微生物与生化药学 问答题

微生物与生化药学问答题

第二章基因工程制药

1. 利用基因工程技术生产药物的优点？

答：1、大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽，为临床使用提供有效的保障；

2、可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，

从而扩大这些物质的应用范围；

3、可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；

4、内源生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工

程进行改造和去除；

5、可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。

2. 基因工程药物制造的主要步骤？

答：目的基因的克隆；

构建DNA 重组体；

将DNA 重组体转移入宿主菌构建工程菌；

工程菌的发酵；

外源基因表达产物的分离纯化；

产品的检验等。

3. 化学合成目的基因的先决条件？

答：较小的蛋白质或多肽的编码基因可以采用人工化学合成，其先决条件：已知目的基因的核苷酸序列或蛋白质的氨基酸序列，按相应的密码子推导出DNA 的碱基序列。

4. 人工合成基因的限制有哪些？

答：1、不能合成太长的基因，50~60 个碱基对；

2、人工合成碱基对时，遗传密码的简并会为选择密码带来很大的困难：

3、费用高。

5. 基因工程宿主菌应满足那些要求？目前应用最广泛的宿主菌有哪些？

答：1、容易获得较高浓度的细胞；

2、能利用廉价易得的原料；

3、不致病、不产生内毒素；

4、发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；

5、容易进行代谢调控；

6、容易进行DNA 重组技术操作；

7、产物的产量、产率高，产物容易提取。

宿主菌可分两大类：1、原核细胞：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌；

2、真核细胞：酵母菌、丝状真菌、哺乳动物细胞。

6. 表达载体须具备哪些条件？常用载体有哪些？

答：1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。

2、具多个限制酶切点，但每种切口最好只有1 个，以便与外源基因连接。

3、具有某些标记基因，便于进行筛选。

4、所产生的mRNA 必须有翻译的起始信号。

5、具有很强的启动子。

6、有很强的终止子。

常用载体有：1、细菌细胞的质粒。

2、λ噬菌体载体。

7. 真核基因在大肠杆菌中的表达形式？

答：有三种形式：

(1)融合蛋白的表达形式。

（由一段短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的蛋白质,称为融合蛋白.。）

(2)非融合蛋白的表达形式。

(3)分泌型表达形式。

8. 表达用的酵母菌应满足哪些条件？

答：表达用的酵母宿主菌应具备：

①体生长力强.

②菌体内蛋白酶要较弱.

③菌株性能稳定.

④分泌能力强。

9.基因工程菌在发酵过程中对发酵罐有哪些要求？

答：①要提供菌体生长的最适宜条件；

②培养过程不得污染，保证纯菌培养；

③培养及消毒过程中不得游离出异物；

④不能干扰细菌代谢活动。

10.离子交换层析的原理？

答：当离子交换剂处于水溶液中时，活性离子可以从活性基因上解离下来，在基质骨架与溶液间自由迁移，并可与溶液间的同性离子，因与活性基因的化学亲和力不同而发生交换，即发生离子交换作用。

11.疏水层析的基本原理？

答：蛋白质表面多由亲水基团组成，也有一些疏水性较强的疏水区。在高盐浓度时，蛋白质表面疏水部位的水化层被破坏，暴露出疏水部位，疏水作用增强，与固定相上的疏水基团产生疏水性作用而被吸附；盐浓度降低时蛋白质疏水作用减弱，目的蛋白质被逐步洗脱下来。

12.亲和层析的基本原理？

答：通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质（也称载体）上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。

（被固定在基质上的分子称为配体，配体与基质共价结合，构成亲和层析的固定相，称为亲和吸附剂。）

13.凝胶过滤层析的优缺点？

答：优点：设备简单、操作方便、样品回收率高、实验重复性好、不改变样品生物学活性。

缺点：分辨率较低，尤其是相对分子质量相近的分子之间。

第三章细胞工程制药

1.动物细胞的生理特点？

答：1 细胞分裂周期长（动物细胞分裂所需时间一般为12~48h。）。

2 细胞生长需贴附于基质，有接触抑制现象。

3 二倍体细胞寿命有限（异倍体细胞系寿命长）。

4 对生长环境要求敏感。

5 培养基要求高。

6 合成的蛋白质有修饰。

2.动物细胞培养时加入血清的作用机制？

答：提供基本营养物质；

提供激素和各种生长因子；

提供贴附因子和伸展因子；

对培养中的细胞起到某些保护作用；

提供PH\缓冲物质，调节培养基PH；

影响培养系统中的某些物理特性如：剪切力、黏度、渗透压和气体传递速度等。

3.无血清培养基的优点？

答：优点：①可避免血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结果的重复性。

②避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染；

③避免血清组分对实验研究的影响；

④有利于体外培养细胞的分化；

⑤可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。

（缺点：主要表现为细胞的适用范围窄，细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养的保存和应用不如传统的合成培养基方便。）

4.动物细胞大规模培养的方法有哪些？

答：①根据培养细胞的种类：原代细胞培养和传代细胞培养。

②根据培养基的不同：液体培养和固体培养。

③根据生产实际：贴壁培养、悬浮培养和贴壁-悬浮培养（假悬浮培养）。

5.动物细胞悬浮培养的优缺点？

答：优点：适用的细胞较广；

容易更换培养液；

容易采用灌流培养的方式使细胞达到高密度。

缺点：操作比较麻烦；

培养条件不易均一；

传质、传氧较差；

不能有效监测细胞的生长；

需要合适的贴附材料和足够的面积；

扩大培养比较困难，投资大。

6.动物细胞贴壁培养的优缺点？

答：优点：操作简单，培养的体积大、成本低；