实验二 细菌的人工培养
细菌的人工培养实验报告
细菌的人工培养实验报告细菌的人工培养实验报告一、引言细菌是一类微小而简单的单细胞生物，广泛存在于自然界中的各种环境中。
为了研究和利用细菌，科学家发展出了人工培养细菌的方法。
本实验旨在通过人工培养细菌的过程，观察并学习细菌的生长特性及其对培养条件的响应。
二、材料与方法1. 实验所用材料和仪器：- 细菌培养皿- 细菌培养基- 微量移液器- 试管- 烧杯- 灭菌棒- 显微镜- 显微镜载玻片2. 实验步骤：a. 准备细菌培养基：按照实验所需的培养基配方，称取适量培养基粉末，并加入适量蒸馏水，搅拌均匀，然后用自动压力锅或高压灭菌锅对培养基进行高压灭菌处理。
b. 取出培养基后，将其倒入细菌培养皿中，用灭菌棒均匀涂布于培养皿底部。
c. 从已知细菌菌液中取一定数量，利用微量移液器滴加于培养皿上，注意避免不同菌种之间的交叉污染。
d. 将培养皿封闭，置于恒温培养箱中，控制培养温度和湿度，培养一定时间。
e. 从培养皿中取出一部分菌液，加入试管中，用显微镜观察细菌的形态、结构和数量。
f. 取少量菌液，滴于显微镜载玻片上，用显微镜观察不同放大倍数下的细菌结构。
三、结果与分析在人工培养过程中，通过观察培养皿上的细菌生长情况和显微镜下的细菌形态，我们可以得出以下结果和分析：1. 细菌生长情况：根据培养皿上的观察，我们可以观察到细菌在培养基上形成了不同大小和形状的菌落。
这说明细菌在适宜的培养条件下能够繁殖并形成群落。
2. 细菌形态：通过显微镜观察细菌的形态，我们可以发现不同菌种之间的形态差异。
例如，某些细菌呈现长棍状、圆球状或螺旋状等形态。
这些形态特征有助于我们对不同细菌的识别和分类。
3. 细菌数量：通过观察显微镜载玻片下的细菌液滴，我们可以估算细菌的数量。
我们可以观察到细菌在显微镜下以聚集和单独分散的形式出现。
数量的变化可以反映出细菌的生长速度和代谢活性。
四、讨论通过本实验，我们可以得出以下讨论结论：1. 细菌对培养条件的响应：细菌在不同的培养条件下表现出不同的生长特性。
实验二 培养基的配制和灭菌
实验二培养基的配制和灭菌一、实验目的微生物的生长发育都有一定的营养需要，培养基即人工培养微生物、为其生长发育提供所需营养的基质。
培养基配好后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物试验，因此培养基的配制和灭菌是植物病理实验室中最基本的工作，通过本次实验学习植病实验室中常用培养基的配制方法和高压灭菌锅的使用方法。
二、内容、材料和方法(一)培养基的配制培养基按组成成分及对这些成分了解的程度分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基三类，从物理性质上又分为液体培养基和固体培养基两类，培养基的种类不同，配制方法也有差异，限于时间，本次实验仅配制马铃薯琼脂培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。
1马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）这是植病实验室最常用的培养基(简称PSA)，主要用于植物病原真菌的分离和培养，有时也用于植物病原细菌。
成分：马铃薯200克蔗糖 10~20克琼脂 17~20克加水至1000毫升方法：将马铃薯洗净去皮切块，加水煮沸半小时，用双层纱布滤去薯块，补足水量，加入琼脂，加热熔化，再加糖，待完全化后，乘热用双层纱布过滤分装，塞好棉塞高压灭菌。
马铃薯蔗糖琼脂培养基略带酸性，培养真菌无需调节pH，培养细菌则调节pH至中性，此培养基留作下次实验分离培养病原真菌用，故不必调节pH。
5人分作一组，1、2组各作此培养基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约10毫升，灭菌后摆成斜面；其余300毫升，分装在3个250—300毫升的三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善保存，留待下次实验使用。
2肉汁胨培养基（BPA）这种培养基主要用于细菌的分离和培养成分：牛肉浸膏 3克蛋白胨 5~10克蔗糖 10克酵母浸膏 1克琼脂 17~20克加水至 1000毫升方法：先将琼脂加热熔化于大部水中，再将其它各成分用少量水化开加入，调节pH至7，趁热用双层纱布过滤，分装，塞棉塞高压灭菌。
牛肉浸膏和酵母浸膏十分粘稠，不易称重，称重时用小烧杯盛装，以玻璃棒沾取，故要先称好杯和棒的重量后，再开始沾取浸膏称重，称后将杯和棒上粘着的浸膏洗净于锅中。
实验二 细菌的人工培养
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四、细菌的生化反应
IMViC试验 ❖大肠埃希菌 + + - ❖产气杆菌 - - + +
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四、细菌的生化反应 尿素酶试验
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❖原理： 细菌若有尿素酶，能分解培养基中的尿 素产生氨，使培养基变为碱性，酚红指示剂呈深 酒红色。
VP试验
❖ 方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖 蛋白胨水，37℃培养18h～24h后，按每毫升培养 基加入含0.3%肌酸或肌酐的0.1ml 40% KOH溶液， 48℃～50℃水浴2h或37℃ 4h，充分摇动后观察。
甲基红试验
❖ 方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖 蛋白胨水，37℃培养18h～24h后，滴加甲基红指 示剂观察结果。
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四、细菌的生化反应
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枸橼酸盐利用试验
❖原理： 细菌利用铵盐作为唯一氮源，并利用枸 橼酸盐作为唯一碳源时，可在枸橼酸盐培养基上 生长，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，并分解铵盐生 成氨，培养基呈碱性反应。
❖ 方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于枸橼酸 盐培养基，37℃培养18h～24h观察。
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二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象 细菌的生长现象
1、液体培养基：混浊生长、沉淀生长、菌膜生长 2、半固体培养基：扩散生长、非扩散生长 3、固体培养基：菌落、菌苔
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四、细菌的生化反应
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1、记录细菌的生长现象。 2、记录并分析细菌的生化反应。
细菌人工培养实验报告
一、实验目的1. 了解细菌人工培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握培养基的制备、灭菌和接种方法。
3. 观察细菌在人工培养条件下的生长情况，分析影响细菌生长的因素。
二、实验原理细菌人工培养是指利用人工合成的培养基，为细菌提供生长所需的营养物质，使其在人工控制的环境中繁殖。
培养基通常含有碳源、氮源、无机盐、维生素和水等营养成分，以满足细菌的生长需求。
三、实验材料1. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖培养基、乳糖培养基等。
2. 灭菌器：高压蒸汽灭菌器、紫外线消毒灯等。
3. 接种工具：接种环、接种针、镊子等。
4. 实验仪器：培养皿、恒温培养箱、显微镜等。
5. 实验试剂：无菌水、酒精、盐酸、酚红指示剂等。
四、实验步骤1. 培养基制备（1）称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、乳糖等原料，按照比例加入去离子水，搅拌均匀。
（2）调节pH值至中性或微碱性。
（3）加热煮沸，持续30分钟，去除多余的水分。
（4）待培养基冷却至60℃左右，加入酚红指示剂，观察颜色变化。
（5）分装至无菌培养皿中，每皿10ml。
2. 培养基灭菌将培养皿放入高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌30分钟。
3. 接种（1）无菌操作，将接种环在火焰上灼烧，待冷却后，挑取适量细菌至培养皿中。
（2）用接种环均匀涂布于培养基表面。
4. 培养与观察将接种后的培养皿放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（1）观察细菌的生长情况，包括菌落形态、颜色、大小等。
（2）用显微镜观察细菌的形态。
5. 结果分析根据实验结果，分析影响细菌生长的因素，如培养基成分、温度、pH值等。
五、实验结果1. 菌落形态：实验中发现，不同细菌的菌落形态存在差异，如金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，表面光滑；大肠杆菌菌落呈粉红色，表面粗糙。
2. 菌落大小：实验中发现，不同细菌的菌落大小存在差异，如金黄色葡萄球菌菌落较大，直径可达1-2mm；大肠杆菌菌落较小，直径约为0.5-1mm。
3. 菌落颜色：实验中发现，不同细菌的菌落颜色存在差异，如金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色；大肠杆菌菌落呈粉红色。
实验二、细菌的分布、生长繁殖
②细菌在与外界相通腔道粘膜上的 分布：取口腔和鼻腔粘膜标本 接种于固体培养基
2、细菌的人工培养 与划线分离 （1）培养基：
观察固体、液体、半固体培养基 （2）细菌在培养基中的生长现象 （3）药物敏感试验的结果 3、消毒与灭菌 （1）物理消毒灭菌法
实验二、细菌的分布、培养与控制 一、实验目的 1、熟悉细菌在自然界及正常人体的分布 2、熟悉细菌的生长现象 3、学会几种常用的消毒灭菌方法 4、学会观察药物敏感试验的结果
二、实验仪器及材料 接种环、培养基、酒精灯、水浴箱、 棉签、净化工作台
三、实验内容 1、细菌的分布 （1）在自然界的分布 ： 空气 （2）在正常人体的分K-B法
煮沸法
②紫外线
（2）化学消毒灭菌法 70﹪～75 ﹪乙醇皮肤消毒效果观察
四、实验结果 1、通过表格写出每个实验结果及解释 2、通过本次实验，你对牢固树立无菌观 念和严格无菌操作有何理解？
实验日期
实验2细菌的培养和生化反应
实验二 细菌的培养和生化反应
注意: 不要打开 培养皿!!!
实验内容：
一、录像 ❖消毒灭菌 ❖基础培养基的制备和细菌的人工培养方法 二、细菌生长现象观察 三、细菌的生化反应
一、培养基的种类和细菌人工培养方法
培养基的种类
液体培养基
半固体培养基 固体培养基（琼脂平板、斜
面培养基）
用途 增菌 动力实验、保存菌种 细菌的分离与纯培养
产气杆菌 - 大肠杆菌 +
蛋白胨水培养基
细菌分解 色氨酸
吲哚 玫瑰吲哚
添加 3-5 滴柯 氏试剂
3、H2S 试验：利用细菌是否分解含硫氨 基酸产生 H2S 来区分和鉴别细菌
大肠杆菌- 变形杆菌+
醋酸铅培养基
含硫氨基酸
H2S Fe2+ Pb2+
黑色沉淀
实验报告：
1 ❖ 描述细菌在液体培养基中的三种生长现象 ❖ 列表比较三种细菌菌落特点 ❖ 描述细菌的生化反应并解释其反应现象
细菌人工培养方法
二、细菌生长现象观察
液体培养基中的生长现象：
混浊生长 表面生长 沉淀生长 （菌膜生长）
固体培养基上的细菌生长物——菌落
菌落 特征
大小：大、中、小 表面：光滑或粗糙、湿润或干燥、凸起或扁平 边缘，颜色 溶血环：α溶血环、β溶血环
菌落特征 金黄色葡萄球菌 枯草芽胞杆菌 乙型溶血性链球菌
大小
表面 边缘
颜色
溶血环
三、细菌的生化反应
1、糖发酵试验: 利用细菌是否分解单糖产酸和/或产 气来区分和鉴别细菌
单糖培养基（乳糖发酵管）
pH指示剂: 酚红 (pH>7,红色；pH<7, 黄色).
黄色有气泡⊕ 黄色无气泡 + 红色 ﹣
细菌的人工培养实验步骤
细菌的人工培养实验步骤细菌的人工培养实验步骤细菌的人工培养是微生物学研究中非常重要的实验方法，可以用于分离、鉴定和纯化细菌。
下面将详细介绍细菌的人工培养实验步骤。
一、准备实验室设备和材料1. 培养基：根据不同的研究目的选择合适的培养基，如营养琼脂、大肠杆菌选择性琼脂、血琼脂等。
2. 细菌液：从保存在冰箱或冷冻库中的细菌液中取出所需的细菌，并进行预处理。
3. 实验室设备：无菌操作台、离心机、移液器、显微镜等。
4. 无菌操作器具：无菌培养皿、试管、移液器等。
二、制备固体培养基1. 称取所需量的琼脂和其他成分，加入适量的去离子水中溶解。
2. 调整pH值，通常为7.0-7.4。
3. 加热消毒：将琼脂溶液装入无菌试管或烧杯中，用高压灭菌器或自制压力锅进行高温高压灭菌。
4. 倒制琼脂：将琼脂溶液倒入无菌培养皿中，使其均匀分布在培养皿底部。
5. 固化琼脂：将培养皿放置在平板上，待琼脂凝固后即可使用。
三、制备液体培养基1. 称取所需量的营养成分和其他添加剂，加入适量的去离子水中溶解。
2. 调整pH值，通常为7.0-7.4。
3. 加热消毒：将液体培养基装入无菌试管或烧杯中，用高压灭菌器或自制压力锅进行高温高压灭菌。
四、细菌的预处理1. 从冷冻库或冰箱中取出细菌液，并进行预处理。
通常采用离心法将细菌沉淀下来，并用生理盐水洗涤2-3次，以去除残留培养基和代谢产物等。
2. 用显微镜观察细胞形态和数量，并调整浓度至合适的范围。
五、接种细菌1. 无菌操作台上进行无菌操作，将细菌液用移液器均匀地滴在琼脂培养皿表面上。
2. 用火柴头或无菌环将细菌液均匀地涂抹在琼脂表面上。
3. 将培养皿倒置放置于恒温箱中，通常为37℃，并注意标记好培养皿的信息。
4. 观察培养皿中细菌的生长情况，并记录下来。
六、细菌的分离和鉴定1. 根据实验设计和研究目的，选择不同的方法对细菌进行分离和鉴定，如生化试验、药敏试验等。
2. 根据实验结果对细菌进行鉴定，并记录下相关信息。
实验二细菌的接种、培养及代谢产物
实验二细菌的接种、培养及代谢产物（B a c t e r i a l I n o c u l e t i o n a n d A r t i f i c a l C u l t u r e a n dM e t a b o i c p r o d u c t s）一、细菌的人工培养（A r t i f i c a l C u l t u r e o f B a c t e r i a）在适当条件下，绝大多数细菌可用人工方法培养，使其繁殖，通过人工培养，获得纯种细菌，是进一步观察研究各种细菌具有不同特性的基础。
(一)常用培养基的制备1、肉汤培养基：是常用的液体培养基，也是制备某些其他培养基的基础。
材料：（制备100m l肉汤培养基的用量）(1)培养基的成分：牛肉50g蛋白脂1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾(K2H P04·12H20)0.1g蒸馏水100m1(2)玻皿、试剂、比色管、比色架、吸管、1N与1／20N 的N a O H、三角烧瓶、漏斗、中试管、酚红指示剂、滤纸、卷筒、天平、蒸馏水。
方法：（1）将已去筋膜脂肪并经绞碎鲜牛肉50g，加蒸馏水100m l，放入冰箱中过夜。
（2）加热45—50℃一小时，并煮沸半小时，用数层纱布或滤纸过滤，滤液用蒸馏水补足其量为100m1。
（3）于滤液中加氯化钠0.5g，蛋白脂1g、磷酸氢二钾0.1g，加热使之完全溶化。
（4）测定酸碱度并调整至P H7.6，必要时用滤纸过滤。
（5）按需要分装于试管或烧瓶内，加棉花塞并包装后，置高压蒸汽灭菌器内经15磅／寸220—30分钟灭菌。
（6）灭菌后置37℃温箱，孵育24h，无杂菌生长，即可应用。
或放冰箱备用。
2、普通琼脂培养基它是最常用的固体培养基。
材料：肉汤、琼脂方法：(1)在肉汤中加入2％琼脂，熔化后调整P H7.6，必要时用棉花纱布过滤。
(2)于琼脂凝固前，分装于试管或小烧瓶内，然后加棉塞并包装。
(3)放入高压蒸汽灭菌器内，经15磅/寸220分钟灭菌。
细菌的人工培养
材
工具：接种环、接种针
料
菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 培养基：
普通平板培养基、斜面培养基、半固体培养基
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材
料
接种环、接种针
13
材
料
普通平板培养基
斜面培养基 (2-3%琼脂)
半固体培养基 14 (0.2-0.5%琼脂 )
材 料 分 配
分组 菌种 两人一组 一位取金葡菌，另一位取大肠杆菌 一块普通平板/每人 培养基
过滤澄清
质量检 查和保存
灭菌
分装
7
细菌培养方法
需氧培养法 二氧化碳培养法
厌氧培养法
8
细菌培养方法
电热恒温培养箱
二氧化碳培养箱
9
细菌培养方法
烛缸二氧化碳培养法
厌氧袋
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操 作 内 容 *
操作内容 平板分区划线 斜面纯培养 半固体培养 目 的 分离细菌 增菌及菌种保存 观察动力和菌种保存
实验二
细菌的人工培养
1
目
的
1.掌握接种细菌用具、接种细菌的环境要求 和无菌操作要领。 2.掌握平板划线法、斜面和半固体培养基等 各种接种方法。 3.熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。 4.了解培养基制备的基本过程。
2
细菌人工培养目的
感染性疾病的病原学诊断
鉴定细菌，指导临床用药。
细菌学研究
一支斜面培养基/每人 一支半固体培养基/每人
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实 验 流 程
领取菌种 及培养基
分别进行平板、 斜面及半固体培 养基接种，然后 贴上标签。
37度恒温 箱培养 18～24小 时后观察 结果。
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实 验 方 法 及 结 果
细菌人工培养实验报告结论及分析
细菌人工培养实验报告结论及分析一、细菌人工培养实验报告，可以得出以下结论：1、细菌的生长速度和数量受到环境条件的影响。
我们观察到在适宜的温度和营养物供应下，细菌的数量呈指数增长趋势。
然而，过高或过低的温度以及缺乏营养物会抑制细菌的生长。
2、不同的细菌菌株具有不同的生长特性。
我们在实验中采集了几种常见的细菌样本，并观察到它们在相同的培养条件下，生长的速度和数量存在差异。
这表明不同的细菌对于环境条件和营养物需求有所不同。
3、细菌的形态在不同生长阶段可能发生变化。
通过显微镜观察，我们发现细菌在菌落发育的过程中，可能会发生变形、分裂和聚集等现象。
这进一步证明了细菌的繁殖过程是一个动态的过程。
二、实验分析：根据我们的实验结果，可以对细菌的人工培养进行一些分析和讨论。
首先，了解细菌的生长规律和特性对生物学和医学领域都有重要意义。
细菌的繁殖是一种快速且效率很高的方式，因此，细菌的培养也常被用于制备和生产许多重要的生物药物和化学物质。
对于不同细菌的生长条件和需求的了解，有助于优化人工培养的过程和提高生产产量。
其次，了解细菌的生长规律对于预防和控制细菌感染也具有重要意义。
细菌感染是很多疾病的原因之一，因此，了解细菌生长的条件和环境对细菌感染的传播和治疗具有指导作用。
通过人工培养实验，我们可以研究细菌菌株的特性，包括其对不同抗生素的敏感性和抗性等，从而提供更好的防控措施。
最后，细菌的繁殖也与环境污染和食品安全等问题相关。
了解细菌在特定环境下的生长情况有助于预测和控制其对环境和食品的影响。
人工培养实验可以提供基础数据和方法来评估和监测环境中细菌的数量和种类，从而保障公众健康和环境保护。
总之，通过本次细菌人工培养实验，我们不仅加深了对细菌生长特性的理解，还为相关领域的研究和应用提供了有益的信息和方法。
细菌的人工培养研究将继续推动我们对微生物世界的认识和应用的发展。
细菌的人工培养实验报告
一、实验目的1. 了解细菌人工培养的基本原理和方法。
2. 掌握无菌操作技术，提高实验操作的规范性。
3. 通过观察细菌的生长和繁殖过程，加深对细菌生物学特性的认识。
二、实验原理细菌人工培养是指利用人工配制的培养基，为细菌提供生长繁殖所需的营养和生长条件，使其在体外进行繁殖。
培养基通常含有碳源、氮源、无机盐、维生素等营养物质，以满足细菌的生长需求。
无菌操作技术是防止细菌在培养过程中被污染的关键。
三、实验材料与仪器1. 材料：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂、无菌水、无菌棉签、接种环、酒精灯、高压蒸汽灭菌器、培养皿、恒温培养箱等。
2. 仪器：电子天平、高压蒸汽灭菌器、显微镜、无菌操作台等。
四、实验步骤1. 培养基的制备与灭菌（1）称取牛肉膏蛋白胨培养基，按照比例加入无菌水，搅拌均匀。
（2）将配制好的培养基分装到培养皿中，每皿约10ml。
（3）将培养皿放入高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌15分钟。
2. 细菌接种（1）用无菌棉签蘸取菌液，在无菌操作台上轻轻涂抹在培养皿的培养基表面。
（2）将接种后的培养皿倒置，放入恒温培养箱中培养。
3. 细菌生长观察（1）在恒温培养箱中培养24小时后，取出培养皿，观察细菌生长情况。
（2）记录细菌生长的形态、大小、颜色等特征。
4. 细菌鉴定（1）使用显微镜观察细菌的形态，记录细菌的形状、大小、排列等特征。
（2）进行生化实验，如糖发酵试验、氧化酶试验等，进一步鉴定细菌种类。
五、实验结果与分析1. 细菌生长情况经过24小时培养，观察到培养皿表面有明显的细菌生长，菌落呈圆形、白色，边缘整齐。
2. 细菌形态观察显微镜下观察到细菌为革兰氏阳性菌，呈球形，排列成链状。
3. 细菌鉴定结果通过糖发酵试验、氧化酶试验等生化实验，鉴定该细菌为金黄色葡萄球菌。
六、实验结论1. 通过本次实验，掌握了细菌人工培养的基本原理和方法，了解了无菌操作技术的重要性。
2. 观察到细菌在人工培养条件下的生长繁殖过程，加深了对细菌生物学特性的认识。
二细菌的生长繁殖消毒与灭菌
【思考题】
一、细菌的生长繁殖与人工培养在医疗实践中有何意 义？
二、临床常用化学消毒剂的种类、作用机制与用途？ 三、以实验小组为单位，预习化脓性球菌分离鉴定并
设计“化脓性球菌分离鉴定”方案（要求小组长切实 负责，小组成员分工进行文献及相关资料查阅收集、 最后归纳总结。）
低危器械物品
只接触未损伤皮肤但不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。一般用 后清洗、消毒即可。
快速周转的医疗器械
室内空气消毒灭菌
a.物理消毒法
紫外线照射（1.5W/m3，1h）最常用； 滤过除菌：空气通过孔径小于0.2 μm的高效过滤装置
以除去细菌和带菌尘埃
b．化学消毒法 包括化学消毒剂喷雾和熏蒸
有鞭毛的细菌：试管中沿穿刺线呈羽毛状或云雾状混浊 生长；平皿中迁徙样生长
无鞭毛细菌：沿穿刺线线状生长或无扩散生长现象 用于细菌的动力试验
力无 动
力有 动
迁徙生长
3. 培养基中生长现象：固体培养基
菌落colony：在固体培养基上，一般经18～24小时培养后， 单个细菌即可繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团。
2. 固体斜面培养基接种方法
3. 半固体培养基接种方法
•右手持接种针，灭菌冷却 •以接种针挑取菌种垂直刺入半固 体培养基的中心， •然后循原路退出。 •半固体琼脂培养基穿刺接种：主 要是观察细菌有无动力。
4. 液体培养基接种方法
挑取少量菌苔或菌液，伸入待接种的培养基管内， 在接近液面的管壁上轻轻研磨，并沾取少许培养液调和， 使菌混合于其中
②非电离辐射：紫外线、微波、超声波、日光
辐射杀菌法：非电离辐射
ⅰ. 紫外线：200 ～ 300nm日光(最佳：265～266nm) 原理：导致DNA分子构型改变DNA复制出现差错 用途：只用于空气和物品表面的消毒（注意防护）
微生物实验细菌的人工培养及形态学检查
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细菌的培养基：
（一）培养基的定义：
培养基是人工方法
水
碳源
配制的含有细菌生 长繁殖所需物质的 营养基质。其必须
营养物质 生长
氮源
因子
本身无菌，一般
无机盐
PH调至7.2 ~7.6。
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7
（二）制备原则:
1.调配营养物质：蛋白胨（氮源），牛肉膏，氯 化钠，蒸馏水。
2.调配PH：加入缓冲剂，保持PH稳定。
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2、按用途分：
(1).基础培养基：含有大多数细菌生长所需要 的基本营养成分。最常用的为肉汤培养基
(2).增菌培养基：在基础培养基中添加生长因 子（eg:血清等）或微量元素等其他营养物 质或特殊抑制剂。
如血平板：5-10%脱纤维羊/兔血， （60°C左右加入血）。巧克力平板:80°C 左右加入血。
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1、液体培养基中的生长现象
• 混浊：大多数 细菌
• 沉淀：多见于 链状排列的细 菌
• 菌膜：多见于 专性需氧菌 菌膜
菌沉淀 均匀浑浊 对照
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2、半固体培养基中的生长现象
有鞭毛细菌：在培
养基中沿穿刺线 并向外扩散生长， 穿刺线边缘模糊。
无鞭毛细菌：只沿
穿刺线生长，穿 A、有动力 B、无动力 C、空白对照 刺线边缘清晰。
③损伤细菌的细胞膜，影响细菌的化学组成， 物理结构和生理活动，从而发挥防腐、消毒灭菌
作用。
有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物，称 为化学消毒剂；浓度低时能抑制细菌生长，称为
防腐剂。
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（2）化学内的所有微生 物，适用于不耐热力灭菌但要进入人体内部的
《医学微生物学》细菌的人工培养实验
《医学微生物学》细菌的人工培养实验[目的]1．掌握平板划线法、斜面、液体和半固体培养基等各种接种方法。
2．掌握接种细菌用具、接种细菌的环境要求和无菌操作要领。
3．熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。
4．熟悉细菌和二氧化碳培养方法。
5．熟悉常用的厌氧菌培养技术。
6．了解培养基制备的基本过程。
[内容]（一）、培养基制备技术[材料]1．试剂：牛肉膏、氯化钠、蛋白胨、琼脂粉、抗凝绵羊血、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、葡萄糖、乳糖、甘露醇、柠檬酸钠、硫酸镁、磷酸二氢铵、硝酸钾、硫代硫酸钠、柠檬酸铁、硫酸。
亚铁、尿素、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中性红、酚红、lmol ／L NaOH、lmol／L HCl。
2．器材：500ml锥形瓶、500ml量筒、10ml、5ml和lml吸管、精密pH试纸、华氏试管、硅胶塞、天平、高压蒸气器、血清凝固器、脱脂棉、滤纸、漏斗、无菌平皿。
[方法]1．培养基制备的基本过程包括调配成分、溶解、矫正pH、过滤澄清、分装、灭菌、质量检查和保存。
（1）调配成分：按培养基组成准确称取各成份用量，放入锥形瓶或大容量烧瓶中，加一定量蒸馏水，使其充分混合。
应注意染料、胆盐和指示剂等应在矫正pH后加入。
（2）溶解：将调配好的混合物在沸水浴或流动蒸气灭菌器中，使其完全溶解。
不可将培养基装在铜铁容器中加热，因培养基中含铜量超过0.3mg／L时，细菌不易生长；含铁量超过0.14mg／L时可抑制细菌毒素的产生。
（3）矫正pH：一般将培养基的pH调至7.2～7.6左右。
经高压灭菌后其pH可发生0.1～0.2变动。
若用NaOH矫正，高压灭菌后pH下降0.1～0.2；若用Na2CO3矫正，高压灭菌后pH升高0.1～0.2。
（4）滤过澄清：自配的培养基通常有一些混浊或沉淀，需滤过澄清后方可使用。
液体或半固体培养基常用滤纸过滤；固体培养基在熔化后趁热以绒布或双层纱布加脱脂棉过滤。
（5）分装：①基础培养基：一般分装于锥形瓶灭菌后备用，以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等；②琼脂斜面：通常在熔化后分装于试管，量约为试管高度的1/4～1/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3，且保持试管下端1cm柱高；③半固体培养基：分装量为试管量的1/4-1/3，加塞灭菌后趁热直立凝固④琼脂高层培养基：分装量为管长的2/3(接种厌氧菌用)，灭菌后趁热直立凝固；⑤琼脂平板无菌分注：先将灭菌琼脂熔化后冷却至50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内(内径90mm的平皿约13～15min)，水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。
实验二 细菌的人工培养 最后
本次实验课结束
作业看结果后由组长收齐交上来，值日同学留 下 再见！
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理
高压蒸 汽灭菌
培养基的分类：
按 物 理 状 态 不 同 划 分
固体培养基
在液体培养基中加入一定量凝固剂，使 其成为固体状态，琼脂含量一般为 1.5%-2.0% 固体培养基常用来进行微生物的分离、 鉴定、活菌计数及菌种保藏
1.熟悉培养基的成分、类型和作用; 2.掌握细菌平板划线分离法的原理、 步骤及结果; 3.掌握细菌在液体培养基的三种生长 状态; 4.了解细菌的自然界分布.
细菌的人工培养
一、培养基
概念: 培养基是用人工方法将多种营养物质按 照各类微生物生长的需要而合成的一种混合养料。 任何培养基都应该具备微生物生长所需要六 大营养要素：
细菌在正常人体的分布
人工培养细菌的意义
在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。
在工农业生产中的应用：细菌在培养过程产生多种代谢
产物，经过加工处理，可制成抗生素、维生素、氨基酸、
有机溶剂、酒、酱油、味精等产品。
在基因工程中的应用：制备出胰岛素和干扰素等生物制
剂。
问题与讨论
1.培养基按物理性状分为几种？决定相应物理性状的物 质是什么？不同物理性状的培养基主要用途如何？ 2.什么是菌落？分离培养时，如何识别琼脂平板上的目 的菌，还是污染的杂菌菌落？ 3.液体培养基中细菌的生长状态有哪几种？各举一例说 明。
在液体培养基中加入一定量凝固剂使其成为固体状态琼脂含量一般为1520固体培养基常用来进行微生物的分离鉴定活菌计数及菌种保藏琼脂含量一般为0305观察微生物的运动特征分类鉴定及噬菌体效价滴定不加任何凝固剂用于增菌大规模工业生产及在实验室进行微生物的研究培养基的分类
细菌的人工培养实验报告
细菌的人工培养实验报告一、实验目的本实验旨在通过人工培养的方法，了解细菌的生长规律、形态特征以及对不同环境因素的适应能力。
二、实验材料和仪器1. 培养基：LB培养基、NA培养基、MacConkey培养基；2. 细菌：大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）；3. 培养皿：平板培养皿、斜面培养皿；4. 其他：无菌匀质棒、灭菌器、移液管等。
三、实验步骤1. 准备工作（1）将所需材料和仪器消毒灭菌处理，保证实验无菌；（2）将LB培养基和NA培养基加热至熔化状态并冷却至50℃左右，加入所需抗生素后混匀备用；（3）将MacConkey培养基取出并放置于室温下预热。
2. 细菌的分离与纯化（1）取一份样品，在无菌条件下用匀质棒沾取一定量的样品涂抹于LB平板培养皿上；（2）用匀质棒将细菌涂抹于斜面培养皿上，倾斜培养皿使其均匀分布；（3）将培养皿放入37℃恒温箱中进行培养。
3. 细菌的形态观察（1）观察细菌在不同培养基上的生长情况，记录生长速度、形态特征等；（2）在金黄色葡萄球菌生长过程中，观察其产生的黄色色素。
4. 细菌对环境因素的适应能力（1）将大肠杆菌接种于MacConkey培养基上，观察其对低pH值和高盐浓度的适应能力；（2）将大肠杆菌接种于NA平板培养皿上，在不同温度下进行培养并记录其生长情况。
四、实验结果与分析1. 细菌在LB和NA培养基上均能够良好地生长，并具有不同的形态特征。
大肠杆菌呈现为白色、透明、带有微弱的凝胶状；金黄色葡萄球菌呈现为黄色、光滑、凸起的圆形菌落。
2. 金黄色葡萄球菌在生长过程中产生黄色色素，这是其分泌的一种外泌物，具有抗菌作用。
3. 大肠杆菌在MacConkey培养基上的生长受到低pH值和高盐浓度的抑制，但仍能够适应一定范围内的环境变化。
在不同温度下，大肠杆菌的生长速度也有所差异，最适生长温度为37℃。
五、实验结论通过本次实验，我们了解了细菌的人工培养方法以及其对不同环境因素的适应能力。
微生物实验
二、消毒与灭菌
1、常用热力灭菌器 （示教）
2、紫外线杀菌
（示教）
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1、常用热力灭菌器
高压蒸汽灭菌器 干热灭菌器
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高压蒸汽灭菌器（湿热灭菌法最常用）
• 原理：水在常压大气中100 ℃沸腾，气压增加，
沸腾温度随之增加。在密闭的高压灭菌器内，当压 力增加到15磅/ cm2时，温度相当121.3 ℃。在这 种温度下维持20—30分钟可以杀死细菌的繁殖体 与芽孢。
温度： 160 －170 ℃ 时间： 2小时 适用范围： 主要用于玻璃器皿 使用注意：1、 禁用：塑料、橡胶、金属；
2、 玻璃器皿放入干烤箱前充分干燥； 3、 干烤箱温度不超过180 ℃； 4、 灭菌后，温度冷却至40 ℃以下取物品
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2、紫外线杀菌
▪ 原理：紫外线波长200－300nm处，具有杀 菌作用。因为细菌吸收了紫外线的能量，在 其DNA中形成胸腺嘧啶双聚体，干扰DNA的 复制，影响细菌酶的活性，导致细菌的死亡。
项目 生长情况 意义 菌种
大肠杆菌
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平板划线分离培养
实验目的：分离培养、获得纯种细菌。 做法：借助划线将混合菌液在琼脂平板 的表面分散开来，使单个细菌在平板的 一个点上生长繁殖，形成单个菌落，以 达到分离培养、获得纯种细菌的目的， 并根据各种菌落的特征来鉴别细菌。
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平板划线的操作步骤
第1组线
▪ 杀菌特点：1， 杀菌力强 2， 穿透力弱 ▪ 适用范围：空气及物体表面。
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紫外线杀菌—操作方法：
①用消毒棉签蘸取大肠杆菌,反复划线接种于无 菌琼脂平板，使细菌均匀涂布于培养基的表面。
②用无菌镊子夹取无菌三角纸片一张，铺盖在琼 脂平板中间。将平板放在紫外线灯下照射30分 钟，然后用无菌镊子夹去三角纸片，盖好平板， 放入37 ℃温箱培养24小时，观察结果。
细菌的人工培养实验报告
细菌的人工培养实验报告实验名称：细菌的人工培养实验一、实验目的：1. 学习和掌握细菌的人工培养方法和技术。
2. 了解细菌的生长特点和培养条件。
3. 探究不同培养基对细菌生长的影响。
二、实验器材和试剂：1. 培养皿、试管、移液器等常见实验器材。
2. 导管酶解液、LB培养基、琼脂、无菌蒸馏水等。
三、实验步骤：1. 准备培养基：按照实验要求，制备不同的培养基。
以制备LB培养基为例，按照配方将所有试剂溶解在适量的蒸馏水中，调节pH值并最终加入琼脂。
将制备好的培养基分装至培养皿或试管中。
2. 细菌落体的制备：采用无菌技术，将需培养的细菌接种于LB培养基中，摇匀后倒入培养皿中。
3. 细菌的人工培养：将准备好的培养皿或试管放入恒温培养箱中，设定适当的温度和培养时间，使细菌能够顺利繁殖。
4. 细菌生长的观察：在培养过程中，根据实验要求，定期观察和记录细菌的生长情况，包括菌落的形态、颜色、大小等。
5. 实验数据的处理与分析：根据观察结果，对细菌的生长情况进行数据处理和分析，比较不同培养基对细菌生长的影响。
6. 结果记录：将实验所观察到的数据和分析结果进行记录，编写实验报告。
四、实验结果与讨论：通过实验观察发现，不同的培养基对细菌的生长有一定影响。
以LB培养基和一般营养琼脂作为对照组，实验中还设置了含有不同生长因子或抑制物的培养基组。
经过一段时间的培养，观察到细菌在不同培养基上的生长情况如下：1. LB培养基：菌落形态规整，生长茂盛，颜色呈浅黄色。
2. 营养琼脂培养基：菌落生长相对LB培养基较差，颜色呈深黄色。
3. 含氧化剂的培养基：观察到菌落的生长速度比对照组快，颜色较浅。
说明氧化剂对细菌生长有一定的促进作用。
4. 含抗生素的培养基：观察到菌落的生长受到抑制，颜色较深。
说明抗生素对细菌生长有一定的抑制作用。
通过以上实验结果分析可以得出结论：不同的培养基对细菌生长有一定的影响，其中营养成分、生长因子以及抗生素等因素都会对细菌的生长产生影响。
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材
料
接种环、接种针
材
料
普通平板培养基
斜面培养基 (2-3%琼脂)
半固体培养基 (0.2-0.5%琼脂)
材 料 分 配
分组 菌种 两人一组 一位取金葡菌，另一位取大肠杆菌 一块普通平板/每人 培养基
一支斜面培养基/每人 一支半固体培养基/每人
实 验 流 程
领取菌种 及培养基
分别进行平板、 斜面及半固体培 养基接种，然后 贴上标签。
厌氧培养法
细菌培养方法
电热恒温培养箱二氧化碳培养法
厌氧袋
操 作 内 容 *
操作内容 平板分区划线 斜面纯培养 半固体培养 目 的 分离细菌 增菌及菌种保存 观察动力和菌种保存
材
工具：接种环、接种针
料
菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 培养基：
普通平板培养基、斜面培养基、半固体培养基
37度恒温 箱培养 18～24小 时后观察 结果。
实 验 方 法 及 结 果
平板分区划线法
分区划线
结果
实 验 方 法 及 结 果
斜面纯培养
实 验 方 法 及 结 果
半固体培养
穿刺接种
结 果
思
考
如何配制巧克力平板？ 平板分区划线法是通过什么方法来达到分 离菌种的目的，第一区和最后一区划线是 否可以相接？ 斜面纯培养为何先划一条直线? 为何在进行半固体培养时，接种针不可穿 刺到底部?
实验二
细菌的人工培养
目
的
1.掌握接种细菌用具、接种细菌的环境要求 和无菌操作要领。 2.掌握平板划线法、斜面和半固体培养基等 各种接种方法。 3.熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。 4.了解培养基制备的基本过程。
细菌人工培养目的
感染性疾病的病原学诊断
鉴定细菌，指导临床用药。
细菌学研究
用于细菌生理、遗传变异、致病性和耐药性 等研究。
生物制品的制备
疫苗、抗毒素等的制备。
细菌人工培养基本步骤
制备培养基
接种
培养
培养基的种类
根据营养组成和用途可分为 基础、增菌、选择、鉴别、厌氧 根据物理状态分为 液体、固体、半固体
普通平板
血平板
培养基的制备
调配成分
溶解
矫正pH
过滤澄清
质量检 查和保存
灭菌
分装
细菌培养方法
需氧培养法 二氧化碳培养法