BPG 层析柱标准装柱流程规范
bpg层析柱 装柱
bpg层析柱装柱摘要：I.简介- 介绍BPG 层析柱II.装柱过程- 准备工作- 层析柱的准备- 装柱器的准备- 装柱步骤- 加样- 加固定相- 加流动相- 排除气泡- 密封装柱器III.注意事项- 避免气泡的产生- 保持操作环境的清洁- 选择合适的固定相和流动相IV.总结- 装柱的重要性- 装柱后的处理正文：BPG 层析柱是一种在生物分离技术中广泛应用的工具，它通过利用样品中各组分在固定相和流动相之间的分配系数的不同，达到分离的目的。
在使用BPG 层析柱进行分离前，我们需要进行装柱操作。
首先，我们需要进行准备工作。
层析柱的准备主要是清洗柱子，以去除可能影响分离效果的杂质。
装柱器的准备则包括检查装柱器是否完好，并按照说明书进行必要的清洗和消毒。
装柱过程分为以下几个步骤：首先，将样品加入装柱器中。
然后，加入固定相。
这一步需要注意，固定相的加入量应适宜，过多或过少都可能影响分离效果。
接着，加入流动相。
在加流动相的过程中，应缓慢、均匀地加入，以避免气泡的产生。
之后，需要排除气泡，以保证样品在柱子中的分离效果。
最后，密封装柱器，开始进行层析。
在装柱过程中，有几点需要特别注意。
首先，应尽量避免气泡的产生，因为气泡会影响样品的分离效果。
其次，应保持操作环境的清洁，避免杂质污染样品。
最后，选择合适的固定相和流动相，是保证分离效果的关键。
总的来说，装柱是BPG 层析柱实验的重要步骤，正确的装柱操作可以保证实验的顺利进行，得到理想的分离效果。
BPG 140-950装柱过程
BPG 140/950装柱过程1.计算每厘米柱床高度填料的数量；2.选择合适的配件和末端筛网，有10、12、23和54 μm几种孔径。
选择不合适的滤网可能导致较高反压或填料泄露；3.选择最佳装柱流速3.1第一步：a.用20%乙醇浸润滤网排除空气；b.向柱中加入10-15 cm装柱缓冲液（关闭出口阀门），缓冲液的选择参考填料说明书；c.底部滤网上侧放置一软管，与蠕动泵的抽吸端连接；d.运行蠕动泵，彻底排除滤网底部包裹的气泡。
3.2第二步a.连续抽吸缓冲液，直至液面位于底部以上2-3 cm；b.使用水平仪检查层析柱是否水平放置，若不平，调整轮子高度。
3.3第三步a.制备75%的填料溶液，可使用玻璃棒搅拌，不可使用磁力搅拌器；3.4第四步a.小心将填料匀浆导入柱内，以防混入气泡；3.5第五步a.插入顶端连接器；b.拧紧四个螺帽；c.使用高度调节柄使连接器底部位于溶液液面下1-5 mm处；注意：该步动作尽可能快，以免填料完全沉降。
3.6第六步a.旋转密封调节旋钮密封O-形圈；b.下移连接器以排除内部空气，直至缓冲液形成一个凹面，并且再无气泡出现。
3.7第七步a.运行蠕动泵，先使用低流速，排除进液管内空气；b.在泵和层析柱之间安装一个压力表，将进液管安装于层析柱顶端，此时蠕动泵一直打开；c.打开底部出口阀门；d.建立压力/流速曲线。
先使用较低流速，然后缓慢提高流速直至流速达到平台，期间记录流速变化。
对于某些硬度较大的凝胶填料，不会出现流速平台，这时使用的流速对应的压力不能超过层析柱允许的最大压力；e.绘制压力/流速曲线，最佳装柱流速为最大流速的70%-100%。
4. 当柱床稳定后，在柱床顶端作一标记，关闭蠕动泵和出口阀门，逆时针旋转调节旋钮松开O-形圈；5. 顺时针转动高度调节柄快速向下移动连接器，柱床和O-形圈之间的缓冲液通过柱壁溢出。
执行该步操作时，柱床将会上升。
当连接器下降至柱床以上0.5-1 cm时停止下降；6. 密封O-形圈，打开底部出水口，运行蠕动泵，调节至最佳装柱流速，柱床将继续被压缩至标记处。
BPG层析柱规范标准装柱经过流程规范标准
操 作 标 准目的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。
范围：配合ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人：层析工序操作人员 标准操作程序： 1 基本术语概念填料因子（Packing Factor, PF ）：指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h ）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns UserManual 28-9562-89 Edition AA 》；线性流速（linear flow rate ）：单位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h 表示；体积流速（volume flow rate ）：单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min表示；2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。
2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例，其填料因子（PF）为1.15，新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇中），耐压3bar。
2.3 确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，中试工艺参数：柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=1.6cm.即，线性流速v2=v1/s柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min；样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数：装柱体积V柱= S柱h=3.14×1.52×1L=7L；装柱需要slurry体积V slurry=V柱×PF/C slurry以DEAE Sepharose Fast Flow为填料，则，V slurry=7×1.15/0.75L=10.73L；装入柱中的slurry高度L slurry=V slurry/S柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至ÄKTA process 上端连接口COLUMN TOP ，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process 的下端连接口COLUMN BOTTOM。
层析柱 操作规程
层析柱操作规程层析柱操作规程一、引言层析柱是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术，可以用于纯化混合物、分离样品中的化合物等。
为确保层析柱操作的准确性和安全性，制定本操作规程。
二、设备准备1. 确认所需使用的层析柱类型和规格。
2. 检查层析柱的外观是否完好，检查是否有裂纹或破损。
3. 选择合适的填料，并用洗净的溶剂将其均匀填充到层析柱中。
三、试样处理1. 准备待测样品，并将其溶解于适当的溶剂中。
2. 调整样品的pH值，以便于目标化合物的分离。
3. 使用过滤器过滤样品，以去除杂质。
四、操作步骤1. 将样品注入层析柱。
注意控制进样量，以避免柱内过载。
2. 使用一定流速的溶剂将样品通过层析柱。
可以使用手动或自动进样系统实现。
3. 观察溶剂前端和尾端的流动情况，确保它们在操作过程中维持稳定。
4. 根据需要，在柱体顶端加入适当的洗脱剂，以推动样品的分离。
5. 监测柱体顶端的洗脱溶液，以确定目标化合物的出现时间。
6. 收集洗脱溶液，直到目标化合物完全洗脱出来。
五、注意事项1. 在操作过程中，避免柱体受到剧烈震动或颠倒，以免损坏填料和柱体。
2. 在柱体运行时避免样品的进样保持过久，以防止填料变形或堵塞。
3. 柱体结束后，及时清洗柱体和填料，以便下一次使用。
4. 注意操作时的个人防护，避免接触或吸入有害溶液。
六、故障处理1. 如果柱体流速变慢或停止，请检查是否柱内有堵塞现象。
2. 如果柱体出现漏液或损坏，请及时更换或修复。
七、实验数据记录1. 记录样品的进样量和溶剂流速。
2. 监测洗脱溶液的UV/Vis或其他检测方法，记录目标化合物的出现时间和峰面积。
八、实验结束1. 按照操作规程清洗柱体和填料。
2. 关闭层析柱，保持其干燥和安全。
九、附录1. 填料的种类和性质。
2. 样品的名称和来源。
以上为层析柱操作规程，希望能对层析柱操作提供相应的参考和指导。
在操作过程中请务必严格按照规程操作，以确保实验的准确性和安全性。
层析柱干法装柱步骤
层析柱干法装柱步骤层析柱干法装柱，这事儿就像搭积木，得有个章法。
咱先得把层析柱给准备好。
这层析柱就好比是一个特殊的小房子，要装东西进去的。
得保证这个小房子干净又干燥，要是里面脏兮兮或者湿漉漉的，那后面装进去的东西可就“住”得不舒服了。
就像你自己的家，如果到处是灰尘和水，你能乐意吗？再来说说填料。
填料是这个柱子里的关键角色，就像是小房子里的家具。
把填料从容器里取出来的时候，动作要轻，可不能像个莽撞的大汉似的。
为啥呢？因为填料如果被弄得乱七八糟，它在柱子里就没法好好排列了。
这就好比你整理衣柜，要是把衣服都胡乱扔进去，找衣服的时候可就麻烦了。
现在开始往柱子里装填料。
把柱子一端封闭好，就像给小房子关上门，只留一个入口。
然后慢慢地把填料倒进去，这个过程要均匀，就像往杯子里倒水，要是一股脑儿全倒进去，水就会溅得到处都是。
填料倒的时候，得时不时晃一晃柱子，让填料在里面铺得更均匀。
这就像你铺床的时候，要把被子铺平展，要是有褶皱，睡起来就不得劲儿。
可不能心急，要是填料倒得太快或者不均匀，那柱子里就会有缝隙或者空洞，这可不行，就像房子的墙有了漏洞，那还怎么住人呢？填料倒得差不多的时候，要轻轻敲打柱子的管壁。
这就像是在给填料做按摩，让它们在柱子里更紧实。
不过敲打的力度得掌握好，不能太用力，不然就把填料给敲坏了。
这就好比你敲鸡蛋，太用力鸡蛋就破了，填料要是破了，那整个柱子的功能可就受影响了。
等填料装得差不多了，再把柱子顶端多余的填料弄平。
这就像是给房子的屋顶做最后的修整，要弄得平平整整的。
要是不平，那后面使用的时候就会有问题。
装完柱之后，可别忘了检查一下。
看看柱子里的填料是不是均匀，有没有什么地方看起来不太对劲。
这就像是做完一件手工品，得检查检查有没有瑕疵。
要是发现有问题，就得重新调整，总不能让一个有毛病的柱子就这么开始工作吧，那肯定会出乱子的。
干这个层析柱干法装柱啊，就得像照顾自己的小宝贝一样细心。
每个步骤都不能马虎，每个细节都很重要。
柱层析操作的基本流程
1.样品选择与预处理。
根据分离目的选择合适的样品，并进行必要
的预处理。
2.装柱。
选择合适的层析柱，如干法或湿法装柱。
在装柱前，柱子
应预先用适当的溶剂或缓冲液处理，以除去可能吸附的杂质，并确保内部没有气泡。
装柱时，应确保柱子均匀且无分层现象。
3.平衡。
用平衡液（通常是缓冲液）填充柱子，以确保柱子内部充
分平衡。
平衡液的体积一般为柱床体积的3到5倍，以保持平衡后柱床体积的稳定及基质充分平衡。
4.加样。
缓慢小心地将样品溶液加到固定相表面，尽量避免冲击基
质，以保持基质表面平坦。
加样量应尽量少，以减少对基质的干扰。
5.洗脱。
使用适当的洗脱液进行洗脱，以将样品组分从固定相上洗
脱下来。
洗脱液的流速和体积应根据分离目的和样品性质进行调整。
6.收集与鉴定。
收集不同馏分的样品，并进行进一步的分析和鉴定。
层析柱装柱流程范文
层析柱装柱流程范文层析柱(CLC)是一种分离和纯化化学物质的常用技术。
它在许多领域，包括制药、生物化学、环境科学和食品科学中广泛应用。
层析柱装柱流程是在层析柱中装填填料的过程，决定着柱的分离性能和吸附能力。
下面是一种常见的层析柱装柱流程:1.准备填料首先需要选择适当的填料。
填料的选择取决于分离目标和样品特性。
常见的填料包括硅胶、脱色树脂、离子交换树脂和凝胶颗粒等。
填料应具有一定的吸附能力，能够与目标物发生相互作用。
2.准备柱子将柱子清洗干净，并根据填料的尺寸调整柱子的高度。
柱子可以是玻璃柱、不锈钢柱或塑料柱，具体选择取决于实验要求。
3.浸泡填料将填料放入容器中，加入合适的溶剂。
浸泡填料有助于去除可能存在的杂质，提高填料表面的活性。
可以根据填料类型和实验要求调整浸泡时间，一般需要几小时到几天。
4.烘干填料将浸泡过的填料放入烘箱中或暴露在室温下进行干燥。
烘干填料有助于去除残留的溶剂，使填料能够更好地保持其结构和吸附性能。
5.装填填料将干燥的填料均匀地倒入柱子中。
填料的层高度应根据实验要求调整，一般为柱子高度的1/3到2/3、填料应当尽量均匀地分布在柱子中，以确保有效的分离效果。
6.压实填料使用压实设备或手动敲击柱子，将填料压缩和固定在柱子中。
压实的目的是增加填料的堆积密度，减少填料颗粒之间的间隙，提高分离效果。
压实的程度应根据填料类型和实验要求进行调整。
7.洗涤柱子将柱子与适当的溶剂进行冲洗，以去除可能存在的杂质和残留的溶剂。
洗涤的选择取决于填料和实验要求。
洗涤过程可以重复几次，直到柱子完全清洁。
8.储存柱子装填完成后，柱子可以进行包装或储存。
柱子应存放在阴凉干燥的地方，以保持填料的性能和活性。
层析柱 操作规程
层析柱操作规程
《层析柱操作规程》
层析柱是一种分离和纯化化合物的工具，它在实验室和工业生产中都得到广泛应用。
为了正确、高效地运用层析柱进行实验操作，必须严格按照规程进行操作。
1. 准备工作
在开始操作层析柱之前，首先需要检查仪器设备和试剂是否准备就绪。
确保层析柱、柱子和柱底都是干净的，没有杂质和残留物。
同时，检查溶剂和流动相的浓度和pH值是否符合实验要求。
2. 样品预处理
样品在进入层析柱之前，需要进行适当的预处理。
通常包括溶解、过滤或稀释等步骤，以确保样品的纯度和浓度符合层析柱的使用要求。
3. 层析条件选择
根据样品的特性和分离要求，选择合适的层析柱和流动相。
流动相的选择包括了溶剂的种类、比例和流速等参数，需要根据实验要求进行合理选择。
4. 样品加载
将经过预处理的样品通过适当的方法加载到层析柱中。
可以采用重力流动、压力注入或者其他方法，确保样品均匀地进入层析柱。
5. 层析过程监控
在样品加载后，需要监控层析过程并进行记录。
包括流出液的收集、色谱图谱的观察等，以便及时发现异常情况并进行调整。
6. 收集和分析分离物
根据层析过程中的监控数据，及时收集目标物质，并进行分析和检测。
可以通过色谱、质谱等技术进行分析，得到分离物的纯度和产率数据。
7. 层析柱的清洗和保养
在操作完毕后，及时清洗和保养层析柱。
包括流动相的冲洗、柱子和柱底的清洗以及存放，以保证下次使用时的质量。
在实验操作层析柱时，严格按照规程进行操作，能够确保实验的准确性和重复性，同时也保证了仪器设备的长久使用。
bpg层析柱 装柱
bpg层析柱装柱【原创实用版】目录1.BPG 层析柱简介2.装柱的目的和方法3.BPG 层析柱的装柱流程4.注意事项和常见问题正文BPG 层析柱是一种用于生物分离和纯化的实验设备，广泛应用于生物制药、生物化工、食品安全等领域。
在实验室中，装柱是使用 BPG 层析柱的关键步骤之一，其目的是在柱内填充固定相，以便进行样品的分离和纯化。
装柱的目的是在 BPG 层析柱内填充固定相，固定相通常是由吸附剂、凝胶或者其他固态材料组成，它们能够吸附样品中的目标物质，从而实现样品的分离和纯化。
装柱的方法有多种，常见的有湿装法、干装法和半干装法等。
BPG 层析柱的装柱流程如下：1.准备固定相：根据实验需要选择合适的固定相，并进行预处理，如清洗、烘干等。
2.准备柱子：将 BPG 层析柱清洗干净，并检查是否有破损。
3.装柱：将固定相添加到柱子中，一般采用湿装法，即在固定相中加入适量的溶剂，使其形成悬浮液，然后倒入柱子中。
在装柱过程中，应尽量避免气泡的产生，以免影响分离效果。
4.冲洗：装柱完成后，用溶剂冲洗柱子，以去除残留的气泡和固定相颗粒。
5.检测：装柱完毕后，可以通过检测柱子的压力和流量等参数，以确保装柱的质量。
在装柱过程中，需要注意以下事项：1.选择合适的固定相：根据样品的特性和实验需求，选择合适的固定相，以实现最佳的分离效果。
2.避免气泡的产生：在装柱过程中，应尽量避免气泡的产生，以免影响分离效果。
3.柱子的清洗：装柱前，应将柱子清洗干净，以去除杂质和油污等。
常见的装柱问题有：1.柱压过高：可能是由于装柱过程中产生的气泡或固定相填充不均匀导致的，需要重新冲洗柱子或重新装柱。
2.分离效果不佳：可能是由于固定相选择不当或装柱质量差导致的，需要重新选择固定相或重新装柱。
bpg层析柱 装柱
bpg层析柱装柱BPG层析柱是一种常见的分离技术装置，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
本文将介绍BPG层析柱的装柱过程及其相关特点。
一、BPG层析柱的装柱BPG层析柱的装柱过程主要包括填充填料、封口和测试等步骤。
1. 填充填料填充填料是装柱的第一步。
首先，将BPG层析柱的尾部封口，确保填料不会从尾部漏出。
然后，将填料填充到柱体中，填料的选择根据具体的实验目的而定。
常见的填料有凝胶、树脂、硅胶等。
填充填料时需要注意均匀填充，避免形成空隙或过度填充。
2. 封口填充填料后，需要对层析柱进行封口。
封口的目的是固定填料，防止填料在柱体中移动或漏出。
封口材料可以选择合适的密封胶或橡胶垫片，确保封口牢固。
3. 测试装柱完成后，需要对BPG层析柱进行测试。
测试的主要目的是检查装柱过程中是否出现漏液或其他问题。
可以通过加入缓冲液或样品，在一定压力下通过柱体，观察是否有液体泄漏或柱体渗透等现象。
如果发现问题，需要及时进行修复或更换。
二、BPG层析柱的特点BPG层析柱具有以下几个特点：1. 高分离效果BPG层析柱的填料具有较大的比表面积和孔隙结构，能够提供更多的分离位点，有效提高分离效果。
同时，BPG层析柱还可以根据需要选择不同的填料，进一步提高分离效果。
2. 快速操作BPG层析柱的装柱过程相对简单，操作方便快捷。
填充填料和封口都可以在较短的时间内完成，适用于一些对操作时间要求较高的实验。
3. 良好的重复性BPG层析柱具有较好的重复性，可以反复使用。
在使用过程中，只需要更换填料和进行适当的维护保养，就可以保持较好的分离效果和分离效率。
4. 广泛应用BPG层析柱可以应用于各种领域的实验，如生物分离、蛋白质纯化、药物筛选等。
其灵活性和高效性使得BPG层析柱成为实验室中常用的分离技术装置。
总结：BPG层析柱是一种常用的分离技术装置，其装柱过程简单，操作方便快捷。
具有高分离效果、快速操作、良好的重复性和广泛应用等特点。
在实验室中，合理选择和使用BPG层析柱能够提高实验效率，促进科研工作的顺利进行。
柱层析实验操作规程及流程
一．实验目的1．了解柱层析的基本原理。
2．掌握柱层析的操作技术。
二．实验原理层析法是一种物理分离方法。
柱层析法是层析方法中的一个类型，分为吸附柱层析法和分配柱层析法。
本实验仅介绍吸附柱层析法。
吸附柱层析法是分离、纯化和鉴定有机物的重要方法。
它是根据混合物中各组分的分子结构和性质（极性）来选择合适的吸附剂和洗脱剂，从而利用吸附剂对各组分吸附能力的不同及各组分在洗脱剂中的溶解性能不同达到分离目的。
吸附柱层析法通常是在玻璃层析柱中装入表面积很大、经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂（常用的吸附剂有氧化铝、硅胶等）。
当混合物溶液流过吸附柱时，各组分同时被吸附在柱的上端，然后从柱顶不断加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物吸附能力不同，从而随着溶剂下移的速度不同，于是混合物中各组分按吸附剂对它们所吸附的强弱顺序在柱中自上而下形成了若干色带，如图1所示。
在洗脱过程中，柱中连续不断地发生吸附和溶解的交替现象。
被吸附的组分被溶解吸出来，随着溶剂向下移动，又遇到新的吸附剂颗粒，把组分从溶液中吸附出来，而继续流下的新溶剂又使组分溶解而向下移动，这样经过适当时间移动后，各种组分就可以完全分开，继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分随溶剂首先流出，再继续加溶剂直至各组分依次全部由柱中洗出为止，分别收集各组分。
三．材料1．仪器 层析柱，烧杯，铁架台，长玻棒，小量筒，脱脂棉。
2．药品 硅胶 ，丙酮 ，石油醚。
3. 材料：菠菜叶。
四．方法1．装柱 取一支洁净干燥的层析柱玻管，自柱口塞入少许脱脂棉并用长玻棒推至柱底压平（塞时不宜太紧）。
然后用漏斗从柱口小心装入约5g 硅胶（100~160目）（四分之三高度，干法装柱），边装边用手指敲打层析柱，使填装紧密均匀。
再在柱顶加入一薄层脱脂棉花（约0.5cm 厚）。
将此层析柱固定在铁架台上。
2．加样 称取研磨研细的菠菜叶2.0~3.0g 于25mL 烧杯中，量取10mL 石油醚：丙酮=1:1（体积比）的混合液溶解浸泡，用封口薄膜封住杯口，浸泡10min,倒出浸出液静置分层，用刻度胶头滴管吸取1.0mL 上样分析，注意上样应沿管壁。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱是一种广泛应用于分离、纯化和分析分子的技术。
输出层析柱装柱流程是输出样品时的关键步骤，以下将详细描述该流程的整体流程及每个环节的详细步骤。
整体流程：1. 准备样品：样品可以是固体、液体或气体，需要根据实际情况选择适当的提取方法和溶解方法。
2. 选择合适的层析剂：根据样品的物理化学性质和所需分离纯化的目标分子，选择合适的层析剂。
3. 选择合适的层析柱：根据样品的性质和目标分子的大小、形状、极性等特性，选择合适的层析柱。
4. 装柱：将合适的层析剂和样品混合并注入层析柱，按一定流速进行柱层析过程。
5. 收集分离物：根据样品的物理化学性质，选择适当的收集方法，如平衡、排洗等方式，收集所需的分离物。
详细步骤：1. 准备样品样品的准备是整个流程的第一步，其重要性不言而喻。
根据样品的不同来源和性质，选择适当的提取方法和溶解方法。
对于固体样品可以采用机械法或化学法进行研磨和提取；对于液体样品可以直接进行提取或进行凝固分离等；对于气体样品可以进行气相色谱前处理等。
2. 选择合适的层析剂层析剂是层析柱分离分子的重要物质，其种类和性质直接影响到层析柱的分离效果和速度。
通常选择的层析剂包括氨基酸、糖类、角蛋白等，这些分子性质不同，可以针对不同的目标分子进行选择，以达到高效分离的目的。
3. 选择合适的层析柱层析柱具有不同的分子尺寸和极性，可以针对不同样品和分子的特性进行选择。
一般分为吸附层析柱、离子交换层析柱、凝胶层析柱、分子筛层析柱、亲和层析柱等。
在选择层析柱之前，还需确定流动相的组成和流速，以及层析柱的尺寸和填充物的质量，一般需要根据样品特性进行综合考虑，以提高分离效果和速度。
4. 装柱层析柱装柱是输出样品时的关键步骤。
将提取得到的样品与适当的流动相混合，并加入适当量的层析剂。
然后通过注射泵或手动喷射的方式，将混合物缓慢注入层析柱中，确保柱中填充物充分分散。
柱中填充物经过一段时间的淋洗和平衡后，将流动相依次加入，形成流动相梯度，实现目标分子的分离。
层析柱装柱操作规范
层析柱装柱操作规范(总2页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除层析柱装柱流程装柱材料层析柱：BXK层析柱装柱仪器：ÄKTA装柱器装柱溶液20%乙醇匀浆的准备精确计算所需介质的量（这对固定柱高的层析柱尤其重要）。
1L填充柱所需的介质量大约是1.15L自然沉淀匀浆的量，于干净烧杯中，取 100%沉降胶（静止放置一天以上，倾去20%乙醇后的胶为100%沉降胶）与等体积20%乙醇混合备用。
安装层析柱1.检测层析柱的各个部件，确保干净、完整，拧上下端堵头，拧紧膨胀圈，然后将层析柱垂直固定在铁架台上。
2.将装柱器安装在层析柱上端。
3.往层析柱中加入适量的20%乙醇，打开下端口，重力流，排除下筛网中滞留的气泡，在液面低至1-2cm高度时关闭层析柱下端出口。
装柱1.用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，将摇匀的介质加入到层析柱中，这可以减少气泡的产生。
迅速用20%乙醇填满柱子和装柱器，装上装柱器盖子，连接到ÄKTA上。
2.打开层析柱下端，开始以30cm/h流速装柱，直至柱床界面平稳。
停止装柱。
3.打开装柱器盖子，用虹吸法去除界面上端的液体，去掉装柱器，然后小心的用20%乙醇封满柱子剩余部分。
4.将上端转接头一端连上ÄKTA，打开机器，以装柱流速用装柱液排出转接头管路中及筛板中残留的气泡，然后将转接头另一端装到层析柱上，使转接头下端刚好接触胶界面。
(装柱流速约为70-100%的最大流速）5.拧紧膨胀圈，继续用装柱流速压柱，至少保持3个柱体积，以界面不变为主，在界面处做上记号。
6.关闭泵，并关闭柱子下端出口，使层析柱上端和泵断开（转接器上接口是打开的），略拧松膨胀圈，缓慢向下转动调节杆，到记号处停止，然后再拧紧膨胀圈，关闭上接口。
7. 检测柱效3。
P5286ProteinG亲和层析预装柱使用说明
脂质结合（疏水性结合）
提示：不论哪一种清洗方法，推荐采用反向冲洗以驱赶柱中微粒，防止柱子下部分受到污染。 消毒 消毒的目的是降低柱子中微生物的污染。所有的柱子都应定期进行消毒，方法如下： • • 用含 0.1 M 醋酸的 20%乙醇洗柱子并保持 1 小时，然后用无菌 PBS 或平衡缓冲液冲洗至 少 5 个柱体积。 用 70%乙醇洗柱子， 并保持 12 小时， 然后用无菌 PBS 或平衡缓冲液冲洗至少 5 个柱体积。
Protein G ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + ++ + ++ – + –
Protein A ++ ++ – ++ ++ + – + ++ – ++ ++ – + –
缓冲液的准备 推荐采用下列缓冲液： 上样缓冲液：20 mM 磷酸盐缓冲液，含 0.15 M NaCl，pH 7.0~7.5 洗脱缓冲液：0.1 M 甘氨酸盐酸盐缓冲液，pH 2.5~3.6 注意： 配制缓冲液所用的水及各种试剂必须为高纯度的，并且使用前需经过 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜 过滤。 样品准备 如果需要，可采用下列方法调整样品至上样缓冲体系中： • 用上样缓冲液稀释样品 • 通过凝胶色谱法进行缓冲液置换 样品在进样前需经过 0.45 μm 滤膜过滤或者离心，以避免微粒杂质堵塞柱子，延长柱子使用寿 命。 纯化步骤 1 2 3 4 取下预装柱顶端堵头，将其接入色谱系统中或注射器上，操作时应避免空气进入柱中； 取下预装柱底部堵头，用至少 5 个柱体积的纯水或上样缓冲液将柱子中乙醇冲洗出； 用 10 个柱体积的上样缓冲液平衡柱子，流速 1ml/min（1ml 预装柱）或 5ml/min（5ml 预 装柱） ； 通过泵或者注射器上样；
BPG 层析柱标准装柱流程规范
操 作 标 准目的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。
范围：配合ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人：层析工序操作人员标准操作程序：1 基本术语概念填料因子（Packing Factor, PF ）：指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h ）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度（柱高）的比值，GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA 》；线性流速（linear flow rate ）：单位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h 表示；体积流速（volume flow rate ）：单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min 表示；换算：2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。
2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例，其填料因子（PF）为 1.15，新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇中），耐压3bar。
2.3 确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，中试工艺参数：柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=1.6cm.即，线性流速v2=v1/s柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min；样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数：装柱体积V柱= S柱h=3.14×1.52×1L=7L；装柱需要slurry体积V slurry=V柱×PF/C slurry以DEAE Sepharose Fast Flow为填料，则，V slurry=7×1.15/0.75L=10.73L；装入柱中的slurry高度L slurry=V slurry/S柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至ÄKTA process 上端连接口COLUMN TOP ，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process 的下端连接口COLUMN BOTTOM。
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操作标准
目得:为了使BＰG3００层析柱装柱过程可重复,并能够得到较好得柱效,故建立此操作规范。
范围:配合ÄKTA prｏcｅsｓ系统进行有效得蛋白质纯化操作。
责任人:层析工序操作人员
标准操作程序:
1基本术语概念
填料因子(PackｉｎｇFａｃtor, PＦ):指在在装柱过程中,用低流速(如６0ｃ
m/h)对填料进行沉降压缩得到得调料高度与最后装柱完成时填料高度(柱高)得
比值,
GＥHC生产得各种常见填料得PF参见《GEＨC ＡxiＣhroｍ300－10０0columns UseｒＭanuａl 28-95６２—89 Ｅｄiｔiｏn AＡ》;
线性流速(liｎeａr flow ratｅ):单位时间内液体流经得直线距离,常用cm／h
表示;
体积流速(volume floｗratｅ):单位时间内液体流经得空间容积,常用ml/mｉ
ｎ表示;
换算:
２准备工作
2.１检查层析柱得完整性,所带配件,就是否水平(用水平仪矫正),就是否清洁(如有污染应进行清洗)、
2、２确定所用填料及其特性、浓度等
以DＥAE ＳｅpｈaroｓｅFast Flｏw填料为例,其填料因子(PF)为1.１５,新填
料(slｕｒｒy)浓度为75％(保存于2０%乙醇中),耐压3bａｒ。
2。
3 确定放大后得工艺参数
以ＸX生化制药股份有限公司得放大工艺为例,
中试工艺参数:
柱高h＝10ｃm;体积流速v1=3mｌ/min;柱内径d=１、６cm、
即,线性流速v ２=v1/s 柱=3/(3、14×0。
82) cm/mi ｎ=1.５ cm ／min;
样品与填料接触时间t ＝h ／v2=１０/1、5min ＝6。
67mi ｎ;
在工艺得线性放大中h 、ｖ2与t 均不变,则可保证样品出峰得位置(洗脱时间)与形状不变、
使用ＢP Ｇ３００层析柱进行放大得工艺参数:
装柱体积V 柱= S 柱h=3。
1４×1、52×１L=7Ｌ;
装柱需要sl ｕr ｒｙ体积V ｓｌurry =Ｖ柱×PF/C sl ｕr ｒy
以ＤE ＡE Sepharo ｓe Fast F ｌow 为填料,
则,V slur ｒｙ＝7×1。
15/0、７５Ｌ＝10。
7３L;
装入柱中得slur ｒy 高度Ｌsl ｕr ｒｙ=V slurry /S 柱＝１0、73/(3。
1４×1。
52)dm=1.５2
ｄm=15。
2cm 。
３管路安装
３、１ 层析柱管道与配件安装
３。
1、1卸下柱子顶部与底部得盲堵垫圈,旋松密封调节器,用纯水或2０%乙醇充分浸润柱内壁与柱头O 型圈;
３.1。
2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰得螺丝,并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处,在柱头顶部依次安装压力表与四路二通阀,在柱底安装四路二通阀;
3。
1、３在顶部四路二通阀上横向连接一根细管,另一端连至ÄＫＴA pro ｃe ｓs 上端连接口C ＯLUMN TOP,同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄＫTA pr ｏｃe ｓs 得下端连接口CO ＬU ＭＮ ＢＯTT ＯM 、
图1、ＢP Ｇ３０0层析柱安装示意图
３。
2层析柱下端筛网排气泡
3.2.１连接两根足够长得细管到ÄK ＴA ｐr ｏcess 进样泵得A1与Ｂ1进口,两管另一端均放入纯水中;
3。
2、2从A1泵入纯水:打开UNI ＣORN 软件,在ｓys ｔｅm co ｎtrol 窗口点击man ｕal →va ｌves →ＩnletA,选择inletA1,ins ｅｒｔ;I ｎletB,选择clos ｅd,i ｎ
sert;Column,选择uｐflｏｗ,iｎｓeｒt;Ｐump→Ｆloｗ,设定流速60L/h,点击ｅx ｅcｕte运行程序充水至BPG柱中2-3cm左右,ｐause,清除下端筛网中得空气,用注射器吸出筛网中残留得气泡。
4装填料
4、1准备填料
所用填料为DＥＡＥ Sephaｒose Fast Ｆｌow ,装置得就是保存于２０％乙醇中得新slurry;
４、2卸下柱头,用搅拌棍引流加入混匀得sｌurｒy至15、2cｍ处,再加入纯水至40cm左右,充分搅拌混匀,同时避免挤压筛网与柱壁,静置使填料界面至少低于38ｃm;
4、3在system control窗口点击manual→vａlvｅs→InlｅtA,选择iｎlｅｔＡ1,i ｎsｅrｔ;ＩnlｅｔＢ,选择ｃlosｅｄ,iｎｓert;Ｃoｌumn,选择dｏwｎflow,insert;Pump→Flow,设定流速60L／h,点击exeｃute运行程序将柱头上端筛网充满水以除去气泡,再装上柱头,用密封调节器固定柱头,拧紧螺丝;
４、4在sｙｓtem cｏntrol窗口点击manｕａl→Pumｐ→Flow,设定流速为4２L/ｈ(6０cm/h),进行填料得沉降,待填料高度降至14cm左右,将密封调节器旋至全松,将柱头快速调至距离填料3—4cｍ处,将密封调节器旋至半松,将柱头快速调至滤网距离填料1-2ｃm,旋紧密封调节器,再设定高流速(如１50Ｌ／ｈ),继续压缩填料,最后再调节柱头至１0cｍ、整个过程一直有流速,泵速不能停。
5 柱效测定
图2、柱效测定示意图
5.１平衡
将Ａ1接口细管放入0。
4M NａＣl溶液中,将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态,在ｓystem ｃｏntｒｏl窗口点击mａnual→valves→InletA,选择inletＡ１,ｉnｓerｔ;InｌetB,选择clｏseｄ,insｅrt;Colｕmn,选择dowｎflow,ｉns ｅｒt;Pumｐ→Floｗ,再设定高流速(如１５0L/h),点击ｅｘｅcute运行,排气泡,再将阀调至管路与柱头相连状态,平衡3—5个柱体积至电导曲线稳定,点击ＥND;
5。
2上样
5、２、1将B1接口细管放入2M NaCl溶液,柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态,在sｙsｔem contrｏl窗口点击manuaｌ→valｖes→InlｅtＡ,选择Ｃloseｄ,inserｔ;InｌｅｔB,选择InｌeｔB1,ｉnsｅrt;Cｏｌｕｍn,选择dowｎflｏｗ,insｅrt;Pｕmp→Fｌｏw,设定高流速(150L/h)点击ｅxｅcute运行,排气泡,pause;
5、２。
２在syｓtem contrｏｌ窗口点击manual→Ｏtｈer→End_Ｔimer,选择Ａcc、 Volumn, Timeout 设上样量为70mL(1％柱体积);Ｐump→Ｆlow,设定上样流速60Ｌ／h,点击ｅxecｕte得同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连,完成上样;
5。
3 洗脱
5.3。
1将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态,在systeｍcontrol窗口点击ｍanual→ｖａlｖes→InｌetA,选择ｉnletA1,inserｔ;InｌetB,选择cｌosed,ｉnｓert;Ｃｏlumn,选择downfｌow,insｅrt;Pｕｍｐ→Fｌow,设定高流速(150L／h)点击ｅxeｃｕte运行,排气泡,同时将管路充满0。
4M ＮaCｌ溶液,调流速至２1L/h(30ｃm/h);
５.3、2 待流速稳定后,在ｓystem control窗口点击mａnual→ｖalvｅs→Ｉnjectｉon Mark,ｉｎsｅrt,点击exeｃute得同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连,开始洗脱,在一个柱体积左右,电导检测下将产生目得峰。
5.４测柱效
在Evaluａｔion窗口中,选择实验保存得结果,在结果图中点击鼠标右键,选择Prｏｐerties,点击Clear,并选中Cond_102,点击OK。
回到Evaｌuaｔion窗口,选择积分按钮,在弹出窗口中,选择Cond_１０2,peａk wiｎｄow中调整积分得范围,并在Rｅｊｅct Peaks中,填Peａk ｍusｔ be one of1lａｒgｅst;确定后,在积分结果窗口,点击右键,选择Ｐroperｔies,在pｅaｋtable选项中,勾选Plａte Heｉght(HＥTP)与Aｓymｍetry。
确定后即可计算得到计算理论塔板高度HE ＴP与对称因子Ａs。
1 Whｅn calcｕlaｔing the amounｔof ｍｅdia ｔo be paｃkeｄ usｅthe p ｒessｉoｎＦａctor 1。
1 iｎsｔead of the Pacｋiｎg Factｏｒ above whicｈｉs useｄ durinｇｐacｋing。