柱层析法的原理和方法

柱层析法的原理和方法
一、原理
• 柱层析是化合物在液相 和固相之间的分配，属 于固-液吸附层析。
• 利用固定相对液体相中 的各组分吸附能力不同， 从而以不同速度向下迁 移，形成若干色带，分 别收集。
二、操作
1.装柱
湿法
1.将溶剂装入管 内， 2.将吸附剂和溶 剂 调成浆状，倒入 管 中， 3.使溶剂流出， 吸附剂下沉
干法
湿法
溶于小极性 溶剂的化合 物
适用范围
任何化合物
操作
1.将溶剂旋干 2.加少量溶剂溶解（样品 样品溶液用 溶解性好） 滴管均匀加 3.加入硅胶吸附至硅胶 不 入 附着在瓶壁上 4.旋干 保证样品层很平整 硅胶和样品间易产生气泡 样品紧实， 不易产生裂 缝 适用范围窄
2. 上 样
优点
缺点
3.淋洗
减少硅胶的使用量， 但是由于大量的空 气通过硅胶会使溶 剂挥发 有些比较易分解的 东西可能得不到而 且还必须同时使用 水泵抽气
优点
增加淋洗剂的流动 速度，减少产品收 集的时间
分离效果最好
缺点
降低分离效果，减 分离时间wenku.baidu.com长，效 少产品的塔板数 率过差
5.收集
• 根据样品中各组分的吸附能力判断流出 的各组分 • 若为有色物质，观看色带，若无色，点 板观察。 • 收集含目标物的淋洗剂。 • 确定纯度。 • 选择无杂质的进行回收。
• 洗脱剂的选择：根据点板的比移值（简称Rf值）。
原点到所需要点的中心 距离 Rf 值 原点到溶剂前沿的距离
洗脱剂极性比较： 己烷、石油醚<环己烷<四氯化碳<三氟乙烯 <二硫化碳<甲苯<苯<二氯甲烷<三氯甲烷< 乙醚<乙酸乙酯<丙酮<丙醇<乙醇<甲醇<水 <吡啶<乙酸
4.分类
分类 加压 常压 减压
干法
1. 管上端放一漏 斗 2.将硅胶装入 3.轻敲管壁使之 填装均匀
吸附剂
种类：氧化铝、硅胶，氧化镁、碳酸钙和活性炭等。 氧化铝有酸、碱、中性。适用于不同类型化合物 的分离。 硅胶没有酸碱性之分，可适用于各类有机物的分 离。
吸附剂的选择
a.与被吸附物及展开剂均无化学作用（首要） b.吸附能力的大小（颗粒大小） c.吸附剂的活性（含水量） d.分子极性