实验一血清蛋白质测定(范玉平)
血清蛋白测定实验报告
血清蛋白测定实验报告血清蛋白测定实验报告血清蛋白测定是一种常见的临床实验，用于评估人体内蛋白质的含量和功能。
蛋白质是构成人体细胞和组织的基本单位，对于维持正常的生理功能至关重要。
通过血清蛋白测定，我们可以了解到人体内蛋白质的水平，从而帮助医生进行疾病的诊断和治疗。
在进行血清蛋白测定实验之前，我们需要明确测定的目的。
蛋白质在人体内起着多种重要的功能，包括运输、免疫、调节和结构等。
因此，我们可以根据需要选择不同的测定方法，以评估特定蛋白质的含量或功能。
血清蛋白测定的常用方法之一是免疫测定法。
这种方法利用抗体与特定蛋白质结合的特异性来测定蛋白质的含量。
我们可以通过酶联免疫吸附试验（ELISA）或放射免疫测定法等技术来进行测定。
这些方法具有高度的灵敏度和特异性，可以准确地测定血清中特定蛋白质的含量。
除了免疫测定法，还有许多其他的方法可以用于血清蛋白测定。
比如，电泳法可以通过将血清样品分离成不同的蛋白带来评估蛋白质的含量和分布。
这种方法可以帮助我们了解血清中各种蛋白质的相对含量，并检测异常的蛋白带，从而指导疾病的诊断和治疗。
在进行血清蛋白测定实验时，我们需要注意样本的采集和处理。
血清样品应该在离心后分离出来，并储存在低温条件下，以避免蛋白质的降解和变性。
此外，我们还需要注意实验条件的控制，确保实验的准确性和可重复性。
血清蛋白测定在临床中有着广泛的应用。
例如，测定白蛋白的含量可以评估肝功能和营养状况。
白蛋白是最丰富的血浆蛋白质，它在维持血液渗透压和运输药物等方面起着重要的作用。
如果白蛋白的含量降低，可能提示肝功能异常或营养不良。
另外，测定免疫球蛋白的含量可以评估免疫系统的功能。
免疫球蛋白是一类抗体，它们可以识别和抵御外来的病原体。
如果免疫球蛋白的含量降低，可能提示免疫系统功能的异常，患者容易受到感染的侵袭。
总之，血清蛋白测定是一种重要的临床实验，可以帮助医生评估人体内蛋白质的含量和功能。
通过选择合适的测定方法，并注意实验条件的控制，我们可以获得准确可靠的测定结果。
血清蛋白含量测定实验报告
血清蛋白含量测定实验报告实验目的：本实验旨在通过测定血清中蛋白质的含量来了解血清的营养状态，并探究不同条件下血清蛋白含量的变化情况。
实验原理：血清是血液中去除了红细胞和凝血因子的部分，主要由蛋白质组成。
蛋白质含量是衡量血清中营养状况的重要指标之一。
本实验利用比色法测定血清中总蛋白质的含量，其原理是利用试剂与蛋白质发生特定颜色的反应，通过光度计测定反应产物的吸光度来推算蛋白质的浓度。
实验步骤：1. 准备工作：取适量标准蛋白溶液（如丙酮酸钙溶液）按一定比例稀释，制备一系列标准溶液，其浓度分别为1、2、3、4、5 g/L。
2. 取血清标本：从受试者血液中取得一定量的血清标本。
3. 样本处理：将血清样本与提取试剂按照一定比例混合，待沉淀形成后，离心分离，收集上清液。
4. 加入试剂：将上述收集到的上清液分别与试剂液按照一定比例混合，充分搅拌，反应一定时间。
5. 测定吸光度：将反应溶液分别放入光度计中，设置为适当的波长，记录吸光度值。
6. 绘制标准曲线：将实验得到的吸光度值与对应的标准溶液的浓度进行配对，绘制标准曲线。
7. 测定血清样本：将血清样本与试剂按照一定比例混合，重复步骤5，测定吸光度。
8. 计算血清蛋白含量：根据标准曲线，将血清样本的吸光度值转换为蛋白质的浓度。
实验结果与讨论：根据实验步骤进行操作并记录各个标准溶液和血清样本的吸光度值。
根据标准曲线计算出血清样本中蛋白质的浓度。
讨论血清蛋白含量的变化情况，可以比较不同个体、不同年龄段或不同疾病状态下的血清蛋白含量是否存在显著差异。
并结合其它相关指标进行综合分析与判断。
结论：根据实验数据计算出的血清蛋白质含量为X g/L，证明了血清样本中存在蛋白质，并可作为评估营养状况的指标。
实验结果进一步揭示了血清蛋白质含量在不同条件下的变化情况，为疾病诊断、个体健康管理等提供了一定的参考依据。
血清白蛋白测定
天间：对低、中和高浓度，每天测定1次，连 续监测20天以上，分别求取三种浓度的精 密度数据
3.实验材料
试剂：商品试剂盒 器材：试管、加样枪、722分光光度计
4.实验方法
5.实验结果
重复性能评价试验的意义重复性试验的目的是评估实验方法出现偶然误差的概率由于导致偶然误差的因素非常多包括仪器稳定性分析环境温度试剂质量标准品的稳定性吸量准确性混匀的充分性以及反应时间的把握度等因此做好重复性试验的前提是
血液清蛋白测定
与 重复性实验
血液清蛋白测定与重复性实验
一、BCG法测定血液清蛋白试验 二、商品BCG试剂重复性能评价试验
【计算】
1、检验20次测定数据的离群值；如存在异常值时 应剔除。对小样标本来讲，Grubbs检验方法概率意 义明确，能给出严格的结果，是最合理的检验方法。
用Grubbs检验准则，检验离群值的统计学工式是：
Xd X G
S
式中Xd为离群值；X 为包括离群值在内的测定值 的均数；S为包括离群值在内的测定值的标准差。
(2) 如果离群值是两个或两个以上都分布在同一侧，X1、 X2都是离群值，则首先检验最内侧的一个数据（X2），即 通过检验G2来决定X2是否应该舍弃。如果X2应该舍弃，X1 自然应该舍弃。如果X2不应舍弃，则再检验X1，但在检验 X1时，测定次数不应该做为少了一次。
(3) 如果离群值有两个或两个以上，而且又分布于均数两 侧，例如X1和Xn都同属于离群值，则分别检验X1和Xn，是 否应该舍弃。如果有一个数据决定舍去，那么在检验另一 个数据时，测定次数应该作为减少一次来处理，而且此时 应该选择的99%置信水平。
实验一血清蛋白质测定(范玉平)
【试剂与器材】
1．6 mol/L NaOH溶液 2．双缩脲试剂 3．双缩脲空白试剂 4．60～70g/L蛋白质标准液 5．仪器 分光光度计。
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【试剂与器材】
大试管
1ml吸管 5ml吸管 洗耳球
4支 ３支
2支 １只
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操作步骤
1.取试管4支，标明测定管（U）、标准管 （S）、标本空白管（B）、试剂空白管（ RB）。
【注意事项】
4. 实验证明，BCG不但与白蛋白呈色，而且与血 清中多种蛋白质成分呈色，其中以α1-球蛋白、 运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较 白蛋白稍慢。由于在30s内呈色对白蛋白特异， 故BCG与血清混合后，在30s读取吸光度，可明 显减少非特异性呈色反应。为了减少本法基质效 应的影响，最好用参考血清作标准。
【方法学评价】
1.本法操作简便、快速，胆红素和一般脂血对测定 无明显干扰。
【方法学评价】
2.血红蛋白和BCG产生与白蛋白相等的颜色强度， 血红蛋白在1g/L以下无明显干扰，2g/L使吸光度 增高3.2%，3g/L使吸光度增高7.4%，4g/L使吸 光度增高7.7%，5g/L使吸光度增高8.8%，所以 溶血标本不宜做BCG法白蛋白测定。
二 物理法：
又可分为紫外吸收法、折射法和重量法 等。除紫外吸收法外，其他方法现已很少 使用或被淘汰。
三 蛋白质与染料结合的方法
是比较灵敏而特异的一类方法。用的较多的染料有丽春红 、考马斯亮蓝G250和邻苯三酚红钼。丽春红蛋白结合法 测得的结果与凯氏定氮法相符，并且显色后在室温可稳 定24小时；考马斯亮蓝G250结合蛋白法灵敏度高，特异 性强，操作简便，广泛用于尿蛋白，脑脊液蛋白及各种 微量蛋白的检测，但该方法测定蛋白浓度的线性范围不 宽，与白、球蛋白反应的灵敏度不同，反应强度亦受温 度的影响，且比色杯吸附色素而干扰测定，不能用于自 动化分析仪，因此该法的应用受到了一定的限制；邻苯 三酚红钼络合显色法克服了考马斯亮蓝G250结合蛋白法 的上述缺点，且具有简便、稳定等优点，可用于自动化 分析仪。
《血清蛋白质测定》课件
血清蛋白质的功能
维持血浆渗透压
血清蛋白质能够维持血浆 渗透压，保持血液的正常 循环。
参与物质运输
血清蛋白质能够结合并运 输脂类、离子、药物等物 质，维持体内代谢平衡。
参与免疫调节
血清蛋白质如免疫球蛋白 ，能够参与机体免疫应答 ，抵御病原体入侵。
发展前景广阔，血清蛋白质测定将在临床实践中发挥更加重要的作用，为患者带来更好的诊 疗体验和治疗效果。同时，随着生物技术的不断发展，血清蛋白质组学的研究也将得到更加 深入的开展，有望为疾病的诊断和治疗提供更多的线索和思路。
THANKS
感谢观看
通过金属表面增强效应，提高拉曼散 射信号，实现对蛋白质的快速、高灵 敏度检测。
质谱技术
利用质谱仪对蛋白质进行定性和定量 分析，具有高灵敏度、高特异性的优 点。
血清蛋白质组学的研究进展
血清蛋白质组学是研究血清中蛋白质组成、表达 01 和功能的一门科学，对于疾病诊断和治疗具有重
要意义。
血清蛋白质组学研究涉及蛋白质分离、鉴定、定 02 量和功能分析等多个方面，需要综合运用多种技
肝病患者由于肝功能受损，蛋白质合成能力下降，导致 血清蛋白质水平降低。通过测定血清蛋白质水平，可以 评估肝病患者的病情严重程度和预后。
慢性肝炎、肝硬化、肝癌等肝病患者常伴有血清白蛋白 、前白蛋白等指标的降低，这些指标的变化有助于指导 临床治疗和评估治疗效果。
肾病患者的血清蛋白质测定
肾病患者由于肾脏滤过功能受损，蛋白质从尿中 丢失，导致血清蛋白质水平降低。通过测定血清 蛋白质水平，可以评估肾病患者的病情严重程度 和预后。
02 血清蛋白质测定在临床实践中广泛应用于多种疾 病，如感染、肿瘤、心血管疾病等，为医生提供 重要的参考信息。
血清浆蛋白质测定
第七章血清(浆)蛋白质测定实验34双缩脲法测定血清总蛋白【原理】血清(浆)中蛋白质的肽键(-CO-NH-)在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。
此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲(H2N-OC-NH-CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。
这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。
【试剂与器材】可购商品试剂或自配。
1．6 mol/L NaOH溶液称取NaOH 240g，溶于新鲜制备的蒸馏水(或刚煮沸冷却的去离子水)约800ml中，冷却后定容至1 L，贮于有盖塑料瓶中。
若用非新开瓶的NaOH，须先配成饱和溶液，静置2周左右，使碳酸盐沉淀，其上清饱和NaOH溶液经滴定后，算出准确浓度再使用。
2．双缩脲试剂称取硫酸铜结晶(CuSO4·5H2O) 3g溶于新鲜制备的蒸馏水(或刚煮沸冷却的去离子水)500ml中，加入酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O，用以结合Cu2+，防止CuO在碱性条件下沉淀)9g和KI(防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析)5g，待完全溶解后，在搅拌下加入6mol/L NaOH溶液100ml，并用蒸馏水定容至1L，置塑料瓶中盖紧保存。
此试剂室温下可稳定半年，若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。
3．双缩脲空白试剂除不含硫酸铜外，其余成分与双缩脲试剂相同。
4．60～70g/L蛋白质标准液常用牛血清白蛋白或收集混合血清(无黄疸、无溶血、乙型肝炎表面抗原阴性、肝肾功能正常的人血清)，经凯氏定氮法定值，亦可用定值参考血清或标准白蛋白作标准。
但定值质控血清定值准确性较差，不能用作血清总蛋白测定的标准物。
5．仪器 自动生化分析仪或分光光度计。
【操作步骤】1．生化自动分析仪法 按试剂盒说明书提供的参数进行操作。
第22章 化学法测定生物化学物质20150921 (2)
紫外吸 收法
比浊法
芳香族氨基酸上 苯环共轭双键具 有吸收紫外光的 性质
与某些有机酸结 合而产生浊度
优点：保留样本的生物学活性 缺点：特异性和准确性受蛋白分 子中含共轭双键氨基酸的比例影 响
优点：操作简单、无需特殊仪器 缺点：影响因素较多，已被淘汰
染料结 合法
酸性下与某些带 负电荷染料特异 结合
优点：简便、快速、灵敏度高 缺点：染料对比色杯有较强的吸 附力
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第二十二章 化学法测定生物化学物质
酚试剂法
蛋白质中酪氨酸和色氨酸能还原磷钨酸或磷钼酸形成钼蓝 或钨蓝 Lowry酚试剂改良法：碱性铜溶液先与蛋白质反应，
再加酚试剂，则铜-肽键络合物中的酪氨酸和色氨 酸与酚试剂反应，呈色灵敏度达双缩脲法的100倍左右 灵敏度高，但各种蛋白质呈色不一致，因其酪氨酸和 色氨酸的含量不同，如清蛋白色氨酸0.2%，而球蛋白 含色氨酸2%～3% 适合于测定单一的较纯蛋白质 易受还原性化合物干扰，如带-SH化合物、糖类、酚类
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第二十二章 化学法测定生物化学物质
比浊法
三氯醋酸、磺基水杨酸等有机酸能与蛋白质结合产 生微细沉淀，悬浮液的浊度大小与蛋白质浓度成正比 优点：操作简便、灵敏度高 缺点：影响浊度大小的因素较多，包括加入试剂 的手法、混匀技术、反应温度等，故精密度差 且各种蛋白质形成的浊度亦有较大差别 用于测定尿液、脑脊液等蛋白质浓度较低的样品
用途 标定蛋白质和校正其 它检验方法
测定单一蛋白质，临 床上主要用于血清粘 蛋白测定
不破坏样品，适用于 蛋白质提取、纯化中 含量的粗略估计
曾用于尿液、脑脊液 等低蛋白浓度样本的 分析 尿液、脑脊液等低蛋 白含量样本的测定，
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第二十二章 化学法测定生物化学物质
实验 血清蛋白测定
实验血清蛋白测定
实验：血清蛋白测定
简介
本实验旨在测定血液中的蛋白质含量。
血清蛋白是血液中的一种重要成分，对人体的健康起着重要作用。
测定血清蛋白含量有助于判定机体的营养状况、肝功能和疾病的诊断。
实验步骤
1. 准备样本：从受试者的静脉采血，将血液转移到干净的试管中，静置片刻使其凝结，然后离心分离血浆。
2. 声明：
* 确保所有实验操作符合相关的伦理和安全规定。
* 受试者的隐私应得到保护，并获得其同意。
* 使用由相关机构认可的试剂和设备，确保实验结果的准确性和可靠性。
3. 准备试剂：
* 使用标准样品和控制品进行校准和质量控制。
* 预先准备好的试剂盒和相关试剂应严格按照说明书进行保存
和使用。
4. 操作步骤：
* 将血清标本和试剂样品温度平衡至室温。
* 取一定量的标本和试剂，按照试剂盒说明书中的步骤进行操作。
* 注意避免污染和交叉感染，使用一次性实验用品。
5. 测定结果：
* 实验操作完毕后，将试管放入分光光度计中测量吸光度。
* 根据试剂盒说明书或相关文献中的公式计算血清蛋白的浓度。
注意事项
* 实验操作应严格按照相关实验室规定和安全操作规程进行。
* 在实验过程中要保持清洁、准确，并注意避免误操作和污染。
* 实验室中的设备和试剂使用应符合相关规定，并留有记录以
备后续审查。
* 实验结果的解读应结合相关参考值和研究背景进行，并避免
片面解读。
以上仅为实验的简要介绍，详细的实验步骤和方法请参考相关
实验文献或相关专业人士的建议。
血清蛋白实验报告
一、实验目的1. 学习血清蛋白的基本概念和分类；2. 掌握血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的原理和操作方法；3. 通过实验，观察血清蛋白在醋酸纤维薄膜电泳中的分离情况，了解血清蛋白的组成和性质。
二、实验原理血清蛋白是血液中的一种重要成分，主要由白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等组成。
醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离技术，利用蛋白质在电场中的迁移速率差异，将混合蛋白质分离成不同的区带。
三、实验材料1. 实验仪器：醋酸纤维薄膜电泳仪、电泳槽、直流电源、紫外灯、剪刀、镊子等；2. 实验试剂：血清蛋白样品、醋酸纤维薄膜、电泳缓冲液、染色液等。
四、实验步骤1. 准备电泳缓冲液：按照实验要求配制醋酸纤维薄膜电泳缓冲液，确保pH值为8.6。
2. 制备样品：将血清蛋白样品用蒸馏水稀释至适当浓度，并加入少量电泳缓冲液，搅拌均匀。
3. 准备醋酸纤维薄膜：将醋酸纤维薄膜剪成适当大小的条状，用蒸馏水浸湿，去除气泡。
4. 加样：将制备好的血清蛋白样品滴加在醋酸纤维薄膜的一端，注意不要重叠。
5. 电泳：将醋酸纤维薄膜放入电泳槽中，确保薄膜水平，加入电泳缓冲液，接通直流电源，进行电泳。
6. 染色：电泳结束后，取出醋酸纤维薄膜，用染色液进行染色，观察血清蛋白的分离情况。
7. 分析结果：根据电泳图谱，分析血清蛋白的组成和性质。
五、实验结果与分析1. 电泳图谱：在电泳图谱中，可以看到血清蛋白分为五个区带，依次为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白。
2. 结果分析：通过观察电泳图谱，可以了解到血清蛋白的组成和性质。
清蛋白是血清蛋白中含量最高的成分，占血清蛋白总量的60%以上；球蛋白是血清蛋白中含量次之的成分，包括α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白。
这些球蛋白在血清蛋白中具有不同的生物学功能。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的原理和操作方法，成功分离了血清蛋白，并观察到了血清蛋白的五个区带。
实验 血清蛋白测定
实验血清蛋白测定
实验：血清蛋白测定
实验介绍
本次实验旨在通过测定血清中的总蛋白和白蛋白浓度，计算出
非白蛋白的含量，并探究人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系。
实验步骤
1. 取得样本血液，并离心分离得到血清
2. 使用比色法测定血清总蛋白浓度，并记录结果
3. 使用免疫层析法测定血清白蛋白浓度，并记录结果
4. 计算非白蛋白含量，并记录结果
实验原理
- 比色法：利用生化试剂和光度计对血清中的蛋白质进行量化
测定。
- 免疫层析法：利用免疫学原理选择性地分离出目标蛋白质，
通过测量蛋白与抗体复合物的浓度来计算目标蛋白质浓度。
- 计算公式：非白蛋白含量＝总蛋白浓度−白蛋白浓度。
实验结果分析
通过实验，我们可以得到每个样本的总蛋白质含量、白蛋白含量和非白蛋白含量。
根据实验结果，我们可以探讨人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系，并且该方法可以用于临床诊断中，如肝功能不全、肾病综合征等。
结论
本次实验成功地测定了血清蛋白质浓度，并计算出非白蛋白的含量，同时探究了人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系。
该方法可以用于临床诊断中，具有重要的临床应用价值。
实验一蛋白质含量的测定
2NH3+ H2SO4(NH4)2SO4(2)
(NH4)2SO4+ 2NaOH2H2O +Na2SO4+ 2NH3(3)
反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。
将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定
非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）
用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长
双缩脲法（Biuret法）
灵敏度低
1～20mg
中速
20~30分钟
多肽键＋碱性Cu2＋紫色络合物
硫酸铵；
Tris缓冲液；
某些氨基酸
用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似
紫外吸收法
（一）实验原理
双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
H2O
O=C C=O
HN NH
（250g/ml）
未知蛋白质0.2 0.4 0.6
（约250g/ml）
蒸馏水1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 00.8 0.6 0.4
试剂甲5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
试剂乙0.5 0.50.50.50.50.50.50.50.50.5
一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法
样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：
血清白蛋白测定(精)
结果报告： 被检者： TP__________g/L［60～80g/L］
＿＿＿年＿＿月＿＿日 检查者：＿＿＿＿
注意事项：
1、由于各种血清蛋白质的分子量不同，故其浓度不宜用mol/L表 示。
2、双缩脲反应并非蛋白质的颜色反应。凡分子内含有两个或两个 以氮丙上或二氨碳酰基原胺甲 等子酰间基接（连－接Ｃ，Ｏ均Ｎ可Ｈ呈2双）缩，脲不反论应是。直如接缩相二连脲还，是草通酰过二一胺个２，
实验二、血清白蛋白测定
【实验要求】 掌握BCG法测定血清Alb的实验原理与方法；
学习微量加样器的使用方法；能熟练使用分光 光度计。 熟悉实验方法学评价 了解血清白蛋白测定的临床意义
【实验原理】
在pH4.2的缓冲液中，清蛋白作为一种阳离子 与阴离子染料溴甲酚绿（bromocresol green，BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波 长630nm处有吸收峰，颜色深浅与清蛋白含 量成正比，与同样处理的清蛋白标准液比较， 可求得血清清蛋白含量。
【操作】
取试管三支，标明测定、标准和空白管，按表 操作。
加入物 / ml 工作试剂 标准液 样品 生理盐水
测定管 4.0
0.02
标准管 4.0 0.02
空白管 4.0
0.02
充分混匀，置室温10min，用630nm波长比色，以空白管调零， 读取各管吸光度。
【计算】
血清清蛋白（g/L）＝ A测/A标×清蛋白标准 液浓度g/L
3、双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，以维持铜离子 在碱性溶液中的溶解性；碘化钾能防止两价铜离子还原．
4、高脂，黄疸及溶血标本应作清空白对照来校正误差。含脂类极 多的血清，加入双缩脲试剂后会出现混浊，可用乙醚3ml抽提后再 进行比色．
血清蛋白质测定
饮食与生活习惯
饮食摄入
饮食中蛋白质的摄入量直接影响血清 蛋白质的水平。长期高蛋白饮食会导 致血清蛋白质含量升高，而蛋白质摄 入不足则可能导致血清蛋白质含量降 低。
生活习惯
长期缺乏运动、过度疲劳、熬夜等不 良生活习惯可能导致机体蛋白质代谢 紊乱，影响血清蛋白质的测定结果。
药物与治疗
要点一
详细描述
球蛋白是除白蛋白之外的血清蛋白质的总称，主要包括免疫球蛋白、补体、酶等。球蛋白具有免疫功 能和多种生理作用，如免疫防御、免疫调节、酶的催化等。在临床上，球蛋白的测定对于评估免疫功 能、肝脏功能和诊断某些疾病具有重要意义。
纤维蛋白原（Fibrinogen）
总结词
纤维蛋白原是肝脏合成的一种蛋白质，参与凝血和止血过程 。
详细描述
纤维蛋白原是肝脏合成的一种蛋白质，是血浆中含量最高的 凝血因子。纤维蛋白原在凝血过程中起重要作用，可转化为 纤维蛋白，促进血液凝固。纤维蛋白原的测定对于评估凝血 功能和诊断出血性疾病具有重要意义。
转铁蛋白（Transferrin）
总结词
转铁蛋白是血浆中主要的含铁蛋白质，具有转运铁离子的功能。
重要性
血清蛋白质测定是临床医学中常 用的实验室检查项目之一，对于 疾病的诊断、病情监测和治疗效 果评估具有重要意义。
血清蛋白质的组成与功能
组成
血清蛋白质是由多种蛋白质组成的混 合物，包括白蛋白、球蛋白、纤维蛋 白原等。
功能
血清蛋白质具有多种生理功能，如维 持血浆渗透压、参与免疫反应、运输 物质等。
通过高通量技术和数据分析，发现 更多具有诊断和预测价值的血清蛋 白质标志物，为临床诊疗提供更多 依据。
自动化与智能化
实现血清蛋白质测定的自动化和智 能化，提高检测效率，降低人为误 差，为大规模临床应用提供支持。
实验一蛋白质含量的测定
3.标准蛋白质溶液：同基本法。
（二）操作步骤
测定标准曲线与样品溶液的操作方法与基本法相同。只是试剂甲改为1毫升，室温放置10分钟后，试剂乙改为4毫升。在55℃恒温水浴中保温5分钟。用流动水冷却后，在660nm下测定其吸光度值。
注意，由于各种蛋白质含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸，显色的深浅往往随不同的蛋白质而变化。因而本测定法通常只适用于测定蛋白质的相对浓度（相对于标准蛋白质）。
四、改良的简易Folin—酚试剂法
（一）试剂
1.试剂甲：碱性铜试剂溶液中，含0.5N NaOH、10%Na2CO3、0.1%酒石酸钾和0.05%硫酸铜，配制时注意硫酸铜用少量蒸馏水溶解后，最后加入。
可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。
（三）操作方法
1.标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20~25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。
每管中蛋白质
的量（g）
吸光度值（A700）
2.样品的测定：取1毫升样品溶液（其中约含蛋白质20~250微克），按上述方法进行操作，取1毫升蒸馏水代替样品作为空白对照。通常样品的测定也可与标准曲线的测定放在一起，同时进行。即在标准曲线测定的各试管后面，再增加3个试管。如上表中的8、9、10试管。
根据所测样品的吸光度值，在标准曲线上查出相应的蛋白质量，从而计算出样品溶液的蛋白质浓度。
一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法
实验一 光谱技术 紫外分光光度法测定血清蛋白质
3）、混匀，选用2cm的石英比 色杯，在280nm处以第一管调节 零点，记录比色结果； 4）、制作标准曲线 以光密度为 纵坐标，蛋白质浓度为横坐标， 绘制出280nm处的血清蛋白质标 准曲线； 5）、据标准曲线查出所测蛋白质
浓度。
实验总结（包括注意事项）
❖ 分三点：化学因素 光学因素 主观因素 ❖ 1）化学因素 化学因素是指被测溶液不遵守
实验二
光谱技术 紫外分光光度法 测定血清蛋白质
实验原理
蛋白质分子中存在着含有共轭双键 的酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸,使蛋白 质在270~~290nm波长范围内具有 吸收紫外光的性质，其蛋白质溶液的 吸收值与其浓度成正比，以此可作定 量分析测定。
实验方法
用标准曲线法
将一糸列浓度不同的标准溶液按照 一定操作过程显色后，分别测吸光度， 以吸光度为纵坐标，标准溶液（蛋白质 溶液）浓度为横坐标绘制出280nm处血 清蛋白质的标准曲线，再以相同条件下 处理待测样品并测定其吸光度，从而可 以从标准曲线上查出相对应的待测液溶 度。
蛋白质标 — 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.0 2.0(
准溶液
待测
（1mg/ml）
Pro)
0.15mol/L 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 — 2.0
Nacl溶液ຫໍສະໝຸດ 蛋白质浓 — 0.125 0.250 0.375 0.500 0.625 0.750 1.00 ？ 度
实验试剂和器材
试剂：0。15mol/L Nacl溶液 蛋 白质标准溶液 蛋白质待测溶液 器材：紫外分光光度计 石英比 色杯 试管架 试管 吸管 吸耳球
记号笔 标准曲线纸 实验记录本
❖ 4、实验步骤
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双缩脲法测定血清总蛋白
【目的与要求】
1.掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理和方法； 2.掌握分光光度计的使用方法和日常维护； 3.熟悉血清总蛋白各种测定方法的原理和优缺点。
双缩脲法测定血清总蛋白
【原理】血清(浆)中蛋白质的肽键(-CO-NH-)在碱
性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合 物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲 (H2N-OC-NH-CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用 形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。这种 紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在 一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处 理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。
临床检验生物化学实验的教学目的：
指导学生掌握实验的基本操作和基本技能， 树立实事求是的科学态度和科学作风，并通过实 验过程培养学生分析问题和解决问题的能力；在 专业理论知识的基础上，培养学生具有创新思维 和初步从事科研的能力；与时俱进，培养学生面 对临床、面对市场，具有从事临床生化实验室实 际工作的能力。
【注意事项】
2.BCG与球蛋白的反应强度与环境温度有关（温度 升高，呈色加速加深）。BCG工作液中的表面活 性剂虽有延缓BCG与球蛋白的非特异性反应的作 用，但亦将测定标本与标准液置于同一温度下操 作，以抵消温度的干扰作用。
【注意事项】
3.Brij-35是非离子型表面活性剂，其浓度大小对结 果测定有影响，浓度越大，吸光度越低，但显色 稳定。Brij-35也可用其他表面活性剂代替，如吐 温-20或吐温-80，终浓度为2ml/L，灵敏度和线 性范围不变。
【试剂】
1．0.5mol/L琥珀酸缓冲贮存液(pH4.0) 2．10mmol/L BCG贮存液 3．叠氮钠贮存液 4．聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)贮存液 5．BCG试剂 6．60g/L白蛋白标准液
7. 仪器 分光光度计。
【操作步骤】
１．取试管3支，标明空白管（B）、标准 管（S）、测定管（U）
【方法学评价】
3.本法既可手工操作，也能自动化分析，是目前国 内测定血清白蛋白的最常用方法。本法线性范围 为10～60g/L，RCV≤4%。但该法与溴甲酚紫法 比较，对血清白蛋白特异性稍差。
三、A/G比值计算
1.用双缩脲法测定血清标本中总蛋白浓度，用溴甲 酚绿法测定血清白蛋白浓度,
2.总蛋白浓度减去血清白蛋白浓度即为球蛋白浓度 3. 求得血清白蛋白、球蛋白比值(A/G比值)。 4.参考范围 A/G 〉1
操作步骤
2.按下表操作。
加入物(ml)
空白管 标准管 样本管
血清
— 0.05
蛋白标准液
— 0.05
—
蒸馏水
0.05
——
TP试剂
3.0 3.0 3.0 —
混匀,37度孵育20分钟 ,540nm比色,空白管调零
操作步骤
3.混匀，置25℃ 30min或37℃ 10min， 4.在波长540nm处比色，用蒸馏水调零，
4.手工操作参数：波长630nm，光径1cm；温度： 室温（18-26 ℃）；模式：终点法；反应时间： 30s，样本量：0.02ml，试剂量：4ml
４．计算结果
血清白蛋白(g/L)=
A测定
-----------------
A标准
xC标准 (g/L)
参考范围
正常成人血清白蛋白参考范围 :35～55g/L。
3 值日生最后扫地和拖地，关闭水电门窗， 带教老师检查合格后方可离开教室。
4 实验报告下次实验课前交给老师。
实验一 血清蛋白质测定
一、血清总蛋白质测定（双缩脲法） 二、血清白蛋白测定（溴甲酚绿法） 三、A/G比值计算
10
方法学介绍
蛋白质测定方法很多，常用的有：
化学法 物理法 染料结合法等
【临床意义】
1.血清白蛋白浓度降低 2.血清白蛋白浓度增高 脱水 3.A/G 4.先天性Alb缺乏症
【思考题】
1. 阐述BCG法测定血清白蛋白的影响因素及条 件控制？ 2. BCG与血清混合后，为什么要在30s读取吸光 度？
生化实验报告书写
目的 原理 操作步骤 结果（计算） 注意事项 思考题答案
注意要点：
1．黄疸血清，溶血，高糖，酚酞等干扰用样本空白来消除。 2．加入显色剂要准确，加入后立即混匀。 3. 本反应是TP的最常用和方便的方法，也便于自动化分析。 4. 其与蛋白质中的肽键成正比关系，与蛋白质的种类及AA的组成
无明显关系.
【临床意义】
1血清总蛋白浓度降低 （1）蛋白质合成障碍 （2）蛋白质丢失增加 （3）营养不良或消耗增加 （4）血浆稀释 2血清总蛋白浓度增高 （1）蛋白质合成增加 （2）血浆浓缩
【方法学评价】
1.本法操作简便、快速，胆红素和一般脂血对测定 无明显干扰。
【方法学评价】
2.血红蛋白和BCG产生与白蛋白相等的颜色强度， 血红蛋白在1g/L以下无明显干扰，2g/L使吸光度 增高3.2%，3g/L使吸光度增高7.4%，4g/L使吸 光度增高7.7%，5g/L使吸光度增高8.8%，所以 溶血标本不宜做BCG法白蛋白测定。
1
生化实验室规则
穿好工作服 不得迟到早退 保持安静
预 习
听
认
从
真
教
完
师
成
指
实
导
验
报
告
加强安全观念
爱护公共财物
money
洗净一切仪器用品， 桌面整洁干净
净
仪器洗涤要求
Hale Waihona Puke 试管、烧杯量筒、 吸管
1 实验课结束后，请大家把凳子摆放整齐。
2 桌面，边台，水池，窗台，仪器要一尘不 染，请值日生用抹布擦干净。
【注意事项】
4. 实验证明，BCG不但与白蛋白呈色，而且与血 清中多种蛋白质成分呈色，其中以α1-球蛋白、 运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较 白蛋白稍慢。由于在30s内呈色对白蛋白特异， 故BCG与血清混合后，在30s读取吸光度，可明 显减少非特异性呈色反应。为了减少本法基质效 应的影响，最好用参考血清作标准。
【操作步骤】
２．按表操作。
加入物(ml) 空白管（B) 标准管（S） 测定管（U）
血清
--
--
0.01
蛋白标准液 --
0.01
--
蒸馏水
0.01
--
--
BCG试剂 3.0
3.0
3.0
【操作步骤】
３．在波长630nm处用空白管调零，用定量加液器 加BCG试剂，与测定管血清混合后，立即在 30±3s内，读取吸光度。
【注意事项】
4.蛋白质与双缩脲试剂反应生成紫色复合物的吸 光度与试剂的组分、pH、反应温度以及蛋白质 的性质有关，所以在做蛋白质标化测定时，实验 仪器的技术状态和反应条件等都必须严格加以控 制。
【注意事项】
5.血清蛋白质的含量一般用g/L表示，因为各种蛋 白质的分子量不同，不能用mol/L表示。
一.化学法
１．凯氏定氮法：用于测定生物物质中总氮含量
的方法，其准确度高、精密度好，成为测定蛋白 质的最经典的标准方法，但由于其测定手续繁琐 ，操作复杂，费时，除用作血清蛋白质标准品定 值及参考性测定工作外，现已很少在血清总蛋白 测定中使用，不适合血清TP的常规测定。
一.化学法
２．酚试剂法：灵敏度较高，可用于测定脑脊
*注意:如标本因严重高脂血症而混浊，需加做标
本空白管(取血清0.02ml，加入琥珀酸缓冲贮存 液4.0ml)，用琥珀酸缓冲贮存液调零，测定标本 空白管吸光度。用测定管吸光度减去标本空白管 吸光度后，再计算结果。
【注意事项】
1. BCG是一种pH指示剂，变色域为pH3.8(显黄色) ～5.4(显蓝绿色)，受酸、碱影响较大，故所用的 器材必须无酸、碱污染，BCG工作液的pH必须 精确度监测，务必使其保持在pH4.15±0.05限度 内。
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【试剂与器材】
1．6 mol/L NaOH溶液 2．双缩脲试剂 3．双缩脲空白试剂 4．60～70g/L蛋白质标准液 5．仪器 分光光度计。
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【试剂与器材】
大试管
1ml吸管 5ml吸管 洗耳球
4支 ３支
2支 １只
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操作步骤
1.取试管4支，标明测定管（U）、标准管 （S）、标本空白管（B）、试剂空白管（ RB）。
血清白蛋白测定
血清白蛋白测定法主要有色氨酸含量法、染 料结合法、电泳法、免疫化学法和电化学测定法 ，但目前国内最常用的是染料结合法中的溴甲酚 绿法。
血清白蛋白测定（BCG法）
【目的与要求】
1.掌握BCG法测定血清白蛋白的原理和方法及影 响因素、条件控制； 2.熟悉微量加样的基本技能； 3.了解血清白蛋白各种测定方法的优缺点。
测各管吸光度。
5.手工操作参数：波长540nm，光径1cm ；温度：室温（18-26 ℃）；模式：终点 法；反应时间：30min，样本量：100ul， 试剂量：5ml.
5.计算
样本管吸 血清总蛋白(g/L)= 光度
-----------------
标准管吸光度
xC标准 (g/L)
血清总蛋白
参考范围
【注意事项】
2.胆红素和血红蛋白本身的颜色可引起吸光值增加 ，造成阳性干扰，但经样品空白校正后可忽略不 计。由于血红蛋白本身能与双缩脲试剂反应，产 生与血清白蛋白和球蛋白相近的显色效价，故应 注意高血红蛋白的影响。
【注意事项】
3. 酚酞、溴磺酞钠在碱性溶液中呈色，影响测定结 果，右旋糖酐可使测定管混浊亦影响结果，理论 上这些干扰均可用相应的标本空白管来消除。
液和尿液中的微量蛋白质，但由于该法是先测定 出酪氨酸的量，再根据酪氨酸在蛋白质中含量而 得出蛋白质的含量，因而准确度较差。