殖样品中的微生物数量，以便更好地进行检测。
常用的培养方法包括液体培养和固体培养。
液体培养适合于微生物数量较多、培养时间较短的情况；固体培养适合于较少微生物数量、培养时间较长的情况。
4. 微生物检测方法微生物检测方法根据检测目的和样品性质的不同而不同。
常用的微生物检测方法包括显微镜观察、生物化学检测、分子生物学检测和免疫学检测等。
显微镜观察适用于检测微生物的形态特征，能够直观地观察微生物的数量和分布情况；生物化学检测适用于分析样品中微生物的代谢产物，如酶活性、酸碱度等；分子生物学检测则可以通过分析微生物的DNA或RNA序列来确定其种属和数量；免疫学检测是通过与微生物特异性抗体的结合反应来检测微生物的存在。
二、实验操作技巧1. 严格遵守操作规程在进行微生物检测技术实验时，必须严格遵守实验室的规程和操作规范，包括个人防护、实验操作流程、废物处理等。
正确佩戴实验手套、防护眼镜等个人防护装备，减少实验操作中的污染风险。
2. 实验仪器的选择与操作根据具体的实验目的和方法，选择合适的实验仪器和设备。
例如，在培养微生物时，选择合适的培养皿、培养基和培养箱等；在显微镜观察微生物时，选择适合的镜头和聚焦方式等。
药品生物检定技术基础知识药品生物检定技术的基本操作(药品生物检定技术课件)
二、常用仪器
（一）玻璃类仪器 （二）橡胶类物品 （三）金属器械 （四）塑料及有机玻璃器皿
三、无菌操作
无菌技术主要指在微生物检定中，控制或防止各类微生物污染及其干扰的一系列 操作方法、手段、规则、程序等，其中包括无菌环境设施、无菌实验器材以及无菌操 作等。
（一）无菌环境
无菌环境是指人们用物理或化学的方法，在某一可控空间内使悬浮粒子、浮游菌数 量达到最低限度，接近于“无菌”的一种空间。 （二）无菌器材 （三）无菌操作
药品生物检定技术的基本操作
提纲
一、药品微生物检定技术的基本程序 二、常用仪器 三、无菌操作 四、消毒灭菌
一、药品微生物检定技术的基本程序
（一）采样 药品微生物检定的采样除了与理化分析法的抽样一样，遵循随机、客观、均匀、
合理的抽样原则外，还必须对抽样过程实施有效防止微生物污染的措施，以保证微生物 检测结果的代表性、真实性和有效性。为此，采样应由专门的无菌采样员或微生物检验 员进行具体的采样工作或实施采样的监管工作。
（三）检验记录和检验报告 检验记录是出具检验报告书的依据，是进行科学研究和技术总结的原始资要涂改，须用斜线将涂改部分划 掉，并签上涂改者的名字或盖印章，不得使用涂黑方式，以保证错误部分清晰可见。
检验报告书是对药品质量作出的技术鉴定，药检人员应本着严肃负责的态度，根据 检验记录，认真书写。检验报告应依据准确，数据无误，结论明确，文字简洁，书写清晰， 格式规范。检验报告一般包括报告编号（是报告相对于样品的惟一性标识）、样品名称、 批号、剂型、规格、包装、数量、来源、取样方法和取样日期、检验方法与依据、检验结 果和结论等。检验报告上还须有检验者、复核者和质量部门负责人的签字或盖章。
（二）样品检验前处理 抽检的样品要注意保持完整性和有效性。完整性是指检测样品的最小包装应完好无缺，
药品生物检定技术简介
门冬酰胺酶（抗肿瘤药） Ch.P（2005）二部 本品系自埃希大肠杆菌（E.coli ASI.357）
或欧文菌（Er-winia casotovora）中提取制备的 具有酰氨基水解作用的酶。
肝素钠（抗凝血药） Ch.P（2005）二部 本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨
基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质。
小包装容器的数量。
例：2支（瓶）/2板×12粒
检查量：指一次试验所用供试品的总量
（g 或 ML）
例： 2×10=20ML
24×0.25=6g
2、对照试验： 阳性对照
阴性对照
9
3、检查方法：
a、薄膜过滤法：应用广、准确性高，适用 于任何药品、尤其是具有抑菌作用的
。
b、直接接种法：操作简便，适用于无 抑菌 作用的供试品。
中文名称
英文名或缩写
适应症
重组人干扰素a1b
rhuIFNaIb
上皮生长因子
(EGF)
粒细胞集落刺激因子
(GCSF)
粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)
红细胞生成素
(EPO)
溶栓药物链激酶
(SK)
重组人胰岛素
Humulin
Novolin
Humalog
白细胞介素-2
rhuIL-2
治疗病毒性角膜炎 烧伤或创伤治疗外用药物
细胞因子类（重组人干扰素）
生长因子类（重组人表皮生长因子）
激素类（重组人胰岛素）
酶类（重组链激酶）
疫苗（重组乙型肝炎疫苗）
单克隆抗体
37
重组DNA技术
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国外重组DNA制品
中文名称
英文名或缩写
适应症
胰岛素
药物制剂的微生物学检验
2. 活菌计数法
将定量的试验菌加入到一定浓度的定量药物中， 作用一定时间后，取样进行活菌数计数，从存活的微 生物数量计算出药物对试验菌的致死率，从而判断药 物的杀菌能力。
活菌计数一般是将定量的药物与试验菌作用后混 合液稀释后，混入琼脂培养基做成平板，培养后数平 板上形成的菌落数，由于一个菌落是由一个细菌繁殖 而来的，所以可以用菌数乘以稀释倍数，计算出混合 液中存活的细菌数。或者也可以用微孔滤膜过滤药物 与试验菌的混合液，洗净药液，将滤膜放在平板上培 养后数菌落数。
▪ 聚山梨酸培养基：用于油剂药品的无菌检查 ➢ 照需氧菌、厌氧菌培养基及真菌培养基处方及制
法，每 1000ml培养基中各加10ml聚山梨酸-80， 摇匀后，分装，灭菌。
至于干燥纸片的制备方法：选用吸水力强而且质 地均匀的滤纸，用打洞机制成6mm直径的圆纸片， 120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的各种适宜 浓度的抗生素溶液，每100张纸片加入0.5ml药液， 使它均匀浸润，放在无菌平皿中，37℃，使它干 燥，分装小瓶中，封口，4℃保存。如果是β－内 酰胺类抗生素还要放在-20℃保存。这就制成了干 燥的含药液的纸片。
真菌培养基（改良马丁培养基）
胨
酵母浸出粉
葡萄糖
磷酸氢二钾(K2HPO4) 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 蒸馏水
5g 2g 20g 1g
0.5g 1000ml
选择性培养基
▪ 对氨基苯甲酸(PABA)培养基：用于磺胺类药物的 无菌检查
➢ 照需氧菌、厌氧菌培养基及真菌培养基处方及制 法，各加对氨基苯甲酸0.125g，溶解后，摇匀，分 装，灭菌。
除此之外还有管碟法、直接滴加法和挖沟法：适用于 测试一种药物对几种细菌的抗菌作用。方法是先制备普通 琼脂平板，并在平板上挖直沟，在沟内滴加药液，在沟侧 接种细菌。经过培养以后观察家细菌生长的情况。我们可 以根据沟和细菌间的抑菌距离的长短，来判断该药物对这 些细菌的抗菌能力。
药品微生物检验及方法验证
药品微生物检验及方法验证药品微生物限度检查及方法验证从事药品微生物限度检查工作两年时间，从学做到承担工作到变得有点经验，经历了一个摸索、学习和积累的过程，回过头来做一个总结，把一些零散的经验和体会做一个梳理和归整，以供在此岗位工作的同仁参考。
第一部分：外围工作外围工作主要有器皿清洗、灭菌，培养基、试剂配制及灭菌，无菌室清洁消毒等。
器皿的清洗是每个实验室和每一个实验员必须要做的最起码的工作，工作要求简单，操作方便，把握一个原则：干净。
培养基、试剂配制后一般都要求调PH到7.20，因为高温灭菌之后PH值会下降0.2左右。
固体培养基在灭菌前要先加热煮沸，使琼脂均匀分散。
煮沸时要注意不要溢出容器，以免发生烫伤。
万一不小心溢出，可用一湿抹布盖住容器口，迅速将其从加热源上移开，不要在情急之下徒手去拿或者在容器侧面拿，那样容易被从容器口源源不断溢出的培养基烫伤。
液体物品灭菌后，不能立即打开放气阀放气，因为此时被灭菌物品的温度大于100℃，在压力等于常压时，液体会暴沸，造成液体喷出或容器炸裂，发生事故。
万级洁净度的无菌室应当每周进行一次消毒，消毒剂每月更换一次，防止长期使用同一种消毒剂而使微生物形成耐药性。
消毒范围包括墙壁，地面，天花板以及空气。
表面消毒可以用消毒剂擦拭，尤其注意门框边缘以及出风回风口，不能留有死角；空气消毒宜采用臭氧或者紫外灯。
可以使用专门的臭氧发生器产生臭氧进行消毒，也可以在每一个操作间包括净化台安装适宜功率的紫外灯，一方面紫外线可以对近距离的物体表面进行消毒，另一方面紫外线的作用也可以使空气中的氧气转换成臭氧，从而能够杀死空气中的微生物。
另外在每次做完实验之后，都应当对实验台面以及地面进行消毒处理。
第二部分：检验过程整个无菌室的检验操作过程应当有一个标准的操作规范，严格按照无菌操作的规定进行操作，包括进入无菌室的程序以及人员清洁消毒，都应当遵守标准来进行。
首先，进入无菌室应当严格按照洁净区（室）有关规定进行。
药品微生物学检验实用技术分析
药品微生物学检验实用技术分析【摘要】药品的微生物学检查属于一项常规安全性检查，该项工作内容相对繁琐，培养基、菌株、实验步骤以及供试品的制备等因素均会对其结果产生影响。
因此对这些影响因素进行分析，并采取相应的技术进行避免为目前药品微生物检验工作中的重点。
本文从微生物检查方法验证的难点、微生物检查方法验证的模式和相关的影响因素几个方面进行了综述。
【关键词】药品检验；微生物学检查；安全性；方法验证；质量控制研究证实微生物在药品中通过代谢产物或者是微生物体对机体造成过敏、感染以及中毒等不良反应，甚至会危及到患者的生命安全。
因此药品微生物检查具有极大的重要性。
目前在药品质量控制中，微生物学检查已经成为一项常规的安全检查项目。
然而现阶段生物学检查工作所面临的难题为微生物检查方法的验证。
本文便对微生物学检验实用技术的现状进行了综述，详见下文。
1微生物检查方法验证的难点近几年来人们开始对药品生产、保存以及使用过程中微生物污染问题给予了重视，并采取了诸多措施展开研究与评估。
曾有学者指出，药品中污染的微生物一般处在相对不稳定的状态，不确定性大，并且在药品生产的各个环节中微生物污染存在很大的不均匀性。
因此中国药典对药品微生物限度测试做出了详细的规定，对药品微生物污染的监测力度予以了增加。
微生物限度测试就是对非规定范围内的灭菌制剂以及原料、辅料受微生物的污染程度进行检测，一般包括细菌数、真菌数、酵母菌数以及控制菌等几项[1]。
所有药品均需要在接受安全性检查后方可投入到临床使用，不管使无抑菌性药物还是抑菌性药物均需要接受微生物限度检查。
一些抑菌性药物被微生物污染后，由于微生物能够在一定条件下稳定存在一定时间，因此尽管其遭到了一定程度的破坏，然而并没有死亡，在条件发生改变时，譬如说人体用药后，存在适宜细菌生长的条件，其可复活进行繁殖。
细菌能够对抑菌药物产生适应性和耐药性，因此抑菌药物内污染的微生物会对人体健康构成严重的威胁。
药品微生物学检验手册
药品微生物学检验手册
对于药品微生物学检验，应当严格按照以下指南进行：
一、抽样
1.使用清洁的，无明显异味的样品容器，建议使用无菌容器。
2.样品抽取程序应遵守衛生規定，应使用清洁的器械进行采样，避免物质污染。
3.抽取的样品应在适当的温度下迅速送检，尽量避免发霉变质。
二、检测方法的选择
1.根据不同的检测目的，采用不同的检测方法，例如有害微生物的检测一般采用传统
的培养裂解法，耐药性微生物的检测一般采用APTEST等测试系统。
2.根据不同种类的药品所含成分多少，可采用抗性指数评估或者分子生物学检测法，
检测药品中可能存在的耐药性型微生物或者毒力增强的菌株。
3.根据抽样结果、药品添加剂类型及添加剂含量等，可根据《药典》中规定的极限值
或安全限值，筛选有可能存在的有害微生物，而后进行产品质量检查，保证药品的质量安全。
三、确定检测指标
1.根据实际情况，确定包括常见有害微生物，尤其是抗药性菌在内的相应检测指标，
以便检查是否符合药典要求或产品规格。
2.根据药典要求或产品规格，确定需要检测的菌株特性，耐药性特性，毒力相关指标，以及检测方法所要求的指标等。
四、验证检测方法
1.根据检测需要的特性，对检测方法进行验证，检测效果要求明确，把控灵活，满足
正确性、精确性、特异性以及重复性等要求。
2.检测方法的验证要完整，保证检测数据的可信度。
采用不同的抗性菌种，耐药性菌株，有害微生物，测试不同检测系统所得结果，进行比较分析，对所选方法进行评价。
药品微生物检验的方法及应用分析
药品微生物检验的方法及应用分析摘要：药品微生物指标超标直接影响药品使用者的安全与健康，故需对药品微生物进行检验，该文分析了药品微生物检验中的无菌检查法和限度检查法，结合注射用头孢抗生素无菌检查和妇科胶囊微生物限度检查介绍了此二法的应用。
关键词：药品；微生物检验；检验方法药品用于治疗疾病，但被微生物污染的药品不但影响治疗效果，还会加重病情，而药品微生物检验是保证药品质量的重要手段[1]。
药品微生物污染事件屡见不鲜，已严重影响用药安全，要保证药品微生物检验结果的准确离不开检验方法的选择和应用，例如微生物限度检查方法影响检查结果的准确性，方法适用性的确认是确保检查结果准确可靠的关键环节[2]。
因此，本文对药品微生物检验的方法及应用进行了分析。
1药品微生物检验的方法1.1 无菌检查法要求无菌的药品必须进行无菌检查，所谓无菌检查即按照无菌检查标准及规定的检验条件检查是否有微生物污染。
无菌检查要求严格的无菌条件，并且操作的全过程都达到无菌要求，在这样的情况下仍检不出供试品内含有微生物判为合格。
为了满足无菌条件，应按相关标准验证和确认洁净度，即监测单向流空气区域、工作台面、环境中的悬浮粒子、浮游菌、沉降菌数量符合A级洁净度要求。
对药品进行无菌检查需验证检查方法的适用性，且药品及检验程序发生变化可能影响检验结果时需重新验证适用性。
验证适用性需对菌种及菌液制备、检查方法（薄膜过滤法或直接接种法）进行试验，并按相关要求判断结果。
《中国药典》2020年版三、四部对无菌检查的检验数量、检验量、阳性对照、阴性对照、供试品处理及接种营养基、结果判断作了明确规定。
例如注射剂批产量在101～500个时，接种每种培养基的最少检验数量为10个；供试品最少检验量在供试品装量为41～100ml时，每支供试品接入每种培养基的最少量为20ml；抗革兰氏阳性菌的供试品阳性对照菌为金黄葡萄球菌；采用薄膜过滤法；在培养基规定的温度培养至少14天；供试品管澄清或有浑浊但经确认无菌生长即合格。
药物制剂微生物检验
药物制剂微生物检验一、概述药物制剂微生物检验是确保药品质量和安全性的重要环节。
它通过对药品制剂中微生物的种类、数量和活性进行检测和分析，确保药品符合相关法规和质量控制标准，保障公众的健康和安全。
本文将探讨药物制剂微生物检验的基本概念、检验方法和实际应用。
二、药物制剂微生物检验的基本概念药物制剂微生物检验主要包括细菌、真菌、病毒等微生物的检测。
这些微生物可能对药品质量和公众健康构成威胁。
例如，某些细菌和真菌可能会引起药品污染，而病毒则可能引发感染。
因此，进行药物制剂微生物检验是十分必要的。
三、药物制剂微生物检验的方法1、细菌学检验：通过培养、分离、鉴定细菌，检测细菌种类和数量，评估药品制剂的细菌污染程度。
2、真菌学检验：通过培养、分离、鉴定真菌，检测真菌种类和数量，评估药品制剂的真菌污染程度。
3、病毒学检验：通过检测病毒的核酸、蛋白质等成分，鉴定病毒种类和活性，评估药品制剂的病毒感染风险。
4、生物安全实验室：为了确保药物制剂微生物检验的准确性和安全性，通常需要在生物安全实验室中进行检验。
这些实验室具备特殊设备和条件，可以防止微生物外泄，保障检验人员的安全。
四、药物制剂微生物检验的实际应用1、新药研发：在新药研发过程中，药物制剂微生物检验有助于评估新药的抗菌、抗真菌和抗病毒效果，为新药的研发和优化提供依据。
2、药品质量控制：通过对药品制剂进行微生物检验，可以评估药品生产过程中的质量控制情况，确保药品符合相关法规和质量标准。
3、感染预防：通过对药品制剂进行病毒学检验，可以评估药品的抗病毒效果，为预防和治疗病毒感染提供参考。
4、公众健康保障：通过药物制剂微生物检验，可以保障公众使用的药品安全、有效，防止药品污染和病毒感染。
五、结论药物制剂微生物检验是保障药品质量和安全性的重要环节。
通过对药品制剂中微生物的种类、数量和活性进行检测和分析，可以确保药品符合相关法规和质量控制标准，保障公众的健康和安全。
未来，随着微生物检测技术的发展和药物制剂研究的深入，药物制剂微生物检验将在新药研发、药品质量控制、感染预防和公众健康保障等方面发挥更大的作用。
药品微生物学检验手册
药品微生物学检验手册
药品微生物学检验手册
药品微生物学检验是药物质量控制的重要组成部分，其目的是检
测药品中的微生物数量、性质和种类，以确保药品的安全性、有效性
和质量。
因此，药品微生物学检验手册是药品质量检验中十分重要的
工具书。
药品微生物学检验手册包括以下内容：首先，它介绍了药品微生
物学检验的基本概念及检验步骤。
其次，它详细地介绍了如何收集、
处理和记录样品，以及如何使用合适的仪器和仪器进行检验和质量控制，包括显微镜、萤石、紫外线分光光度计等。
此外，手册对药品相
关的微生物规定进行了描述，以供参考。
最后，手册还提供了一份详
细的样品采样分析表，以及一份关于检验结果的误差表，以帮助检验
人员更好地处理检验过程中的质量问题。
药品微生物学检验手册为药品质量检验提供了重要信息，可以帮
助检验者迅速准确地完成各项质量检验任务，确保药物质量的安全性、有效性和质量。
微生物检验技术教材
微生物检验技术教材
《微生物学检验技术》是一门系统介绍微生物学检验技术的学科，其教材内容通常包括以下几个方面：
1. 微生物学基础知识：介绍微生物的形态、结构、生理、生长繁殖等基本知识，为后续的检验技术打下基础。
2. 微生物学检验技术：介绍各种微生物学检验技术的方法、原理、操作步骤和应用范围，包括培养法、染色法、免疫学方法、分子生物学方法等。
3. 微生物学检验标准：介绍国内外相关的微生物学检验标准、规范和法规，包括食品卫生标准、药品检验标准等。
4. 微生物学检验质量控制：介绍微生物学检验的质量控制原则、方法和技术，以确保检验结果的准确性和可靠性。
5. 微生物学检验在各领域的应用：介绍微生物学检验在医学、食品、环境、农业等领域的应用，包括疾病诊断、食品安全、环境监测、农业病害防治等方面的应用。
教材中还会根据需要介绍一些常见微生物的检验方法和注意事项，以及一些新型微生物的发现和鉴定等方面的内容。
此外，教材中还会包括一些实验操作和案例分析等内容，以帮助学生更好地理解和掌握所学知识。
以上信息仅供参考，如需了解更多信息，建议查阅相关教材或咨询专业人士。
实用药品微生物检验检测技术指南
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药品微生物学检验技术
药品微生物学检验技术第十二章药品微生物检验方法验证的意及要求第一节药品微生物检验结果的影响因素微生物的生长受很多因素的影响，特别是药品中污染的微生物尤为如此。
药品微生物检验是检测药品中具有繁殖能力的活细胞，这些活的微生物在药品中处于不稳定的状态，它的检出与否受很多因素的影响，主要影响因素有如下几点：一、供试品组分由于供试品本身的特性，可能含有具有抑菌作用的组分成分，如抗生素中药中的黄莲、牛黄、冰片等。
另外，很多供试品中加入的抑菌剂或防腐剂用于防止供试品中的微生物再污染和再生殖，以及增溶剂、乳化剂、抗氧剂等其他辅料，这些组分在一定浓度下对微生物具有抑制作用，并可能对药品中污染的微生物造成不同程度的损伤。
供试品中污染的微生物在这些物质的影响下有可能检不出，这时，它们虽然被抑制甚至受到损伤，但并未死亡，在一定条件在塔门还可以稳定地存活一段时间，当微生物生存环境改变时，如抑菌成分消除或浓度降低时，这些微生物便可以复苏并繁殖，患者使用后同样可危及人体健康。
对于这些药品，如按常规方法进行微生物检验，往往显示假阴性结果。
除此之外，在药品微生物检验中，由于原料来源不同，特别是中药制剂，或者生产工艺的差别，使用的辅料不同等原因，使不同厂家生产的同一产品，甚至是同一厂家生产的同一产品不同批次的药品往往对同一中微生物的生长也有不同程度的影响。
从理论上讲，许多药品含有影响微生物生长的物质，许多试验也表明了这一点，表12-1列出了已知试验菌的菌数在不同药品中的回收率，有的药品几乎对所有试验菌均有很强的抑制或杀死作用。
因此，供试品的组分及其浓度直接影响供试品中污染微生物的检查结果准确与否。
二、微生物的多样性及复杂性自然界中微生物的种类和生存形式是多种多样的，药品的种类繁多，剂型多样，其污染的微生物也是多样而复杂的，即使是同一产品的生产区域，所污染的微生物种类也不尽相同；同一产品因存放的时间和条件不同，其中污染微生物存在的形式可能改变（菌体或孢子等状态）。
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9
培养基的适用性检查
检查培养基是否无菌及灵敏度 培养基的无菌性检查 培养基的灵敏度检
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培养基的无菌性检查
每批培养基随机取不少于5支(瓶)，放置于 相应的温度下培养14天
培养基应无菌生长，表明所制备的培养基 达到无菌要求
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培养基的灵敏度检查
物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基 上，23～28℃培养24～48小时
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌 数小于100 cfu/ml的菌悬液。
菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保
存在2～8℃可在24小时内使用
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15
菌悬液制备 (如何使浓度<100cfu/ml?)
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂 斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加 入3～5ml含0.05％(v/v)聚山梨酯80的0.9% 无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用
试验菌株用于试验时，细胞或孢子浓度需 小于100cfu/ml
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14
菌悬液制备 (如何使浓度<100cfu/ml?)
接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽 孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营
养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物 至硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃～35℃培 养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养
厌氧菌有生孢梭菌(Clostridium sporogenes) 〔CMCC(B) 64941〕
酵母菌有白色念珠菌(Candida albicans) 〔CMCC(F) 98001〕
霉菌有黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98003〕
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13
对试验菌株的要求
菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中 心获得的冷冻干燥菌种为第0代)
适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内， 用含0.05％(v/v)聚山梨酯80的0.9%无菌氯 化钠溶液制成含孢子数小于100 cfu/ml的孢 子悬液。
黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在贮存 期内使用
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16
培养基接种及培养
取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基 9支，分别接种上述浓度的金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌等4 种菌的菌悬液各2支，另1支不接种作为空白 对照，培养3天
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7
无菌检查所用的培养基制备
需氧菌、厌氧菌培养基：硫乙醇酸盐流体 培养基
真菌培养基：改良马丁培养基 选择性培养基：对氨基苯甲酸培养基(用于
磺胺类药物的无菌检查)，聚山梨酸培养基 (用于油剂药品的无菌检查)
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8
培养基的保存
配制后灭菌，灭菌好的培养基应保存在 2℃～25℃、避光的环境
若保存于非密闭容器中，一般在三周内使 用
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中和剂或灭活剂
供试品有抑菌作用，可采用中和剂或灭活 剂，消除供试品的抑菌作用
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19
常见干扰物的中和剂或灭活方法
干扰物
可选用的中和剂或灭活方法
戊二醛
亚硫酸氢钠
酚类、乙醇、吸附物
稀释法
醛类
稀释法、甘氨酸、硫代硫酸盐
季铵类化合物(QACs)、对 卵磷脂、聚山梨酯 羟基苯甲酸酯
汞类制剂
亚硫酸氢钠、巯基乙酸盐、硫代 硫酸盐
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6
药品的无菌、微生物限度检查的验 证试验
方法：在采用的检验方法和过程中，通过 分别加入规定量的代表性微生物
以试验供试品是否在规定的检验量、在所 采用的检验条件下无抑菌性，或已充分消 除了抑菌性(供试品本身的以及操作系统中 可能对微生物生长有影响的各种因素)
以试验所用方法对微生物生长无不良影响
接种低浓度的试验菌株，培养观察生长情 况
培养基灵敏度判定 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基 管均生长良好，则说明该培养基可以使低 浓度的微生物也良好生长，表明培养基的 灵敏度符合规定
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试验菌株
需氧菌有金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26003〕、铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10104〕和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 〔CMCC(B)63501〕
双胍类化合物
卵磷脂
碘酒、洗必泰类
聚山梨酯
卤化物
硫代硫酸盐
乙二胺四乙酸(EDTA)
镁或钙离子
磺胺类
对氨基苯甲酸
ß-内酰胺类抗生素
ß-内h 酰胺酶
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无菌检查法的方法验证
目的：证明所采用的方法适合于该产品的 无菌检查 …是否有抑菌和干扰生长的现象
验证方法：
直接接种法
薄膜过滤法
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直接接种法
取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙 醇酸盐流体培养基8管，分别接入小于 100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管；取符合直 接接种法培养基用量要求的改良马丁培养 基4管，分别接入小于100cfu的白色念珠茵、 黑曲霉各2管。
取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分
别接种上述浓度的白色念珠菌、黑曲霉各2支，
另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日
观察结果。
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常用的稀释液、冲洗液
常用的稀释液有0.1%蛋白胨水溶液 常用的冲洗液有氯化钠-蛋白胨缓冲液 如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌
前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等以 达到预处理的目的
项目十四 药品的微生物学检验
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214页 附录5 思考以下问题：
要求无菌的生理盐水注射液如何检验 是否无菌？
有抗菌作用的青霉素粉针剂又如何检 验是否无菌？
口服药如何检验细菌数是否<1000/g？
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视频资源
供试品的制备
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许多药品本身具有抑菌性(如抗生素类药品、 含防腐剂药品)会对检查结果带来影响
样品的预处理方式、检验条件和培养条件 也都会影响到样品的微生物检测结果
检验方法的准确性、有效性和重现性
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药品微生物检查
无菌检查：药品物品是否呈无菌状态 微生物限度检查：物品中含有微生物的数
量 控制菌检查：是否有指定的病原菌存在
无菌检查和微生物限度检查
/isearch/%E6%97%A0%E8%8F%8C %E6%A3%80%E6%9F%A5/ 套不同的体系。
药品微生物检验的验证更加严格：方法更 加可靠，且不易被供试品中的抑菌物质干 扰
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药品检验结果的可靠性来自于严谨的方 法学验证。为何规定要进行方法学的验 证？