糖蛋白分析方法

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高效阴离子交换色谱分析糖蛋白类低聚糖

TN42高效阴离子交换色谱分析糖蛋白类低聚糖前言再生体衍生糖蛋白类在治疗剂应用方面的发展导致了表征碳水化合物结构方法的需求增长。

高效阴离子交换色谱与脉冲安培检测（HPAE-PAD）技术可以直接快速的定量未衍生的碳水化合物样品，所以在表征其结构方面被广泛应用。

HPAE-PAD可以根据所带的电荷分离低聚糖，而且还可以根据糖的大小、组成和单糖单元的连接来分离带相同电荷的低聚糖。

低聚糖可以通过与标准的共淋洗或通过保留时间的比较来进行表征。

HPAE-PAD方法中低聚糖结构之间的经验关系和色谱保留在前面已有描述[1]。

HPAE-PAD分离得到的低聚糖通常在柱后收集而后用质谱和NMR作进一步的结构分析。

在药物和生物技术工业中，HPAE-PAD技术在糖蛋白类碳水化合物结构方面的应用包括：1），在初始表征时用来分离和鉴别存在的低聚糖结构；2），监测糖基化的一致性，鉴别细胞培养条件或生产过程改变引起的糖的变化；3），监测不同的细胞系表达引起的糖基化变化。

附录中列出了HPAE-PAD在糖蛋白类谱中的应用文章。

本技术注解描述了HPAE-PAD方法应用于一家生物技术公司质量控制测定N－牛胎球蛋白低聚糖方法的准确度、精密度、线性和检测限。

这些结果可以为HPAE-PAD绘制低聚糖谱的方法验证提供指导。

实验部分Dionex DX-500系统包括：LC30柱温箱；GP40梯度泵，有在线脱气装置；ED40电化学检测器，金电极；AS3500自动进样器或8880自动进样器；PeakNet色谱工作站试剂与标准去离子水，色谱级；50%（w/w）氢氧化钠（Fisher Scientific）；胎球蛋白低聚糖糖醇标准（Dionex，P/N43064）；脱唾液酸和二唾液酸半乳糖化双触角低聚糖标准（Oxford GlycoSciences）条件柱子：CarboPac PA-100分析柱（4×250mm），带保护柱检测：ED40电化学检测器，金电极进样体积：10μL波形：碳水化合物波形（参见TN21）淋洗液：A：100mM NaOH；B：100mM NaOH/0.5M NaAc流速：1mL/min方法：时间（min）%A %B初始99 11 0.0 991 0.2 9910 10 9045 50 55100 50.1 0100 55 01 55.1 991 70 99本分离方法中的初始条件包括1%B，是为了防止柱子从氢氧化钠换成醋酸钠淋洗液时偶尔产生的基线干扰。

糖化仪硼酸亲和层析法

糖化仪硼酸亲和层析法糖化仪硼酸亲和层析法是一种常用于糖蛋白或糖类分析的方法。

它利用硼酸与糖分子之间的特殊相互作用进行分离和纯化，具有高选择性和高效率的特点。

本文将介绍糖化仪硼酸亲和层析法的原理、步骤和应用。

一、原理糖化仪硼酸亲和层析法的原理是基于硼酸与糖分子之间的酯键形成的稳定络合物。

硼酸分子具有两个较强的亲电子中心，可以与糖分子的羟基形成稳定的酯键。

这种硼酸与糖分子之间的络合作用是可逆的，在适当的条件下可以实现糖分子的选择性结合和洗脱。

二、步骤糖化仪硼酸亲和层析法的步骤主要包括样品的制备、样品的加载、洗脱和分析。

1. 样品的制备：将待分析的样品进行预处理，去除干扰物质，并使糖分子处于较好的溶解状态。

2. 样品的加载：将处理后的样品加载到含有硼酸亲和层析介质的柱上，糖分子与硼酸形成络合物，通过静态或动态方式进行。

3. 洗脱：通过改变洗脱缓冲液的条件，如pH值、离子强度等，使络合物发生断裂，糖分子被洗脱出来。

4. 分析：收集洗脱液中的糖分子，进行浓度测定、纯度分析或其他下游实验。

三、应用糖化仪硼酸亲和层析法在糖蛋白或糖类分析中具有广泛的应用。

1. 糖蛋白分析：糖蛋白是一类具有糖基化修饰的蛋白质，糖化仪硼酸亲和层析法可以用于糖蛋白的纯化和富集。

通过该方法可以获得高纯度的糖蛋白样品，用于进一步的结构和功能研究。

2. 糖类分析：糖类是生物体内重要的能量来源和信号传递分子，糖化仪硼酸亲和层析法可以用于糖类的分离和定量。

通过该方法可以实现对复杂糖类混合物的高效分离和纯化，为糖类的结构和功能研究提供可靠的样品。

3. 生物药物分析：糖化仪硼酸亲和层析法在生物药物的糖基化修饰分析中也具有重要的应用。

生物药物的糖基化修饰对其活性、稳定性和免疫原性等性质有着重要的影响，通过该方法可以对生物药物的糖基化修饰进行定量和质量控制。

糖化仪硼酸亲和层析法是一种用于糖蛋白或糖类分析的重要方法。

它具有高选择性和高效率的特点，能够实现糖分子的选择性结合和洗脱。

表面等离子体共振成像法用于糖蛋白分析

点样所用蛋白质溶液均用ｐ７８的磷酸缓冲溶液（质量分数为１％的甘油）Ｈ＝．含０配制．将上述金膜密
闭反应８ｈ后，１０ｍｌＬ的乙醇胺溶液（Ｈ＝．）用．ｏ／ｐ８５浸泡３ｉ，０ｍｎ然后用水清洗，气吹千．将此固氮
定有蛋白质的传感膜安装到聚四氟乙烯的流通池中，２Ｌｍｎ流速下，次通入５ｏＬ三羟在０￣／ｉ依０ｍｍｌ／
收稿日期：０８）－８２０４２２．基金项目：国家科技部科研项目基金（批准号：０６Ａ０Ａ９２０Ｃ７３０）国家自然科学基金（２０ＢＫ３０，０２Ｂ１８３、批准号：０３００和中国科２４５３）
酸（１Ｍｅｃｐｕｄｃｎｉａｉ，Ａ）自Ａｄｉ１一ｒ‘ｔｎｅａ０ｃｃＭＵ购ｄ０ｄｌｒｈ公司（国密尔沃基）１乙基一一３二甲氨基丙基）ｃ美；一３（．碳二亚胺盐酸盐［一ｔｙ一一３ｄｍｔｙ— ｎｐｏｙ）ａｂｄｍｉｙｒｃｌｒ，ＥＡ、鸡卵白蛋白１Ｅｈｌ（－ｉｅｈｌｍｉｏｒｐ１ｃｒｏｉｄｈｄｏｈｏｉＤＣ］３ａｉｅｃ（ｖｌｕｉ，Ａ）免疫球蛋白ＧＩｍｎｇｂｌｇ、溶菌酶（ｙｏｙｅＹ）ＣｎＡ均购自ＯａｍｎＯ、ｂ（ｍｕｏｌｕｉＧ，ＩＧ）ｏｎＬｓｚｍ，ＬＺ和ｏ
维普资讯
Ｖ０．１２９
２００８年９月

糖蛋白分析

糖蛋白分析糖基化修饰不仅影响蛋白质的空间构想、生物活性、运输和定位，而且在分子识别、细胞通信、信号转导等特定生物过程中发挥着至关重要的作用。

随着蛋白药物的迅速发展，单抗药物迅速发展，作为大分子糖蛋白药物，单抗药物的糖基化修饰对其稳定性、有效性和安全性等各方面均有不同程度的影响，因此对其糖基化修饰进行全面表征具有十分重要的意义。

对于单抗药物这种大分子蛋白类药物要对能够影响其有效性及安全性的初级或二级结构进行评价。

因此，对单抗药物糖基化修饰的定性、定量研究对药物研发、改进以及安全用药等都具有十分重要的意义。

百泰派克提供以下糖蛋白分析服务糖型分析糖基化位点分析糖基化位点及该位点糖型分析糖蛋白分析一站式服务您只需下单-寄送样品百泰派克一站式服务完成：样品处理-上机分析-数据分析-项目报告How to order?关于百泰派克北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）成立于2015年，是国家级高新技术企业，业务范围主要围绕蛋白和小分子代谢物检测两大板块，从事蛋白质和小分子代谢物的理化性质分析及结构解析等相关技术服务，为客户提供高性价比、高效率的技术服务。

深耕蛋白鉴定、定量蛋白组（iTRAQ/TMT、label free、DIA/SWATCH）、PRM靶蛋白定量、蛋白和抗体测序、蛋白修饰（二硫键、糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化等）、靶向和非靶向代谢物检测。

百泰派克生物科技检测平台包括：检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。

公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室，以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。

目前已与国内外多家药物研发企业，以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系，协助客户发表了多篇中英文文章，包括Cell等多家高水平期刊。

糖蛋白组学

糖蛋白组学
糖蛋白即发生了糖基化修饰的蛋白质，糖蛋白组学是指在组学水平上研究糖蛋白。

百泰派克生物科技提供基于质谱的糖蛋白组学研究服务。

糖蛋白组学
糖蛋白是指含有共价结合于氨基酸侧链的寡糖链（聚糖）的蛋白质。

碳水化合物以共翻译或翻译后修饰的方式附着到蛋白质上的过程称为糖基化，经过糖基化后的蛋白质也就是糖蛋白。

糖基化修饰可以影响蛋白质的结构、生物活性、运输、定位和功能等，因此研究糖蛋白是十分有意义的。

糖蛋白组学是蛋白质组学中的一部分，主要是从整体上研究分析一个细胞或组织等样本中的糖蛋白，包括糖蛋白的糖型分析、糖基化位点分析以及定量分析等。

糖蛋白组学质谱
随着质谱分辨率的提高和生物信息学的发展，质谱在糖蛋白组学研究中可以用于糖蛋白的糖型分析、位点分析和定量分析。

糖蛋白根据其糖链结构及糖基化位点主要包括N-糖蛋白与O-糖蛋白两大类。

目前，基于质谱的糖型相对含量分析主要针对于N-糖基化蛋白，因为没有通用的酶可以将各种形式的O-糖全部切下来。

基于质谱的糖基化位点分析，通过检测带同位素标记的糖基化修饰肽段找到蛋白发生糖基化的位点，可以分析N-糖蛋白也可以分析O-糖蛋白。

定量分析则是在糖基化位点分析的基础上对糖蛋白进行定量。

糖蛋白组学。

β2糖蛋白I纯化及其稳定性分析

ｐｒｙａｄｓａｉｔ．Ｍｅｈｄ：ｐＰａｕｆｄｂｐｒｅｈｒｓＬｒｆｎｔｈｏｔｇａｈｕｔｎｔｂｌｙｉｉｔｏｓ２１ｗｓｐｒｅｙＨｅａｉＳｐａｏｅＣ－ＢａｆｉｃｒｍａｏｒｐｙＧｉｉｎｉｙ
Ｊ１０８ｕ．２０
Ｉ３蛋白Ｉ化及其稳定性分析２糖纯
黄宏亮，周红，王婷，文霞，李娜，石王海波
（苏大学基础医学与医学技术学院，江苏镇江２２１）江正常人混合血浆中纯化获得ｐ糖蛋白ＩｐＧＩ．从：（Ｐ）并对提纯蛋白的纯度及稳定性进行分析。方，
ｆｌｗｎｙＨＣ０ｒｃｐｔｉ．Ｔｅｐｒｙｏｔｅｉｌｔ２ＰａｅｔｅｙＳＳＰＧｏｌｉｇｂ１４ｅｉｉｔｎｈｕｔｆｈｓａｅｐ１ｓｉｎｉｄｂＤ —ＡＥ，ＷｅｔｒｏｐａｏｉｏｄＧｗｄｆｉｓｎｅ
Ｐｕｒｆｃｔｏｆ－ｌｃｐｏｅｎＩａｎｌｓｓｏｔｔｂｌｔｉａｉｎｏｇｙｏｒｔｉｎｄａａｙｉｆｉｓｓａｉｉｙｉ
ＨＵＡＮＧｎｇｌａｇ，ＺＨＯＵｎＨｏ —ｉｎＨｏｇ，ＷＡＮＧｇ，Ｓｎ— ｉＴｎＨＩＷｅｘａ，ＬＩＮａ，ＷＡＮＧｌｂＨａ — ｏ
９％）２Ｐ在浓度低于０８ｍｌＬ的ＮＣ溶液中，５。ｐＧＩ．ｏ／ａ１置室温及４ ℃保存易降解变性，但在１６ｍｌＬＮＣ溶液中于室．ｏ／ａ１温及４ ℃保存６０天均未见蛋白明显降解。结论：利用本法能够得到高纯度的ｐＧＩ在使用和保存ｐＧＩＰ，Ｐ时要考虑到其降解的可能性，注意保存条件，必要时冻干保存。［关键词］ｐ糖蛋白Ｉ蛋白纯化；白稳定性；蛋［中图分类号］Ｒ４４６［文献标志码］Ａ［文章编号］１７ —７８（０８００４６１７３２０）４— ３４—０４０

药典对糖蛋白的要求

药典对糖蛋白的要求
1. 纯度要求，药典对糖蛋白的纯度要求较高，通常要求达到一定的纯度水平，以确保其质量和安全性。

纯度的评估可以通过各种分析方法，如凝胶电泳、质谱等进行。

2. 含量测定，药典要求对糖蛋白中的有效成分进行含量测定，以确保其符合规定的标准。

常用的测定方法包括高效液相色谱法（HPLC）等。

3. 残留物限量，药典对糖蛋白中的残留物进行限定，包括有害物质、杂质和其他不纯物质等。

这些限量通常是根据国际标准和相关法规制定的，以确保产品的安全性和质量。

4. 理化性质，药典对糖蛋白的理化性质也有一定的要求，包括溶解性、稳定性、pH值等。

这些要求可以确保糖蛋白在制剂过程中和使用过程中的性能和稳定性。

5. 微生物限度，药典要求对糖蛋白产品进行微生物限度测试，以确保其符合卫生要求。

常用的微生物限度测试包括总菌落计数、大肠杆菌和霉菌等。

6. 标签声明，药典要求对糖蛋白产品的标签进行准确的声明，包括产品名称、规格、生产厂家、使用方法等。

这些信息对用户正确使用产品非常重要。

总之，药典对糖蛋白的要求主要包括纯度、含量测定、残留物限量、理化性质、微生物限度和标签声明等方面，以确保产品的质量和安全性。

这些要求是为了保护消费者的健康和权益，并确保药品的合规性和有效性。

糖蛋白质谱解析

糖蛋白质谱解析
糖蛋白质谱解析（Glycoprotein Mass Spectrometry Analysis）
是一种用于研究糖蛋白质结构和功能的分析方法。

糖蛋白是一类含有糖基化修饰的蛋白质，这些糖基化修饰对于蛋白质的结构和功能具有重要影响。

糖蛋白质谱解析的主要步骤包括样品制备、质谱分析和数据解析。

首先，糖蛋白质样品需要经过蛋白质的提取和纯化步骤。

然后，利用质谱仪器对样品进行分析，常用的质谱方法包括质谱-质谱联用、离子迁移谱和质谱图谱等。

最后，对质谱数据
进行解析，包括识别糖基化修饰的位置和类型、确定糖基化的结构等。

糖蛋白质谱解析可以提供关于糖蛋白质结构和功能的重要信息。

通过分析质谱数据，可以确定糖基化修饰的类型和位置，揭示糖蛋白质的糖基化异质性。

此外，还可以研究糖蛋白质的糖基化变化与生物学过程的关联，探索糖蛋白质在疾病发展中的作用等。

总之，糖蛋白质谱解析是一种重要的分析方法，可以用于深入研究糖蛋白质的结构和功能，对理解生物学过程和疾病发展具有重要意义。

抗β2糖蛋白1 IgG抗体检测试剂盒化学发光免疫分析法

抗β2糖蛋白1 IgG抗体检测试剂盒化学发光免疫分析法抗β2糖蛋白1（anti-β2GP1）是一种特异性IgG抗体，存在于自身免疫性疾病、血栓性疾病、胎儿死亡等多种疾病中。

因此，对其进行检测具有重要的临床意义。

近年来，随着技术的发展，化学发光免疫分析法（CLIA）作为一种快速、准确、高通量的实验方法，已经被广泛应用于各种免疫学检测中，包括抗体检测。

本文将介绍一种基于CLIA的抗β2GP1 IgG抗体检测试剂盒，并探讨其在临床应用中的优势和局限性。

一、技术原理抗β2GP1 IgG抗体检测试剂盒采用了CLIA技术，其原理是将在β2GP1的磷脂idiosyncratic epitope（IPE）区域结合的IgG抗体与放射性标记的荧光素结合酶（HRP）标记的抗人IgG抗体结合，形成抗体复合物。

随后，加入荧光素基质，使荧光素被激发并发射荧光信号，经荧光计检测荧光强度，根据荧光强度确定样品中抗β2GP1 IgG抗体的含量。

二、试剂盒组成本试剂盒包含以下试剂：1.微孔板：96孔，预包被β2GP1抗原。

2.标准品：有0 u/ml、10 u/ml、50 u/ml、100 u/ml和200 u/ml五个浓度，并加有浓度40 u/ml的抗β2GP1抗体，用于制作标准曲线。

3.检测试剂盒：标记有HRP抗体的荧光素荧光素，缓冲液，稀释液等。

4.负对照血清：用于负对照。

5.阳性对照血清：用于正对照。

三、检测步骤1.操作人员应穿戴口罩、手套，并按照规定程序进行操作。

2.将微孔板放在孔板架上。

3.标准品制备：将标准品依次加入标签为1#-6#的微孔板中，每孔加50 μl，最后加入50 μl稀释液，混合均匀。

4.待试样品加入：将待测样品加入标签为7#-12#的微孔板中，每孔加50 μl，最后加入50 μl稀释液，混合均匀。

5.添加检测试剂：将添加到所有孔中的检测试剂加入并混匀后，在37℃下孵育，30分钟后加入底物。

6.测量：在顶部加入发光素荧光素并孵育10分钟后，用荧光计检测荧光强度。

糖蛋白的结构_功能及分析方法_武金霞

糖蛋白的结构、功能及分析方法武金霞　赵晓瑜(河北大学生命科学学院,保定071002)摘　要:　综述了糖蛋白研究的重要意义、糖肽键的主要类型、糖链的主要类型、糖蛋白结构研究的一般策略及结构分析的最新进展。

关键词:　糖蛋白　糖链　结构分析Structure Function and Analysis Methods of GlycoproteinWu Jinxia Zhao Xiaoyu(College of Life Scienc e Hebei Un iversity ,Baoding 071002)Abstract :　In this paper ,the impo rtance of gly coprotein research ,the types of gly co -peptide bonds ,the types of oligosaccharides chain ,the general methods of g lycopro tein structure research ,and the prog ress of analysis methods in this filed were summarized .Key words :　G lycopro tein Oligosaccharide Structure analy sis1　糖蛋白的重要作用糖蛋白(g lycopro tein )是指由比较短,往往带分支的寡糖与多肽链某些特殊部位的羟基或酰氨基共价连接而成的一类结合蛋白质。

细胞中的糖蛋白有可溶性的,也有与膜结合的不溶形式,生物体内大多数蛋白质是糖蛋白[1]。

糖蛋白中蛋白质是生理功能的主要承担者,糖链对蛋白质的功能起修饰作用,即糖链影响蛋白质的整体构象,影响蛋白质的折叠、溶解度、半衰期、抗原性及生物活性等,糖链与蛋白质的相互作用介导细胞的专一性识别和调控各种生命过程如:受精、发生、发育、分化、神经系统、免疫系统恒态的维持等,在炎症及自身免疫疾病、老化、癌细胞异常增殖及转移、病原体感染等过程中起重要作用[2,3]　。

基于液相色谱-质谱的血清糖蛋白质组定量分析

基于液相色谱-质谱的血清糖蛋白质组定量分析胡丹阳;蒋碧云;王献;刘晓慧【摘要】糖尿病作为最常见的代谢疾病之一,是一种受环境和遗传因素影响的多因素疾病.糖基化可导致蛋白功能多样性,对重大疾病、免疫系统有着深远影响.本实验通过两性离子亲水相互作用色谱(zwitterionic hydrophilic interaction liquid chromatography,ZIC-HILIC)富集技术结合微升级高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法,对6例糖尿病人和6例正常人的血清中的蛋白和糖蛋白进行了非标记定量分析,定量了65个差异蛋白和24个差异表达的糖蛋白.通过DAVID软件对这些差异蛋白和差异糖蛋白进行功能富集分析,进一步了解它们的细胞定位、分子功能和生物过程.该研究揭示了糖尿病发病过程中糖蛋白的变化,可为疾病的发病机制和临床诊断提供数据参考.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2019(040)004【总页数】11页(P314-324)【关键词】糖尿病;血清糖蛋白;非标定量;质谱【作者】胡丹阳;蒋碧云;王献;刘晓慧【作者单位】中南民族大学化学与材料科学学院,国家民事委员会分析化学重点实验室,湖北武汉430074;复旦大学生物医学研究院,上海200032;中南民族大学化学与材料科学学院,国家民事委员会分析化学重点实验室,湖北武汉430074;复旦大学生物医学研究院,上海200032【正文语种】中文【中图分类】O657.63糖基化是一种具有重要生物学功能的蛋白质翻译后修饰。

与许多其他翻译后修饰不同，蛋白质的N糖基化的主要结构N-聚糖是由许多单糖单元组成，且呈非线性排列，具有结构多样性，研究蛋白质的糖基化对了解其生物学结构和功能有着重要意义，如对糖蛋白和糖基化位点、对糖型进行鉴定等[1-3]。

研究表明[4-7]，糖蛋白参与了很多重要的生物学过程，包括细胞粘附、分子运输、受体激活和特定的蛋白功能等，许多疾病的病理过程与糖蛋白表达量的变化密切相关。

糖蛋白结构质谱解析的样品前处理

ｌｂｌｈｌｃｐｐｉｅｏｓｒｄｓｅｏｉａｅ（Ｒａｅｔｅｇｏｅｔ．ＨｒｅａｉｐｒｘｄｙｄｈｓＨＰ）ａｄＲａｅＢｗｅｅｕｉｓｄｔｐｉｚｎＮｒｔｉｏｏｔｓｌｅｍｉｅ
ｔｅｃｈｏｎｄｔｏｎｓｏａｐｌｅｐｒｅｓｎｉｉｆｓｍｅｐｒ — ｏｃｓｉｇ．Ｔｈｅｅｆｃｓｏｈｅｃｆｅｔｆｔｏｎｄｔｏｎｓｗｅｅｉｅｔｇｔｄｓｐａｉｉｒｎｖｓｉａｅｅ－
周玮，刘晓慧，周新文，中华莉，杨艽原
（旦大学生物医学研究院，上海２０３）复００２
摘要：于高分辨率、精度、灵敏度及良好表现力的多级质谱，基高高以标准糖蛋白辣根过氧化物酶（Ｐ）核糖核酸ＨＲ、
ＺＯＵｅ，ＬＩＸｉｏｈ，ＺＯＵｎｅＨＷｉＵａｕｉＨＸｉｗｎ，ＳＨＥＮｕｌ，ＹＡＮＧｎｇｕａＨａｉＰｅｙｎ
（ｎｔｔｅｆＢｉｍｅｉａｃｅｃｓＦｕａｎｖｒｉｙ，ｈｎｈｉ２０３ＩｓｉｓｏｏｄｃｌＳｉｎｅ，ｄｎＵｉｅｓｔＳａｇａ００２，Ｃｉａｕｔｈｎ）
ＨＲＰ，ＲＮａｅＢｉｓｉｉｈｅｏｐｏｔｉｓｓＣ，ＨＲＰｄｉｅｔｏｉｈｔｙｉ， — １ｆｓｄｇｅｔｏｎｗｔｎｄｒｅｎａｅＬｙ — ｇｓｉｎｗｔｒｐｓｎ１２ｈｏ５ｄｉｅｔｏ，５ｇｓｉｎ０％ａｅｏｎｉｒｌ５ｃｔｔｉｅ－％ｔｉｕｏｒａｔｃｃｄｏｈｅｅｒｔｏｓｕｉｎ．ｓｎｄｉｈｐｏ — ｒｆｌｏｃｅｉａｉｆｔｘｔａｃｉｎｏｌｔｏａｗｃｓｔ

糖蛋白结构质谱解析的样品前处理

深入分析［ )! . )$ ］。目前这些研究侧重于糖链部分的分析，多采用繁琐复杂的糖肽富集方法和标记技术，较少对实际样品直接进行胶上酶解和糖基化分析。 * * 本文通过实验建立了糖蛋白酶解后不经糖肽富集标记、简单易操作的直接胶上酶解（或溶液酶解） -
收稿日期： !""# -"% -)& 第一作者：周 * 玮，女，硕士研究生， ."* ：（ "!) ） %+!’#%’% ； /-%01* ： "23)43)5$!& , 6%01*+ 2)%+ 通讯联系人：杨芃原，男，教授， ."* ：（ "!) ） %+!’#+)& ； /-%01* ： #77086 , 95:08+ ":5+ 28+ 基金项目：国家自然科学基金项目（ ,)+ !"") ;<%)"!"! ）和国家 “ -&’ ” 项目（ ,)=+ !""! <>;)) >)) ， !""+ <>#)) >)$ ） +
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糖蛋白结构质谱解析的样品前处理

糖蛋白糖基化位点及糖型的多重质谱分析

糖蛋白糖基化位点及糖型的多重质谱分析于晶;李晓敏;李红梅;张庆合;李秀琴;邵淑丽【摘要】以糖蛋白核糖核酸酶B(RNase B)为研究对象,采用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)、傅里叶变换离子回旋共振质谱(FT-ICR-MS)的碰撞活化解离(CAD)和电子转移解离(ECD)多种质谱技术对RNase B的糖肽的完整信息进行解析.通过多种质谱相互验证,确定了RNase B的糖肽组分的氨基酸序列为SRNLTK、糖链结构为(HexNAc)2(Hex)5-(HexNAc)2(Hex)9及糖基化位点为第34位氨基酸残基.本方法为糖蛋白结构的全面解析提供了一种快速、有效、全面的研究思路.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2015(043)004【总页数】6页(P564-569)【关键词】基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱;傅里叶变换离子回旋共振质谱;碰撞活化解离;电子捕获解离;核糖核酸酶B【作者】于晶;李晓敏;李红梅;张庆合;李秀琴;邵淑丽【作者单位】齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,齐齐哈尔161006;中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所,北京100029;中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所,北京100029;中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所,北京100029;中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所,北京100029;中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所,北京100029;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,齐齐哈尔161006【正文语种】中文蛋白质的糖基化是糖链在糖基转移酶作用下结合到蛋白质特定氨基酸残基上[1],是蛋白质的一种重要的翻译后修饰方式[2]。

目前,已知哺乳动物蛋白质中至少有1/2是糖蛋白,广泛分布于各种组织和细胞中[3]。

糖蛋白糖链的结构多样,功能复杂,并且由于生物合成的非模板性和结构的微不均一性,使糖链具有了更多的分支结构、连接方式和空间构象,因此,修饰后的糖蛋白会产生多种生物活性,对生物体的生长、发育甚至对生物体的生存起着至关重要的作用[4]。

药典对糖蛋白的要求

药典对糖蛋白的要求
1. 质量标准，药典对糖蛋白的质量标准通常包括其纯度、含量、溶解性、pH值、残留溶剂和重金属等方面的要求。

这些标准旨在确
保糖蛋白的质量符合药品的安全性和有效性要求。

2. 检测方法，药典规定了用于糖蛋白质量控制的检测方法，例
如高效液相色谱法（HPLC）、氨基酸分析、核磁共振（NMR）和质谱等。

这些方法可用于确定糖蛋白的结构、组成、纯度和含量等关键
参数。

3. 相关规定，药典还可能对糖蛋白的生产、储存和运输等方面
提出相关规定。

例如，要求在生产过程中采用合适的工艺控制和质
量管理体系，确保糖蛋白的稳定性和一致性。

此外，药典还可能对糖蛋白的特定应用提出额外的要求。

例如，如果糖蛋白用于制备药物，药典可能要求糖蛋白必须符合药物的微
生物限度、内毒素限度和其他药物相关要求。

总之，药典对糖蛋白的要求旨在确保其质量和安全性，以保障
药品的质量和疗效。

具体的要求可能因药典的版本、国家或地区的
法规要求而有所不同。

因此，在具体应用中，需要参考适用的药典并遵守当地法规。

糖基化分析的内容和方法

糖基化分析的内容和方法
糖基化程度的分析过程大致如下：首先是鉴定糖蛋白，即确定糖蛋白的存在；其次是富集糖蛋白，即糖蛋白的分离存化。

糖蛋白的检测大致有以下几种：放射性标记法、分子荧光标记法、电泳法、凝集素标记法、抗体标记法和化学酵素法。

获得糖基化蛋白的方法主要是电泳法和层析法。

电泳法即通过电泳的方法先得到糖蛋白条带或蛋白点，再通过电洗脱或透析的方法得到糖蛋白。

此方法较为费时，且在操作中易使蛋白变性。

而层析法则具有快速、准确、分辨率高、稳定性好等特点，是分析糖蛋白的理想手段。

目前，利用抗体、凝集素进行亲和层析已成为分离存化糖蛋白的主要方法。

糖基化氨基酸位点的鉴定中，Edman降解法冗长，需要高超的实验技巧和较多的蛋白质，且无法处理N－端封闭的蛋白质。

因此，随着质谱技术的发展，此法已不在被广泛使用。

核磁共振技术也可用于糖基化氨基酸位点的鉴定。

这种方法可在液态溶液中直接进行蛋白质结构测定。

糖链结构的鉴定也采用质谱技术、毛细管电泳技术、气相色谱技术及凝集素亲和技术。

如何进行N-糖的分析？

如何进行N-糖的分析？N-糖分析从糖蛋白释放聚糖开始。

N-糖分析通过使用特定的N-糖苷酶F对样品进行消化，从而实现有效的去糖基化。

释放的N-糖用荧光染料标记，并通过高分辨率HILIC-UPLC-FLR进行分析。

HILIC-UPLC具有极高的分辨率，可轻松识别N-糖基化谱的细微变化。

通过荧光法进行分析，可以实现定量分析，因为每个N-糖只用一个荧光染料分子标记。

通过相应峰面积的计算可以获得不同聚糖种类的分析。

由于HILIC相的立体选择性，相同质量数的N-糖可以被区分。

例如，唾液酸的3-或6-和2，3或2，6键上的半乳糖基化可以通过它们的保留时间来区分。

HILIC与 ESI-QTOF-CID-MS/MS 结合进行N-糖分析，可根据样品的特征片段谱图和与谱库匹配，从而实现N-糖结构的鉴定。

因此，包括平分型GlcNAc、触角型GlcNAc或多余的GalNAc的等压N-糖的进一步区分也是可行的。

与荧光法相比，质谱法需要多种电荷态和不同数量的同位素才能进行定量分析。

即便如此，也无法保证相同的电离效率，因而质谱定量较多的应用于物化性质相似的N-糖。

百泰派克生物科技采用荧光和质谱两种方法，结合它们各自的优势进行N-糖基化分析。

并提供可靠、快速的生物学相关糖基化参数的量化和计算。

每个样品将被汇编在结果报告中，其中包括荧光色谱图，有关样品和应用方法的信息，测量和计算的具有生物学相关性的N-糖基化参数，如唾液酸化，岩藻糖基化，高甘露糖含量，触角等。

为了验证，运行标准的性能受到监控并包含在报告中。

除了N-糖分析，百泰派克生物科技还进行O-糖基化分析。

这是通过化学释放O-糖和用2-AB标签标记后荧光峰的定量来完成的。

百泰派克生物科技-您身边的生物质谱专家北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）从事以生物质谱为依托的生物药物表征，大分子物质（包括蛋白质、多肽、代谢物）质谱分析以及小分子物质检测服务。

N糖检测--检测技术

百泰派克生物科技
N糖检测
N糖对糖蛋白的结构和功能具有重要作用，N糖检测是解析N-糖基化过程及糖蛋白
功能的重要前提之一。

由于糖蛋白释放的N糖数量有限，N糖分析一直非常具有挑
战性，质谱法由于其高灵敏度和选择性而成为N糖检测分析的重要工具。

目前，可使用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）和液相色谱
质谱联用（LC-MS/MS）对N糖结构进行解析，其可用于分析简单或复杂基质中N糖。

N糖检测流程：在进行质谱检测之前，需要对样本中糖蛋白进行纯化富集，之后利
用糖苷酶酶切，将得到的N糖纯化富集并进行标记/衍生化后上机测样，根据所得
质谱数据在结构特异性数据库搜索与鉴定。

百泰派克生物科技采用MALDI TOF MS高分辨质谱系统和UHPLC技术提供N-糖分析
服务，该服务可用于鉴定血浆/血清、细胞、组织或生物体表达的全部N-糖，所有
与蛋白质连接的聚糖都将通过酶消化水解，通过亲水色谱法分离后，使用质谱系统进行定量分析。

您只需将实验目的告知并将样品寄出，我们将负责项目后续所有事宜，包括蛋白提取、蛋白酶切、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。