兽药残留检测技术现状

兽药残留检测技术现状

摘要近年来，国际上发生了一系列重大的食品安全事件，使得消费者对食品安全的信任度下降，对食品来源的关注逐渐增加。动物源性食品安全问题现已成为全球性的议题。因此，建立准确、灵敏、可靠的兽药残留分析方法刻不容缓。本文介绍了目前兽药残留分析的检测现状。

关键词兽药残留检测食品安全

Abstract In recent years, a series of major international food safety incidents have happened, consumers trust in food safety dropped, and focus on increasing food sources. Animal-derived food safety has become a global issue. Therefore, there must be establishing accurate, sensitive and reliable way about analysis of veterinary drug residues without delay. This article describes the current status of the detection of veterinary drug residue analysis. Keywords Residues of Veterinary Drugs detect food security

0前言

近年来，兽药在畜牧生产中的应用增加，由此导致的动物性食品中兽药残留问题日益突出。兽药残留分析是复杂混合物中痕量组分的分析技术，既需要精细的微量操作手段，又需要高灵敏的痕量检测技术，难度大、仪器化程度和分析成本高，分析质量控制和分析策略有特殊要求。现对兽药残留分析中的和检测方法作简要介绍[1]。

1检测技术

有许多高灵敏、通用性或专一性强的检测器供选用，如氢焰离子化检测器(FID)、氮磷检测器(NPD)等。但是大多数兽药极性或沸点偏高，需繁琐的衍生化步骤，限制了气相色谱法(GC)的应用。所以，2O世纪80年代后HPLC的发展速度超过GC，相当数量的兽药采用或改用HPLC进行分析，如氯霉索、磺胺类药物等。

1.1标记免疫分析技术[2]

1.1.1常见标记免疫分析技术及其应用

1.1.1.1放射免疫分析

放射免疫分析(Radioimmunoassay，RIA)是最早建立的标记免疫检测方法。1968年，Centeno等首次将RIA用于DDT和马拉硫磷的检测，其后该技术在对硫磷、克百威、百草枯、氯霉素、青霉素等农兽药残留检测中得到了广泛应用。

1.1.1.2酶免疫分析

酶免疫分析(Enzyme immunoassay，EIA)是在抗原或抗体分子上标记特定的酶，依据抗原抗体反应的特异性和酶催化显色反应的高效性对超微量残留物进行检测。酶联免疫吸附分析法(Enzyme．1inkedImmunosorbent Assay，ELISA)是目前最常用的酶免疫分析方法。ELISA法是一种非均相免疫测定方法，即抗原、抗体反应在固液相间进行，反应平衡后需要进行两相分离，在实际应用中检测农兽药等小分子物质常采用间接竞争ELISA法和包被抗体(或抗原)直接竞争ELISA法。迄今为止，已建立了有机磷、拟除虫菊酯、三嗪类、磺胺类及氟喹诺酮类等农兽药的单残留和多残留ELISA检测方法。

1.1.1.3荧光免疫分析

荧光免疫分析(Fluorescent immunoassay，FIA)的种类很多，如时间分辨荧光免疫分析(Time resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)、荧光偏振免疫分析(Fluorescence polarizafion Immunoassay，FPIA)、荧光猝灭免疫分析(Fluorescence quenching immunoassay，FQIA)和荧光增强免疫分析(Fluorescence enhancedimmunoassay，FEIA)等，它们以荧光物质为标记物，基于免疫反应对待测物进行检测。在药物残留分析方面，

TrFIA的研究目前仅局限于敌草隆、甲草胺、沙丁胺醇等少数农兽药。

1.1.1.4化学发光免疫分析

发光物质主要有物理、化学和生物发光三类。在小分子药物残留检测中，化学发光免疫分析(Chemiluminescence immunoassay，CLIA)的应用最广泛。CLIA以发光物质或酶标记抗原或抗体，标记抗原和抗体与待测物反应后经分离、洗涤等步骤，加入氧化剂或酶底物而发光，通过测量最后的化学发光强度，利用标准曲线测定待测物的含量。目前国内外已建立了甲基对硫磷、涕灭威、克百威、氯氰菊酯、氯霉素、链霉素、盐酸克伦特罗等农兽药方法。

1.1.1.5胶体金标记免疫分析

胶体金标记免疫分析技术(Colloidal gold immunoassay，CGIA)采用纳米金颗粒来标记抗体，当金标抗体聚集到一定密度时，出现肉眼可以观察紫红色，实现对抗原和抗体反应结果进行测定。实际应用中一般通过制备抗农药或兽药的单克隆抗体，将其做成胶体金免疫层析测试条，直接检测样品中的农药或兽药残留。

1.1.2其他免疫分析技术

1.1.

2.1以量子点为探针的免疫分析

导体量子点纳米晶(semiconductor quantum dots nanocrystai)，简称量子点(quantum dots,QDs)，特别是IIB-VIA族荧光量了点(如CdSe,CdTc)，在纳米尺度时表现出许多独特的光、电特性。在农兽药等小分子化合物残留检测方面的研究则刚起步。Vinayaka等建立了基于CdTe量子点的免疫荧光法，用于检测除草剂2，4一D，检测限达250 pg/mL。Chen等研制了基于量子点标记的竞争性ELISA法，用于快速检测鸡肉中恩诺沙星残留量，方法的线性检测范围为1～100 ng/mL，最低检测限为2．5 ng/mL。Ding等以量子点作为荧光探针标记二抗，建立了检测鸡肉组织中磺胺二甲嘧啶的间接竞争荧光免疫分析法，方法检测限为1.0 ng/L，标准添加回收率为80．6％～117．4％。

1.1.

2.2基于核酸适体的免疫分析

核酸适体(Aptamer)是一种功能类似抗体的新型仿生生物识别分子，它是利用指数富集配体系统进化(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)技术，从人工体外合成的随机DNA／RNA文库中筛出的一段单链寡核苷酸片段畔]，一般由25～80个碱基组成，它的出现对以抗体为关键试剂的免疫分析技术的发展具有重要意义。

1.2单链抗体技术[3]

单链抗体技术（scFv）是抗体分子中保留抗原结合部位的最小功能片段的一种新型重组蛋白，由重链可变区(V H)和轻链可变区(V L)通过一段约15～25个氨基酸残基构成的弹性短肽(Linker)以非共价键相连而成，分子质量约为完整抗体分子的1／6，具有单一抗原结合位点、分子质量小、组织穿透力强、体内清除快、免疫原性低、易于在大肠杆菌中表达和进行基因进化等特点。近年来，随着单链抗重组抗体技术日益成熟，单链抗体库技术近年来已经渗入到兽药残留检测领域。Korpimaki等(2002，2004)利用噬菌体抗体库技术制备的重组抗体对13种磺胺类药物的交叉反应率明显优于传统单克隆抗体。随后又对重组抗体进行改造。应用获得的重组抗体建证了能对18种磺胺类药物进行多残留检测的荧光免疫分析方法。

1.3蛋白芯片的应用[4]

蛋白芯片兽药残留检测试剂盒集成了样品前处理及样品检测过程，该项技术是二十一世纪发展起来的一种新的食品中兽药残留量检测技术。目前，该试剂盒可以实现对猪肉、猪肝、鸡肉、鸡肝4种组织以及猪尿中恩诺沙星、磺胺二甲嘧啶、链霉素、克仑特罗的半定量检测，除具有灵敏度高、特异性强、样品前处理简单，检测方便快速等优点外，还可实现对上述多种兽药同时并行检测的优点，极大地节省了检测费用，缩短了检测时间，进而提高了检测效率。