无创产前筛查采血操作规范

附件3

胎儿染色体非整倍体（T21、T18、T13）检

测样本采集手册

一、受检者准备

1．检测对象：孕周范围为孕12-24周的孕妇。

2．采样体位：坐位取血，且在采血前患者需要有10分钟时间稳定自己的体位。

【注意事项】

要求受检孕妇先进行B超检测，确认胎儿为单活胎。

采血前24小时内避免运动和饮酒，不宜改变饮食习惯和睡眠习惯。

二、样本采集前准备

1、知情同意书签署：送检医生与受检者及其家属作良好沟通，告知该检测的重要性、临床意义及潜在的风险，并指导受检者签署知情同意书。对于孕周大于24周并坚持要求进行该检测的受检者，由送检医生指导其签署知情同意书补充条款。

2、送检单填写：要求用钢笔或签字笔填写，并使用正楷字体，字迹清晰，填写完整。

3、送检单必填信息：送检单位、送检医生、采血日期、受检者姓名、年龄、孕周、B超检查结果、身份证号码、联系电话。

4、信息核对：仔细核对送检单和受检者的基本信息，确保一致；检查受检者是否按照医嘱准备，并向其解释操作目的以取得配合。

5、样本标识：在采集管、知情同意书、送检单上贴上样本唯一条码，并注明受检者姓名、年龄、孕周、检验项目等信息，确保与送检单一致。

【注意事项】

1．粘贴条码标签时，应使条码与采集管的管长平行，字母朝管口方向，避免以环绕管壁粘贴的方式使管周被遮挡，而无法清晰看到管内样本情况。（条码7个，分配：患者一个、采血机构一个、保健所3个、保健院一个、检测中心一个）

2. 样本采集后使用的条码必须为抗冻条码，并且粘贴牢固，确保在运输、检测、储存过程中不会脱落或字迹模糊不清。

三、样本采集

1、采样器：医用一次性采血针、10 mL EDTA抗凝管、灭菌棉签、止血带、消毒液。

2、采集操作：

全血标本的采集—使用普通的10mlEDTA采血管：

严格按照《实验室操作技术规范》的要求采取10 mL孕妇外周血，采血后请立即缓慢颠倒6次使血液与管内成分混匀（如图1），拖延颠倒混匀时间可能会造成检测失败。混匀后立即放直立于4℃冰箱内，并在6个小时内进行血浆分离。按照无创产前检测血浆分离要求操作（见附件），分离后样本放入-20℃冰箱储存。血浆样本需在0℃以下冷冻运输，不应超过72小时

图1. 颠倒混匀示意图

【注意事项】

1.不可使用肝素抗凝的采血管进行取样.。

2.颠倒混匀时动作应轻柔，防止溶血，影响检测结果的准确性。

3.禁止将普通EDTA抗凝样本和血浆样本在室温状态下放置。

4.全血离体后必须在6小时进行血浆分离，防止母体有核细胞破裂，增加检测背景，影响检测结果的准确性

5.未采血的Streck Cell-Free DNA BCT储存温度为18-25℃，禁止将已采血的Streck Cell-Free DNA BCT 存放于4℃或以下。

四、标本递送

1．甲方采集血标本后，4小时内连同送检单、知情同意书、知情同意书补充条款（如适用），该部分资料医院均需留有备，一同送到旗县区约定的标本收集机构（有能力分离血浆的医疗机构）进行血浆分离及保存。（血浆分离操作见附件）

2．血浆样本应保存于标准的2mL EP 管，并用封口膜密封管口，以防止样本溢出；

3．寄送包装箱应为壁厚6cm 以上的硬质泡沫箱，泡沫箱内容量视样本量可适当调整；

4．血浆样本寄送采用干冰运输，寄送所用的干冰量为10 公斤/2-3 天，15 公斤/4-5天，可根据运输时间长短适当增加用量。保证样本到达生产地，干冰有剩余。

5．将复核后需寄送的血浆样本及收集的白细胞管放入冻存盒内，并用保鲜袋将冻存盒封好，所有将纸质送检单、知情同意书装入自封袋中封好，置于泡沫箱内最上层

6．乙方按规定的时间到旗县约定的标本收集机构收取标本

附件

血浆分离步骤

一、低温离心

血样离心（15min）：将采血管按编号顺序放入离心桶中，用托盘天平严格配平，将配平好的离心桶放在位置相对的吊篮中，设置离心机“xg：1600xg，tem：4℃time：10 min ，ACC：5。按“star”开始第一次离心，并在血浆制备中“第一次离心”下打“√”。

在离心10分钟内做其他准备工作：清洁超净台，给垃圾桶套上黄色医疗垃圾袋、准备2ml无菌EP管，根据每份血样3个2mlEP管准备，将EP管的开口朝内放到双面板上，同一血样标记相同的标号1、1、1、2、2、2……20、20、20。同样标号的管子并排放置，根据标号顺序依次排列。

分离血浆：离心完成后从离心机中取出样本，此时样本分为三层，下层为红细胞层，中间为白细胞和血小板，上层为我们所需要的血浆，将采血管按编号从小到大顺序放到采血管架的相应位置。用移液器将上清液移到与采血管编号对应的其中2个EP管中，每管2ml共约4ml。

吸取白细胞层：血浆分离后吸取中间白细胞1ml到与采血管编号对应的另1ml个EP管中(贴上与申请单一致的条形码)。

【注意事项】

血样离心后已经分层，从离心机中取出时要轻拿轻放，不可倾斜采血管，避免破坏分层。

吸取血浆时吸头要垂直伸入采血管，从液面下3-6mm处吸取，接年白细胞层时要缓慢吸取，为确保不吸到白细胞层，可留有3mm左右血浆不吸。

吸取白细胞层时，需将吸头贴近中间层缓慢吸取，避免吸取过多的红细胞和血浆。

二、高速离心

血浆离心（15min）：将EP管中体积接近的血浆放在微量台式离心机转子的相应位置，盖上离心机黄色内盖，并通过向上提内盖确保盖好，设置离心机参数“xg： 6000xg， time：10 min ，按“star”开始第二次离心，并在血浆制备中“第二次离心”下打“√”。

在离心的10分钟内做其他准备工作：根据每份血样4个无菌2mlEP管准备，将EP管的开口朝内放到双面板上，同一血样标记相同的标号1、1、2、2……20、20。同样标号的管子并排放置，根据标号顺序从小到大依次排列。

提取上清液（30min）：吸取离心所得的上清，即得到较为纯净的血浆，将血浆按每管不少于1ml分装于对应编号的2mlEP管中（EP管上贴上与申请单一致的条形码）。

血浆QC检测（2min）：审核血浆的体积与溶血情况，血浆体积少于2ml判定为不合格；根据《样本接收规程》中溶血标准判断是否溶血，如溶血则为不合格，需要重新采集样本。不合格样本需在《血浆制备单》的备注栏中注明此样本的不合格信息，并在LIMS系统中填写不合格及不合格理由，然全报告实验室负责人，发送重采血报告。

【注意事项】

分装血浆时，需将同一样本的血浆分装在具有相同标号的EP管内，切勿弄混。

吸取血浆时，可从沉淀物的对立面缓慢吸取，避免吸头沾到沉淀或吸到沉淀。

三、血浆样本保存

血浆分离后与白细胞管立即低温保存，一周之内-20 ℃条件下暂存：长期保存需置于-80 ℃冰箱中。血浆不可常温保存。

血浆样本避免反复冻融。