磷脂的提取与分析检测技术_王道营
实验五蛋黄中卵磷脂的提取及鉴定
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（2）脂肪酸的检查 取棉花上沉淀少许，加5mL水，搅
拌，有无泡沫生成？过滤，得滤液，以浓 硝酸酸化后加入数滴10％醋酸铅溶液，观 察有何现象?
蒸去乙醇
乙醇溶液
油状物
脂肪
卵磷脂
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氯仿
丙酮
油状物
氯仿溶液
卵磷脂
脂肪
脂肪 卵磷脂
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【实验步骤】
1．卵磷脂的提取
（1）取1个熟的鸡蛋黄，置于研钵中研细，加 入
15mL 95％乙醇溶液，研磨，搅拌均匀。减压过滤，
收集滤液。将漏斗的残渣移入研钵内，加15mL 95 ％乙醇溶液，研磨，过滤(滤液应完全透明)，将 两次滤液合并于蒸发皿内。
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（2）将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇，至 干，得到黄色油状物。
（3）冷却后，加入2mL～3mL氯仿，搅拌使 油状物溶解。
（4）在搅拌下慢慢加入10mL～15mL丙酮， 即有卵磷脂析出，搅动使其成团粘附于 玻棒上，溶液倒入回收瓶内。
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2．卵磺脂的水解及其组成鉴定 （1）卵磺脂的水解
滴95%乙醇溶液，用硝酸酸化，加1mL钼 酸铵试剂，观察有何现象产生？最后直接 用火加热5min～10min，观察有无黄色磷 钼酸铵沉淀生成？
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注意事项
乙醇、氯仿、丙酮用量一定要控制好
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思考题
加丙酮之前为何要加少量的氯仿？
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鸭肉肌内磷脂水解酶的提取及相关酶系的酶活测定
ｏ ｏ ｒ ｌｔ ｅ ｅ ｚ ｍ ａｉ ｃｉｉ ／Ｈ Ｎ ｕ ａ￣， Ｎ ａｙ ｇ， ＩＮＨ ａ￣， Ｕ ｆｃ ｒｅａｉ ｎ ｙ ｔ ａ ｔ ｔ Ｚ Ａ ＧＬｊ ｎ ＷＡ Ｇ Ｄ ｏｉ ＢＡ ｕｎ Ｘ ｖ ｃ ｖｙ ｕ 一 ｎ 一
Ｗｅｍｉ’ Ｙ ａ ｉ Ｉ ｅ ｇ， ｉ ｎ， Ｅ Ｙ ｍｅ。 Ｕ Ｆ ｎ 。 ＷＡ Ｇ Ｚ ｉ ｎ １ Ｉｓｉ ｔ ｆ ｇｉ ｌ ｒｌ ｒｄ ｃｓ Ｐｏ ｅ ｓ ｇ ，Ｌ Ｎ ｈ ｕ （． ｎ ｔｕｅ ｏ ｒ ｕｔ ａ Ｐ ｏ ｕ ｔ ｒｃ ｓ ｉ ， ｊ ｔ Ａ ｃ ｕ ｎ
第４卷第６ ２ 期
２１ ０ １年 ６月
东
北
农
业
大
学
学
报
４ （）４ ￣ ５ ２６： １４
Ｊ ｎ ０ｌ ｕ ｅ２ １
Ｊｕ ｎ ｌ ｆＮｏｔｅ ｓ ｒｃ ｌｕ ａ ｉｅｓｔ ｏ ｒ ａ ｒｈ ａｔＡｇｉｕ ｔｒｌＵｎｖ ｒｉ ｏ ｙ
鸭 肉肌 内磷脂水解酶 的提取及相 关酶 系 的酶活测定
ａ ｄ ８ ５ ｗｈｃ ｓ ｕ ｅ ｏ ｅ ｒｃ ｈ ｈ ｓ ｏｌ ａ ｅ ｈ ｄｒ ｙ ｉ ｚ ｍ ｅ ｏ ｈｅ ｄ ｃ ｄ ｄｒ－ ｕ ｅ ｕ ｋ ｎ ． ｉｈ ｗａ ｓ ｄ ｔ ｘ ａ ｔｔ ｅ ｐ ｏ ｐｈ ｉ ｓ ｙ ｏｌｓｓ ｅｎ ｙ ｆｔ ｕ ｋ ａｎ ｙ ｃ ｒ ｄ ｄ ｃ ｔ ｐ
张露娟 一 ，王道营 ，卞 欢 一，徐 为 民 ，叶雅梅。 ，刘 凤。 ，汪志君２
三种海产品磷脂的分离、分析与贮藏性能
多７８摘要第一部分：参考植物油和蛋黄中磷脂的提取方法，以总脂提取液中磷脂含量为指标，考虑到提取剂中氯仿和甲醇的比例、提取剂的用量、抽提时间等因素，利用正交实验优化提取磷脂的条件。
结果显示最佳因素位级组合：提取剂体积（ｍ１）：样品重量（ｇ）＝１４，提取剂氯仿（ｍ１）：甲醇（ｍ１）＝２，抽提时间４ｈ，洗涤用１％ＮａＣｌ体积（ｍ１）：样品提取液体积（ｍ１）＝Ｏ．５０，其中前三个因素对实验结果有显著影响。
＋，第二部爿：分析测定了在收获旺季马面纯卵巢、贻贝、葛氏长臂虾三种样品总脂和磷脂的含量、总脂和磷脂的脂肪酸组成，并利用薄层层析对磷脂的组分进行了定性、定量分析。
结果显示：三种海产品都含有较丰富的以ＰＣ、ＰＥ为主的磷脂，与大豆、蛋黄磷脂以及同种海产品总脂的脂肪酸组成相比，海产磷脂含有更丰富的多不饱和脂肪酸，尤其是ＥＰＡ和ＤＨＡ的含量比较高。
第三部分：三种海产品在２０。
ｃ（或３０。
Ｃ）、４。
Ｃ、一ｉｏｏＣ一２０。
Ｃ温度下贮藏，测定贮藏期间磷脂含量及其组分的变化情况。
结果表明：在较高温度下贮藏时，磷脂含量快速下降，总磷脂中ＰＣ的比例下降明显，而ＬＰＣ的比例有不同程度的增加。
海产品收获后若不能立即处理，最好在－２００Ｃ下暂贮数日，以保存磷脂。
实验结果能为充分利用低值海产品中的磷脂提供理论依据。
／关键词：海产磷脂；正交实验ｊ提取；脂肪酸；贮藏专黪５１、青岛海洋大学硕士学位论文二酋ｉ－已ＡＢＳＴＲＡＣＴＴｈｅｆｉｒｓｔｓｅｃｔｉｏｎ：ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆＰＬｆｒｏｍｐｌａｎｔｏｉｌＳａｎｄｙｏｌｋ，ｃｏｎｓｉｄｅｒｉｎｇｆｏｕｒｆａｃｔｏｒｓ：１）ｔｈｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｎｄｍｅｔｈａｎｏｌ，２）ｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｅｘｔｒａｃｔａｎｔ，３）ｔｈｅｔｉｍｅｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，４）ｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆ１％ＮａＣｌ，ｔｈｅＰＬ‘ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｒｏｍＮａｖｏｄｏｎｓｅｐｔｅｎｔｒｉｏｎａｌｏｓ（Ｇｏｎｔｈｅｒ）ｏｖａｒｙｗａｓｄｉｓｃｕｓｓｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｒｉａｌＳ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｂｅｓｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｉＳ：ｅｘｔｒａｃｔａｎｔ：ｓａｍｐｌｅ＝１４：１（ｖ／ｗ），ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ：ｍｅｔｈａｎｏｌ：２：ｌ（ｖ／ｖ），ｆｏｕｒｈｏｕｒｓ’ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，１％ＮａＣｌ：ｅｘｔｒａｔｕｍ＝１：２（ｖ／ｖ）．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＰＬｉＳａｆｆｅｃｔｅｄａｐｐａｒｅｎｔｌｙｂｙｔｈｅｆａｃｔｏｒｓｅｘｃｅｐｔｔｈｅＶ０１ｕｍｅｏｆＩ％ＮａＣｌ．Ｔｈｅｓｅｃｏｎｄｓｅｃｔｉｏｎ：ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄＦＡｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎＴＬａｎｄＰＬａｍｏｎｇＮａｖｏｄｏｎｓｅｐｔｅｎｔｒｉｏｎａｌｏｓ（ＧＤｎｔｈｅｒ）ｏｖａｒｙ，尼ｌ厶曲叩ｇｒａｖＪｅｒｉ（Ｙｕ）ａｎｄＭｒｔｉｌｕｓｅｄｕｌｉｓ（１ｉｎｎａｅｕｓ）ｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ。
磷脂 ir鉴定方法
磷脂 ir鉴定方法磷脂是一种重要的生物分子，广泛存在于细胞膜中，参与细胞组成、信息传递和能量代谢等生物过程。
为了研究磷脂的结构和功能，需要进行磷脂的鉴定和分析。
本文将介绍常见的磷脂鉴定方法，包括色谱、质谱和核磁共振等技术。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析化合物的常用方法，包括薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱等。
这些方法可以用于磷脂的分离和纯化，并且可以得到磷脂的相对含量。
1.1 薄层色谱薄层色谱是一种相对简单、快速的色谱技术，通常用于磷脂样品的初步分离和纯化。
其原理是利用不同化合物在吸附剂上的亲和力不同，从而使它们在薄层上运动的速度和方向不同，从而达到分离的目的。
在磷脂的鉴定中，可以用磷酸化的酯酶切割磷酸基，使磷脂分解成甘油3-磷酸酯和脂肪酸，用正相或反相薄层色谱分离。
1.2 高效液相色谱高效液相色谱是一种分离并纯化化合物的方法，它利用液相固定相互作用对样品进行分离，可以有效地分离一些极性化合物和不同结构的磷脂。
常见的固定相为C8、C18等碳链，分离柱为正相分离柱、反相分离柱等。
气相色谱是一种将挥发性有机物分离和定量的技术。
它主要用于分析和定量非极性化合物和低极性化合物。
在磷脂的鉴定中，气相色谱可以用于脂肪酸的分离和定量。
质谱技术是一种鉴定物质分子量、化学结构的方法，通过高分辨率、高灵敏度的检测系统，可以快速、准确地确定化合物的化学式和结构。
在磷脂的鉴定中，质谱技术主要包括质谱、飞行时间质谱和磁共振质谱等。
质谱是一种将分子分解成离子的技术，并将它们按质量和数量进行分离和检测的方法。
在磷脂的鉴定中，可以使用飞行时间质谱或质量分析仪对磷脂进行分析。
通常，磷脂会转化为负离子化物，然后进行质谱分析。
根据离子的质量比和相对强度，可以确定磷脂的组成。
2.2 飞行时间质谱飞行时间质谱是一种将离子加速到高能状态，然后通过电子荧光屏幕进行检测的技术。
在磷脂的鉴定中，飞行时间质谱可以用于测定磷脂的质量和相对含量。
磷脂的提取与分析检测技术_王道营
磷脂的提取与分析检测技术王道营 徐幸莲 徐为民(南京农业大学食品科技学院) 【摘 要】磷脂的提取方法主要是萃取法;总含量的测定方法有称重法、比色法、紫外分光光度法等;磷脂不同组分的分离和测定方法有T LC、HPLC和31P-NM R等;利用RP-HPLC和GC可以对磷脂的脂肪酸的组成分析测定;使用HPLC、GC等和M S的联合使用可以对磷脂分子量及分子结构进行分析。
本文分别对上述5个方面进行综述,并对不同方法的特点进行了初步探讨。
【关键词】磷脂;组分;脂肪酸组成;分子结构;分析检测中图分类号:TS224.4 文献标识码:A 文章编号:1009-1807(2005)07-0051-04 磷脂是一类存在于生物界的含磷脂肪物质。
在植物的种子、动物血液和脏器、蛋黄及细菌中与油脂并存,是构成细胞基本结构的必需物质,对维持细胞的通透性和细胞内氧的传递起重要作用。
磷脂可分为3大类:糖基甘油二酯、神经鞘磷脂(SM)和磷酸甘油酯(PL)。
磷酸甘油酯又可分为酯磷脂和醚磷脂,醚磷脂包括胆碱缩醛磷脂和乙醇胺缩醛磷脂,通常所说的磷脂就是指酯磷脂。
酯磷脂主要包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酸(PA)、二磷脂酰甘油(DPG)以及N-乙酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)等。
一种磷脂就是多种磷脂分子组成的混合物,这造成了磷脂分离和定量上的困难。
本文就磷脂的提取和分析检测技术作一综述。
1 磷脂提取常用的提取方法可归纳为两大类:一是物理萃取法,即用超临界流体技术(SFE-CO2),这是一种新型的分离技术,其操作简单,萃取纯度较高;二是化学萃取法,即用氯仿、甲醇、丙酮、乙醚、乙醇等有机溶剂反复萃取,其操作步骤较复杂。
原料不同,所采用的提取方法也不同。
对于一些粗磷脂产品可以直接取样进行分析;对于大豆油、菜籽油等植物油类样品可采用丙酮沉淀法获取磷脂;对于大豆、动物组织等固体类样品,要先提取样品中的粗脂肪,然后对其进行分离获取磷脂。
医药磷脂提取实验报告
医药磷脂提取实验报告医药磷脂（Phospholipids）是一类重要的生物大分子化合物，它们广泛存在于细胞膜中，在生物体内具有重要的生理功能。
为了研究和开发医药磷脂，了解其提取方法是非常重要的。
本实验旨在提取医药磷脂，并对提取物进行分析。
实验中我们选用了磷脂提取试剂盒进行提取，具体步骤如下：1. 准备样品：将磷脂样品（比如卵磷脂，磷脂酰胆碱等）加入离心管中。
2. 加入提取试剂：将适量的提取试剂加入样品中，在适当的温度下进行搅拌。
3. 离心：将样品离心，使得磷脂与其他组分分离。
4. 收集上清液：将上清液转移到另外的离心管中。
5. 加入酶解酶：将适量的酶解酶加入上清液中，进行酶解反应。
6. 加入抗氧化剂：加入适量的抗氧化剂，防止磷脂氧化。
7. 离心：将样品离心，去除残余物质。
8. 收集上清液：将上清液转移到另外的离心管中。
9. 测定磷脂含量：用酶法、化学法或其他方法测定提取物中磷脂的含量。
通过上述步骤，我们成功地提取了医药磷脂，并进行了相关的分析。
在实验过程中，我们需要注意以下几点：1. 样品的选择：根据实验需要选择适合的磷脂样品，同时保证样品的纯度和质量。
2. 提取试剂的选择：选择合适的提取试剂，能够高效提取磷脂，并保证提取物的稳定性。
3. 实验条件的控制：控制实验条件，比如温度、pH值等，以保证提取过程的顺利进行。
4. 仪器设备的使用：合理使用离心机、显微镜、分光光度计等仪器设备，确保实验结果的准确性。
在实验中，我们成功提取了医药磷脂，并获得了提取物。
通过测定磷脂含量，我们可以评估提取物的纯度和质量。
通过对提取物的进一步分析，比如结构分析、功能研究等，可以深入探究医药磷脂的生理功能和应用价值。
总之，本实验通过采用磷脂提取试剂盒进行磷脂的提取，并对提取物进行分析，为研究和开发医药磷脂提供了重要的实验基础。
同时，本实验还为后续的医药磷脂研究提供了参考和借鉴。
南京板鸭加工过程中肌内磷脂与游离脂肪酸含量的变化
（ ． ｅ ａ ｏ ｔｒ ｏ Ａ ｒ ｕｔｒ ｎ ｎｍ ｌ ｒ ｕｔ Ｐｏｅｓ ｇａｄＱ ａｔ Ｃ ｎｒｌ Ｍｉｉｒ ｏ Ａ ｒ ｕｔｒ， １Ｋ ｙＬｂ ｒ ｏ ｆ ｇ ｃｌ ａ ａ ｄＡ ｉ ａ Ｐｏ ｃ ｒ ｓｉ ｎ ｕ ｉ ｏ ｔ ， ｎｓ ｆ ｇｉ ｌ ｅ ａ ｙ ｉ ｕｌ ｄ ｓ ｃ ｎ ｌｙ ｏ ｔ ｃ ｕ ｙ Ｎ ｎｉ ｇ ｃ ｔｒ ｎｖｒｔ， ａｊ ｇ Ｊ ｎｓ １０５， ｈｎ ； ．ｎｔｕ ｆ ｇ ｃ ｔ ａ Ｐｏｕｔ Ｐｏｅｓ ｇ ａｊ ｇＡ ｒ ｕ ｕａ Ｕ ｉｅ ｉ Ｎ ｉ ， ｉ ｇｕ２ ０９ Ｃ ｉ ２ Ｉｓｔｔ ｏ ｒ ｕ ｕｌ ｒ ｃｓ ｒｃｓｉ ， ｎ ｉｌ ｌ ｓｙ ｎ ｎ ａ ａ ｉ ｅ Ａ ｉｌ ｒ ｄ ｎ
关键词 ： 南京板鸭 ；加工工艺 ； 磷脂 ；游离脂肪酸
中 图 分 类 号 ： Ｓ５ ． Ｔ ２ １６ ８ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ １５ ７ （ ０ ８ ０ －３００ １７ —４ ０ ２ ０ ） ３０ ２ －４
Ｃｈ ｎｇ ｓ ｏ ｈｏ ｐ ｌｐ ｄ ｎ ｆ ｅ ａ ｔ ｃｄ ｏ ｔ ｎｔ ｎ ｉ ｔ ａ ｕ ｃ ａ ｉ ｄ ａ ｅ ｆ ｐ ｓ ｈｏ ｉ ｉ ｓ ａ ｄ ｒ ｅ ｆ ｔｙ ａ ｉ ｓ ｃ ｎ ｅ ｓ ｉ ｎ ｒ ｍ ｓ ｕｌ ｒ ｌ ｓ ｐｉ
ｓｏ ｅ ｈｓｈｌ ｉ ｅ ａｋｂｙｄｃｅ ｅ ｎ ｒｅｆｔ ｃ ｓｓ ｎ ｃ ｔ ｎｒａｅ ｕ ｎ ｈ ｒ ｅｓ ｇｏ ａｊ ｇｄ －ｕｅ ｈｗ ｄｐ ｏｐｏｉ ｄ ｒｍ ｒａｌ ｅｒａ ｄａ ｄｆ ａｙａｉ ｉ ｉ ａ ｌ ｉ ｅ ｄｄ ｒ ｇｔｅｐｏ ｓ ｎ ｆ ｎｉ ｒ ｃ ｒｄ ｐｓ ｓ ｅ ｔ ｄ ｇ ｆｎ ｙ ｃ ｓ ｉ ｉ ｃ ｉ Ｎ ｎ ｙ
Ｊ ｇｕＡ ａｅ ｙｏ ｇｉ ｔ ａ Ｓｉ ｃｓ Ｎ ｎｉｇ Ｊ ｎｓ ０４， ｈｎ ） ｉ ｓ ｃｄｍ ｆ ｒ ｕ ｕｌ ｃｅ ｅ， ａｊ ， ｉ ｇｕ １ １ Ｃ ｉａ ｎ ａ Ａ ｃ ｒ ｎ ｌ ｎ ａ ２０
实验九卵磷脂的提取和鉴定
5、点样：样点距玻璃板一端下缘1cm ，相互间隔 1～1.2 cm ；每位点重复点五次，每次用冷风吹干 后再点，每次点样直径不超过2mm 。 6、展层：在层析缸中加入展层剂0.5cm深，加盖平 衡30分钟，将点样端浸入，密闭展层10-30min。后 取出薄层板，标出展层剂前沿位置，用电吹风热风 将薄层板吹干。 7、显色：用喷雾器向薄层板上均匀喷洒1%碘液溶 液，热风吹干至色斑显现。
表1 抽提物、温度、时间和料液比4因素3水平
水平
1 2 3
[乙醇]∶ [乙醚] 5∶1 4∶1 3∶1
影响因素
温度 时间（min）
4℃
10
25℃
20
60℃
30
料液比 1∶4 1∶5 1∶6
表3 L9 表
按一般方法，如对4个因素3个水平的各种搭配都要考虑，共 需做3*3*3*3=81次试验，而用正交表只需做9次试验，即选用 L9表(L是正交表的代号，下标数字表示试验次数)。
胆碱 HO
二、实验原理
（一）卵磷脂的提取和纯化
▪ 磷脂易溶于乙醚、苯、氯仿，部分溶于乙醇，极难溶于丙酮； 卵磷脂溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂，但不溶于丙酮； 丙酮能够溶解油脂和游离脂肪酸、甘油三酯等。
▪ 因此，本实验用乙醇、乙醚为溶剂，丙酮为沉淀剂，干燥后 获得卵磷脂。新提取得到的卵磷脂为白色蜡状物，与空气接 触后因所含不饱和脂酸被氧化而呈黄褐色。卵磷脂中的胆碱， 在碱性溶液中可分解为三甲胺，而具有特异的鱼腥味，可用 于鉴定。
正交法实验设计
物质提取、纯化受到多种因素的影响，如抽提物 的种类及其配比、抽提条件（温度、时间等）都能影 响提取的结果。这种多因素的试验可以通过正交法， 即用一特制的表格—正交表来安排试验，计算和分析 试验结果。这样就能通过少量试验取得较好的效果。
磷脂含量测定方法
磷脂含量测定方法
磷脂是一类非常重要的生物分子，在细胞结构和功能中起着关键作用。
那怎么来测定磷脂含量呢？这可是个有趣的问题呀！
常见的方法之一就是比色法，就好像我们通过观察颜色的变化来判断一件事情一样。
通过特定的试剂与磷脂反应，产生有颜色的物质，然后测量这个颜色的深浅，就能推算出磷脂的含量啦！这是不是很神奇呢？就如同我们根据天上云朵的颜色和形状来推测天气情况一样。
还有薄层层析法呢，它就像是给磷脂们来一场“选美比赛”。
把磷脂样品在薄层板上展开，不同的磷脂会在特定的位置上显现出来，然后通过与标准品比较，就能知道有多少磷脂啦！这多有意思呀，仿佛是在给磷脂们划分各自的“地盘”。
高效液相色谱法也是很厉害的哦！它就像是一个超级精确的“分拣员”，可以把不同的磷脂非常准确地分离出来，然后再进行定量分析。
这可真是高科技呀，能把那么复杂的磷脂混合物分得清清楚楚。
另外，核磁共振法也不能小瞧呀！它能从分子层面上告诉我们磷脂的信息，就好像是直接钻进磷脂的“内心世界”去探索一样。
每种方法都有自己的特点和适用范围呢，我们得根据具体情况来选择合适的方法。
就像我们选择工具一样，不同的任务需要不同的工具，不是吗？我们不能随便拿起一个方法就用，得像个聪明的工匠一样，精心挑选最适合的工具来完成我们的工作。
总之，磷脂含量测定方法多种多样，各有千秋。
我们要善于利用这些方法，去揭开磷脂世界的神秘面纱，去探索那些隐藏在细胞中的奥秘。
这难道不是一件令人兴奋的事情吗？让我们带着好奇和热情，去深入了解磷脂含量测定的奇妙世界吧！。
磷脂酶的分离纯化技术研究进展
磷脂酶的分离纯化技术研究进展王道营;张牧晗;张露娟;刘芳;诸永志;徐幸莲;徐为民;曹建民【期刊名称】《江西农业学报》【年(卷),期】2012(024)009【摘要】为了充分认识磷脂酶的酶学性质及应用技术,笔者对磷脂酶A1/A2、C、D的分离纯化方法及其发展前景进行了综合论述.【总页数】4页(P142-145)【作者】王道营;张牧晗;张露娟;刘芳;诸永志;徐幸莲;徐为民;曹建民【作者单位】江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;南京农业大学肉品加工与质量控制教育部重点实验室、农业部农畜产品加工与质量控制重点开放实验室,江苏南京210095;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;南京农业大学肉品加工与质量控制教育部重点实验室、农业部农畜产品加工与质量控制重点开放实验室,江苏南京210095;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】Q545【相关文献】1.磷脂酶A2及脂蛋白相关磷脂酶A2与动脉粥样硬化相关疾病的研究进展 [J], 何建新;徐丹苹2.高速逆流色谱分离纯化技术研究进展 [J], 王海燕;李睿;王介平;谷山林;王小燕;曾秀3.蛋白质分离纯化技术的相关研究进展 [J], 范东海;刘磊;唐瑞4.α-亚麻酸分离纯化技术研究进展 [J], 唐佳芮;魏冰;石珊珊5.亚麻胶、亚麻木酚素的提取及分离纯化技术研究进展 [J], 邱立明;唐佳芮;袁榕;魏冰;孟橘因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验五卵磷脂的分离与鉴定解析
三、实验原理、方法和手段
原理一：蛋黄中卵磷脂含量较多 (10%左右)。卵 磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此 性质可将其与中性脂肪分离开；卵磷脂能溶于乙 醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑 磷脂分离。
原理二：
卵磷脂为白色，其所含不饱和脂肪酸易被 空气氧化而呈黄褐色。
卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘 油、胆碱和磷酸盐。甘油与硫酸氢钾共热， 可生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸盐在 酸性条件下与钼酸铵作用，生成黄色的磷 钼酸沉淀；胆碱在碱的进一步作用下生成 无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。从而 完成对卵磷脂的鉴定。
分离、提取、浓缩、纯化 （去杂）、鉴定、分析
2）、卵磷脂的纯化
取一定量的卵磷脂粗品，用无水乙醇溶解，得到 约10% 的乙醇粗提液，加入相当于卵磷脂质量的 10% ZnCl2水溶液，室温搅拌0.5h；分离沉淀物， 加入适量冰丙酮（4℃）洗涤，搅拌1h，再用丙 酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色止，得到白 色腊状的精卵磷脂；干燥；称重。
3）、卵磷脂的溶解性试验
六、实验步骤
1）、卵磷脂的提取 方法二、称取10g 蛋黄于小烧杯中，加入温
热的95%乙醇30mL，边加边搅拌均匀，冷 却后过滤。如滤液仍然混浊，可再次过滤 至滤液透明。将滤液置于蒸发皿内，于水 浴锅中蒸干（或用加热套蒸干，温度可设 140℃左右），所得干物即为卵磷脂。
（为了减少或尽可能不用乙醚，实验采用 方法二。）
五、实验条件
1、实验材料：1枚鲜鸡蛋/组 2、仪器与器皿：蛋清分离器、恒温水浴锅、
蒸发皿、漏斗、铁架台、磁力搅拌器、天平、 25mL量筒、100mL量筒、干燥试管、玻棒、 小烧杯大小各2个。 3、试剂：95％乙醇、乙醚、丙酮、ZnCl2、无 水乙醇、滤纸、10%氢氧化钠、3% 溴的四氯 化碳溶液、红色石蕊试纸、硫酸氢钾、钼酸 铵溶液
磷脂化学与提取.doc
磷脂化学与提取一、磷脂的组成与结构磷脂可分为两类：鞘磷脂（神经磷脂）和甘油醇磷脂鞘磷脂也称神经磷脂，它是神经酰胺与磷酸直接相连，然后再与胆碱或胆胺相连而成的脂。
甘油醇磷脂是由甘油与磷酸反应生成的脂。
磷脂典型的化学结构式为：甘油磷脂甘油醇磷脂主要有以下几种：卵磷脂（磷脂酰胆碱，phosphatidylcholines ，PC ）脑磷脂（磷脂酰乙醇胺，phosphatidylethanolamines ，PE ） 肌醇磷脂(磷脂酰肌醇,phosphatidylinostols ，PI) 丝氨酸磷脂(磷脂酰丝氨酸，phosphatidylserines,PS)此外还有磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油、缩醛磷脂和溶血磷脂等。
1、卵磷脂卵磷脂结构式为：卵磷脂的分子结构特点是一个脂酰基被磷酸胆碱基所取代，而磷酸胆碱所连接的碳位臵不同又产生α、β两种异构体，其磷酸胆碱基连接在甘油基的第3碳位上称α-型，连接在第2碳位上则为β-型。
自然界存在的卵磷脂为L-α-卵磷脂，即R2-CO基处在甘油碳链的左边为L-型。
卵磷脂分子中不同碳位上所连接的脂肪酸也不同，α碳位上连接的几乎都是饱和脂肪酸，而β碳位上连接的通常为亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸等不饱和脂肪酸。
卵磷脂广泛存在于动植物体内，在动物的脑、精液、肾上腺及细胞中含量尤多。
禽类卵黄中含量最为丰富，达干物质总量的8%～10%。
2、脑磷脂脑磷脂又称氨基乙醇磷脂，其分子结构与卵磷脂相似，只是以氨基乙醇代替了胆碱，有α、β两种异构体，与磷相连的羟基为甘油的伯醇基称α型，为甘油的仲醇基则称β型。
脑磷脂水解后可得到甘油、脂肪酸、磷酸和乙醇胺。
脑磷脂通常与卵磷脂共同存在于动物脑组织和神经组织中，心、肝及其它组织也有分布。
脑磷脂在动物脑组织中含量最多，约占脑干物质总量的4%～6%。
3、肌醇磷脂肌醇磷脂结构式为：肌醇磷脂是磷脂酸与肌醇构成的磷脂，磷脂的极性基团部分有一个六碳环状糖醇（肌醇），除一磷酸肌醇磷脂外，还有1，4-二磷酸肌醇磷脂和1，4，5-三磷酸肌醇磷脂。
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磷脂的提取与分析检测技术王道营 徐幸莲 徐为民(南京农业大学食品科技学院) 【摘 要】磷脂的提取方法主要是萃取法;总含量的测定方法有称重法、比色法、紫外分光光度法等;磷脂不同组分的分离和测定方法有T LC、HPLC和31P-NM R等;利用RP-HPLC和GC可以对磷脂的脂肪酸的组成分析测定;使用HPLC、GC等和M S的联合使用可以对磷脂分子量及分子结构进行分析。
本文分别对上述5个方面进行综述,并对不同方法的特点进行了初步探讨。
【关键词】磷脂;组分;脂肪酸组成;分子结构;分析检测中图分类号:TS224.4 文献标识码:A 文章编号:1009-1807(2005)07-0051-04 磷脂是一类存在于生物界的含磷脂肪物质。
在植物的种子、动物血液和脏器、蛋黄及细菌中与油脂并存,是构成细胞基本结构的必需物质,对维持细胞的通透性和细胞内氧的传递起重要作用。
磷脂可分为3大类:糖基甘油二酯、神经鞘磷脂(SM)和磷酸甘油酯(PL)。
磷酸甘油酯又可分为酯磷脂和醚磷脂,醚磷脂包括胆碱缩醛磷脂和乙醇胺缩醛磷脂,通常所说的磷脂就是指酯磷脂。
酯磷脂主要包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酸(PA)、二磷脂酰甘油(DPG)以及N-乙酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)等。
一种磷脂就是多种磷脂分子组成的混合物,这造成了磷脂分离和定量上的困难。
本文就磷脂的提取和分析检测技术作一综述。
1 磷脂提取常用的提取方法可归纳为两大类:一是物理萃取法,即用超临界流体技术(SFE-CO2),这是一种新型的分离技术,其操作简单,萃取纯度较高;二是化学萃取法,即用氯仿、甲醇、丙酮、乙醚、乙醇等有机溶剂反复萃取,其操作步骤较复杂。
原料不同,所采用的提取方法也不同。
对于一些粗磷脂产品可以直接取样进行分析;对于大豆油、菜籽油等植物油类样品可采用丙酮沉淀法获取磷脂;对于大豆、动物组织等固体类样品,要先提取样品中的粗脂肪,然后对其进行分离获取磷脂。
如章建浩等人对金华火腿的肌间脂质成分的分析,取股二头肌根据Folc h.J等人方法提取脂质,然后用氨丙基硅柱分离,用2%乙酸-乙醚(W/ W)溶液洗出游离脂肪酸,用甲醇洗出磷脂。
由于磷脂的结构组成比较复杂,采用一种方法可能对某种磷脂的提取效果好但对另一种的提取效果却很差,因此在分析检测之前必须根据分析目的、分析条件等选择合适的提取方法。
2 磷脂总含量的测定方法2.1 称量法称量法有两种:一种是将磷脂混合物用浓硫酸和浓硝酸混合物分解,使磷变成正磷酸根离子,再将后者转化成为磷钼酸铵沉淀称量;另一种方法是利用油脂溶于丙酮,而磷脂不溶于丙酮的性质,用丙酮萃取样品,除去油脂,烘干残留物,称量即得磷脂含量,这种方法主要适用于植物油脂中磷脂总量的测定,其优点是操作简单,但其测定值并非磷脂真实值。
2.2 比色法比色法有钼蓝比色法、硫氰亚铁胺比色法和酶法比色法之分,三者在磷脂检测上均有应用。
钼蓝比色法是将样品与金属氧化物灰化,试样中的磷变为磷酸盐,加酸溶解而得磷酸根,在加入钼酸盐后生成磷钼酸盐,磷钼酸盐被还原而产生钼蓝,其颜色深浅与磷脂含量成正比关系,由此可进行比色定量。
该法容易受样品中无机磷的影响,而使测定值偏高。
高氯酸-浓硫酸-钼锑抗比色法也有报道,它是在钼蓝比色法的基础上发展而来的,由于用强酸消化使分析时间大大缩短,同时用2,6-二硝基酚作酸碱指示剂,从而使显色更加准确。
硫氰亚铁胺比色法原理是:红色硫氰亚铁胺化合物不溶于氯仿,但与磷脂形成的复合物可溶于氯仿,按磷脂和硫氰亚铁胺形成的复合物所产生的颜色于488nm测定吸光度,从而测定出磷脂含量,该法特点是不需要消化,测试时间短。
酶法比色法是利用磷脂酶水解磷脂,然后测定其释放出的产物,在500nm处测定其吸光度值,由于该法测定成本较高,所以应用的并不是很多。
2.3 二阶导数紫外分光光度(UV)法磷脂吸收光谱有两个峰,一个处在240nm左右,一个处在273nm左右,前者吸光度比后者强得多,测定240nm 左右的峰和谷(通常为247nm的峰和239nm谷)之间的垂直距离(D),D与浓度成正比。
其优点是不需经过分离就可直接测定,操作简单、精密度好、回收率高以及相关系数好,但测定值不能完全反映真实值。
2.4 红外光谱(FTIR)法由于C=O、PO2、P-O-C的吸收振动,在磷脂定量分析过程中产生5个谱带:1765～1720nm;1200～1145 nm;1145～970nm;1200～970nm;830～740nm。
可用于测定毛油和脱胶油中含磷量的谱带是1200～970nm谱带,该谱带的振动是由P-O-C和PO2基团产生的。
由于非磷脂成分的C=O基团振动产生的吸收也在1765～1720nm 区域内,所以1765～1720nm谱带不能用于准确测定磷脂含量。
在1200～970nm内产生的振动吸收通过计算机程序进行统计分析,产生线性回归方程以及把磷脂键面积转换为磷脂浓度的皮尔森相关系数,然后计算出磷脂含量。
a i等人还用FTIR分析了大豆中磷脂的组成。
他先用标准磷脂混合样溶解在氯仿中,配成各种浓度的标准溶液,用于确定磷脂的各种化学键振动的波数,并绘制标准曲线,再用标准曲线确定大豆磷脂的含量。
FTIR法与钼蓝比色法相比具有分析速度快、操作简单、可重复性好、效率高等优点。
3 磷脂组分的分离和测定方法3.1 薄层色谱(TLC)法TLC法是将磷脂用硅胶板上行法展层,展开后的板喷布磷脂显色剂。
各种磷脂的定量,可采用薄层色谱扫描仪计算积分值,或将磷脂的斑点刮下来,然后测定磷含量。
TLC法可分为单向和双向两种。
单向TLC能够同时分析几个样品,但很难将组分完全分开;双向T LC可将磷脂各组分完全分开,但是它一次只能分析一个样品。
T LC法通常采用的显色剂有:碘蒸气、Dittme r-le ster钼蓝、Dr agen-dorff试剂、Vaskovsky试剂和茚三酮等。
a i等人用TLC-显影光密度分析法,测定大豆油中磷脂的组成。
他先把2%的水化大豆油离心,再用丙酮去除油脚中的水分和油脂。
干燥后得到的粗磷脂再通过硅胶柱用氯仿洗脱中性油,用甲醇洗脱回收其中的磷脂。
得到的磷脂用氯仿-甲醇-水(75∶25∶3,v/v/v)展开,用钼酸铵和高氯酸显色。
显色的薄板用显影光密度分析仪扫描,分析各组分的含量。
被美国油脂化学协会(AOCS)收录为标准方法的二维TLC-P法是一种更准确的定量分析磷脂的方法。
这种方法是在分离后收集各种磷脂,测定磷含量,再按照各类磷脂的平均相对分子质量计算出它们的含量,还有一些典型的磷脂的双向T LC法见表1。
TLC 法分析过程烦琐,分析时间长,其重复性也较差。
3.2 高效液相色谱(HPLC)法近年来,国外有许多文章报道采用HPLC分析磷脂,因为HPLC能使非挥发性的、热敏感的磷脂在常温得到分离,它的封闭系统减少了磷脂在分析过程中被氧化的可能性,确保实现磷脂的快速、灵敏、准确的定量分析。
HPLC 法一般分为反相高效液相色谱法(R P-HPLC)和正相高效液相色谱法(NP-HPLC),RP-HPLC法的分析时间一般比较短,但分离效果不如NP-HPLC法,一些典型的磷脂的NP-HPLC分析法见表2。
表1 磷脂的双向T LC分析法编号展开剂A v/v展开剂B v/v显色剂定量方法1氯仿∶甲醇∶7mol/L氨水65∶30∶4氯仿∶甲醇∶醋酸∶水170∶25∶25∶6碘蒸气高氯酸、硝酸消化,310nm 比色,标准曲线定量2氯仿∶甲醇∶水65∶25∶4正丁醇∶醋酸∶水60∶20∶20钼酸和硫酸肼喷涂,硫酸甲醇(10%)显色700nm扫描3氯仿∶甲醇∶冰醋酸∶丙酮∶水35∶25∶5∶14∶2正己烷∶乙醚4∶1磷钼酸乙醇(5%～10%,w/v)和Dittmer试剂显色检测波长650nm参比波长400nm下扫描4氯仿∶甲醇∶醋酸∶水80∶14∶14∶3氯仿∶甲醇∶氨水65∶25∶2—在专用的石英棒上展开, FID检测表2 典型的磷脂N P-HPLC分析法编号色谱柱流动相A v/v流动相B v/v检测器分离组分1Hypersilsil ica-5己烷∶异丙醇∶25mM硫酸铵∶乙醇∶乙酸367∶490∶62∶100∶0.6己烷∶异丙醇∶25mM硫酸铵∶乙腈∶乙酸442∶490∶62∶25∶0.6UV206PE,PI,CL,PS,PC,LPS,LQC2ZorbaxR x-SIL己烷∶异丙醇3∶2己烷∶异丙醇∶醋酸铵120∶80∶11ELSDPE,PG,C L,PI,PS,LPE,PC,LPC3Nucleosil100-5己烷∶异丙醇∶甲酸∶氨水79∶20∶0.6∶0.07异丙醇∶水∶甲酸∶氨水88∶10∶0.6∶0.07UV205PE,PS,PI,PC,SM,LPC HPLC法固定相的型号通常有:Hypersil silic a-5、Mi-cropak si-10、Nuc leosil50-5和100-5、Nucle osil100-7和经常用于RP-HPLC法中的C18键合硅胶柱等,选用何种分析柱应根据分析要求而定。
HPLC法最常用的检测器是UV检测器,但由于磷脂种类的繁多,其脂肪酸组成也有很大差异,磷脂必然在UV的吸收较为复杂从而使磷脂的定量不准确。
一些学者试图用其他检测器来得到更好的分析结果。
J.S.Rhee等人用折光指数(RI)检测器替代UV 检测器分析大豆磷脂中的卵磷脂成分。
Mer lin D.Gr ieser等人用梯度洗脱和火焰电离(FI)检测器测定了大豆和玉米磷脂的各组分含量,得到的图谱基线平稳,可以很好地检测PC、PE、PI的含量。
S.Shi-Hua Chen等人用荧光检测器在342nm(激发)和500nm(发射)波长下检测磷脂含量,磷脂先要用Dns-C1进行衍生,得到的衍生物用HPLC分离检测。
冯会迎等人用HPLC-ELSD法测定氢化大豆卵磷脂的含量,结果灵敏度高、操作简便。
ELSD在磷脂分析检测领域内更具有前景。
HPLC法的流动相主要采用常规或梯度淋洗,其所用流动相体系主要有以下两类:一是甲醇-乙腈-H3PO4,但甲醇、乙腈在200～210nm有吸收,这就要求纯度级别很高的试剂,否则基线不稳;二是正己烷-异丙醇-醋酸盐缓冲溶液,但其色谱图基线欠稳, PC峰对称性不好。
HPLC法在磷脂分析中占有非常重要的地位,随着新型检测器的应用,HPLC法分析将更趋于完美。
3.3 31P核磁共振(31P-NM R)法核磁共振(NMR)技术用于磷脂的分析是20世纪90年代才发展成熟的新技术,它利用磷原子的31P的核磁共振效应来分析各种磷脂的组成和含量的,由于不同类型的磷脂化学环境不同,31P的化学位移也不同,由此来确定各种不同磷脂的种类,各种磷脂的含量由核磁响应信号的积分确定。