实训八 病毒的鸡胚接种技术
病毒的鸡胚培养
病毒的鸡胚培养一、目的掌握病毒鸡胚接种、收获、HA试验方法和原理二、实验内容1、种蛋选择、消毒与孵化：种蛋为健康未免疫ND疫苗、受精率为90﹪以上的新鲜种蛋。
15g高锰酸钾、30mL甲醛/m3熏蒸消毒30分钟，气室向上38.5-39℃孵化，相对湿度60-70%。
每2小时翻番一次。
2、画蛋与打孔：孵化9-11日龄鸡胚，暗室内画出气室边缘和胚头位置。
于胚头一侧气室边缘上方0.5cm处打孔。
3、接种与封孔：NDV Lasota种毒以灭菌生理盐水作一定倍数稀释（20倍）,尿囊腔内接种0.1ml/胚，以融化的石蜡封孔，继续孵化，不翻蛋。
每日照蛋一次，弃去72h内死亡鸡胚。
至120h全部取出于4℃冰箱过夜。
4、收毒：无菌操作打开气室部位蛋壳，撕开壳膜、尿囊膜和羊膜,吸出尿囊液，观察鸡胚肉眼变化。
5、HA效价测定：原理。
1%鸡RBC制备：采取3只青年公鸡血液，抗凝，以生理盐水离心洗涤3次，制成1%RBC悬液。
血凝试验按下表操作。
病毒鸡胚培养病毒培养可用动物接种、鸡胚培养和组织培养法。
鸡胚接种培养是病毒学的重要方法之一，来自禽类的病毒，均可在鸡胚中繁殖，哺乳动物的病毒如蓝舌病病毒、流感病毒等也可在鸡胚中增殖。
目前鸡胚尤其是SPF、鸡胚被广泛利用于分离病毒、制造疫苗和抗原等，其来源丰富，操作简便。
除病毒外，衣原体、立克次氏体也可用鸡胚来培养，衣原体可在鸡胚卵黄囊繁殖，致死鸡胚；部分立克次氏体也可在卵黄囊中繁殖。
[目的要求](1)掌握鸡胚的孵化过程和不同日龄鸡胚的接种途径和接种方法。
(2)掌握新城疫病毒在鸡胚尿囊腔增殖过程，掌握接毒和收毒的方法。
[实验材料]白壳鸡胚、孵化箱、1mL注射器、蛋架、新城疫工系和Ⅱ系弱毒苗等。
[实验准备]1．鸡胚的选择和孵化应选健康无病鸡群或SPF鸡群的新鲜受精蛋。
为便于照蛋观察，以来航鸡蛋或其他白壳蛋为好。
用孵卵箱孵化，要特别注意温度、湿度和翻蛋。
孵化条件一般选择相对湿度为60％，最低温度36℃，一般37．5℃。
鸡胚接种实验步骤
鸡胚接种实验步骤
鸡胚接种实验是一种常用于研究病毒感染和疫苗研发的方法。
以下是一般的鸡胚接种实验步骤：
1. 准备工作：
- 确保实验室卫生条件良好，并进行必要的消毒处理。
- 准备所需材料，包括鸡蛋（受精后的鸡蛋）、病毒样品或疫苗、适当的培养基等。
2. 取出鸡蛋：
- 使用无菌器具将鸡蛋从孵化器中取出。
- 用消毒剂擦拭鸡蛋表面，确保表面无菌。
3. 制备操作区域：
- 在实验室台面上准备一个无菌操作区域。
- 使用无菌器具将所需工具（如注射器、刀片）摆放在操作区域上。
4. 接种操作：
- 在无菌操作区域上，使用无菌器具在鸡蛋的空气室区域确定一个合适的接种点。
- 使用无菌注射器将病毒样品或疫苗注入鸡蛋内。
- 注意避免对鸡蛋内的胚胎造成机械损伤。
5. 封蛋：
- 使用无菌聚乙烯封膜或其它适当的封蛋材料将接种点封住，以防止污染和脱水。
6. 孵化：
- 将接种后的鸡蛋放回孵化器中，并根据所研究的病毒或疫苗的特性设定合适的温度和湿度。
- 根据实验需求，确定孵化时间，通常为数天至数周。
7. 结果观察：
- 在孵化结束后，取出鸡蛋，观察胚胎的发育情况。
- 根据研究的目的，可以进行进一步的分析、检测和测量。
需要注意的是，鸡胚接种实验需要在合适的实验室条件下进行，严格遵守实验室安全操作规范，并获得相关机构的许可和伦理审批。
此外，具体的实验步骤可能会因研究目的和病原体的不同而有所变化，所以在进行实验前最好参考相关的专业文献或咨询专业人士。
鸡胚接种实验报告
一、实验目的1. 掌握鸡胚接种病毒的方法和步骤。
2. 了解病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
3. 学习病毒分离和培养的基本原理。
二、实验原理鸡胚接种是一种常用的病毒分离和培养方法。
病毒接种于鸡胚后，能够在鸡胚中繁殖，从而便于观察和分析病毒的生物学特性。
本实验主要采用尿囊腔接种法，将病毒接种于鸡胚尿囊腔内，观察病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
三、实验材料1. 实验动物：9-11日龄的鸡胚。
2. 实验试剂：新城疫病毒悬液、生理盐水、碘酒、酒精、消毒棉球等。
3. 实验仪器：照蛋器、无菌手术刀、镊子、注射器、剪刀、平皿等。
四、实验方法1. 鸡胚准备：取9-11日龄的鸡胚，用碘酒和酒精消毒鸡胚蛋壳，用手术刀在鸡胚气室处划一小孔，用注射器吸取适量新城疫病毒悬液。
2. 尿囊腔接种：将鸡胚置于卵盘上，气室端向上，用注射器将病毒悬液注入鸡胚尿囊腔内，注入量约为0.1-0.2ml。
3. 孵育：将接种后的鸡胚放入37℃孵卵箱中孵育48-72小时。
4. 观察：定期观察鸡胚的生长发育情况，记录死亡、畸形等现象。
5. 病毒分离：取出死亡鸡胚，无菌操作下取出尿囊液，进行病毒分离和培养。
五、实验结果1. 接种后，部分鸡胚出现死亡现象，死亡时间集中在接种后24-48小时。
2. 死亡鸡胚的尿囊液中检测到新城疫病毒。
3. 成活鸡胚生长发育正常，未出现明显异常。
六、实验讨论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法，适用于多种病毒的研究。
2. 尿囊腔接种法是一种常用的鸡胚接种方法，适用于新城疫病毒、流感病毒等多种病毒。
3. 本实验结果表明，新城疫病毒能够在鸡胚中繁殖，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
七、实验结论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法。
2. 尿囊腔接种法适用于新城疫病毒等多种病毒的分离和培养。
3. 本实验成功分离和培养了新城疫病毒，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
八、实验心得1. 实验过程中，无菌操作至关重要，需严格按照无菌操作规程进行。
实验鸡胚接种
实验鸡胚接种
xx年xx月xx日
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目录
实验准备实验步骤实验数据分析实验结论实验讨论与展望
01
实验准备
1
实验人员要求
2
3
了解微生物的种类、特点、致病性及检验方法等。
具备微生物学基础知识
熟悉接种、分离、培养、鉴定等实验操作规范，并能够熟练操作。
掌握实验操作技能
遵守实验室的各项安全规章制度，注意个人防护和实验室废弃物的处理。
培养时间
根据实验需要，确定鸡胚培养的时间，以便观察和记录实验结果。
鸡胚培养
03
实验数据分析
数据记录
记录实验进行的日期。
实验日期
记录所使用鸡胚的编号，方便追踪。
鸡胚编号
记录接种的病毒或细菌剂量。
接种剂量
记录鸡胚在实验过程中表现出的症状和时间。
症状表现
数据转换
将非数值型数据进行转换，以便进行数学分析。
多样性
根据实验需求，选择不同品种、来源的鸡胚，以满足实验的多样性和代表性。
鸡胚选取
选用精细、锋利的接种针，灭菌烘干后备用。
鸡胚接种
准备接种工具
将鸡胚固定在操作台上，用接种针在鸡胚的尿囊膜上选择适宜的位置，进行无菌接种。
接种操作
接种后对鸡胚进行密封处理，以防止外界微生物的侵入。
接种后处理
培养环境
为鸡胚提供适宜的温度、湿度和气体环境，以保证鸡胚的正常发育和繁殖。
数据清洗
去除异常值、缺失值和重复数据，确保数据准确性。
数据聚合
将多个数据源的数据聚合在一起，以便更全面地评估实验结果。
数据处理
03
结论提取
基于分析和解释，提取有关实验的结论，为后续研究提供参考。
鸡胚接种技术
这些病毒被接种到尿囊腔后，可在内皮细胞中复制，
复制的病毒被释放到尿囊液中，因此，在尿囊液中喊 与大量的病毒。
鸡胚接种技术
——鸡胚的接种途径和方法
✪
卵黄囊接种：
这些大的病原体能在卵黄囊的内皮细胞中快速生长。
用于虫媒病毒、衣原体及立克次体等的分离和繁殖，
鸡胚接种技术
——鸡胚的结构与生理 ✪ 鸡胚的发育过程：Day 3
鼻、腿、翅开始形成，器官出现。 尿囊开始长出，胚胎的位置与蛋的长轴垂直。 胚胎与延伸的卵黄囊血管形似蚊子。
鸡胚接种技术
——鸡胚的结构与生理 ✪ 鸡胚的发育过程：Day 4
尿囊和羊膜腔形成。 卵黄体积继续增大，卵黄囊血管包围卵黄近1/3。 胚胎与卵黄囊血管形似蜘蛛。
主要用于分离和繁殖在绒毛尿囊膜上产生斑点状和痘 可在绒毛尿囊膜上滴定这些病毒，通过产生斑和痘的 数目来计算感染性病毒颗粒的数目。 还可用于抗体滴定，因为斑和痘数目减少的程度与抗 体浓度有关。
鸡胚接种技术
——鸡胚的接种途径和方法
✪
尿囊腔接种：
应和传代培养。
用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的适
✪ 卵黄囊
主要营养的存储场所，在胚胎发育早期供给鸡胚营养
✪ 卵白
在胚胎发育晚期供给鸡胚营养
鸡胚接种技术
——鸡胚的孵育和检查
✪ 受精鸡卵的选择
接种病毒的受精鸡卵应未感染已知病毒或其它微生
物，最好来自无特定病原体(Specified Pathogen
Free, SPF)鸡群。 受精卵的壳最好是白色的，利于检卵灯观察鸡胚的 发育情况。 受精卵必须新鲜，保存在5~20℃不超过10天。
鸡胚接种技术
——鸡胚的孵育和检查
病毒鸡胚接种技术心得体会
病毒鸡胚接种技术心得体会
作为一种常见的病毒检测方法,病毒鸡胚接种技术可能有以下心得体会：
1. 病毒鸡胚接种技术需要实验室条件比较高,需要专门的实验室和专业的人员进行操作,操作过程需要严格遵守操作规程和安全规范。
2. 接种病毒前需要对鸡胚进行充分的检测,确保鸡胚的质量符合要求,否则会影响实验结果。
3. 操作过程中需要注意实验器材的消毒,避免污染和交叉感染的发生。
4. 实验中需要对病毒的种类进行合理的分类和识别,以便进行正确的对照实验,确保实验结果的正确性。
5. 在实验评价中,需要严格按照规范进行评价,对实验结果进行定量化处理和对比分析,以便有效地评估实验数据。
总之,病毒鸡胚接种技术需要严格遵守相关规范和操作规程,进行细致的实验操作和数据分析,以确保实验结果的可靠性和科学性。
病毒的鸡胚培养法
卵黄囊接种
鸡胚的各种接种途径
1.绒毛尿囊膜接种 2.尿囊腔接种 3.羊水腔接种 4.卵黄囊接种
3.收毒：病毒的收毒根据接种的途径而定。
绒毛尿囊腔内接种 ★★
尿囊液
绒毛尿囊膜接种
绒毛尿囊膜
羊膜腔接种 卵黄囊内接种
羊水 卵黄液和卵黄膜
4.废料处理
• 操作完毕，将所有的用具煮沸消毒，擦净 后再以消毒水浸洗，卵壳、壳膜和胚胎等 残物煮沸消毒后弃去。
• b.病毒材料的准备：要分离培养的病毒材料应
是无菌的，因此在处理材料的过程中，应严格按 照无菌操作进行，将新城疫弱毒活疫苗按照每 1000羽份配成250ml,为达到无菌的目的，可在 每毫升接种物中加入青霉素和链霉素各1005000IU，置室温中1h处理。
法氏囊病毒的分离
• 取疑似感染病毒的法氏囊，称重，按1:5 （w/v）加入生理盐水，研磨，-20℃，反复 冻融2次；每次冷冻时间以研磨物结冰为准；
绒毛尿囊膜接种
1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜
羊膜腔接种
取10-12日龄的鸡胚，消
毒气室顶上的蛋壳，并
将气室顶端的蛋壳锉一
三角形的裂痕，用灭菌
镊子揭去裂痕部位的蛋
壳和壳膜，用灭菌平头
镊子刺破尿囊膜，并轻
轻夹去羊膜，用小号针
头刺进羊膜腔内，注入
0.05-0.1ml的病毒接种
液，以氧化锌胶布封口，
滴上溶化的固体石蜡。
（三）实验器材
• 1.鸡胚：要选择SPF鸡胚或低母源抗体的鸡胚。
从实践看，法氏囊炎病毒对抗体相当敏感，所以 要用无母源抗体的鸡胚；而新城疫病毒、禽流感 病毒等可抵御母源抗体的作用而得以繁殖致死鸡 胚。
• 孵化前的鸡胚应注意消毒，置37-38℃、相对湿
鸡胚接种实验报告
鸡胚接种实验报告引言鸡胚接种实验是一种常见的生物学实验，通过将病毒或细菌接种于鸡胚中，我们可以观察到它们对胚胎发育的影响。
这种实验能够帮助我们了解病原体的传播途径、感染机制以及鸡胚对外界刺激的响应能力。
本文将就鸡胚接种实验的过程和观察结果展开论述，以期更好地了解和探索生命的奥秘。
实验材料和方法材料：新鲜鸡胚、病毒/细菌培养液方法：1. 准备培养基：将培养基配制好，并加热灭菌。
2. 取出鸡胚：在无菌条件下，取出新鲜的鸡胚，约为8-10天，保证胚胎仍处于发育阶段。
3. 接种病原体：在鸡胚卵黄囊的顶部，用无菌针缓慢注入病原体培养液。
4. 封胚：用胶带或蜡封好孔洞，保持接种处的无菌状态。
5. 孵化：将接种后的鸡胚放入孵化器中，保持适当的温度和湿度。
6. 观察：根据实验设计，每隔一段时间观察鸡胚的发育情况。
实验结果通过观察病原体接种后的鸡胚，我们可以得出一些有趣的结果。
1. 反应变化：不同病原体对鸡胚的反应变化具有差异。
一些病原体可能导致胚胎发育减缓或停滞，而另一些病原体可能导致胚胎畸形或死亡。
这些结果提供了关于病原体对于胚胎发育的影响的线索。
2. 免疫响应：鸡胚对病原体的接种可能会触发免疫响应。
我们可以观察到鸡胚的免疫系统是否能够有效地对抗病原体的入侵。
免疫细胞的增多、炎症反应的出现都可能是这一免疫响应的体现。
3. 病变形态：观察鸡胚的病变形态对于了解病原体的感染机制和病变过程非常重要。
我们可以观察到病原体在鸡胚中的定位、侵入细胞的方式以及细胞破坏的情况。
这些观察结果有助于研究病原体的致病机制，并为预防和治疗提供依据。
4. 实验变量：在鸡胚接种实验中，还可以引入一些实验变量，比如改变接种浓度、不同时间点的接种等，以观察这些变量对实验结果的影响。
通过对变量的控制和对比，可以更加准确地判断病原体对鸡胚的影响。
结论鸡胚接种实验是一种有效的方法，可以研究病原体与胚胎发育之间的关系。
通过观察鸡胚的发育情况和病变形态，我们可以了解病原体的感染机制以及胚胎对外界刺激的响应能力。
鸡胚的接种技术 - 养鸡技术
鸡胚的接种技术-养鸡技术张师杨（哈尔滨市阿城区畜牧兽医局150000）鸡胚接种技术用途广泛，除了可以分离培养病毒、支原体及衣原体等病原以确诊传染病外，还可用于病毒的鉴定，效价测定，致病力测定及制造疫苗、抗原等。
因此掌握鸡胚接种技术对进行传染病的研究和防制工作非常重要。
1选胚根据需要选用合适日龄的鸡胚，大多数病毒适于9～12日龄的鸡胚。
鸡胚应以白色蛋壳者为好，便于照蛋观察。
鸡胚应发育正常，健康活泼，不要过大、过小或畸形蛋孵化的胚。
鸡胚应来自健康无病的鸡群，而且不能含有可抑制所接种病毒的母源抗体，最好选用SPF鸡胚或非免疫鸡胚。
2. 照蛋定位接种前应在照蛋器下检查鸡胚，挑出死胚和弱胚。
对所有健康胚应先用红铅笔画出气室位置，再于胚胎侧画出接种位点（进针点），接种点应避开大血管，靠近气室边缘处，离胚头约1cm左右[养殖:/]。
3 接种照蛋定位完毕后，即可开始接种。
先用碘酊将接种位点和气室消毒，再用70%酒精脱碘，然后根据需要用三棱针或20号针头在蛋壳上打孔。
尿囊腔接种：最常用的接种方法，鸡新城疫、减蛋综合症病毒、传染性支气管炎病毒、法氏囊病毒等均可采用这种方法。
蛋壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎一侧近气室处所画位点打一小孔，用带5～7号针头的注射器插入孔内约1. 5cm，接种接种材料0. 1～0.2mL。
进针时针头与蛋壳应保持30℃角，不应垂直进针，注射完毕，立即用溶化的热石蜡将注射口和气室上小孔密封，然后放回37℃孵化箱孵化72～120h。
绒毛尿囊膜接种：主要用于痘病毒、喉气管炎病毒和马立克氏病毒等的分离培养。
将卵壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎侧靠近气室处避开大血管用电烙铁或钢锯条将蛋壳打开1个4mm见方的小口，用刀尖小心撬开蛋壳，不能损伤卵壳膜，形成卵窗。
用针尖轻轻挑破卵窗中心的卵壳膜，但不能损伤卵壳膜下的绒毛尿囊膜。
在针尖挑破处滴1滴灭菌生理盐水或甘油，然后用吸头在气室小孔上吸气，使胚内造成负压，这时卵窗处绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见生理盐水或甘油迅速渗入。
鸡胚尿囊腔接种实训报告
一、实验目的1. 掌握鸡胚尿囊腔接种的基本操作技术。
2. 熟悉鸡胚尿囊腔接种在病毒分离与培养中的应用。
3. 了解鸡胚尿囊腔接种对病毒分离与培养的重要性。
二、实验原理鸡胚尿囊腔接种是一种常用的病毒分离与培养方法。
该法利用鸡胚尿囊腔作为病毒培养的场所，使病毒在尿囊腔内繁殖，从而获得病毒培养物。
鸡胚尿囊腔接种适用于多种病毒，如新城疫病毒、流感病毒等。
三、实验材料1. 9-11日龄健康鸡胚。
2. 病毒悬液（如新城疫病毒、流感病毒等）。
3. 无菌操作工具：无菌镊子、无菌剪刀、无菌注射器、无菌吸管、无菌培养皿、无菌滤纸等。
4. 无菌消毒剂：碘酊、酒精棉球等。
5. 温箱、孵化箱等。
四、实验步骤1. 鸡胚准备- 将鸡胚置于温箱中孵化，保持温度37.5-38.0℃，湿度60-70%。
- 在孵化过程中，每日翻动鸡胚2-3次，以防止粘连。
- 在孵化第5-6天，用照蛋器检查鸡胚发育情况，挑选发育良好的鸡胚。
2. 病毒悬液准备- 将病毒悬液置于无菌操作台中，用无菌吸管吸取适量病毒悬液。
3. 鸡胚尿囊腔接种- 将鸡胚取出，用无菌滤纸吸去表面水分。
- 在鸡胚气室部位，用碘酊和酒精棉球进行消毒。
- 用无菌剪刀在鸡胚气室部位剪一小孔，露出尿囊。
- 用无菌注射器吸取病毒悬液，注入尿囊腔内。
- 用无菌滤纸吸去多余病毒悬液。
4. 鸡胚孵育- 将接种后的鸡胚放回孵化箱中，继续孵化。
- 每日观察鸡胚的生长发育情况，记录死亡、病变等。
5. 收获病毒- 在接种后48-72小时，取出死亡鸡胚。
- 用无菌剪刀剪开鸡胚气室部位，撕去卵壳膜。
- 用无菌吸管吸取尿囊液，进行病毒分离与培养。
五、实验结果与分析1. 鸡胚尿囊腔接种成功后，大部分鸡胚在接种后48-72小时内死亡。
2. 死亡鸡胚尿囊腔内可见病毒繁殖的典型病变，如尿囊液增多、尿囊膜增厚等。
3. 收获的尿囊液经病毒分离与培养，可得到纯化的病毒。
六、实验总结1. 鸡胚尿囊腔接种是一种简单、实用的病毒分离与培养方法，适用于多种病毒。
《鸡胚接种技术》课件
该技术广泛应用于生物医学、农 业、食品工业等领域，具有较高 的实用价值。
鸡胚接种技术的历史与发展
鸡胚接种技术最早可追溯到19 世纪末期，当时主要用于疫苗 生产。
随着科技的不断进步，鸡胚接 种技术在20世纪得到了迅速发 展，应用范围不断扩大。
目前，鸡胚接种技术已经成为 一种成熟的实验和生产手段， 为科学研究和技术创新提供了 有力支持。
鸡胚接种技术的应用领域
01
02
03
04
生物医学
用于疫苗生产、药物筛选、疾 病模型构建等。
农业
用于育种、品种改良、动物疫 病防治等。
食品工业
用于生产某些酶制剂、生物活 性物质等。
其他领域
如环保、生物安全等也涉及到 鸡胚接种技术的应用。
02
鸡胚接种技术的基本原理
鸡胚的结构与发育
鸡胚的结构
鸡胚由卵黄囊、羊膜、绒毛膜和 尿囊等组成，具有完整的胚胎发 育过程。
VS
病原鉴定
通过鸡胚接种技术，可以对分离出的病毒 进行生物学鉴定，确定病毒的种类、毒力 等。
抗体的制备与检测
抗体制备
利用鸡胚接种技术，可以制备针对各种病毒 的特异性抗体，用于治疗或诊断疾病。
抗体检测
通过鸡胚接种技术，可以检测血清中的抗体 水平，了解免疫状态或评估疫苗免疫效果。
THANKS
感谢观看
鸡胚接种技术的应用实例
疫苗的研发与生产
疫苗研发
利用鸡胚接种技术，可以研发针对各种病毒性疾病的疫苗，如流感疫苗、狂犬病疫苗等。
疫苗生产
鸡胚是生产疫苗的重要原材料，通过鸡胚接种技术，可以大量繁殖病毒，为疫苗生产提供足够的原材 料。
病原的分离与鉴定
病原分离
鸡胚接种的方法与步骤
鸡胚接种的方法与步骤
鸡胚接种是一种常用的病毒分离和培养方法，其基本步骤如下：1. 选择合适的鸡胚：通常选择9-12 日龄的鸡胚，此时鸡胚的免疫系统尚未完全发育，适合病毒的生长和繁殖。
2. 准备接种材料：将待接种的病毒样品稀释到适当的浓度，并准备好接种工具，如吸管、针头、注射器等。
3. 接种鸡胚：将稀释后的病毒样品接种到鸡胚的尿囊腔、卵黄囊或绒毛尿囊膜等部位。
接种时要注意操作规范，避免污染和损伤鸡胚。
4. 孵化鸡胚：将接种后的鸡胚放入孵化箱中，在适当的温度和湿度条件下孵化，让病毒在鸡胚中生长和繁殖。
5. 观察和检测：在孵化过程中，定期观察鸡胚的生长情况和病变特征，如鸡胚是否死亡、是否出现出血点、是否出现痘斑等。
同时，可以进行病毒的分离和鉴定，以确定病毒的种类和特性。
6. 收获病毒：当病毒在鸡胚中生长和繁殖到一定程度时，可以收获病毒。
收获病毒的方法包括离心、过滤、沉淀等，具体方法取决于病毒的种类和特性。
7. 保存病毒：收获的病毒可以保存在适当的温度和湿度条件下，以备后续的实验和研究使用。
需要注意的是，鸡胚接种是一项技术性较强的操作，需要严格遵守实验操作规范和安全注意事项，以确保实验的准确性和安全性。
同
时，在进行鸡胚接种实验时，应该遵循相关的法律法规和伦理规范，确保实验的合法性和道德性。
禽胚接种方法实训报告
一、引言禽胚接种是兽医微生物学实验中常用的技术之一，主要用于分离、鉴定和研究禽类病原微生物。
通过禽胚接种，我们可以观察病原微生物在禽胚中的生长繁殖情况，进而为疾病的诊断和防治提供科学依据。
本次实训旨在通过禽胚接种方法的学习和实践，提高学生对禽类病原微生物的分离、鉴定及研究能力。
二、实训目的1. 掌握禽胚接种的基本原理和操作方法。
2. 学会使用禽胚进行病原微生物的分离和培养。
3. 了解病原微生物在禽胚中的生长繁殖规律。
4. 培养学生的实验操作技能和科学思维。
三、实训材料与设备1. 实验材料：鸡胚、鸭胚、鸽胚、病原微生物、培养基、生理盐水、酒精、无菌生理盐水等。
2. 实验设备：无菌操作台、接种环、接种针、恒温培养箱、显微镜、显微镜载玻片等。
四、实训步骤1. 准备工作（1）将鸡胚、鸭胚、鸽胚置于37℃恒温培养箱中孵化，待其发育至一定阶段。
（2）准备培养基，按照无菌操作规程进行。
（3）配制生理盐水，进行无菌处理。
2. 病原微生物接种（1）将病原微生物用生理盐水稀释至适当浓度。
（2）取无菌接种环，蘸取适量病原微生物。
（3）将接种环插入鸡胚、鸭胚、鸽胚的尿囊腔中，深度约为1cm。
（4）将接种环插入鸡胚、鸭胚、鸽胚的卵黄囊中，深度约为1cm。
3. 观察与记录（1）将接种后的禽胚置于37℃恒温培养箱中培养，每隔一定时间观察其生长情况。
（2）记录禽胚的生长变化，包括死亡、畸形、生长缓慢等现象。
（3）观察病原微生物在禽胚中的生长繁殖情况，记录其形态特征。
4. 结果分析（1）根据禽胚的生长变化和病原微生物的形态特征，对病原微生物进行鉴定。
（2）分析病原微生物的生长繁殖规律，为疾病诊断和防治提供依据。
五、实训结果与讨论1. 实训结果本次实训成功分离出多种禽类病原微生物，如新城疫病毒、禽流感病毒、禽霍乱菌等。
通过观察禽胚的生长变化和病原微生物的形态特征，对病原微生物进行了鉴定。
2. 讨论与分析（1）禽胚接种方法是一种有效的病原微生物分离和培养方法，具有操作简便、结果准确等优点。
实验八 病毒鸡胚接种与细培养
病毒分离培养
分离培养：动物接种——原动物/实验动物 鸡胚接种——尿囊腔、卵黄囊、尿囊膜、羊膜腔等
细胞培养——原代细胞
二倍体细胞 传代细胞
cpe观察空斑
基因克隆/扩增
组织块培养——肠管、气管环等
鸡 胚 成 纤 维 细 胞 培 养 程 序 ：
在无菌条件下采取9－10日龄鸡胚 ↓ 除去头(或仅除去喙和眼)、爪和内脏，并剪成块 ↓ 用Hanks液等充分冲洗 ↓ 剪将其剪成lmm大小的碎块 ↓ 加入Hanks液或其他洗液，充分冲洗 ↓ 约4倍量的0.25％胰酶，并调整pH至7.6－7.8 ↓ 37℃水浴中感作30分钟，每10分钟轻轻摇动一次 ↓ 吸弃上层胰酶溶液 ↓ 用洗液轻洗2次后 ↓ 吸管充分吹打，直至形成均匀的细胞悬液 ↓ 准备细胞计数 ↓ 单层细胞培养
鸡胚成纤维细胞培养
细胞培养的特点：
每个细胞的生理特性基本一致； 感染病毒的细胞可通过细胞病变观察结果； 免疫学和核酸技术检测细胞内有无培养病毒； 从感染的组织分离病毒和病毒克隆。
实验报告：
1、常用鸡胚方法有几种，说明各接种途径的日龄。 2、叙述鸡胚接种过程中应注意的事项。 3、描述细胞培养和接毒后的细胞病变。
动物接种原动物实验动物鸡胚接种尿囊腔卵黄囊尿囊膜羊膜腔等细胞培养原代细胞cpe观察空斑二倍体细胞基因克隆扩增传代细胞组织块培养肠管气管环等在无菌条件下采取910日龄鸡胚鸡胚成纤维细胞培养细胞培养的特点
兽医微生物实验教学课件
（动物医学本科专业）
动物医学系
验八 病毒鸡胚接种与培养
目的要求：
1、了解不同日龄鸡胚接种的途径和应用。 2、掌握鸡新城疫病毒鸡胚尿囊腔接毒、收毒方法。 3、掌握鸡胚成纤维细胞培养和新城疫病毒接种、病变观察及收毒。
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实训八病毒的鸡胚接种技术
目的要求掌握鸡胚培养病毒的接毒和收毒方法，明确鸡胚培养病毒的应用。
仪器及材料受精卵、恒温箱、照蛋器、接种箱、蛋架、一次性注射器（1～5ml）、中号镊子、眼科剪和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、吸管、酒精灯、试管架、胶布、蜡、锥子、锉、煮沸消毒器、消毒剂（5%碘酊棉、75%酒精棉、5%石炭酸或3%来苏儿）、新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗。
方法与步骤（实验视频六）
（一）鸡胚的选择和和孵化应选择健康无病鸡群或SPF鸡群的新鲜受精蛋。
为便于照蛋观察，以来航鸡蛋或其他白壳蛋为好。
用孵化箱孵化，要注意温度、湿度和翻蛋。
孵化最低温度为36℃，一般为37.5℃，相对湿度为60%。
每日最少翻蛋3次。
发育正常的鸡胚照蛋时可见清晰的血管及鸡胚的活动。
不同的接种材料需不同的接种途径（见图2-4），不同的接种途径需选用不同日龄的鸡胚。
卵黄囊接种，用6～8日龄鸡胚；绒毛尿囊膜接种，用9～13日龄的鸡胚；绒毛尿囊腔接种，用9～12日龄的鸡胚；血管注射，用12～13日龄的鸡胚；羊膜腔和脑内注射，用10日龄的鸡胚。
（二）接种前的准备
病毒材料的处理怀疑污染细菌的液体材料，加抗生素（青霉素1000IU和链霉素1000μg/ml）置室温1h或4℃冰箱12～24h，高速离心，取上清液，或经细菌滤器滤过除菌。
如为患病动物组织，应剪碎、匀浆、离心后取上清液，必要时加抗生素处理或过滤除菌。
若用新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗，则无菌操作用生理盐水将其稀释100倍。
照蛋以铅笔划出气室、胚胎位置及接种的位置，标明胚龄及日期气室朝上立于蛋架上。
尿囊腔接种选9～12日龄的鸡胚，接种部位可选择在气室中心或远离胚胎侧气室边缘，避开大血管。
（三）鸡胚的接种（以新城疫病毒的绒毛尿囊腔接种为例）在接种部位先后用5%碘酊棉及75%酒精棉消毒，然后用灭菌锥子打一小孔，一次性1ml注射器吸取新城疫病毒液垂直或稍斜插入气室,刺入尿囊，向尿囊腔内注入0.1～0.3ml。
注射后,用熔化的蜡封孔，置温箱中直立孵化3～7d。
孵化期间，每6h照蛋一次，观察胚胎存活情况。
弃去接种后24h内死亡的鸡胚，24h以后死亡的鸡胚应置0～4℃冰箱中冷藏4h或过夜（气室朝上直立），一定时间内不能致死的鸡胚也放冰箱冻死。
（四）鸡胚材料的收获原则上接种什么部位，收获什么部位。
绒毛尿囊腔接种新城疫病毒时，一般收获尿囊液和羊水。
将鸡胚取出，无菌操作轻轻敲打并揭去气室顶部蛋壳及壳膜，形成直径1.5～2.0cm的开口。
用灭菌镊子夹起并撕开或用眼科剪剪开气室中央的绒毛尿囊膜，然后用灭菌吸管从破口处吸取尿囊液，注入灭菌青霉素瓶或试管内。
然后破羊膜收获羊水，收获的尿囊液和羊水应清亮，浑浊说明有细菌污染。
收获的病毒经无菌检验合格者冷冻保存。
用具消毒处理，鸡胚置消毒液中浸泡过夜或高压灭菌，然后弃掉。
注意事项鸡胚接种需严格的无菌操作，以减少污染。
操作时应细心，以免引起鸡胚的损伤。
病毒培养时应保持恒定的适宜条件，收毒结束，注意用具、环境的消毒处理。
思考题：1．病毒的鸡胚接种途径有哪些？分别选用多大日龄的鸡胚？
2．收集病毒时，为什么要弃掉24h以内死亡的鸡胚？
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