流式细胞仪检测凋亡和细胞周期等应用
流式细胞仪分选原理
流式细胞仪分选原理流式细胞仪是一种高效、快速、准确的细胞分析工具，它能够实现对细胞的快速分类、计数和分选。
其分选原理主要基于光散射和荧光信号的检测与分析。
本文将详细介绍流式细胞仪的分选原理及其应用。
一、光散射的检测与分析流式细胞仪通过激光束照射样品细胞，细胞与光发生相互作用后会发生光散射。
光散射分为前向散射、侧向散射和后向散射三种。
前向散射主要与细胞的大小和形状有关，可用来区分不同类型的细胞。
侧向散射则与细胞的复杂度和颗粒物含量相关，可用来评估细胞的复杂度和颗粒物含量。
后向散射则与细胞的内部结构有关，可用来评估细胞的核质比。
二、荧光信号的检测与分析流式细胞仪通过荧光染料标记的抗体或荧光染料直接标记的细胞，可以检测到细胞表面或内部相关蛋白、DNA或RNA的荧光信号。
这些信号可以用于检测细胞的免疫表型、细胞周期和细胞凋亡等生物学特性。
通过检测细胞的荧光信号，可以实现对不同类型细胞的快速分类和分析。
三、细胞的分选在细胞检测和分析的基础上，流式细胞仪还可以实现对特定类型细胞的分选。
分选是通过细胞仪中的细胞排序系统实现的，通常采用静电分选或压力分选的方式。
静电分选是通过根据细胞的光信号特征将其分为阳性和阴性细胞，然后通过高压电极将细胞引导到相应的收集器中。
压力分选则是通过调整细胞流速和压力差，使目标细胞以一定方式排列并被分选。
四、流式细胞仪在生命科学中的应用流式细胞仪在生命科学研究中具有广泛的应用。
首先，它可以用于免疫表型分析，通过检测细胞表面标记物的荧光信号，可以对细胞的免疫表型进行精确的鉴定。
其次，流式细胞仪可以用于细胞周期分析，通过检测DNA荧光信号的强度，可以确定细胞所处的不同周期阶段。
此外，流式细胞仪还可以用于细胞凋亡分析、细胞功能研究以及肿瘤细胞的分选等。
总结：流式细胞仪的分选原理主要基于光散射和荧光信号的检测与分析。
通过光散射可以评估细胞的大小、形状、复杂度和颗粒物含量等特征，而荧光信号则可以用于检测细胞的免疫表型、细胞周期和细胞凋亡等生物学特性。
流式细胞仪应用——利用PI检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)
流式细胞仪应用——利用PI检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis) 本文主要讲述PI单染检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)PI（碘化丙啶）染色特点：一是能够与双链DNA/RNA螺旋的大沟部位结合，二是不能通过功能正常的完整细胞膜。
基于以上特性，目前主要有两大方面的应用，配方也不同：细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)一方面的应用是检测细胞周期，检测细胞周期时，为了保证所有的细胞都能染上PI，因此要将细胞用乙醇固定，并加入Triton X-100 ，以增加膜的通透性；同时由于DNA使细胞的粘附性增大，加入EDTA以降低细胞粘附性；为了消除RNA的干扰，要加RNAase。
由于要鉴定DNA含量，因此PI染料必须过饱和，所以PI终浓度很高，一般50ug/mL。
由于晚期凋亡细胞DNA断裂形成亚二倍体峰，因此可同时检测凋亡。
另一方面的应用是检测膜通透性（凋亡），由于PI不能进入完整的活细胞膜，因此一般认为PI染色阳性的细胞是死细胞。
Annexin V/PI 凋亡检测试剂盒中就是这种染液，它的作用是鉴定死细胞，从而与凋亡细胞区分开来。
它的配制就是将PI溶于PBS，终浓度较低，一般2.5ug/mL。
所需试剂：1、PI染液：用于检测细胞周期的PI配制如下：方法一：10×PI配制方法,用时用PBS稀释至工作液：5mg-----PI0.1ml---Triton X-1003.7mg--EDTA10ml----PBS2、RNaseA——2mg方法二,直接配制PI工作液：PI -----5mgRNaseA——2mg1.0%Trition X-100——0.25ml枸椽酸钠——100mg生理盐水——65ml调pH值至7.2-7.5加蒸馏水至100ml, 棕色瓶分装，保存在4℃操作步骤1.细胞培养铺细胞至6孔板或者35mm培养皿，约4－5*10e5 cells/well, 如果要加药物，在此时可以加以不同种或不同浓度的药物。
利用流式细胞仪分析细胞存活率细胞周期ROS
利用流式细胞仪分析细胞存活率细胞周期ROS 流式细胞仪（Flow cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究领域的技术，可用于分析细胞数量、形态、存活率、细胞周期等多个参数。
下面将详细介绍如何利用流式细胞仪来分析细胞存活率、细胞周期和ROS （Reactive Oxygen Species）。
一、分析细胞存活率细胞存活率是研究细胞毒性或细胞凋亡过程中的重要参数。
在流式细胞仪中，常用细胞染色剂PI（Propidium Iodide）来评估细胞的存活率。
PI是一种能够穿透破损细胞膜并结合DNA的染色剂，可以通过荧光检测器来测量。
具体操作步骤如下：1.培养待测试的细胞，并将细胞备样。
可以使用PBS洗涤一遍，以获得单细胞悬浮液。
2. 使用细胞培养基或PBS将细胞悬浮液稀释至合适的细胞浓度，通常在1×10^6 - 1×10^7 cells/mL之间。
3.加入适量的PI染色剂到细胞悬浮液中，一般终浓度为1-10μg/mL。
4.在黑暗条件下，在4°C冷藏室中孵育15-30分钟，避免光照和温度升高。
5.使用流式细胞仪进行测量。
设置PI染色剂的激发波长和检测通道，根据实验需要选择适当的过滤器。
6. 将细胞悬浮液转移到流式细胞仪的样本管中，进行数据采集和分析。
可以设置门控（gating）策略以排除细胞碎片和颗粒物。
通过分析样本中PI染色的细胞数量，可以计算出细胞的存活率。
二、分析细胞周期细胞周期分析是研究细胞增殖和凋亡机制的一项重要实验。
在流式细胞仪中，通过DNA染色剂染色和分析可以了解细胞的周期分布情况。
具体操作步骤如下：1.培养待测试的细胞，并将细胞备样。
可以使用PBS洗涤一遍，以获得单细胞悬浮液。
2. 使用细胞培养基或PBS将细胞悬浮液稀释至合适的细胞浓度，通常在1×10^6 - 1×10^7 cells/mL之间。
3.用酒精或细胞固定液固定细胞，一般在-20°C的环境中固定20-30分钟。
流式荧光指数-概述说明以及解释
流式荧光指数-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述流式荧光指数是一种用于表征细胞或颗粒物的荧光强度的标准化指标。
在细胞生物学和免疫学领域，流式荧光指数广泛应用于细胞分析、蛋白质定量和荧光探针的评价等方面。
随着流式细胞术的快速发展，研究人员需要能够对复杂的细胞样品进行高通量的分析，并获得准确、可靠的数据。
然而，由于荧光信号的强度受到许多因素的影响，例如细胞数量、荧光染料浓度和仪器参数等，直接比较不同样品的荧光强度是困难的。
为了解决这个问题，流式荧光指数被引入。
它是通过将感兴趣的荧光信号与一个参考信号进行比较来计算得出的。
这个参考信号可以是内标，如细胞或颗粒物中存在的共表达荧光标记物，也可以是人工添加到样品中的标准物质。
通过使用流式荧光指数，研究人员可以消除实验条件和仪器参数的影响，从而得到更加准确和可比较的结果。
这对于比较不同样品之间的荧光信号强度，或者用于定量分析和更深入的数据挖掘是至关重要的。
流式荧光指数的应用领域非常广泛。
在免疫学研究中，它被用于表征细胞亚群的分布和活性，从而对免疫应答进行深入研究。
此外，在药物筛选、疾病诊断和检测等领域，流式荧光指数也发挥着关键的作用。
然而，流式荧光指数也存在一些局限性。
首先，选择适当的参考信号对结果的准确性至关重要。
错误的选择可能会导致结果的误差。
其次，流式荧光指数对实验设计和数据分析的严格要求，需要研究人员具备一定的专业知识和技能。
在未来，流式荧光指数将继续发展和完善。
新的计算方法和算法将被引入，以更精确地表征荧光信号强度和亮度。
同时，更多的应用领域将受益于流式荧光指数的应用，推动科学研究和临床诊断的进一步进展。
文章结构是指文章的组织和布局方式，它决定了文章内容的呈现方式和逻辑顺序。
本文将按照以下结构进行论述：1. 引言：- 1.1 概述：介绍流式荧光指数的背景和意义，引出本文的研究对象。
- 1.2 文章结构：说明本文的组织结构和各章节内容安排。
- 1.3 目的：明确本文的目标和写作意图，阐述对流式荧光指数的研究意义。
实验九流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期时相
发光源，激发波长为488nm，测定数据输入计算机，用Multicycle软件分析细 胞DNA含量。
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五、实验结果
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五、实验结果
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五、实验结果
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二、实验原理（continued）
● 流式细胞术（FCM，Flow Cytometry）：是对单个 细胞或其他生物微粒进行快速定性, 定量分析与分选 的一门技术。
● FCM是利用流式细胞仪(Flow Cytometer)分析在高压 高速下通过样品孔径的单个细胞, 在激光束的照射下 的发出的散射光和与细胞表面结合的荧光标记的单抗 的荧光信号。
实验九 流式细胞术分析细胞凋亡和 细胞周期时相
杭州师范大学 刘姬艳
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一、实验目的
1、了解流式细胞术（FCM，Flow 了解流式细胞术分析细胞凋亡的检测方法。 3、了解流式细胞术分析细胞群体DNA含量分布
的基本方法。
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二、实验原理
● 细胞凋亡(Apoptosis)是指细胞基因调控的一种自主性 的自杀现象。或者说在一定的生理或病理条件下，细 胞遵循自身的程序，自我结束生命的死亡方式。由于 这种死亡方式是由基因调控的死亡过程，因此又称之 为程序性细胞死亡(Programmed Cell Death)。
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二、实验原理（continued）
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二、实验原理（continued）
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二、实验原理（continued）
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二、实验原理（continued）
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二、实验原理（continued）
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流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用1. 引言流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生命科学研究和临床诊断的技术。
通过使用流式细胞仪，可以对生物细胞进行快速、精准的多参数分析，为科学家和医生提供了大量的有关细胞的信息。
流式细胞术已成为生物学领域的重要工具，被广泛应用于细胞分析、免疫表型分析、药物筛选等领域。
2. 原理流式细胞术基于细胞在封闭流动系统中单个通过的原理。
其基本流程包括样本制备、细胞标记、细胞检测和数据分析。
2.1 样本制备样本制备是流式细胞术的第一步，它需要将待检测的细胞样本制备成单细胞悬浮液。
这可以通过细胞培养、组织切片或体液等方式获得细胞样本。
重点是要避免细胞凝聚和聚集，以确保细胞在流式细胞仪中单个通过。
2.2 细胞标记细胞标记是流式细胞术的关键步骤之一。
它使用荧光染料或抗体等标记物与目标细胞发生特异性反应。
荧光染料可以通过不同的通道发出不同波长的荧光信号，从而实现多参数分析。
细胞表面标记的抗体通常与荧光素共价结合，以产生可检测的荧光信号。
同时，可以利用染料进行细胞内部器官或分子的标记，以更详细地研究细胞的功能和结构。
2.3 细胞检测细胞检测是流式细胞术中最关键的步骤之一。
它通过流式细胞仪将标记后的细胞悬浮液以单个细胞的形式通过单个检测区域。
这些细胞在流式细胞仪中被激活并产生荧光信号。
光电传感器将捕获和记录这些荧光信号，并将其转化为数字信号，供数据分析使用。
2.4 数据分析数据分析是流式细胞术的最后一步。
通过对获得的荧光信号的数字化处理，可以获得有关细胞的详细信息，包括细胞表面标记物的表达水平、细胞数量统计、细胞大小等信息。
数据分析可以使用专业的流式细胞仪软件完成，也可以使用其他数据分析软件进行更复杂的数据处理。
3. 应用流式细胞术作为一种全面、高通量的细胞分析技术，广泛应用于各个领域。
3.1 免疫学研究流式细胞术在免疫学研究中得到了广泛应用。
通过对免疫细胞的表面标记物进行检测，可以评估免疫细胞亚群的数量、功能和表达水平。
流式细胞仪检测凋亡
流式细胞仪检测凋亡细胞凋亡的检测方法众多，流式细胞仪检测凋亡，是常用的方法。
由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。
因此，具有其它方法无可比拟的优越性。
本文主要结合我室的一些实际经验，力图简单明了的介绍流式在检测凋亡方面的应用。
下面是一幅凋亡过程图。
在凋亡诱导剂的作用下，首先是细胞色素C和apa f－1形成复合体，线粒体的功能发生衰退；后是caspase家族激活，磷脂酰丝氨酸外翻，这时细胞的形态已经发生了改变，可以看到细胞变小，胞核皱缩；最后是细胞内DNA断裂，形成凋亡小体。
在凋亡发生的各个过程当中，都有相应的流式细胞仪的检测方法，我室曾经检测过的方法包括：1线粒体功能2DNA Cycle3 Caspases4Annexin V Assay6DNA Fragmentation Assays基本上涵盖了细胞凋亡的各个期，对各种检测方法的原理和特点做一个简单介绍。
线粒体功能检测的试剂盒有深圳达科为公司代理的试剂盒（产品编号为BVK250）和BD公司出售的盒Apo-Alert试剂盒。
其检测主要采用阳离子型荧光染料。
原理是：正常细胞中，染料可以在线粒体内聚集，发出明亮的红色荧光；而细胞凋亡后，其线粒体膜电位发生改变，染料无法进入线粒体，只能在胞质中以单体形式存在，发出绿色的荧光。
可以在荧光显微镜下，或流式检测。
采用488nm激发，其检测波长分别是527nm和590nm。
整个实验过程操作简单，只需要30min就可以见到结果。
Caspase家族可以检测的分子非常多，也有不少商业的试剂盒可以应用。
即使没有相应的试剂盒，只要有相应抗体基本上是可以检测的，具体的方法是参照细胞内蛋白检测的步骤。
在细胞凋亡过程中伴随着一系列的形态特征改变，细胞膜的改变是这些特征中较早出现的一种。
在凋亡细胞中，细胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的外侧。
Annexin－V是一种35－36 KD的钙粒子依赖的磷脂结合蛋白，它对PS具有较高的亲和力。
流式细胞仪常用的几种检测方法
流式细胞仪常用的几种检测方法1.细胞计数和生存率检测：流式细胞仪可以通过测定细胞的大小、形状和胞内染色物来实现细胞计数和生存率的检测。
通过自动聚焦和自动获取图像的功能，可以对大量的细胞进行计数和分析，并得出生存率数据。
2.表面标记检测：流式细胞仪可以利用荧光染料或荧光标记抗体对细胞表面的蛋白质、糖类或其他生物分子进行检测。
这种检测方法主要用于检测细胞表面标记的数量和分布情况，例如测定细胞表面特定抗原的表达水平。
3.细胞周期分析：流式细胞仪可以通过染色剂或荧光标记抗体对细胞进行染色，然后分析细胞在不同细胞周期阶段的比例。
这种检测方法可以用于研究细胞的增殖能力、细胞周期调控机制以及细胞周期与疾病发展的关系。
4.细胞凋亡检测：流式细胞仪可以利用染色剂或荧光标记抗体对细胞凋亡的标志物进行检测。
凋亡是细胞死亡的一种形式，通过测定凋亡细胞的数量和凋亡标志物的表达水平，可以研究细胞凋亡的调控机制以及细胞凋亡与疾病的关系。
5.细胞功能检测：流式细胞仪可以通过检测细胞内Ca2+浓度、ROS （活性氧物种）水平、蛋白质磷酸化等细胞功能指标来研究细胞的信号转导和功能活性。
例如，利用荧光染料可以测定细胞内钙离子的浓度变化，以研究细胞响应外界刺激的机制。
此外，流式细胞仪还可以进行细胞分选、多色细胞分析和细胞细胞间相互作用的研究。
细胞分选功能可以根据细胞标记物的表达水平将细胞分离出来，用于研究特定功能细胞的特性。
多色细胞分析可以用于同时检测多种标记物的表达水平，以揭示不同细胞类型的分子特征。
细胞间相互作用的研究可以通过检测细胞间的共聚或共表达标记物来研究细胞间的相互作用和相互影响。
总的来说，流式细胞仪是一种功能强大的实验室设备，常用于细胞生物学和疾病研究。
通过不同的检测方法，可以在细胞水平上研究细胞的数量、表面标记、周期、凋亡、功能以及细胞间相互作用等方面的特征。
流式细胞仪的三大应用范围
2，白血病的免疫分型：
白血病免疫学分型是利用单克隆抗体 (McAb)检测白血病细胞的细胞膜和细 胞浆抗原（CD）,分析其表现型,以了解被 测白血病细胞所属细胞系列（如髓系、 红系、淋巴系等白血病亚型）及其分化 程度。对白血病细胞抗原的分析研究有 助于对白血病分型，为诊断和治疗提供 依据。
举例：T系急性淋巴细胞白血病免疫表 型特点（T-ALL）： 根据T淋巴细胞在胸腺内的成熟顺序， 将T-ALL分为早期、中期和晚期三类。 早期T-ALL：表达CD7和CD1a，CD4、 CD8膜CD3均为阴性；中期T-ALL：除 表达CD7和CD1a外，还表达CD2、 CD5，CD4/CD8同时表达，膜CD3仍为 阴性；晚期T-ALL：膜CD3为阳性，但 丢掉CD1a，其他标志同中期。通过检测 CD抗原来确定白血病分期。
流式细胞仪的主要应用范围
• 1，流式细胞仪的免疫荧光检测； • 2，流式细胞仪的细胞周期检测； • 3，流式细胞仪的细胞分选；
（一）在免疫学中的应用 ----重要的免疫学实验技术
• 抗原(antigen，Ag)是指能刺激机体 免疫系统诱导免疫应答并能与应答 产生如抗体或致敏淋巴细胞发生特 异反应的物质。 • 抗原多为相对分子质量在10,000以上 的蛋白质和多糖大分子.
File: 2006/9/20 Yang.002 Acquisition Date: 19-Sep-06 Quad Events % Gated % Total X UL 2 0.03 0.02 UR 121 1.57 1.21 LL 5939 77.05 59.39 1646 21.35 16.46 LR
File: 2005/2/28 319 Zho Acquisition Date: 28-Fe R1 Quad% Gate % Tota UL 23.30 9.77 UR 1.86 0.78 LL 16.24 6.81 LR 58.60 24.57
流式细胞仪的临床应用
流式细胞仪的原理及其临床应用流式细胞技术(FCM)是70 年代发展起来得一种快速对单细胞定量分析的新技术, 它借簦了荧光显微镜技术, 同时利用与荧光染料, 激光技术, 单抗技术以及计算机技术的发展, 将荧光显微镜的激发光源改为激光, 使之具有更好的单色性与激发效率, 因而大大提高了检测灵敏度, 同时将固定的标本台改为流动的单细胞悬液, 用计算机进行数据处理, 因而大大提高了检测速度与统计精确性, 而且从同一个细胞中可以同时测得多种参数, 为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的视角和强有力的手段. 目前, 该技术已经广泛用于基础研究与临床应用, 在免疫学, 遗传学, 血液学, 肿瘤学等领域内发挥前重要的作用. 本文着重介绍流式细胞仪基本原理及其在临床上的应用.一. 基本原理流式细胞仪的主要结构可以大致分为这样几个组成部分: 激光系统, 流式系统, 信号处理及放大, 计算机系统. 图一, 图二概括了流式细胞仪的基本原理, 当待测标本被制务成单细胞悬液, 经染色后进入流动室, 流动室内充满流动的鞘液, 鞘液压力与样品流压力是不同的, 当二者的压力差异达到一定程度时, 鞘液裹挟着的样品流中细胞排成单列逐个经过激光聚焦区. 如果我们将细胞中感兴趣的部分特异性地标上荧光染料, 那么这些染料将在细胞通过激光检测区时受激发出特定波长的荧光, 通过一些波长选择通逶性的滤色片, 我们可以将不同波长的散射光, 荧光信号区分开来, 并送到不同的光电配增管中, 经过一系列信号转换, 放大, 数字化处理, 我们就可以在计算机上直观地统计染上各种荧光染料的细胞各自的百分率. 选择不同的单克隆抗体及荧光染料, 我们可以利用流式细胞仪同时测定一个细胞上的多个不同的特征, 如果对具有某种特征的细胞有兴趣, 我们还可以利用流式的分选功能将其分选出来, 以便于进一步培养, 研究二. 流式细胞仪在免疫学中的应用1. 淋巴细胞亚群分析淋巴细胞是正常机体免疫系统功能最重要的一大细胞群, 在免疫应答过程中, 未梢血淋巴细胞发育成为功能不同的亚群. 各亚群的数量和功能了生异常时, 就能导致机体免疫紊乱并产生病理变化.FCM可以同时检测一种或几种淋巴细胞细胞表面抗原, 将不同的淋巴细胞亚群数量的测定来监控病人的免疫状态, 指导治疗.2. 感染及其治疗效果观察由于T 淋巴细胞在人体免疫系统中承担着重要的功能, 因此, 当感染发生时,T 淋巴细胞各亚群的变化往往能很敏感地反映感染的状态与程度. 例如, 细胞膜外CD4分子有HIV 识别部位, 因此CD4细胞是HIV 病毒受体,AIDS 病人CD4+T细胞明显减少, 该指标是诊断AIDS的重要标志. 当病毒感染发生时( 如乙型肝炎,EB 病毒和巨细胞包涵体病毒),CD8+T 细胞增多, 对CD8细胞的测定有助于对感染的诊断, 治疗效果的动态观察.利用流式细胞仪可对器官或骨髓移植后病人进行监控. 当病人CD3+,CD25持+续增加提示已经开始发生排异,CD4/CD8持续下降表明有感染发生, 当其比值小于0.2 时必须停用免疫抑制剂.由于流式细胞仪将静态的, 显微镜下肉眼观察改为动态的, 计算机信号处理, 因此, 在流式细胞仪上T 细胞亚群统计方式已从传统的荧光显微镜下计数200个细胞成为几秒钟内计数上万个, 因此结果更真实, 更具有统计意义.3. 其他免疫功能性疾病分析流式细胞仪便捷, 准确的特点可以用来对自身免疫性疾病进行检测与疗效观察. SLE病人的淋巴细胞变化可以反映该病的活动情况和器官侵犯程度. 活动或非活动性SLE伴有多系统疾病但无肾脏损害的病人可出现CD4/CD8比值升高, 伴有严重肾脏损害的SLE病人可出现低CD4+,高CD8+的现象.有证据表明外周血HLAB27的表达及其表达程度与强直性脊髓炎的发生有很大程度的相关性, 利用流式细胞仪可以进行HLA-B27./HLA-B7 双标记来检测HLA-B27 阳性细胞, 同时排除交叉反应. 另外,CD23 表达的增加与变态反应性疾病, 自身免疫性疾病, 肾病综合症有关, 而且阳性率与病情严重程度呈正相关, 治疗有效后CD23+细胞减少.利用流式细胞仪检测PNH血细胞的细胞膜所缺乏的糖化肌醇磷脂(GPI) 锚连接的蛋白如DAF(CD55.)与MIRI(CD59..) 来确诊阵发性睡眠性血红蛋白尿传统的血清溶血试验具有更高的特异性与灵敏度.一. 流式细胞仪在血小板功能评价方面的应用血小板膜糖蛋白(GP)是参与止血, 血栓形成的重要分子基础, 这些膜糖蛋白是一类重要得黏附分子. 用搞GP.. 的单克隆抗体对血小板进行免疫荧光标记, 用FCM 分析单个血小板或血小板亚群GP是血小板膜糖蛋白检测分析方法的重大发展,方法简便, 快速, 标本用量少, 灵敏度高, 结果准确.与血小板有关的抗原的临床意义有:1. 诊断遗传性血小板功能缺陷疾病巨血小板综合症(BSS)患者血小板CD42 A\CD42B复合物先天缺陷,FCM中表现CD42A与CD42B不仅严重缺乏, 而且其平均荧光强度显著低于阴性对照,CD61代偿性增加.血小板无力症(GT) 患者FCM表现血小板GPIIB,IIIA(CD41,CD61) 明显缺乏,CD42A 和CD42B基本正常或稍高, 并可出现异常血小板亚群.3. 血栓性疾病和血栓前状态由于活化血小板是血栓的主要成分之一, 也是引起血栓形成的主要原因, 所以血小板活化程度增高与疾病发生发展有关.CD62P.. 和CD63是活化血小板最特异和灵敏的分子标志物, 正常人血小板只有低水平活化, 外周血CD62P只有3-5%.有文献报导糖尿病伴有微血管病变, 冠心病, 高血压病. 高血脂病, 脑血栓形成, 脑动脉硬化患者活化血小板百分率和绝对数显著高于正常人, 而糖尿病无微血管病变, 周围血管病以及深静脉血栓形成患者活化血小板水平与正常人无显著差异.PTCA后24 小时发展成急性血管闭塞或高度再狭窄的患者CD62P..和CD63增多,FCM可用于测PTCA后急性缺血再发作的危险性.四, 流式细胞仪在白血病中的应用血液病多种为肿瘤性免疫性和遗传性疾病, 但恶性血液病约占一半以上.FCM在血液病的发病机制, 诊断, 分类, 治疗和预后判断方面都有广阔的应用前景.1. 白血病的分类研究2. 微小残病变检出(MRD)M R D是白血病复发的主要根源,..FCM 其高特异性与敏感性可以在患者缓解期检避免复发.测是否有残存病变细胞, 早期探测MRD以,五FCM在肿瘤学上的应用1. DNA含量测定及细胞周期分析FMC在肿瘤学上的应用主要是利用DNA含量测定进行包括癌前病变及早期癌变的检出, 化疗指导以及预后评估等工作.大量工作表明, 癌前病变的癌变率与病变的增生程度一致, 而增生程度与DNA含量的异常改变又呈平行关系.FCM通过精确定量DNA含量, 能对癌前病变的性质和了展趋势作出判断, 有助于癌变的早期诊断.DNA非整倍体的出现可能是恶变细胞的重要标志, 目前病理学尚无法从癌前病变中发现癌变和即将癌变的细胞, 而FCM检测中DNA非整倍体细胞的出现可作为一个有价值的参数.DNA倍体分析有助于临界性肿瘤的诊断, 如卵巢的交界性肿瘤, 异倍体的出现与病变的恶性发展有关.细胞异常增殖和分化障碍是肿瘤细胞的特性,DNA含量不仅能非常敏感地反映细胞代谢的异常, 而且能通过DNA倍体分析, 细胞周期各时相的细胞比例分析并结合细胞抗原的表达多参数分析, 全面了解细胞的生物学行为, 从而帮助肿瘤的诊断, 选择治疗方案和预后判断.DNA异倍体, 高S_PHASE细胞比值和高增殖细胞核抗原(PCNA)表达与细胞增殖能力, 恶性程度和不良预后呈正相关.2. 为治疗方案和药理学研究提供依据不同类型的肿瘤对化疗药物的敏感程度是不同的. 可以利用FCM进行细胞期分析, 适当选用周期特异性药物或非周期特异性药物.MDR是由多药耐药基因编的P糖蛋白(PGP)是亲脂化合物, 包括多种抗癌药物和荧光染料的跨膜性排出泵. 从人淋巴细胞排出荧光染料与细胞内P-GP的含量直接相关. 当淋巴细胞出现M D R阳性细胞时, 病人对化疗药物开始出现耐药性, 需要考虑其他治疗方式.六, 活细胞内活性酶的检测法( 如FLUOROMETR及ICCOLORIMDTRIC_ASSAY都S是), 测定总体细胞的总酶活性而非测定单一细胞的酶活性. 若要测定单一细胞的酶活性, 通常都是涉及固定后的死细胞. 近来COULTE公R司推出最新的技术及试剂CELLPROBE_REAGE由N于T,每一个特定的酶都有其专一的受质, 而受质本身是由特别的化学品与荧光染料FLOURENSCE或IN RHODAMINEN共O价结合的, 能迅速进入活细胞, 当其遇到特异性酶时, 会被酶破坏其共价结构而释放其荧光染料, 从而能够被FCM检测到, 因此, 活细胞酶探针能够用来测量单一活体细胞内酶的活性.七. 凋亡细胞检测凋亡最初是作为形态学概念被提出来的. 细胞有两种不同的死亡方式. 即坏死(MECROSIS和) 凋亡(APOPTOISI). 凋亡典型的形态特征是核染色质固缩并分离, 细胞质浓缩, 细胞膜和核膜皱曲, 核断裂形成片断, 最后形成数量不等的凋亡小体. 利用FCM可以进行DNA断裂点标记检测.DNA片断可以从细胞内漏出, 导致DNA含量减少, 利用F C M进行DNA含量分析, 通过二倍体细胞G0/G1期峰前的亚二倍体峰来确定.在凋亡早期, 一些与膜通透性改变及凋亡有关的蛋白在细胞膜表面有特定表达, 例如FAS基因蛋白(CD95), 线粒体膜蛋白(AP027), 磷脂酰丝氨酸(ANNEXIN_V),FCM结合单克隆抗体可以检测表达这些蛋白的细胞, 从而确定细胞的凋亡情况.自70 年代流式细胞仪成型以来, 历经20 多年的发展, 流式细胞仪应用意义越来越得以体现, 尤其是1982 年以后, 随着白细胞分化抗原意义的确认以及单克隆抗体技术的发展, 给流式细胞仪的应用发展提供了强大的推动力. 在我国, 不仅许多科研单位早在80 年代已经开始使用流式细胞仪作为其科研工具, 进入90 年代后, 以库尔特原理及其相关血细胞分析产品闻名的美国库尔特公司以其在流式领域研究, 应用近二十年的积累, 在其五代流式细胞仪的基础上推出了以单激光同时激发四色荧光的新一代临床型流式细胞仪, 并为其配套了临床标本制备仪, 使临床标本制备标准化, 简单化, 开创了流式应用的新领域. 从而, 不少大中型医院也逐步引进流式细胞仪作为临床诊断的辅助工具, 随着单抗技术, 计算机技术及其它相关技术的不断发展, 流式细胞仪将会在应用领域得到不断的开拓, 成为科研与临床不可或缺的重要手段.。
流式细胞仪在生物学研究中的应用
流式细胞仪在生物学研究中的应用流式细胞仪（Flow cytometer）是一种广泛应用于生物学研究的仪器，通过对细胞的特性进行快速、准确地分析和分选，为科学家提供了重要的数据和信息。
本文将探讨流式细胞仪在生物学研究中的应用，并展示其在不同领域的重要性。
一、流式细胞仪的原理和技术流式细胞仪的工作原理基于细胞在液体流动状态下被传感、检测和反应的过程。
它通过将细胞悬浮液经过细胞仪仪器内的细长管道，并在细胞通过过程中激发和测量其特定性质，从而实现对细胞的多参数分析和评估。
流式细胞仪的技术包括激光激发、细胞传感和荧光信号检测等。
激光激发利用高能激光束对细胞进行激活并激发其内部或表面荧光标记物的发射。
细胞传感通过聚焦和引导细胞通过检测区域，确保单个细胞按顺序经过检测装置。
荧光信号检测则通过光学检测系统捕捉和记录细胞放射出的特定波长的荧光信号。
二、流式细胞仪在免疫学研究中的应用1. 免疫表型分析：流式细胞仪可以用于识别和分析多种免疫细胞，如T细胞、B细胞、巨噬细胞等，并评估它们的表型特征，如表面标记物的表达情况、活化状态等。
2. 免疫细胞功能研究：通过对细胞的功能进行评估，如蛋白质分泌、细胞增殖、细胞凋亡等，可以了解它们在免疫反应中的作用和调控机制。
3. 免疫细胞亚群分析：流式细胞仪可以将免疫细胞按照特定标志物进行分拣和分选，从而获得纯度较高的特定亚群细胞，以便进行进一步的研究。
三、流式细胞仪在细胞生物学研究中的应用1. 细胞周期分析：通过流式细胞仪的荧光探测系统，可以对细胞进行DNA含量的测定，从而确定其所处的细胞周期阶段和细胞增殖状态。
2. 細胞凋亡檢測：流式细胞仪可以通过检测特定标志物如磷脂翻转等，对凋亡细胞进行分析和鉴定，以了解细胞凋亡的机制和调控网络。
3. 细胞增殖和细胞死亡研究：通过荧光染料等方法，流式细胞仪可以评估细胞增殖和死亡相关的指标，如活细胞数量、细胞周期分布、凋亡率等。
四、流式细胞仪在癌症研究中的应用流式细胞仪在癌症研究中具有重要意义，可以用于：1. 癌细胞鉴定和分离：通过特定标志物的荧光检测，流式细胞仪可以将癌细胞与正常细胞进行区分，从而进行纯化和特异性分析。
流式fitc和pi四象限
流式fitc和pi四象限流式fitc和pi四象限实验是研究细胞生命周期及死亡等现象的一种常用手段，也是目前生物学研究中不可或缺的分析技术。
下面为大家详细介绍流式fitc和pi四象限的相关内容。
一、什么是流式fitc和pi四象限实验？流式fitc和pi四象限实验是通过流式细胞仪检测荧光素FITC 和PI染色的细胞数量，来分析细胞的生命周期和死亡等现象的一种实验方法。
其中，FITC染色可以反映细胞活性和成分变化，PI染色可以反映细胞核酸含量和形态变化。
二、流式fitc和pi四象限实验的原理及步骤1、实验原理流式fitc和pi四象限实验是基于细胞状况的荧光信号来进行分析，首先通过FITC和PI染色将细胞分类，然后在流式细胞仪中进行检测得到荧光信号。
2、步骤（1）取相应数量的细胞，进行细胞处理，并用PBS冲洗一次去除培养基和残留药物等。
（2）将细胞溶解液均匀加入每个实验管中，加入FITC染液和PI 染液，使细胞达到充分染色。
（3）经过染色后，用PBS进行冲洗，去除残留的染料和重复的细胞。
（4）将实验管放入流式细胞仪中进行检测，得到其中包含的荧光信号。
三、流式fitc和pi四象限实验的应用领域流式fitc和pi四象限实验被广泛应用于生物学研究中，特别是在细胞周期和细胞死亡中的应用更为广泛。
其应用领域包括：（1）研究细胞凋亡、坏死、自噬等现象。
（2）分析细胞周期。
（3）研究细胞中分子、化合物的吸收、转运等。
（4）检测细胞膜的表达。
（5）研究肿瘤、癌症等疾病的发生机制。
以上是流式fitc和pi四象限实验的相关介绍，这种实验方法使得研究者可以更加深入地探究细胞的相关问题，为广大生物学研究者提供了重要的实验手段。
流式细胞仪的发展历史及其原理和应用进展
流式细胞仪的发展历史及其原理和应用进展一、本文概述流式细胞仪（Flow Cytometry，FCM）作为一种先进的细胞分析技术，自其诞生以来，在生物医学领域发挥了重要的作用。
本文旨在全面概述流式细胞仪的发展历史，深入剖析其基本原理，以及探讨其在不同领域的应用进展。
我们将从流式细胞仪的初步概念出发，追溯其技术的演进过程，分析其在细胞生物学、免疫学、肿瘤学等领域的应用实例，并展望未来的发展趋势。
通过对流式细胞仪的深入研究，我们希望能够为相关领域的研究人员提供有价值的参考，推动流式细胞仪技术的进一步发展。
二、流式细胞仪的发展历史流式细胞仪（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速测量和分析细胞特性的高科技仪器。
自其诞生以来，流式细胞仪在生物医学研究领域发挥了重要作用，其发展历史可追溯至20世纪60年代末。
1965年，美国科学家Wallace H. Coulter首次提出了流式细胞仪的基本概念，并设计出了第一台原型机。
这台机器利用了液流原理和荧光检测技术，可以对单个细胞进行快速、定量的分析。
1970年，Coulter Science公司正式推出了世界上第一台商用流式细胞仪，标志着流式细胞技术的诞生。
随着科技的进步，流式细胞仪在随后几十年中经历了不断的改进和创新。
在硬件方面，流式细胞仪的激光源从最初的单一波长发展到多波长，甚至引入了紫外、红外等多种激光，使得可以同时检测多种细胞参数。
在软件方面，数据分析和处理能力得到了显著提升，可以实现对大量数据的快速、准确分析。
流式细胞仪的应用领域也不断拓宽。
从最初的免疫学研究，到现在的肿瘤学、细胞生物学、分子生物学等多个领域，流式细胞仪已经成为了不可或缺的研究工具。
随着单细胞测序技术的发展，流式细胞仪与单细胞测序技术的结合，为深入研究细胞异质性和疾病发生机制提供了新的手段。
流式细胞仪的发展历史是一部科技进步的缩影。
从最初的原型机到现在的多功能仪器，流式细胞仪在硬件、软件和应用领域都取得了显著的进步。
流式细胞术的原理
流式细胞术的原理
流式细胞术是一种用于分析和计数细胞的技术，它通过检测细胞中的荧光标记
物或细胞表面的抗原来对细胞进行鉴定和分类。
流式细胞术的原理是基于细胞在流动液体中单个通过激光束的原理，利用光散射和荧光信号来对细胞进行分析和分类。
首先，样本中的细胞被标记上荧光染料或特定的抗体。
这些标记物可以与细胞
内的特定蛋白或抗原结合，使得细胞在流式细胞仪中可以被检测到。
然后，样本被注入到流式细胞仪中，细胞在液体中单个通过激光束的同时，流式细胞仪会对细胞进行多参数分析。
当细胞通过激光束时，它们会散射出光线。
这些光线的散射模式可以提供关于
细胞大小、形状和结构的信息。
同时，如果细胞被标记上荧光染料，它们还会发出荧光信号。
流式细胞仪会同时记录细胞的散射光和荧光信号，通过这些信号来对细胞进行分析和分类。
流式细胞仪可以同时检测多种不同的荧光标记物，这使得它可以对细胞进行多
参数分析。
通过对细胞表面抗原的鉴定和分类，流式细胞术可以用于免疫细胞表型分析、白细胞分类和计数、肿瘤细胞检测等领域。
此外，流式细胞术还可以用于检测细胞凋亡、细胞周期分析和细胞内分子的定量分析。
总的来说，流式细胞术的原理是基于细胞在流动液体中单个通过激光束的原理，利用光散射和荧光信号来对细胞进行分析和分类。
它是一种高效、灵敏和多参数的细胞分析技术，广泛应用于生命科学研究和临床诊断领域。
通过对细胞的鉴定和分类，流式细胞术为科研人员和临床医生提供了重要的实验数据和诊断依据，对于研究细胞生物学和疾病诊断具有重要意义。
流式细胞术基本原理与应用实验报告
流式细胞术基本原理与应用实验报告一、引言流式细胞术（flow cytometry）是一种广泛应用于生物学、医学和临床诊断领域的高通量技术。
它可以快速地分析细胞群体的形态、数量、大小、表面分子表达和内部结构等信息，从而为科学家们提供了许多有价值的数据和见解。
本文将介绍流式细胞术的基本原理和应用实验，以期为读者提供更深入的了解。
二、流式细胞术基本原理1. 光学系统流式细胞仪主要由光源、透镜系统、光谱仪和检测器等组成。
光源可以是氩离子激光器或其他激光器，它们会发射出不同波长的激光束。
透镜系统会对激光束进行聚焦和扩散，使其能够穿过样品中的单个细胞。
光谱仪则会将激光束分成不同波长的色带，并通过探测器来检测样品中各个荧光染料或标记物的信号。
2. 样品处理在进行流式细胞术之前，需要对样品进行处理。
一般来说，样品需要进行单细胞悬浮处理，以便于在流式细胞仪中进行分析。
这个过程可以通过机械分离、酶消化或超声波破碎等方法实现。
3. 荧光标记为了使细胞的某些结构或分子能够被检测到，需要将它们标记上荧光染料或其他标记物。
这些标记物可以是抗体、蛋白质、DNA探针等。
当激光束照射到样品中时，荧光染料会发出特定波长的荧光信号，从而被检测器捕捉到。
4. 数据分析流式细胞术所得到的数据通常是一个多维度的数据集合，其中包括了每个单个细胞的大小、形态、荧光强度等信息。
为了对这些数据进行更深入的分析和解释，需要使用专业软件进行数据处理和可视化。
三、应用实验1. 细胞表面抗原检测流式细胞术可以用于检测细胞表面的抗原表达情况。
通过将适当的荧光标记物与抗体结合起来，可以快速地对细胞表面的抗原进行定量和定性分析。
这种方法在肿瘤学、免疫学和感染病学等领域中得到了广泛应用。
2. 细胞周期分析流式细胞术也可以用于细胞周期分析。
通过将DNA染料与样品中的单个细胞结合，可以对不同阶段的细胞进行分类和计数。
这种方法可以用于评估细胞增殖速率、治疗药物的效果等方面。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用一、流式细胞术的原理流式细胞术是一种在液流中快速检测细胞特性的技术。
通过将单个细胞与特异性抗体结合，实现对细胞表面和内部抗原的定量和定性分析。
抗体通常与荧光染料标记，以便在流式细胞仪中产生光信号。
细胞在流式细胞仪中通过激光束，产生的荧光信号被光电倍增管收集并转换为电信号，从而实现对细胞特性的定量分析。
二、流式细胞术的应用1. 免疫表型分析流式细胞术可用于免疫表型分析，以了解免疫细胞群体的多样性、功能和活性状态。
通过检测特定免疫细胞表面标记物的表达水平，可以评估其发育阶段、激活状态和功能特性。
这种分析对于研究免疫系统功能、疾病发生机制和疫苗开发具有重要意义。
2. 细胞功能分析流式细胞术可用于分析细胞的生理功能，如细胞增殖、凋亡和吞噬作用等。
通过向流式细胞仪中添加特定的荧光染料或抗体，可以检测细胞内关键分子如DNA、RNA、蛋白质等，从而评估细胞的增殖和凋亡状态。
此外，还可以通过检测细胞表面的吞噬标记物，研究细胞的吞噬能力。
3. 基因表达分析流式细胞术可用于基因表达分析，以了解特定基因在细胞中的表达水平。
通过将RNA与特异性抗体结合，并使用荧光染料标记，可以检测细胞中特定基因的表达水平。
这种分析有助于研究基因功能、疾病诊断和药物筛选。
4. 病原体检测流式细胞术可用于病原体检测，以快速准确地识别和计数感染性疾病的病原体。
通过将特异性抗体与病原体结合，并使用荧光染料标记，可以在流式细胞仪中实现对病原体的定量和定性分析。
这种分析对于疾病诊断和治疗具有重要意义。
5. 肿瘤诊断和治疗流式细胞术在肿瘤学中也有广泛的应用。
通过对肿瘤细胞的表面抗原、基因表达和细胞功能进行分析，有助于肿瘤的诊断、分类、预后评估和治疗策略的制定。
此外，流式细胞术还可以用于监测肿瘤细胞的耐药性和对治疗的反应，为个体化治疗提供依据。
流式细胞术——原理,操作及应用(二)
流式细胞术——原理,操作及应用(二)流式细胞术原理流式细胞术（Flow Cytometry）是一种通过流式细胞仪对细胞进行高速连续检测和分析的技术。
它利用细胞与荧光标记的抗体等特异性反应，通过流式细胞仪的高速流体流动和多通道探测系统来实现对数千个细胞的快速检测和分析。
操作1.细胞准备：首先需要从样品中获得待检测的细胞，并进行细胞的染色。
常用的染色方法包括直接染色和间接染色，可以利用荧光标记的抗体或荧光染料对细胞进行染色。
2.样品处理：将染色后的细胞悬浮液注入流式细胞仪的进样室中，通过机械或压力的方式使细胞以单细胞的形式通过流式细胞仪。
3.流式细胞仪操作：设置流式细胞仪的相关参数，包括激光光源的波长、光学滤波系统、探测器的选择等。
4.数据获取和分析：流式细胞仪会记录每个细胞的各项参数，包括细胞形态、大小、荧光强度等。
可以利用专门的数据分析软件对获取的数据进行分析和图表的制作。
应用流式细胞术在生命科学研究中有广泛的应用，以下是一些常见的应用：1.免疫学研究：利用流式细胞术可以对免疫细胞进行表面标记，例如CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、B细胞等的检测和分析，以研究免疫应答、免疫细胞的亚群分布等。
2.血液学研究：流式细胞术可以用于血液中不同细胞类型的检测和分类，例如红细胞、白细胞以及不同亚群的白细胞等，有助于了解血液疾病的发生机制。
3.肿瘤学研究：利用流式细胞术可以检测肿瘤细胞的特定标记，例如细胞表面抗原、细胞周期相关蛋白等，帮助进一步了解肿瘤细胞的类型、分化程度、增殖活性等。
4.微生物学研究：流式细胞术可以用于微生物的检测和计数，例如细菌、酵母菌等，有助于研究微生物的生长特性、代谢活性等。
5.细胞生物学研究：流式细胞术可以用于对细胞周期的分析、细胞凋亡的检测、细胞增殖速度的测定等，有助于了解细胞生物学的基本过程和调控机制。
总结：流式细胞术是一种非常强大和多功能的技术，在生命科学研究中得到广泛应用。
流式细胞仪的原理、应用及进展
流式细胞仪的原理、应用及进展一、本文概述流式细胞仪（Flow Cytometry，FCM）是一种在细胞生物学、免疫学、分子生物学和临床医学等领域中广泛应用的强大技术。
通过结合流式细胞术和荧光标记技术，流式细胞仪能够实现对单个细胞的快速、精确和多参数分析。
本文旨在深入探讨流式细胞仪的基本原理、主要应用以及最新的研究进展，旨在为读者提供一个全面、深入的了解，同时展望其未来的发展趋势和潜在应用。
我们将从流式细胞仪的基本原理出发，介绍其如何通过对细胞进行多参数定量分析和分选，实现对细胞群体特性的精确刻画。
随后，我们将重点讨论流式细胞仪在细胞周期分析、细胞凋亡检测、免疫表型分析以及疾病诊断与治疗等领域中的应用。
我们还将关注流式细胞仪的最新研究进展，包括新型荧光探针的开发、多色荧光标记技术的发展以及流式细胞仪与其他技术的结合等。
我们将对流式细胞仪的未来发展趋势进行展望，以期为相关领域的研究和应用提供有价值的参考。
二、流式细胞仪的基本原理流式细胞仪（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速测量和分析细胞特性的先进生物技术。
其基本原理主要基于流体力学、光学和计算机技术。
在流式细胞仪中，单个细胞通过特定的流动室，以单文件形式排列，形成连续的细胞流。
这个流动室设计得足够小，使得细胞在通过时，可以被集中的激光束照射。
激光束与细胞相互作用，产生散射光和荧光信号，这些信号反映了细胞的物理特性和化学性质。
散射光主要包括前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC）。
FSC主要与细胞的大小有关，而SSC则与细胞的内部颗粒度和复杂性有关。
通过测量这两种散射光，可以获取细胞的大小、形状和内部结构等信息。
荧光信号则是通过标记细胞表面的特定抗原或细胞内的分子，使用荧光染料或荧光蛋白进行检测。
这些荧光染料或荧光蛋白在激光的激发下，会发出特定波长的荧光，从而提供关于细胞表面或内部分子表达的信息。
流式细胞仪的计算机系统负责收集和处理这些散射光和荧光信号，将其转化为数字信号，并进行多参数分析。
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Flow Cytometry
什么是流式细胞仪
●流式细胞仪实物
BD-Calibur
BD FACSVantage
一、 概述
1. 发展历史 1934 Moldavan 1973 Steinkamp
2. 定义：对在高速流动的鞘液包括下对特异荧 光标记的细胞、粒子进行分析和分选的技术.
基本结构
流动室和液流系统； 激光源和光学系统； 光电管和检测系统； 计算机和分析系统。
三、 流式细胞仪可检测到的细胞参数 非荧光信号
颗粒度
细胞大小
= 前向角散射光（FSC）细胞相对大小及其表面积 = 侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的
相对复杂性
血液涂片
外周全血细胞散射光双参数点图
凋亡过程中，细胞内核酸酶的释放，将DNA降 解，分解成小的片段，在标本制备中的固定处 理时，细胞膜的完整性被破坏，使细胞内降解 的DNA片段从细胞内流出，造成总体DNA含量 减少，成为亚2倍体。
二）肿瘤诊断与抗肿瘤药物研究
1. 肿瘤诊断
DNA异倍体的出现是癌变的一个重要标志 细胞的增殖能力的大小也可反映肿瘤的生物
流式细胞仪检测凋亡和细胞周期等 应用
DNA细胞周期分析
G2 M
G0
G1
细
s
胞 数
量
细胞周期
DNA分析
G0G1
s G2M
2N
200
400
4N DNA含量
600
800
1000
肿瘤组织中的各种DNA倍体
2倍体
异倍体
4倍体
含量与凋亡关系
DNA亚G1峰的检测：利用PI染色，检测具有 亚G1期DNA含量的细胞比例，代表凋亡细胞数。
二、流式细胞仪的工作原理和基本结构
待测细胞以单个细胞的悬液，经特 异性荧光染料染色，放入样品管， 吸入流动室。
流动室充满鞘液，作用：约束样品 在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔 壁堵塞喷孔。细胞排成单列由喷 嘴中心喷出，形成细胞液柱。
液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。 荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。
……
一） 细胞DNA含量检测
细胞固定后用PI （Propidium iodide碘化丙啶）， 染色，因为PI特异性结合于细胞DNA，荧光强度 与PI的结合量呈良好的线性关系，根据这个原理， 可测出细胞的DNA含量。用于细胞周期、细胞倍 体以及凋亡的检测。
单参数直方图
图中2N代表G0/G1期细胞，4N代表G2/M期细胞，两者中间代表 S期细胞。这是以2倍体和4倍体细胞为主的流式DNA图
3. 特点 测量速度快，每秒钟能测数千个乃至上万个 细胞 可进行多参数测量 在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离 出来，即分选技术。
4. 应用范围
凡是能被荧光素标记的细胞或颗粒都可用流式细 胞仪检测。
前提这种荧光素能被流式细胞仪所配置的激光光 源激发
在生物检测技术中流式细胞仪是不可多得的一机 多用的仪器。
106 7 10.08 816 .8 6 468 .8 9 529 1 49.98 19.57 4.41 397 5 37.55 418 .8 0 9.87
图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死
流式细胞仪数据分析
点图分析
流式细胞仪数据分析
直方图分析
图中100～101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞
Annexin V Assay
R1
Fi le : 4
Acq ui si ti on Date: 0 6-Ma r-03
Quad UL UR LL LR
Eve nts % Ga te d X Mean Y Mean 254 2.40 37.47 461 .3 6
学特征 利用流式细胞仪进行细胞周期分析和DNA
倍性分析，辅助肿瘤诊断，包括监测癌前病 变、肿瘤的早期诊断和肿瘤细胞学诊断。
肿瘤组织中的各种DNA倍体
2倍体
异倍体
4倍体
2. 凋亡研究
在 G0/G1 峰 前 出 现 一 个亚二倍体峰，即凋 亡峰。
检测调亡，可进行抗 肿瘤药物研究和某些 因素对细胞的损伤机 理的研究。
量有关，在正态分布时一般用该值。 Geo Mean：几何平均荧光强度，在阳性细胞
为偏态分布时一般用该值。
散点图
密度图
二维等高图
直方图
图 报告中常见的几种流式细胞图
R1
Fi le : 4
Acq ui si ti on Date: 0 6-Ma r-03
Quad UL UR LL LR
Eve nts % Ga te d X Mean Y Mean 254 2.40 37.47 461 .3 6
荧光信号
荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的 荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。 有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳） 高FL细胞与低FL细胞区分开来（强弱）
一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出 三个FL，即FL1、FL2、FL3，大型的流式细胞仪装有两个 或三个激光光源（488nm、633nm和325nm），可测出6个 FL。
荧光信号与细胞特性
荧光染料被激发而发射的光信号。 定量染色
荧光信号大小 被标记组分含量的定量
多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量
光信号收集
光信号分离，导向 各探测通道接收并转化为电信号。
激光束
侧向散射 光，荧光
二色镜
1
2
3
细胞Βιβλιοθήκη 前向 散射 光收集透镜
带通滤波片 光电倍增管
三 数据处理及流式报告
光信号
FSC SSC FL1 FL2 FL3
对数 线性
电信号
线性 线性 对数
脉冲处理，模数转换 （面积，峰高，宽度）
记录数据，显示结果
流式报告的图一般分为四种，即散点图、直方
图、密度图和二维等高图等。最常用的为散点
图和直方图。
几个概念： %Gated：阳性细胞百分比。反映细胞群体中
阳性细胞的数量。 Mean：平均荧光强度，与被检测物质的表达
五、 流式细胞术的应用
细胞结构 细胞大小 细胞颗粒度 细胞表面积 核浆比例 DNA含量与细胞
周期 RNA含量 蛋白质含量
……
细胞功能
• 细胞表面/胞浆/核的特异性抗 原
• 细胞活性 • 细胞内/外的细胞因子 • 激素结合位点、细胞受体 • 蛋白磷酸化 • pH值 • 钙离子浓度 • 细胞膜电位、线粒体膜电位