(完整版)木质素酶活力的测定方法
木质素的测定
中性洗涤剂:按Van Soest方法配制;2M盐酸溶液:167ml浓盐酸(比重 1.19)用蒸馏水定溶至1000ml;72%浓酸溶液: 665mlH2SO4(比重1. 84)加入300ml水中,冷至20℃,补加水至1000ml。
1.3方法取经80℃3h烘至衡重的三个菌株各5g。
1.3.1取1.0000g样品置于100ml碘瓶中,加入70ml中性洗涤剂,之后放入已沸的高压锅, 100℃保温40min,115~121℃保温20min,取出用3号30ml沙芯坩埚过滤至pH 6.5~7.0,依次用95%乙醇、无水乙醇和丙酮洗涤2次,将残渣置真空干燥器中,干燥20min。
1.3.2将残渣连同坩埚置于100ml烧杯中,加入70ml2M盐酸溶液,然后放入已沸的高压锅,100℃保温50min,过滤至中性,依次用95%乙醇、无水乙醇和丙酮洗涤2次,残渣80℃烘至衡重为W1。
1.3.3将残渣连同坩埚置于150ml烧杯中,加入10ml致冷的72%硫酸,20℃降解4h,后加入90ml蒸馏水,室温过夜,次日用蒸馏水洗残渣至pH 6.5,烘干至衡重为W2,W1-W2为纤维素的含量。
1.3.4将残渣在550℃马福炉中灰化,干燥器中平衡至衡重为W3,W2-W3即为木质素的含第二种方法：1 纤维素纤维素的测定方法有硫酸与重铬酸钾氧化法、酸性洗涤法与酸碱醇醚处理法和差重法等。
1.1 改进方法1.1.1 预处理称取0.10 g玉米秸秆于刻度试管（容量为15ml）中，加入醋酸和硝酸混合液（体积比1:1）5 ml，盖上盖于沸水浴中加热30 min，全部转至塑料刻度离心管（容量为50ml）中，加蒸馏水稀释至45 ml刻度线，冷却后以8000 转每分的转速离心15min，去除上清液，再加蒸馏水至45ml刻度线然后离心去上清夜，以同样的方法再洗两次后于烘箱80 ℃烘干。
1.1.2 测定取烘干样加入混合液（溶液中硫酸的质量分数为10%；重铬酸钾的浓度为0.1 mol/L）10 ml，摇匀后沸水浴15 min，全部转入干净的三角瓶中冷却后滴定。
木质素测定方法
木质素测定方法木质素是一种存在于植物细胞壁中的复杂有机化合物，它是植物细胞壁的主要成分之一，也是造纸、生物质能源等领域的重要原料。
因此，对于木质素的测定方法的研究具有重要的意义。
常用的木质素测定方法主要有以下几种：一、酸碱法酸碱法是一种常用的木质素测定方法，其原理是利用酸碱反应将木质素分解成单体，然后通过比色法或滴定法测定单体的含量。
该方法操作简单，但存在一定的误差，因为酸碱反应的条件会影响到分解的程度，从而影响到测定结果的准确性。
二、红外光谱法红外光谱法是一种非常常用的木质素测定方法，其原理是利用木质素的特征吸收峰进行定量分析。
该方法具有高灵敏度、高准确性和高重复性等优点，但需要专业的仪器和技术支持，成本较高。
三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种基于分离和检测的木质素测定方法，其原理是利用高效液相色谱仪将样品中的木质素分离出来，然后通过检测器进行定量分析。
该方法具有高分辨率、高灵敏度和高准确性等优点，但需要专业的仪器和技术支持，成本较高。
四、质谱法质谱法是一种基于分子质量的木质素测定方法，其原理是利用质谱仪将样品中的木质素分子进行分析和检测。
该方法具有高分辨率、高灵敏度和高准确性等优点，但需要专业的仪器和技术支持，成本较高。
总的来说，木质素的测定方法有很多种，每种方法都有其优缺点和适用范围。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的方法进行测定。
同时，还需要注意样品的处理和分析过程中的误差，以保证测定结果的准确性和可靠性。
除了上述常用的木质素测定方法外，还有一些新的方法正在不断研究和发展中，如基于光谱学的木质素测定方法、基于生物传感器的木质素测定方法等。
这些新方法具有更高的灵敏度和更低的成本，有望在未来得到广泛应用。
木质素是一种重要的有机化合物，其测定方法的研究对于推动木质素的应用和开发具有重要的意义。
随着科技的不断进步和发展，相信木质素测定方法会越来越完善和精确，为木质素的应用和开发提供更好的支持和保障。
一种羧甲基纤维素酶活力的测定方法
一种羧甲基纤维素酶活力的测定方法一、概述羧甲基纤维素酶（carboxymethylcellulase，CMCase）是一种重要的木质素酶，它可以将木质素分解为更小体积的产物，从而可促进木质素利用。
因此，测定CMCase活性对于研究木质素加工过程和利用资源至关重要。
二、试剂①P-nitrophenyl 葡糖苷（PNPG）：20 mg/ml;②NaHCO3：0.1 mol/L;③Tris-HCl buffer：50 mmol/L, pH 7.2;④凝胶分离 Buffer：30 mmol/L Tris-HCl，1.5 mmol/L EDTA，10 mmol/L Na2SO4，pH=7.2三、实验步骤1.溶质处理：将木质素细胞壁材料（包括原料和残渣）用凝胶分离buffer缓慢搅拌，直至得到悬浮液。
2.仪器设置：将悬浮液100 μL加入定量瓶中，并加入足量的Tris-HCl缓冲液（50 mL）。
然后安装溶解度仪，并调节机器的参数，使水温调节在28-30℃，波速调节在400 Hz左右，进行10min的研磨处理。
3.测定：将研磨后的悬浮液取出，加入0.1mol/L NaHCO3 10 ml和P-nitrophenyl 葡糖苷（100 μL），搅拌均匀，测定其吸光度，以425nm波长，示定测定CMCase活性。
4.计算：根据吸光度值计算CMCase活性：CMCase活性（U/ml）=A/B，其中A为PNPG测定液的吸光度，B为研磨后悬浮液的吸光度。
四、安全措施1.实验时应戴好实验手套，操作时要注意卫生。
2.羧甲基纤维素酶属于酶分类，易挥发，操作时应尽量避免空气污染。
3.在实验室进行实验时，应注意实验室温度和湿度，使实验条件尽量达到推荐的实验要求。
4.搅拌完毕后，实验材料用大量水冲洗，然后再投入污水处理系统处理。
五、结论本实验介绍了一种简便、高效的羧甲基纤维素酶活性测定方法，建立的方法可以准确、灵敏地测定羧甲基纤维素酶活性，可广泛应用于木质素加工过程和资源利用的研究中。
酶活力测定方法
NH
NH-CO-
H2N-C-NHCH2CH2CH2-CH-COOC2H5
253nm处的A随酶促反应递增，根 据酶活力单位定义计算酶活力。
酶活性单位：在最适的条件下，每分钟能 转化一个微摩尔底物的酶量定为一个活性 单位。 测定： 空白：底物溶液 + 0.001mol/L HCl
2．酶活力测定法
1）基本原理： 酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。
酶活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化 学反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力 越高。
酶反应速度可以用单位时间反应底 物的减少或产物的增加来表示。
通常酶活力测定时，先制备酶反应 进程曲线和酶浓度曲线。通过酶反应速 度的测定，求得酶的浓度或含量。
加热：使酶失效
酶反应
不同的时间取样
终止反应
测定
连续测定法：在反应过程中对反应系统进 行直接连续检测。
检测方法：
紫外-可见分光光度法 旋光法
荧光分光光度法
电化学测定法
酶偶联测定法 离子选择性电极测定法等。
示例：胰蛋白酶效价测定 胰蛋白酶 肽键、酰氨键、酯键（碱性氨基酸） 水解速率：酯键﹥酰氨键﹥肽键 供试品溶液：50～60单位/ml 底物溶液：N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯
1。酶切条件
取浓度为3ｍｇ·ｍＬ-1的样品0 4ｍＬ对1%Ｎ Ｈ4ＨＣＯ3充分透析,然后取透析样品250μＬ至 微量进样瓶,加0 3ｍｇ·ｍＬ-1ＴＰＣＫ处理的胰 蛋白酶10μＬ混匀,于37℃温控自动进样器酶切, 每80ｍｉｎ进样一针,进样量6μＬ,用Ｍｉｌｌ ｅｎｎｉｕｍ32色谱软件选择214ｎｍ进行分析, 直至ｒｈＩＬ 11完全酶解。按此方法摸索最佳 酶切时间,在第14针后ｒｈＩＬ 11已被完全酶切, 酶切时间在18～22ｈ范围内肽图图谱基本一致, 即确定最佳酶切条件为37℃保温20ｈ。
木质素测定方法 标准
木质素测定方法引言木质素是一种存在于植物细胞壁中的复杂有机化合物，它在许多工业应用中具有重要的作用。
因此，准确测定木质素的含量对于相关研究和工业生产非常重要。
本文将探讨木质素测定的方法以及相关的标准。
木质素的重要性木质素是植物细胞壁中最主要的成分之一，主要由苯丙基醇类化合物组成。
它们在植物细胞壁的形成和稳定性方面起着重要作用。
此外，木质素还具有抗菌、抗氧化和抗真菌等性质，因此在许多工业应用中得到了广泛应用，如造纸、纤维素、生物质能源等领域。
木质素测定方法本节将介绍几种常用的木质素测定方法，并对其优缺点进行比较。
1. 元素分析法元素分析法是通过测定木质素中的C、H、O和N等元素的含量来间接推算木质素的含量。
这种方法的优点是简单、快速，且不需要特殊设备。
然而，它只能提供木质素含量的估计值，并且对不同种类的木质素具有一定的局限性。
2. 气相色谱法气相色谱法是一种常用的木质素测定方法，通过将样品中的木质素化合物蒸发后分离并通过气相色谱仪检测其浓度。
这种方法可以提供比较精确的木质素含量，并且可以对不同种类的木质素进行定量分析。
然而，该方法的操作较为复杂，需要较为专业的设备和技术。
3. 红外光谱法红外光谱法是一种通过测定木质素样品在红外光谱区域的吸收特性来推算其含量的方法。
它具有非破坏性、快速和准确的特点。
此外，红外光谱法还可以用于分析不同类型的木质素成分。
然而，该方法对于样品的处理和数据分析要求较高。
木质素测定方法标准为了保证木质素测定结果的准确性和可比性，制定和使用标准方法是非常重要的。
以下是一些常用的木质素测定方法标准。
1. TAPPI标准TAPPI（美国造纸和纸浆技术协会）制定了许多与纸浆和造纸过程相关的标准方法。
其中，TAPPI T222 om-11标准方法就是用于测定木质素含量的方法。
这个标准方法主要基于气相色谱法，并规定了样品的处理、仪器的使用和数据分析等方面的要求。
2. ISO标准国际标准化组织（ISO）也制定了一些与木质素测定方法相关的标准。
酶活力的测定方法
酶活力的测定方法
酶活力咋测？嘿，有办法。
先准备好材料，就像要去打仗得有武器。
然后按照步骤来，可不能瞎搞。
注意啥呢？温度得控制好呀，不然酶活性乱了套，那可完蛋啦。
还有时间也得把握准，就像做饭不能糊了锅。
安全不？只要你操作规范，没啥问题。
就像走路走得稳就不会摔跟头。
稳定性嘛，只要条件控制好，结果就比较靠谱。
就像盖房子基础打好就不会歪。
啥时候用这方法？做实验、研究的时候呗。
优势可不少呢，能知道酶有多厉害，就像给酶做个体检。
我见过人家测酶活力，那数据准得很。
就像神枪手打靶，百发百中。
测酶活力有门道，弄好了超棒。
你还等啥呢？赶紧试试吧！。
木质素的检测方法
木质素的检测方法
嘿，这木质素的检测方法啊，咱可得好好唠唠。
一个办法呢，是化学分析法。
这就需要一些化学试剂啥的。
把要检测的东西弄碎了，放在一个小瓶子里，加上各种试剂。
然后就像变魔术一样，看着它们发生反应。
通过观察反应的结果，就能知道里面有多少木质素啦。
这就有点像猜谜语，根据各种线索来猜出谜底。
还有一种方法是光谱分析法。
这就用到一些高大上的仪器啦。
把样品放在仪器里，仪器就会发出各种光啊啥的。
然后根据光的反射、吸收啥的情况，就能判断出木质素有多少。
这就像用手电筒照东西，看看透过来的光有啥不一样。
另外呢，也可以用显微镜观察法。
把样品切成薄薄的一片，放在显微镜下。
然后就像用放大镜看小虫子一样，仔细观察里面的结构。
如果能看到木质素的特征结构，那就说明有木质素啦。
这就需要有耐心，一点点地找。
我记得有一次，我们在实验室里检测木质素。
大家都忙得不可开交，一会儿加试剂，一会儿看仪器，一会儿又盯着显微镜。
最后终于确定了样品里木质素的含量。
从那以后，
我们就知道了，检测木质素得用对方法，不能瞎搞。
总之呢，木质素的检测方法有不少，各有各的好处。
可以根据实际情况选择合适的方法。
让我们一起努力，把木质素检测得准准的。
木质素纤维素测定方法
木质素纤维素测定方法木质素测定方法（熊素敏等浓硫酸法）反应原理木质素在醋酸的作用下,易溶于乙醇和乙醚的混合液,在硫酸介质中用重铬酸钾氧化为二氧化碳和水,反应方程式如下：C6H10O5+ 4K2Cr2O7+ 16H2SO4=4Cr2(SO4)3+ 4K2SO4+ 6CO2+ 21H2O过量的重铬酸钾用硫代硫酸钠回滴,淀粉KI溶液为指示剂。
其中加氯化钡溶液的作用是让溶出的木质素和硫酸钡一起沉淀。
0.05g干样（过40目筛）10ml①↓离心15min沉淀5ml①↓离心15min沉淀3-4ml乙醇和乙醚混合液（1:1）↓浸泡3min（浸洗3次）沉淀↓沸水浴蒸干3ml质量分数72%硫酸玻棒搅匀↓室温静置16h+10ml蒸馏水↓沸水浴5min冷却↓5ml蒸馏水和0.5ml②，摇匀离心沉淀↓蒸馏水冲洗2次后加入10ml③和④沸水浴15min，不断搅拌↓冷却↓所有物质转入烧杯中作滴定15-20ml蒸馏水洗涤残余部分↓5ml⑤和1ml⑥硫代硫酸钠滴定对照：滴定加入了5ml质量分数25%硫酸和0.05mol/L的重铬酸钾溶液作为空白样木质素含量按下式计算: X=K(a-b) /(n×48)式中,“48”为1molC11H12O4相当于硫代硫酸钠的当量数;K为硫代硫酸钠浓度,mol/L;a为空白滴定所耗硫代硫酸钠体积,ml；b为滴定溶液所耗硫代硫酸钠体积,ml；n为干样质量, g。
①质量分数1%醋酸：②质量分数10%氯化钡：③质量分数25%的硫酸：④0.05mol/L重铬酸钾溶液：14.7g重铬酸钾定容至1000ml⑤质量分数30% KI溶液⑥质量分数0.5%淀粉液用0.05mol/L重铬酸钾和0.2mol/L硫代硫酸钠滴定纤维素测定（72%浓硫酸水解法）0.05g干样（过百目筛）↓5 ml醋酸和硝酸混合液,盖上球形玻盖↓置沸水浴中加热25 min,并不断搅拌冷却离心15min↓沉淀↓蒸馏水冲洗3次沉淀↓10ml①和10ml②摇匀沸水浴中10min↓倒入三角瓶适量蒸馏水冲洗试管3次，一并倒入三角瓶↓冷却5 ml质量分数20% KI溶液和1ml质量分数0.5%的淀粉溶液（上清液）↓0.2mol/L硫代硫酸钠滴定对照：滴定入加入了5ml质量分数25%硫酸的0.1 mol/L的重铬酸钾溶液作为空白样。
木质素酶活测定方法
115木质素酶活测定方法仪器: 多功能紫外可见光分光光度计(CE M u lt imode compu t ing UV Spect rophotometer (6 000 Series) )。
1 m l 比色皿。
反应试剂: 按测定反应液体总量1m L, 酶粗液样用量100～200 Ll; 反应缓冲溶液为pH 2.75 磷酸二氢钾缓冲溶液; 藜芦醇: 按缓冲溶液的5% (V öV ) 加入到20 mM 藜芦醇溶液中。
使用20 Ll 20mM H2O 2 溶液启动反应, 于310 mM 测吸光率的变化。
按吸光率计算藜芦醛产量。
酶活单位定义: 每分钟氧化生成1 Lmo l 藜芦醛所需的酶量。
1. 2. 5 木质素降解酶类活性测定1. 2. 5. 1 漆酶(愈创木酚法,朱显峰改良) 10 mL反应体系中,含50 mmol ·L - 1琥珀酸钠缓冲溶液(pH 值4. 5) ,0. 4 mmol·L - 1的愈创木酚和0. 5 mL的酶液,30 ℃条件下反应30 min 后,于465 nm 处测OD 值. 酶活力定义为:以灭活的酶液反应混合物做对照,1 min 内催化氧化1 nmoL 愈创木酚的酶量为1 U[6 ] .1. 2. 5. 2 木质素过氧化物酶(藜芦醇法) 藜芦醇2 mmol ·L - 1 ,酒石酸缓冲液50 mmol ·L - 1 (pH 值2. 5) ,0. 4 mmol·L - 1的H2O2 ,室温条件下测定,于310 nm 紫外光处测OD 值. 酶活力定义为: 每min合成1μmol 藜芦醛所需的酶量为1U[5 ,9 ] .1. 2. 5. 3 锰依赖过氧化物酶反应体系中含50mmol·L - 1的乳酸钠缓冲液(pH 值4. 5) 3. 4 mL ,1. 6mmol·L - 1的硫酸锰溶液0. 1 mL ,1. 6 mmol 的H2O2 0. 1 mL 启动反应. 室温条件下测240 nm 紫外光处反应4 min 时OD 改变值. 酶活力定义为:每min 使1μmol ·L - 1 Mn2 + 转化为Mn3 + 所需的酶量为1U[4 ,8 ] .。
酶活力的测定
4. 抑制剂和激活剂
抑制剂和激活剂是影 响酶活力的其他因素 。抑制剂会抑制酶的 活性，而激活剂则会 增强酶的活性。在测 定酶活力时，需要排 除抑制剂和激活剂的 影响，并进行适当的 样品处理和数据处理 以确保实验结果的准 确性
酶活力的测定
酶活力的测定
三、实验步骤与操作要点
酶活力测定的实验步骤包括样品准备、反应体系配制、温度控制、时间记录、产物或底物 浓度测定等。在操作过程中需要注意以下几点
酶活力是指酶催化特定化学反应的能力， 通常以单位时间内转换底物的摩尔数来 表示
通过测定酶活力，可以了解酶的性质、 作用机制以及底物特异性等方面的信息一、酶活力测 定的基本原理
酶活力测定的基本原 理是利用酶催化的化 学反应速率与酶浓度 成正比的性质，通过 测定反应速率来推算 酶的浓度和活力。常 用的方法有终点法、 动力学法和连续监测 法
酶活力测定结果受到多种因素 的影响，包括温度、pH值、底 物浓度、抑制剂和激活剂等。 为了获得准确的测定结果，需 要严格控制实验条件，并进行 适当的样品处理和数据处理
酶活力的测定
1. 温度
温度是影响酶活力的 重要因素之一。大多 数酶在一定的温度范 围内具有最佳活性， 温度过高或过低都会 影响酶的活性。因此 ，在测定酶活力时， 需要选择适当的温度 ，并进行温度控制以 确保实验结果的准确 性
酶活力的测定
四、时间记录
时间记录是酶活力测定的关键步骤之一。在酶促反应过程中，需要准确记录反应时间，以 便计算反应速率和产物生成量。在时间记录过程中，需要注意控制反应时间，避免过长或 过短的反应时间对实验结果的影响
酶活力的测定
五、产物或底物浓 度测定
产物或底物浓度的测定是酶活力 测定的关键步骤之一。通过测定 产物或底物的浓度，可以计算出 酶的活性。在浓度测定过程中， 需要注意选择适当的测定方法， 并进行准确的浓度计算。常用的 浓度测定方法有分光光度法、色 谱法等
(完整版)木质素酶活力的测定方法
1前言草菇是一种著名的食用菌，营养丰富，味鲜美，深受人们的喜爱。
草菇子实体含有人体必需的8种氨基酸，占其他氨基酸总量得38.2%，还含有14种维生素[1]，不愧为一种比较理想的天然保健食品。
草菇喜高温高湿，生长速度快，生长周期短，一糙只需25天左右，在广西每年4月至9月均可以种植，是一种很有发展前途的食用菌，生产和市场前景广阔。
栽培草菇的生物学效率比较低（鲜菇与栽培料的比值），用稻草栽培草菇的生物学效率大都在10—15%左右。
过去研究认为草菇主要利用纤维素、淀粉，不大利用半纤维素以及木质素。
因为草菇的半纤维素酶活性低，又缺乏降解木质素的酶类，但是农作物秸杆中一般含有半纤维素15—30%，木质素占10—30%。
为此，本试验用透明圈法、氧化圈法观测V展1、V展2、V展3、V6、V广、V11六个菌株所产的胞外酶利用分解半纤维素，木质素的能力，看是否能够从其中初步筛选出利用半纤维素、木质素较强的菌株来。
探讨更合理地配制栽培料的途径对提高草菇的生物转化率有重要意义。
2 实验原理半纤维素是由五个碳原子为主的木糖聚合的高分子化合物，经木聚糖酶降解利用之后，基质生成透明圈[2]。
木质素是以苯环为基本结构的复杂大分子的有机化合物，含碳60—66%，在多酚氧化酶、过氧化酶降解后，能与愈创木酚进行反应生成棕红色或棕褐色轮环[3]。
亮兰试剂与蛋白质结合兰青色、在与过氧化酶作用则呈黄色透明圈[4]。
通过相应的平板基质培养，草菇菌丝分泌的酶类降解利用后，形成的透明圈迟早、直径大小、色泽深度等初步判断是否存在半纤维素酶和木质素酶降解酶类及其活性。
3 材料与方法3.1 材料3.1.1 菌株V 9购至广西大学微生物研究所，V广、V11购至广西农业科学院生物技术研究所，V展1、V展2、V展3采至广西现代农业展示中心经组织培养所得。
3.1.2 试剂可溶性淀粉、亮兰溶液自配、半纤维素自已提制、愈创木酚为国产分析纯、木聚糖为进口。
3.2 试验方法3.2.1 试剂配制3.2.1.1 亮兰溶液配制25 ml亮兰溶于25ml浓度为90%乙醇中，加入85%的H3PO4，最后定溶至500ml，灭菌。
木质素测定方法 标准
木质素测定方法标准木质素是一种重要的天然高分子化合物，广泛存在于植物细胞壁中，对于研究植物生长发育和木材性质具有重要意义。
因此，木质素的测定方法也备受关注。
下面将介绍一种常用的木质素测定方法及其标准。
一、木质素测定方法1. 试剂准备（1）2% NaOH溶液：将2g NaOH加入100ml去离子水中，搅拌至溶解。
（2）1% HCl溶液：将1ml浓盐酸加入100ml去离子水中，搅拌至溶解。
（3）乙醇：取绝对乙醇。
（4）酚：取纯酚。
2. 样品制备将待测样品粉碎成粉末，称取0.5g样品，加入50ml 2% NaOH溶液中，放置于80℃水浴中加热2h，然后过滤，滤液收集于100ml烧杯中。
3. 木质素测定（1）加入1ml 1% HCl溶液，搅拌均匀。
（2）加入10ml乙醇，搅拌均匀。
（3）加入1ml酚，搅拌均匀。
（4）加入1ml 1% HCl溶液，搅拌均匀。
（5）加入10ml乙醇，搅拌均匀。
（6）用去离子水定容至100ml，搅拌均匀。
（7）用紫外分光光度计在280nm处测定吸光度值。
二、木质素测定标准根据GB/T 2677.8-1994《木材化学分析方法第8部分：木质素含量的测定》标准，木质素测定应符合以下要求：1. 试剂应符合国家标准或行业标准的规定。
2. 样品应随机取样，样品数量应符合统计学要求。
3. 试验室应保持干燥、通风、无污染的环境。
4. 试验过程中应注意安全，避免试剂溅入眼睛或皮肤。
5. 试验结果应进行统计分析，计算出平均值和标准差。
6. 试验结果应报告测定值和相应的误差范围。
7. 试验结果应与同类样品进行比较，评估样品的木质素含量。
总之，木质素测定方法及其标准对于研究植物生长发育和木材性质具有重要意义，应严格按照标准操作，确保测定结果的准确性和可靠性。
木质素含量测定方法
木质素含量测定方法
森林作物的木质素含量测定是评价森林作物品质的重要指标，在科学管理森林作物时也有重要的作用。
木质素含量测定采用的方法有多种，主要有重量法和容量法。
1、重量法
重量法是最常用的木质素含量测定方法，其测定原理是利用重量比，即已知样品中木质素的重量比和总重量比，可以推算出样品中木质素的重量。
该方法测定步骤如下：
Step1：将二氧化碳法制样的样品（约10g）装入直径为30mm的重量罐内。
Step2：将重量罐放入干燥箱，在105℃±2℃的温度下烘干，并在每隔两小时消耗50g的二氧化碳，直至样品重量不变。
Step3：取放入重量罐内的干燥样品重量，记为A。
Step4：将烘干的样品取出，用火焰焚烧，烧至弹棉，再将烧结物再放入重量罐内，重新烘干，烘至样品不减重。
Step5：取放入重量罐内的烧结物重量，记为B。
Step6：计算样品中木质素含量：木质素含量＝（A-B）/A × 100%。
2、容量法
容量法是采用干重法检测样品中的木质素含量，它比重量法简单，耗时短，容量稳定性高，但容量法的结果受木质素的表面粗糙度影响较大，不适用于检测木质素含量较低的样品，它的检测步骤如下：
Step1：将样品分装于两个容量瓶中。
土壤木质素过氧化物酶(S-Lip)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
土壤木质素过氧化物酶（S-Lip）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1970规格：50T/24S产品内容：试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存；临用前加入5mL乙醇溶解。
试剂三：液体10μL×1瓶，4℃保存。
临用前加入5mL蒸馏水备用。
产品说明：木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。
木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛，在310nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、震荡仪、甲苯、乙醇、30-50目筛（或更小）。
操作步骤：一、样本处理：土样自然风干，过30-50目筛。
二、测定操作：1、紫外分光光度计预热30min以上，波长调至310nm，蒸馏水调零。
2、将试剂二用乙醇稀释10倍备用，用多少配多少。
测定管对照管上样（g）0.10.1甲苯（μL）5050室温静置15min。
试剂一（μL）800800试剂二（μL）100-试剂三（μL）50-30℃水浴反应1h后立刻煮沸5min。
试剂二（μL）-100试剂三（μL）-5012000g常温离心10min，取上清于310nm处测定吸光值，分别记为A测定管、A对照管，计算ΔA=A测定管-A对照顾管。
三、酶活计算公式：酶活性定义：每克土壤每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
S-LiP活性（U/g）=△A/(ε×d)×109×V反总÷W÷T= 1.792×△A÷W。
ε：藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，1mL=0.001L；W：土样质量，g；T：反应时间，60min；109：1mol=109nmol。
木质素酶菌株的筛选与酶活力测定
王鹏潮木质素酶菌株的筛选与酶活力的测定一、实验目的1.学习了解木质素酶菌株的培养条件以及分离方法2.学习利用定性和定量方法筛选并鉴定具有木质素降解能力的土壤真菌3.学习木质素酶活力测定的原理、操作二、实验原理木质素是自然界中木质纤维素的主要组分之一，含量丰富、降解困难，其生物降解是自然界中碳循环的限速过程。
目前的研究主要局限于担子菌类白腐真菌.。
事实上在土壤、堆肥等系统中木质纤维素的转化绝不仅仅是高等担子菌作用结果，许多丝状低等真菌的作用不容忽视。
此外，担子菌类白腐真菌在土壤中的木质素降解作用还存在争议，因为土壤环境条件不适于白腐菌活性代谢。
因此，研究土壤中低等真菌对木质素的降解有重要现实意义。
常用的木质素降解真菌筛选方法主要有定性方法和定量方法。
定性方法是利用染料或木质素类低分子底物检测木质素降解酶的产生，定量方法是利用14C标示的木质素作为代谢底物，检测微生物产生的14CO2的能力。
另外还有一种半定量方法，该方法利用饱和氢氧化钡浸湿的滤纸吸收代谢产生的14CO2，同时用X射线曝光胶片自动照相，生成碳酸钡量不同在相片上显示不同程度的颜色，利用软件分析可半定量14CO2产生量。
本实验利用定性和定量方法筛选并鉴定具有木质素降解能力的土壤真菌，检测其产生的主要木质素降解酶类，以期考察土壤中有木质素降解能力的真菌种类，并试图筛选出有较强降解能力的真菌用于高木质纤维素含量的土壤、堆肥系统中，加速木质纤维素的转化，提高腐殖质的产率。
三、实验步骤1.培养基基础培养基（BM培养基）：酵母膏10g，葡萄糖30g，加蒸馏水至1000ml；菌种保藏培养基（PDA培养基）：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，加蒸馏水至1000ml；选择培养基：愈创木酚1.0g，酒石酸铵0.1g，蛋白胨2.6g，MgSO4·7H2O 0.5g，KH2PO4 1.0g，Na2HPO4 0.2g，琼脂18g，加蒸馏水至1000ml；降解培养基：Kraft木质素溶液60ml，酒石酸铵0.1,g，MgSO4·7H2O 0.5g，KH2PO4 1.0g，Na2HPO4 0.2g，MnSO4 0.035g，CuSO4·5H2O 0.007g，加蒸馏水至1000ml；产酶培养基：葡萄糖10g，酒石酸铵0.1g，MgSO4·7H2O0.5g，KH2PO4 1.0g，Na2HPO4 0.2g，MnSO4 0.035g，CuSO4·5H2O 0.007g，加蒸馏水至1000ml；2.菌种分离采集10处岳麓山林间表层土壤样品，结合稀释平板法在固体选择培养基上通过不断的划线分离直至获得纯菌种，在PDA培养基上斜面保藏3.菌种初筛将分离纯化后的菌株点接至苯胺兰平板，25℃避光培养10d，每天检查菌落外脱色圈的形成情况。
酶活性测定方法(ENZ)
酶活性测定方法(ENZ)
酶活性测定方法 (ENZ)
1. 引言
酶活性测定是评估酶在特定条件下催化产物形成速度的一种常用方法。
该方法可以用于酶的鉴定、酶的纯化、酶的定量以及酶的反应机理研究等领域。
本文档将介绍一种常用的酶活性测定方法。
2. 实验步骤
2.1. 准备试剂和设备
- 酶样品
- 底物溶液
- 缓冲液
- 显色剂
- 集光器和分析仪器
2.2. 操作步骤
1. 预热集光器至适当温度。
2. 将一定比例的底物溶液和缓冲液混合，在试管中制备酶反应
混合物。
3. 在集光器中加入酶反应混合物。
4. 记录初始吸光度值。
5. 启动反应，记录吸光度值随时间的变化。
6. 在适当时间点停止反应，加入显色剂。
7. 通过分析仪器测量吸光度值，并根据标准曲线计算出酶活性。
3. 数据分析
根据上述实验步骤获得的数据，可以进行酶活性的计算和分析。
常见的酶活性计算方法包括单位时间内底物转化量的计算、酶活度
单位的确定以及酶活性的比较等。
4. 结论
本文介绍了一种常用的酶活性测定方法，该方法可以用于酶的
鉴定和定量，并可以通过数据分析获得酶活性指标。
酶活性测定方
法在生物化学和生物工程领域中具有重要的应用价值。
参考文献
[1] Smith A, et al. (Year). Title of the Article. Journal Name, Volume(Issue), Page numbers.
[2] ...。
酶活性的测定方法
酶活性的测定方法生物样品预处理预冷解剖用具，采用颈后断头的方法将鱼杀死，立即取肝脏、腮、脑，操作均在4℃下进行，用预冷的0.15 mol/L KCl 溶液洗去血丝，用滤纸吸干后称重。
将肝、脑组织放入预冷的Tris-HCl缓冲液(0.1 mol/L Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 mol/L KCl)匀浆（匀浆比（W/V）1:5），腮组织放入组织匀浆（匀浆缓冲液含40mmol/L咪唑，250mmol/L蔗糖，5mmol/L EDTA，pH7.0），匀浆比为1:40，匀浆速率为10000g，以15s为周期，重复3次。
分别取1ml匀浆液放入1.5ml离心管进行离心，4℃下离心(9000g，20min)，取上清液-80℃下保存，待测。
（1）250mL 0.15 mol/L KCl：取2.7956g（2）Tris-HCl缓冲液：125mL 0.1 mol/L Tris（1.5143g）+ 105mL 0.1 mol/L HCl+ KCl（0.15*0.23*74.55=2.5720g）（Na+＋K+）－ATPase活性的测定1、试剂（1）匀浆液（250ml）：40mmol/L咪唑0.6808g+250mmol/L 蔗糖21.3931g +5mmol/LEDTA 0.3653g（2）反应缓冲液（250ml）：80mmol/L咪唑1.3616g+4mmol/LMgCl2 0.2033 g+40mmol/LKCl 0.7455g（3）16mmol/L Na2ATP（10ml）：0.0988g（4）30%三氯乙酸（TCA）9g TCA+21mlH2O（5）定磷试剂（硫酸亚铁-钼酸胺试剂100ml）：10ml 5mol/LH2SO4+1.3556 g钼酸铵+90mlH2O每10ml加入FeS040.5g（FeS04·7H2O 0.0941g），25ml加入FeSO4·7H2 O 0.2353g，临用前配制。
木质素降解酶的酶活测定方法探讨
因而 ， 木质素的分解特别慢 ， 而且 ， 在完整的木质组织中， 木质素是以一种物理屏障存在的， 它包围纤维素 ， 成为外围基质 ， 保护纤维素免遭微生物袭击和降解酶 的进攻 ， 降解必须先于纤维素分解 ， 其 是地球上碳素 循 环 的限速过 程 ， 木质 素 的降解 在碳 素循 环及植 物纤 维素 材料 有效 利用 中占有非 常重 要 的地位 ［ ５。 故 ２ Ｊ － １２ 木质素的降解酶系是非常复杂的体系 ， ． 目前对它的研究较多， 认为最重要的木质素降解酶有 ３ ： 种 木
ｃｓ ． ｉ ｓ）酚氧化酶 、 ｏｅｏ ｄ ｅ、 １ｘ ａ 过氧化氢酶等都参与了木质素的降解或对其降解产生一定 的影响。
收稿 日期 ： ０ ８—０ ２０ ２—１ ８ 修 回 日期 ： ０ ８—０ ２０ ２—１ ７
项目 来源 ： 广西高校百名 中青年学科带头人资助计划（ 目 Ｒ ２ ０ ０ ３ ０ ５ ； 市科学研究与技术开发计划（ ５ １４ ２ 。 项 号 Ｃ ０ ６ ８ ０ １ ）桂林 ００ １ — ） 第一作者简介：倪启亮 ， ，９ ２年生 ， 男 １８ 浙江嘉兴 ， 在读硕 士研究生 ， 从事环境 工程方 面的研究 。
和农作物废弃秸杆形式存在【 ， ｌ 它是一种量大而又可再生的有机资源。 Ｊ 能源紧张、 粮食短缺及环境污染的 日 趋严重是 目前世界各国所 面临的难题 。通过对可再生资源的转
化 利用 ， 能在有 利于 生态 平衡 的条 件 下缓 解 或解决 这些 问题 。 而这些 清 洁 、 保产 业正 作 为 一种新 的工业 环 生产 方式 日益受 到技 术发 达 国家 的重视 。
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1前言
草菇是一种著名的食用菌，营养丰富，味鲜美，深受人们的喜爱。
草菇子实体含有人体必需的8种氨基酸，占其他氨基酸总量得38.2%，还含有14种维生素[1]，不愧为一种比较理想的天然保健食品。
草菇喜高温高湿，生长速度快，生长周期短，一糙只需25天左右，在广西每年4月至9月均可以种植，是一种很有发展前途的食用菌，生产和市
场前景广阔。
栽培草菇的生物学效率比较低（鲜菇与栽培料的比值），用稻草栽培草菇的生物学效率大都在10—15%左右。
过去研究认为草菇主要利用纤维素、淀粉，不大利用半纤维素以及木质素。
因为草菇的半纤维素酶活性低，又缺乏降解木质素的酶类，但是农作物秸杆中一般含有半纤维素15—30%，木质素占10—30%。
为此，本试验用透明圈法、氧化圈法观
测V
展1、V
展2
、V
展3
、V
6
、V
广
、V
11
六个菌株所产的胞外酶利用分解半纤维素，木质素的能
力，看是否能够从其中初步筛选出利用半纤维素、木质素较强的菌株来。
探讨更合理地配制栽培料的途径对提高草菇的生物转化率有重要意义。
2 实验原理
半纤维素是由五个碳原子为主的木糖聚合的高分子化合物，经木聚糖酶降解利用之后，基质生成透明圈[2]。
木质素是以苯环为基本结构的复杂大分子的有机化合物，含碳60—66%，在多酚氧化酶、过氧化酶降解后，能与愈创木酚进行反应生成棕红色或棕褐色轮环[3]。
亮兰试剂与蛋白质结合兰青色、在与过氧化酶作用则呈黄色透明圈[4]。
通过相应的平板基质培养，草菇菌丝分泌的酶类降解利用后，形成的透明圈迟早、直径大小、色泽深度等初步判断是否存在半纤维素酶和木质素酶降解酶类及其活性。
3 材料与方法
3.1 材料
3.1.1 菌株
V 9购至广西大学微生物研究所，V
广、
V
11
购至广西农业科学院生物技术研究所，V
展1
、
V
展2
、V
展3
采至广西现代农业展示中心经组织培养所得。
3.1.2 试剂
可溶性淀粉、亮兰溶液自配、半纤维素自已提制、愈创木酚为国产分析纯、木聚糖为进
口。
3.2 试验方法
3.2.1 试剂配制
3.2.1.1 亮兰溶液配制
25 ml亮兰溶于25ml浓度为90%乙醇中，加入85%的H3PO4，最后定溶至500ml，灭
菌。
3.2.1.2 愈创木酚试剂配制：
0.4ml愈创木酚药品，用100ml水酒精溶解。
3.2.2 半纤维素提取
3.2.2.1 稀酸高温提取法[5]
50g玉米芯装入500 ml三角瓶加入0.1%的硫酸0.5ml,加无菌水至500ml,60℃下浸泡12h,去渣取液→按原料干重加水至500ml→浴煮10min(120℃高压) →冷却,加酒精,
用离心机离心分离→取沉淀物。
3.2.2.2 浓碱液提取法[6]
玉米芯切碎→烘干→粉碎→过40目→取6个500ml三角瓶，每瓶装25g玉米芯粉→每瓶加水300ml→置入高压锅126℃煎40 min→过滤取渣→每瓶加入10%NaOH300 ml→移入水浴锅内90℃水温提取半纤维素2h→过滤取滤液，用1：1HCL中和到PH6.0～7.0→离心15～20min（3500r/min）→取沉淀粉加入95%乙醇浸过液（或移入40℃温箱）→24h
后离心取沉淀物。
3.3 平板培养基制作
3.3.1 淀粉酶测定培养基
4.0g可溶性淀粉、4.5g琼脂、1.0g蛋白胨、1.3g NaH2PO4加水220ml→调PH=6.5
→倒入12付培养皿,每皿15ml→0.1Mpa下灭菌30 min。
3.3.2亮兰培养基
20g木薯根、20g木薯叶、4.5g琼脂、1.0gKH2PO4、2.0g葡萄糖，加220 ml水煮至
200 ml→0.1Mpa下灭菌40min.
3.3.3 半纤维素培养基制备
烘干的半纤维素2.5，磨碎倒入烧杯中,加220ml水解，再加琼脂3.0，酵母膏0.6，1.0gNa2HPO4，0.1gMgSO4，1.0gNH4NO3煮至200 ml倒12付培养皿→0.1 Mpa下灭菌40 min。
3.3.4 木质素酶测定培养基制备
20g木薯块根，20g木薯茎叶，加水220 ml煮至200 ml双层沙布过滤→加入
1.0gKH2PO4，糖
2.0g，酵母膏2.0g→PH=7.0，加入0.04%的愈创木酚2ml[7]，摇匀倒12
付平板→0.1 Mpa下灭菌40 min。
3.3.5 半纤维素测定培养基双层平板制备
下层平板—水琼脂培养基：琼脂2.5加水130 ml煮至120 ml,倒12付培养皿→灭
菌。
上层平板—水解圈制作：配方同上述半纤维素培养基配方一样→装入300 ml的三角瓶灭菌→待下层培养基冷却后，用灭菌过的量筒均匀倒入12付培养皿中。
3.3.6 对照实验。