板栗支链淀粉含量的双波长测定方法_王广鹏

0.132。 C直 单位为 μg/mL, r=0.999。
2 结果 与分 析
2.1 直链淀粉和支链淀粉测定双波长的选择 支链淀粉和直链淀粉的最大吸收波长分别为 550 nm
和 615 nm (图 1)。按双 波长测 定的 波长 选择 方法 , 用 作图 法 选 定 在 550 nm和 695 nm测 定 支 链 淀 粉 , 在 615 nm和 475 nm测定直链淀粉 。 2.2 支链 (直链 )淀粉标准回归方程的建立
河北农业科学 , 2008, 12 (1):35 -37 JournalofHebeiAgriculturalSciences
责任编辑 杜晓东
板栗支链淀粉含量的双波长测定方法
王广鹏 1, 2 , 刘庆香 1 , 孔德军 1 , 张志宏 2＊
(1.河北省农林科学院昌黎果树研究所 , 河北 昌黎 066600;2.沈阳农业大学园艺学院 , 辽宁 沈阳 110160)
直链淀粉
27.34 2.12 0.83 1.20 0.64 0.42 0.41 0.74 1.42 2.27 2.23
பைடு நூலகம்
支链淀粉
3.10 3.00 1.00 0.71 0.45 0.78 1.12 0.92 0.78 1.14 1.09
直链淀粉
10.94 8.66 1.01 0.49 0.65 0.62 0.72 0.68 0.91 2.49 2.97
板栗是我国主要的干果树种 , 近年 来 , 关于板栗主 要营养成分研究较多 , 而关于板栗口感糯性 的研究则较 少 [ 1 ～ 4] 。糯性是板 栗制 品品 质评 价中 的 重要 指标 之一 。 糯性由板栗淀粉中支链淀粉的含量决定 , 测 定支链淀粉 含量最常用的方法是传统碘比色法 [ 5] , 但该 方法存在易 受样品天然糖分和脂类等干扰的缺点 。采用 目前应用较 多的双波长分光光度法 , 对板栗中 2种淀粉 含量进行了 不同测定条件的比较研究 , 旨为准确测 定板栗 2种淀粉 含量寻找科学 、 简便的方法和为板栗产品糯 性品质评价 提供定量界定的参考方法 。
1 材料 与方 法
1.1 材料与仪器 试验材料为板栗果实 (品种为燕山短枝 ;去除硬壳
和内皮 , 果仁 切块 , 烘 干粉碎 , 过 120 目 筛 ), 直 链淀 粉 (Sigma)和支链淀粉 (Fluka)标准品 ;试验 仪器为 DU530 紫外分光光度计 (Beckman)。 1.2 试验方法 1.2.1 试验设计 试验 设样 品脱 脂 、 脱 糖 、 脱脂 脱糖 和未脱脂脱糖 (对 照 ) 4 个处理 , 3 次 重复 , 检 验糖脂
直链淀粉
1 2 5 10 20 30 40 50 60 70 80
支链淀粉
1.88 ±0.06 2.48 ±0.07 5.01 ±0.05 9.99 ±0.07 19.96 ±0.09 40.47 ±0.31 60.98 ±0.68 81.38 ±0.75 101.88 ±0.79 122.08 ±1.39 142.59 ±1.56
Abstract:Dual-wavelengthspectrophotometrywasappliedtothedeterminationofamylopectininCastaneamollissima BL.Accordingtotheabsorptionspectraofthetwocomplexes, thewavelengthofI2-amylose, 615 nmand475 nm, and ofI2-amylopectin, 550 nmand695 nm, wereselectedasthemeasuringwavelength.Boththeexactitudeandaccuracyare verywellwhentheConcentrationRangeisobeyedin5 -60 μg/mLforamyloseand5 -140 μg/mLforamylopectin.It shouldremovedglucoseandfatindrypowderbeforedetection. Keywords:CastaneamollissimaBL;Dual-wavelengthspectrophotometry;Amylopectin
直链淀粉
0.73 ±0.08 1.96 ±0.17 4.96 ±0.05 10.12 ±0.05 19.89 ±0.13 29.89 ±0.18 40.15 ±0.29 50.31 ±0.34 60.85 ±0.55 71.59 ±1.78 81.78 ±2.43
支链淀粉
88.23 24.12
0.29 0.14 0.02 1.18 1.63 1.73 1.88 1.73 1.85
第 1期
王广鹏等 :板栗支链淀粉含量的双波长测定方法
支链淀粉 一元 线性 回归 方程 为 :C支 =221.622ΔA支 +1.515。 C支 单位为 μg/mL, r=0.999。
直链淀粉一元线性回归方程为 :C直 =78.341ΔA直 -
图 1 淀粉光谱扫描图 Fig.1 Scanningwavelength
2.3 试验测定的浓度范围以及准确度和精密度 从表 1可 以 看出 , 支链 淀 粉标 准 样品 浓 度 范 围在
5 ～ 140 μg/mL时 , 本方法的测 定相对偏差均 ﹤ 2%, 变 异系数均﹤ 1.5%, 准确 度和精 密度都 较好 , 说 明本方 法测定的样品支链淀粉浓度处于此区间时 , 测定结果是 可靠的 ;直链淀粉标准样品在 5 ～ 60 μg/mL浓度范围内 时 , 本方 法 的 测 定 相 对 偏 差 均 ﹤ 2%, 变 异 系 数 均 ﹤ 1.5%, 表明本方法准确度和精密度都较好 。
2.4 不同前处理对样品测定结果的影响 从表 2可以看出 , 未脱脂脱糖处理 测定结果显 著偏
大 , 支链淀粉含量增高 6%、 直 链淀粉含 量增高 18%左 右 。其中脂类对板 栗直 链淀粉 含量 测定几 乎没 有影 响 , 而使支链淀粉含量偏高但未达到显 著水平 ;糖类的 存在 使支链淀粉含量 偏高 5%左右 , 影响 显著 , 而 对直链 淀 粉含量偏高的影响则未达到显著水平 。 2.5 样品双波长测定法与碘比色法比较
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河北农业科学
2008年
值 A, 以吸 光 度 值 差 ΔA为 自 变 量 , 以 相 应 支 链 (直 链 )淀粉标样浓度为依变量 , 分别得到 2 种淀粉的一元 线性回归方程 。 1.2.5 试验测定的浓 度范围 以及 准确度 和精 密度 的检 验 通过对定量标准样品进行 3次重复 测定 , 来分析方 法的精密度和 准确 度 。测 定 范围 设 定支 链 (直 链 )淀 粉浓度 1 ～ 150 μg/mL。 1.2.6 比较样品不同 前处 理的 测定 结果 , 以 及样 品双 波长测定法与碘比色法的淀粉含量测定结果 。
表 2 糖类和脂类对样品测定结果 的影响 Table2 Theeffectofcarbohydratesandlipids
ondetermination (mg)
处理 脱脂 脱糖 脱脂脱糖 未脱脂脱糖
支链淀粉
11.36 aA 10.96 abA 10.81 bA 11.50 aA
直链淀粉
2.19 abA 2.11 bA 2.12 bA 2.50 aA
3 讨 论
淀粉是板栗仁的主要组成部分 , 淀粉中 既有支链淀 粉又有直链 淀 粉 , HizukuriS[ 7] 认为 用传 统 碘比 色 法进 行水稻直链淀粉测定时 , 样品中支链淀粉在 直链淀粉的 最大吸收波长处也有一定的吸光度值 , 使测 定结果往往 偏高 , 同理支链淀粉测定亦是如此 。本试验 中双波长法
DeterminationofAmylopectininCastaneamollissimaBL.byDual-wavelengthSpectrophotometry
WANGGuang-peng1, 2 , LIUQing-xiang1 , KONGDe-jun1 , ZHANGZhi-hong2＊ (1.FruitInstitute, HebeiAcademyofAgricultureandForestrySciences, Changli 066600, China;2.HorticultureCollege ofShenyangAgriculturalUniversity, Shenyang 110160, China)
摘要 :研究了双波长分光光度法测定板栗果仁直链淀粉和支链淀粉的含 量 。对光度测定 的最佳条件 和样品前处 理进行了详细考察 。选择支链淀 粉的测 定波长 为 550 nm和 695 nm, 直链 淀粉 的测定 波长为 615 nm和 475 nm。 样品测定时应进行脱脂脱糖处理 , 直链淀粉浓度在 5 ～ 60 μg/mL、 支链淀粉浓度在 5 ～ 140 μg/mL时 准确度和精 密度均较好 。 关键词 :板栗 ;双波长分光光度法 ;支链淀粉 中图分类号 :S664.2 文献标识码 :A 文章编号 :1008-1631 (2008) 01-0035-03
从表 3可以看出 , 碘比色法测得 的总淀粉 、 直 链淀 粉和支链淀粉含量均高于双波长法 , 其中支链淀粉 和总 淀粉含量 差异 不 显著 , 直链 淀 粉含 量 差异 达 到显 著 水 平 。双波长法测定结果的变异系数 均低于碘比 色法 , 说 明用双波长法测定栗仁 2种淀粉含量 的稳定性和重 复性 高于碘比色法 。
收稿日期 : 2007-09-03 作者简介 :王广鹏 (1978 -), 男 , 河 北赞皇人 , 硕 士在读 , 主要从
事果树遗传与生理研究 。 通讯作者 :张志宏 。
类对测定的干扰程度 。其中脱脂采用石油 醚 , 脱糖采用 85%乙醇 。
样品处理参照碱液溶解 [ 6] 的方法并加 以修改 。以脱 脂脱糖处理为例 , 具体步 骤为 :准确 称取干 粉 20 mg置 于离心管中 , 脱 脂 3 次 (加入 石 油醚 5 mL, 涡 旋 脱脂 10 min, 5 000 rpm离心 5 min, 弃去上 清液 ), 脱 糖 3次 (加入 85%乙醇 5 mL, 涡旋 脱糖 10 min, 5 000 rpm离心 5 min, 弃去上清液 ), 烘干 , 0.5 mL无水乙 醇湿润 , 用 2 mol/LKOH溶 液 4.5 mL在 70 ℃水 浴 锅 中 分 散 溶 解 10 min, 取出 冷 却 , 取 1 mL置 于 50 mL容 量 瓶 中 , 用 0.2 mol/LHCL溶液 调节 pH值至 3.0, 用 pH值 3.0 的 HCL溶液定容 , 静置备用 。 1.2.2 比色测定 (1)支链淀粉和直链淀粉标准溶液 配制 。参照 何 照范 方 法 [ 6] 配置 成 1 mg/mL的 标 准 工作 液 。 (2)样 品比色 。 移取 1 mL样品 溶液于 离心 管中 , 再 加 入 HCL溶 液 (pH 值 3.0 ) 3.9 mL和 碘 试 剂 0.1 mL, 静 置 15 min。 以 0.1 mL碘 试 剂 用 pH 值 3.0 HCL溶液稀释至 5 mL的溶液作参比液 。 1.2.3 直链淀粉和支 链淀粉 测定双 波长 的选 择 分别 取显色后支链淀粉 和直链淀 粉的标 准工作液 , 于 300 ～ 800 nm波段扫描 , 得到吸收光谱图 。用作图法选择直链 淀粉和支链淀粉的测定双波长 。 1.2.4 支链 (直链 )淀粉标准 回归方程 的建立 10个 不同浓度支链淀粉标样 , 在其测定双波长处 测定吸光度
表 1 样品支链 (直链 )淀粉测定的准确度和精密度 Table1 Theprecisionandaccuracyofthedeterminedamylopectin
标样浓度 (μg/mL)
测定值 (μg/mL)
相对偏差 (%)
变异系数 (%)
支链淀粉
1 2 5 10 20 40 60 80 100 120 140