土壤生理生化参数测定方法大全

土壤过氧化氢酶活性的测定

土壤过氧化氢酶,高锰酸钾滴定法（周礼恺，张志明.土壤酶活性的测定方法[J].土壤通报，1980，11(5)：37-38.）

（1）所用试剂

①0.3%的过氧化氢(现配)：1ml过氧化氢（30%）定容至100ml

② 1.5M硫酸：80ml浓硫酸定容至1L

③0.02M高锰酸钾（最多保存2周）：3.16g高锰酸钾定容至1L

（2）测定步骤

①取2g过1mm筛的风干土样，置于100ml锥形瓶中，然后注入40ml蒸馏水和5ml0.3%过氧化氢。另设对照（往瓶中注入40ml蒸馏水和5ml0.3%过氧化氢，不加土样）。

②将瓶塞紧，置于120次/分钟往返式摇床上（温度调至25度，放干水），震荡20min。停止震荡，注入5ml1.5M硫酸以终止反应。将瓶中内容物用定量滤纸过滤。

③取25ml滤液用0.02M高锰酸钾滴定至微红色。（对照，将5ml0.3%过氧化氢与40ml水、5ml1.5M的硫酸混合，取25ml该混合液，用0.02M的高锰酸钾滴定至微红色）。

（3）结果计算

从用于滴定原始的过氧化氢所消耗的高锰酸钾的量（A）中，减去用于滴定土壤滤液的高锰酸钾的量(B)，获得的差（考虑高锰酸钾滴定度的校正值T）即为土壤的过氧化氢酶活性：（A-B）﹡T。

过氧化氢酶活性以20min1g干土的0.02M 的高锰酸钾的ml数表示，单位0.02M MnkO4ml/20min·g

蔗糖酶,3，5二硝基水杨酸比色法（关松荫.土壤酶及其研究法[M].北京：农业出版社，1986：275-276.）

（1）所用试剂

①3，5二硝基水杨酸溶液：称2.5g二硝基水杨酸，溶于100ml2M氢氧化钠（8gNaOH溶

于100ml水）和250ml水中，再加150g酒石酸钾钠，用水稀释至500ml（不能超过7d）②PH5.5磷酸缓冲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠(23.87 g Na2HPO4·12H2O溶于1 L蒸馏水

中)25mL加1/15 mol/L磷酸二氢钾(9.078 g KH2PO4 溶于1 L蒸馏水中)475mL即成。

③8%蔗糖溶液：8g蔗糖用蒸馏水定容至100ml

④甲苯

⑤标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50-58 ℃条件下，干燥至恒重。然后取500 mg溶于100

mL苯甲酸溶液中(5 mg/mL)，即成标准葡萄糖溶液。再用标准液制成1 mL含0.3-1.3 mg 葡萄糖的工作溶液。（即吸取5mg/ml的标准液3、5、7、9、11、13ml定容至50ml）标准曲线绘制：取1ml不同浓度的工作液，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。

（2）操作步骤

⑥称5 g风干土，置于50 mL三角瓶中，注入15 mL8％蔗糖溶液，5 mL pH 5.5磷酸缓冲

液和5滴甲苯。

⑦摇匀混合物后，放入恒温箱，在37 ℃下培养24 h。到时取出，迅速过滤。从中吸取滤

液l mL，注入50 mL容量瓶中，加3 mL 3，5-二硝基水杨酸并在沸腾的水浴锅中加热10min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3 min。

⑧溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸因而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50 mL，并在分

光光度计上于波长508 nm处进行比色。

⑨为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个

试验需做无土壤对照。

（3）结果计算

蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示：葡萄糖（mg）=a﹡4

式中a表示从标准曲线查得得葡萄糖毫克数4表示换算成1g土的系数

淀粉酶,3，5二硝基水杨酸测定（关松荫.土壤酶及其研究法[M].北京：农业出版社，1986：278-280.）

（1）所用试剂

①1%淀粉

②甲苯

③PH5.5磷酸缓冲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠(23.87 g Na2HPO4·12H2O溶于1 L蒸馏水

中)25mL加1/15 mol/L磷酸二氢钾(9.078 g KH2PO4 溶于1 L蒸馏水中)475mL即成。

④3，5二硝基水杨酸溶液：称2.5g二硝基水杨酸，溶于100ml2M氢氧化钠（8gNaOH溶于100ml水）和250ml水中，再加150g酒石酸钾钠，用水稀释至500ml（不能超过7d）

⑤麦芽糖标准溶液：将麦芽糖先在50-58 ℃条件下，干燥至恒重。然后取500 mg溶于100 mL苯甲酸溶液中(5 mg/mL)，即成标准麦芽糖溶液。再用标准液配置成1ml含0.5-1.5mg麦芽糖的工作溶液。（即分别吸取5 mg/mL标准液5、7、9、11、13、15ml定容至50ml）

标准曲线的绘制：分别取不同浓度麦芽糖标准液1ml，移入50ml容量瓶中，加2ml3，5二硝基水杨酸溶液，并在沸腾的水域中加热5min。然后将瓶移到自来水下冷却。定容后在分光光度计上于508nm处进行比色。

（2）操作步骤

①称5g土壤，置于50ml三角瓶中，注入10ml1%淀粉溶液，再加10mlPH5.6的磷酸缓冲

液和5滴甲苯。摇匀后，在37 ℃恒温箱中放置24h。

②培养结束后，将悬液过滤。取1ml滤液移入50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线的显

色方法进行比色测定。

试验应设无基质的对照和无土壤的对照。

淀粉酶活性，以24h后1g土壤中麦芽糖的毫克数表示。

土壤脲酶活性的测定

脲酶,苯酚钠比色法测定（关松荫.土壤酶及其研究法[M].北京：农业出版社，1986：296-297.）

（1）试剂配制

①PH6.7的柠檬酸盐缓冲液：取184g柠檬酸溶于300ml蒸馏水中，另取147.5g氢氧化钾

溶于水，再将两种溶液合并。用1M的氢氧化钠将PH值调至6.7，并用水稀释至1L.

②苯酚钠溶液：称62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，然后用乙醇稀

释至100ml（A），保存在冰箱中。称27g氢氧化钠溶于100ml水中(B)，保存在冰箱中。

使用前，将A、B两液各20ml混合，并用蒸馏水稀释至100ml备用。

③次氯酸钠溶液：用水稀释制剂，至活性氯的浓度为0.9%（将5.2%的次氯酸钠稀释6倍），

溶液稳定。

④10%尿素

⑤甲苯

⑥氮的标准溶液: 精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，则得1ml含0.1mg氮

的标准液。

标准曲线绘制：吸取稀释的标准液1、3、5、7、9、11、13ml，移入50ml容量瓶中，然后加蒸馏水至20ml。再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，边加边摇匀。20min 后显色定容。1h内在分光光度计上于波长578nm处比色。根据光密度值与溶液浓度绘制标准曲线。

（2）操作步骤

①取5g风干土，置于50ml三角瓶中，加1ml甲苯。15min后加10ml10%尿素液和20mlPH6.7

柠檬酸盐缓冲液。

②摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。过滤后取3ml滤液注入50ml容量瓶中，然后按绘制

标准曲线显色方法进行比色测定。

（3）结果计算

脲酶活性以24h后1g土壤中NH3-N毫克数表示。

NH3-N（mg）=a×2

a表示从标准曲线查得得NH3-N毫克数；2表示换算成1g土的系数。