肿瘤学研究常用实验技术及方法

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肿瘤学研究常用实验技术及方法复习题

1.表观遗传的科学内涵

三个特点？

a)基因功能完全、稳定地丧失，有遗传性；

b)细胞外环境长期作用的结果，有可逆性；

c)分析方法灵敏，可检出少数细胞的变化

2.

DHPLC

3.

i.

ii.

梯度中

iii.

SDS-

iv.

1.丙烯酰胺有神经毒性，可经皮肤、呼吸道等吸收，故操作时一定要注意防护。

2.制备聚丙烯酰胺凝胶时，小心防止凝胶渗漏。

3.蛋白加样量要合适，加样量太小，条带不清晰，加样量太大，则泳道超载，条带过宽而重

叠，甚至覆盖至相邻泳道。

4.对多种蛋白质而言，电流大则电泳条带清晰，但电流过大，玻璃板会因受热而破裂，故适

合的电流为玻璃板微热。

5.胶转膜后应在膜上标记好正反面及电泳方向。

6.电转移时应注意勿将滤膜和胶的位置放反，而且滤纸、滤膜和胶应等大，以免短路。

4.组织培养/基因的克隆、转化与表达

i.请列举至少3种流式细胞仪的用途?

1.定量检测细胞膜、细胞质和细胞核中的各种细胞成分

2.研究细胞的各种功能状态(细胞增殖，细胞凋亡、细胞分化、酶活性、细胞膜通透性、

氧化还原状态、吞噬性等)。

3.定量检测血清中的各种可溶性生物分子成分

临床中应用：1.白血病和淋巴瘤的免疫分型

1.

2.

3.细胞

磷酸酶（phosphatase）

激酶（Kinase）

连接酶（Ligase）

5.生物质谱简介

生物质谱在蛋白组学中的应用？

1.ProteinsMWmeasurements；

2.ProteinIdentification；(ID)

3.Peptideandproteinprofiling；

4.ImagingMS；

5.ProteinPTMs；5.ProteinQuantification

6.《常用电泳技术基本原理及应用》课程复习题

i.简述形成不连续PAGE电泳的样品浓缩效应的4个不连续性。

1.凝胶的不连续性-浓缩胶4%大孔径，分离胶-20%小孔径

2.缓冲离子的不连续性-浓缩胶αCl->α蛋>αGly;mclαCl->m蛋α蛋>mGlyαGly；分离

胶αCl->αGly>α蛋;mclαCl->mGlyαGly>m蛋α蛋

3.PH的不连续性电极缓冲液PH8.3;浓缩胶PH6.7；分离胶PH8.9

4.电位梯度的不连续性浓缩胶-较高的电位梯度；分离胶-均一电位梯度

ii.双向电泳的定义并简述以细胞为样本做双向电泳的实验步骤。

，然后

；

6.染色

作

如beta-巯基乙醇、DTT则使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。蛋白被解聚为组成它们的多

肽链，解聚后的氨基酸侧链与SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS胶束，所带负电荷大大超过了天然蛋白质所有的电荷量，因而掩盖了蛋白质原有电荷的差异，电泳迁移率主要决定于蛋白质或亚基分子量的大小。

7.激光扫描共聚焦荧光显微镜原理与应用

i.试述激光扫描共聚焦显微镜成像基本原理及其在生命科学中的应用。

工作原理：利用激光器发出的激光做光源，激光经光源针孔形成电光源，激发光透过激发波长滤片后到达分光镜，由于分光镜能反射波长较短的激发光，而透过波长较长的发射光，所

以激发光在分光镜处被反射，透过物镜，在扫描装置和控制装置的控制下在荧光标记标本的焦平面上逐点扫描，荧光标记被激发出的发射光经原来入射光路直接反向回到反光镜，透过反光镜后再通过检测针孔，随后通过发射波长滤片光被光电倍增管逐点或逐线检测接收，并转换为数字信号传输至计算机，最终在计算机显示屏上形成焦平面的图像。

应用：原位检测细胞中的核酸；原位检测蛋白质及其他分子；检测细胞凋亡；检测细胞器；

活细胞或组织内游离钙离子的分布和浓度；药物进入细胞的动态过程、定位分布及定量；荧光漂白丢失和恢复的测量；荧光能量共振转移的测量。

ii.

iii.

；

漂洗310

室

漂洗3

PBS 漂洗3次，每次10分钟；9.Hoechst3332或者DAPI复染细胞核5分钟，PBS漂洗1次，10分钟，再用蒸馏水洗1分钟，除去结晶盐；10.在载玻片上加一滴甘油/PBS封闭剂，将含细胞的盖玻片那一面朝向载玻片放置，周围再用指甲油固定。

iv.分别简述免疫荧光技术中甲醇和甲醛固定样本的基本原理。

甲醇：抽提脂类，使细胞脱水，同时将细胞结构蛋白沉淀。甲醛：通过游离氨基酸形成分子间桥连，从而产生一种抗原相互连接的细胞内网络结构。交联剂比有机溶剂更易于保持细胞的构造，但会下降一些细胞组分的抗原性，需增添一个通透步骤以使抗体可进入标本。

8.生物医学文摘数据库介绍

1)简述PubMed的重要检索功能

i.特征栏检索功能(Limits)

ii.超级链接功能(RelatedCitations,LinkOut)

iii.高级检索功能（Advancedsearch）

iv.词汇（主题词）自动转换功能(MeSHDatabase)

v.基于临床方法学检索(ClinicalQueries)

2)简述GoPubMed的几个主要统计分析功能

9.

1）.

⏹

⏹

⏹

⏹

2）.

⏹

⏹

⏹

⏹

3）.

*最大限度稀释抗体

*BSA阻断

*二抗同种属正常血清阻断

*5%脱脂奶粉

4）.免疫组化染色阳性的判定标准是什么？

⏹通常以阳性细胞占所有细胞的10%以上定为阳性，如散在表达或表达量低时，也有选择5%阳性为阳性标准。

⏹根据染色的强度，分为+，++，+++。