sds-page
sds-page电泳的基本原理
SDS-PAGE电泳是一种常用的蛋白质分析技术，通过电泳分离蛋白质样品的方法得到了广泛的应用。
本文将着重介绍SDS-PAGE电泳的基本原理。
一、SDS-PAGE电泳的概念SDS-PAGE是一种已经被广泛应用的蛋白质分离技术，它的全称是聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis）。
这种电泳技术利用聚丙烯酰胺凝胶作为分离介质，通过直流电场将蛋白质样品分离出不同电荷和大小的蛋白质成分。
二、SDS-PAGE电泳的原理1. 聚丙烯酰胺凝胶SDS-PAGE电泳中所使用的凝胶是由聚丙烯酰胺构成的。
聚丙烯酰胺凝胶具有一定的孔隙结构，可以根据蛋白质的大小和电荷来调整孔隙的大小，从而实现不同大小的蛋白质的分离。
2. SDS处理SDS是指月桂基硫酸钠，它是一种阴离子表面活性剂。
在SDS-PAGE 电泳中，将样品中的蛋白质经过SDS处理后，蛋白质表面都会均匀地吸附一定数量的SDS分子，并且使蛋白质呈负电荷。
这样，所有的蛋白质分子都会带有类似的电荷密度，可以消除蛋白质的本身的电荷特性，使蛋白质在电场作用下只受到电场力的作用，而不受到其他因素干扰。
3. 蛋白质分离将经过SDS处理的蛋白质样品加载到聚丙烯酰胺凝胶上，然后通过电泳进行分离。
经电泳分离后，蛋白质会根据其大小和电荷迁移到不同位置，从而使不同的蛋白质分离开来。
三、SDS-PAGE电泳的应用SDS-PAGE电泳技术在生物化学和分子生物学研究领域应用广泛。
它可以用于研究蛋白质的分子量、纯度和比例，也可以用于检测蛋白质的存在和表达水平，同时还可以用于鉴定蛋白质的异构体等。
四、SDS-PAGE电泳的发展SDS-PAGE电泳技术自问世以来，经过不断的改进和完善，在蛋白质分离和分析领域一直处于领先地位。
未来，随着科学技术的不断进步，SDS-PAGE电泳技术也将会迎来新的发展，并在更广泛的领域得到应用。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE测定蛋白质分子量
02 实验材料
所需的试剂和溶液
丙烯酰胺（AA）：用于制备凝胶，是聚合反应 的单体。
甲叉双丙烯酰胺（MBA）：交联剂，增加凝胶 的交联度。
N,N,N',N'-四甲基乙二胺（TEMED）：催化剂， 加速交联聚合反应。
所需的试剂和溶液
过硫酸铵（APS）
引发剂，产生自由基，引发聚合反应。
SDS
十二烷基硫酸钠，用于变性蛋白质并促使其 带负电荷。
发展新型分离技术
随着生物技术的不断发展，可以发展新型的蛋白质分离技术， 如二维电泳、毛细管电泳等，以提高蛋白质分离的分辨率和准
确性。
应用多维度分析
在后续实验中，可以将SDS-PAGE与其他蛋白质分析技术相结 合，如质谱技术、免疫学检测等，进行多维度分析，更全面地
了解蛋白质的性质和功能。
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白质带负电荷，从而在电场中向正极移动。
聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，能够根据蛋白质分子量的不同
03
对其进行分离。
蛋白质的分子量测定
通过比较标准蛋白的迁移率和已知分 子量的标准蛋白，可以大致测定出待 测蛋白质的分子量。
蛋白质的迁移率与其分子量的对数成 反比，因此可以通过计算待测蛋白与 标准蛋白的相对迁移率来推算其分子 量。
甘氨酸
作为分子量标准品。
Tris-HCl缓冲液
维持电泳过程中的pH值稳定。
所需的仪器和设备
电源
为电泳提供电力。
凝胶板
放置凝胶的框架。
垂直电泳槽
提供电泳所需的基 本结构。
移液器
精确添加试剂和溶 液。
紫外透射仪
检测蛋白质条带。
实验前的准备事项
清洗电泳槽和相关器具，确保无残留物。 准备好所需的试剂和溶液，并确保其在有效期内。
SDS-PAGE(SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳)原理
甘氨酸
最广泛使用的不连续缓冲系统最早是由Ornstein(1964) 和 Davis(1964) 设计的, 样品和浓缩胶中含 Tris-HCl(pH 6.8), 上下槽缓冲 液含Tris-甘氨酸(pH 8.3), 分离胶中含Tris-HCl(pH 8.8)。系统中所有组 分都含有0.1% 的 SDS(Laemmli, 1970)。样品和浓缩胶中的氯离子形 成移动界面的先导边界而甘氨酸分子则组成尾随边界，在移动界面的两 边界之间是一电导较低而电位滴度较陡的区域, 它推动样品中的蛋白质 前移并在分离胶前沿积聚。此处pH值较高， 有利于甘氨酸的离子化， 所形成的甘氨酸离子穿过堆集的蛋白质并紧随氯离子之后，沿分离胶泳 动。从移动界面中解脱后，SDS-蛋白质复合物成一电位和pH值均匀的 区带泳动穿过分离胶，并被筛分而依各自的大小得到分离。
Ø 加入加速剂TEMED后聚合马上开始，应立即将凝胶混匀，迅速灌胶。
保存条件： 4℃保存。
注意事项：
Ø 易燃，有腐蚀性，请注意防护。
Ø为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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过硫酸铵 分子式: (NH4)2S2O8 分子量: 228.20
性状：过硫酸铵是一种白色、无味晶体，常作强氧化剂使用，也可用作单体聚合引发 剂。它几乎不吸潮，由于能达到很高的纯度而具有特别好的稳定性，便于储存。另外， 它还具有使用方便、安全等优点。 储存及使用注意事项：
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浓缩效应：凝胶由两种不同的凝胶层组成。上层为浓缩胶，下层为分离 胶。浓缩胶为大孔胶，缓冲液pH6.7，分离胶为小孔胶，缓冲液pH8.9。 在上下电泳槽内充以Tris—甘氨酸缓冲液(pH8.3)，这样便形成了凝胶孔 径和缓冲液pH值的不连续性。在浓缩胶中 HCl几乎全部解离为Cl-，但只 有极少部分甘氨酸解离为H2NCH2COO-。蛋白质的等电点一般在pH5左 右，在此条件下其解离度在HCl和甘氨酸之间。当电泳系统通电后，这3 种离子同向阳极移动。其有效泳动率依次为Cl-＞蛋白质＞ H2NCH2COO-，故C1-称为快离子，而H2NCH2COO- 称为慢离子。电 泳开始后，快离子在前，在它后面形成离子浓度低的区域即低电导区。 电导与电压梯度成反比，所以低电导区有较高的电压梯度。这种高电压 梯度使蛋白质和慢离子在快离子后面加速移动。在快离子和慢离子之间 形成—个稳定而不断向阳极移动的界面。由于蛋白质的有效移动率恰好 介于快慢离子之间，因此蛋白质离子就集聚在快慢离子之间被浓缩成— 条狭窄带。这种浓缩效应可使蛋白质浓缩数百倍。
sds-page分离蛋白的原理
sds-page分离蛋白的原理SDS-PAGE（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种在实验室中常用的生物化学技术。
SDS-PAGE可以用来分离蛋白质，使研究者能够研究它们的结构和功能。
SDS-PAGE的基本原理是利用电泳现象将复杂的混合物分离成单一的组分。
电泳是一种根据物质的电荷、大小和形状利用电场作用通过凝胶进行分离的方法。
SDS-PAGE是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离蛋白质的一种方法。
蛋白质分子因其分子量和分子结构不同，在SDS-PAGE中将被分离为单独的、清晰的带状带。
这些带状带每个代表一个不同的蛋白质。
通过观察这些蛋白质带状带，可以获得蛋白质分子的相关信息，如分子量（MW）和含量。
在SDS-PAGE中，聚丙烯酰胺凝胶被用作固定相。
凝胶是通过将聚丙烯酰胺单体和交联剂混合后形成的。
这种凝胶可以形成微孔和孔径，使凝胶能够分离不同大小的蛋白质分子。
在准备样品时，蛋白质分子通常会在缓冲液中添加SDS (十二烷基硫酸钠）。
SDS是一种表面活性剂，可以使蛋白质分子带有负电荷并具有等电点（pI）价值。
当SDS蛋白质混合物被加入聚丙烯酰胺凝胶电泳电场中时，它们会在电泳作用下向负极移动。
这是因为凝胶的孔径大小使得分子量大的蛋白质分子移动缓慢，分子量小的蛋白质分子移动较快。
SDS-PAGE还需要在样品上和凝胶中加入还原剂和染色剂。
还原剂可以断裂蛋白质分子的二硫键，并使氨基酸带上负电，而染色剂则通过与蛋白质分子中的某些氨基酸或特定结构相互作用来着色。
这些特殊的化学试剂可以使蛋白质更容易在凝胶上定位，并且可以观察到蛋白质分子的相对含量。
总的来说，SDS-PAGE是一种有效的蛋白质分离技术，可以帮助生物学家了解蛋白质分子的研究方向。
任何要研究或描绘蛋白质质量、酸碱平衡、多肽结构或寻找抗原、肽链或酶活性的科学家都需要使用这种技术。
sds-page
SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳（英语：polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质和寡核苷酸。
作用原理聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。
它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）和变性聚丙烯酰胺凝胶。
在蛋白质的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开；在DNA的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，DNA呈双链状态泳动，其迁移率会受碱基组成和序列的影响。
在变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，由于加入了变性剂——蛋白质变性剂常为SDS（SDS-PAGE），核酸变性剂常为尿素、甲酰胺等，故其分离仅依据于分子量大小。
蛋白质的SDS-PAGE技术最初由Shapiro于1967年建立，他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂（SDS即十二烷基硫酸钠）后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小（可以忽略电荷因素）。
作用SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。
而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。
在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。
浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。
当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。
电泳开始后，HCl解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。
SDS-PAGE(蛋白印迹)
2. RT，1-2hours 或 4℃过夜
一抗
1
2 3 4 5
把膜从冰箱中取出，RT ，30min。 注： 封闭 液可回收 四个角蘸点水铺好保鲜膜后，加1：100的一抗 500ul（抗体稀释液495ul+5ul mouse p65抗体） 于保鲜膜上 蛋白面朝下，使尼龙膜和一抗充分接触。注避免 产生气泡，如有气泡，可用镊子将膜的四角轻轻 提起，排出气泡 盖上玻璃平皿，RT下孵育2hours TBST 10min×2 ； TBS 10min×1
当蛋白质的分子量在15,000－200,000之间时，样 品的迁移率与其分子量的对数呈线性关系。 符合如下方程式：Lg MW =－b m
R
+
K
其中，MW 为蛋白质的分子量，m R 为相对迁移 率，b为斜率，K为截距。当条件一定时，b与K均 为常数
因此通过已知分子量的蛋白与未知蛋白的比较， 就可以得出未知蛋白的分子量
4.05ml
3.3ml
1.5mol/L pH=8.8 Tris-HCl 2.5ml
100µ l 50µ l 10µ l
100µ l 100µ l 10µ l
3.按比例配好分离胶,用移液管快速加入 （或直接用小烧杯倒入）,大约5厘米左右, 之后加少许蒸馏水（或异丙醇除泡）,静臵
至胶凝
* 凝胶配制过程要迅速, 催化剂TEMED要
2 放好胶后，放尼龙膜。注：尼龙膜一旦放到胶上就 不可再作移动，因为这时已有蛋白结合到膜上。然后， 在膜上加一点缓冲液，用玻璃棒尽量使之铺平 3 在膜上依次放好三张滤纸和海绵后，即可夹好转膜模 具。注：每层间都要注意赶气泡 4 黑对黑，白对红在电泳槽中放好模具。并加一块冰在 电泳槽中，以防转膜过程中温度过高，影响转膜效率。 5 在用转移缓冲液注满电泳槽后。红对红，黑对黑接好 转 膜 装 臵 （ 及 电 泳 装 臵 ） 。 设 臵 电 泳 参 数 ： 60v ， 2.5hours
SDS-PAGE问题及解决方法
一：电泳跑的太慢A.内槽缓冲液要没过凹玻璃板，低于平玻璃板。
内槽和外槽缓冲液不能相通。
B.电泳缓冲液pH值及浓度是否配制正确。
C.分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液pH 值及浓度是否配制正确。
D. 电压太低，选择合适的电压。
E. 样品盐浓度太大，除去样品中的盐。
二：微笑现象.电泳温度太高或者太低，1．选择合适电压；2．加入缓冲液太少，将缓冲液加满；3．如确实需要高电压，可将电泳仪至于4℃冰箱中。
三：蛋白条带歪曲或波浪形A:凝胶原因：1．胶时，胶中有气泡。
2．放入梳子时，梳子下面有气泡；3．分离胶表面不平，一定要用水覆盖；B: 样品原因：1．盐浓度高，透析除盐；2．样品有沉淀，上样前离心。
四：条带不清楚A. 凝胶原因：1．试剂一定要用高纯度；2．胶配置后不能放置时间太长；3．样品PH不对；4．缓冲液PH不对；5．降低电压或电流。
B. 样品问题：1．样品离子浓度比凝胶中的离子浓度低；使用和凝胶缓冲液一样的样品缓冲液。
2．样品浓度太高或低，减少或增加浓度；3．上样前加热样品，加热后马上放入冰水中；4．样品保存在低温中，防蛋白降解。
五：样品跑完浓缩胶，进入分离胶前没有压缩成一条直线1.浓缩胶和分离胶pH值不正确；2.浓缩胶太短；3.试剂一定要用高纯度；4.样品中钠离子或钾离子浓度高。
六：样品分不开1．凝胶浓度太大，凝胶浓度太小；调整浓度大小；2．蛋白亚基没有完全分开，样品缓冲液SDS浓度不够，充分加热。
七：制胶时漏胶玻璃板没有装好。
重新安装玻璃板，锁紧螺丝要拧紧，密封条老化。
八：样品孔之间的凝胶凝固不好凝固温度低，时间太长。
凝胶最好在25℃到30℃之间，凝固时间40分钟到一个小时。
九：电泳太快了缓冲液浓度低，电压太高。
重新正确配置缓冲液；选择合适的电压。
十：电泳结束后，凝胶底部的样品泳道比上部收缩变窄样品中的离子浓度比胶的离子浓度大，除去样品中的盐。
sds-page的原理,说明其在物质分离与检测的步骤
序一：认识SDS-PAGESDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质电泳技术，可以对蛋白质进行分离和检测。
它通过凝胶的孔隙大小和电泳的受力使蛋白质在凝胶中进行分离，是生物化学实验中的重要手段。
今天我们就来深入探讨SDS-PAGE的原理及在物质分离与检测中的步骤。
序二：SDS-PAGE的原理在SDS-PAGE技术中，其原理主要包括两个方面：SDS和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
1. SDS的作用SDS是一种阴离子表面活性剂，它的主要功能是将蛋白质变性并赋予负电荷。
蛋白质经过SDS处理后，其构象被完全展开，获得了相同的质量比电荷的分布，使得蛋白质在电泳过程中只受到电场的作用而不再因其本身的结构而迁移速度有差异。
2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶是一种网状结构的凝胶，其孔隙大小可以根据需要调整，能够使蛋白质根据其分子大小在凝胶中被有效地分离。
序三：SDS-PAGE在物质分离与检测中的步骤1. 样品处理需要将待测样品进行SDS处理，在加热的条件下，SDS可以使蛋白质获得带负电的线性结构，这样可以消除蛋白质的构象差异，从而在电泳过程中只受到电场的作用而进行迁移。
2. 样品加载处理好的样品需要被加在SDS-PAGE的凝胶孔中，然后进行电泳操作。
3. 电泳电泳的原理是利用电场的作用，使具有电荷的离子或分子在电场中移动。
在SDS-PAGE中，蛋白质通过受到电场的作用，根据其分子大小在凝胶中被有效地分离。
4. 凝胶染色蛋白质在凝胶中分离后需要进行染色，通常使用银染或共染技术，使蛋白条带清晰可见，便于进一步的分析。
序四：SDS-PAGE的个人观点和理解通过对SDS-PAGE的原理及在物质分离与检测中的步骤的了解，我深刻认识到这一技术在蛋白质研究领域中的重要性。
SDS-PAGE能够对蛋白质进行高效分离和定量，为蛋白质的性质和功能研究提供了有力的手段。
SDS-PAGE
用途：由于所有的SDS-蛋白质复合物，在电泳时都 以同样的电荷按分子量大小不同向正极移动，作SDS 聚丙烯酰胺凝胶泳动（SDS-PAGE）时，其泳动速度 仅决定于蛋白质的分子量。SDS与蛋白质的结合是成 比例的，所以SDS-蛋白质复合物在泳动中的不同速 率，就反映了分子量的不同。与分子量的对数和相 对迁移率成一定比例关系。使用已知分子量的标准 物作标准曲线或用计算法确定标准曲线的常数，即 可求出未知样品的分子量。用这种方法测定的分子 量是亚单位肽链的分子量。
Principle
是利用检体中蛋白质 分子量大小的不同， 使其在电泳胶中分离。 是最常用的பைடு நூலகம்白质分 析技术之一。
影响电泳的3因素：蛋白质的形状，大 小和所带的电荷得多少
method
SDS是阴离子变性剂，与 蛋白质结合后加热能把折 叠的蛋白质打开 在电场的影响下，带有SDS的负电 荷蛋白质向正极运动
SDS-PAGE
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝 胶电泳
小组成员 ❤王希希 14109302 ❤赵晓君 14109226
内容概要
• 1.WHAT is SDS-PAGE （定义与用途与作用） 定义与用途与作用） • 2.Principle（原理解析） （原理解析） • 3.method （使用流程） • 4. Advantages and disadvantages （优点与缺点）
WHAT
SDS-PAGE 即 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis 的缩写
作用：是胶体电泳的一种， 作用： 常用于生物化学、鉴识科学、遗传学 分子生物学等领域的分析技术。
WHAT
SDS-PAGE 即 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis 的缩写
sdspage分离蛋白质实验报告
sdspage分离蛋白质实验报告
SDS-PAGE分离蛋白质实验报告
引言
SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离技术，通过电泳原理将蛋白质按照其分子量大小进行分离。
本实验旨在利用SDS-PAGE技术对不同来源的蛋白质进行分离，并观察其分离效果。
材料与方法
1. 样品制备：收集不同来源的蛋白质样品，如动植物组织、细胞培养液等。
2. 样品处理：将样品加入SDS-PAGE样品缓冲液，并在100℃下煮沸5分钟，使蛋白质变性。
3. 准备SDS-PAGE凝胶：按照实验要求制备SDS-PAGE凝胶。
4. 样品加载：将处理好的样品加载到SDS-PAGE凝胶孔中。
5. 电泳分离：在设定好的电泳条件下进行电泳分离。
6. 凝胶染色：将分离后的蛋白质凝胶进行染色，观察分离效果。
结果与讨论
经过SDS-PAGE电泳分离后，观察到不同来源的蛋白质在凝胶上呈现出不同的条带。
通过比较不同样品的分离效果，可以发现不同来源的蛋白质在分子量和丰度上存在差异。
此外，通过与已知分子量标准蛋白质进行对照，可以进一步确定待测蛋白质的分子量。
结论
本实验通过SDS-PAGE技术成功分离了不同来源的蛋白质样品，并观察到了它们的分子量差异。
这为进一步的蛋白质研究和分析提供了重要的数据支持。
同
时，本实验也展示了SDS-PAGE技术在蛋白质分离领域的重要应用价值。
结语
通过本次实验，我们对SDS-PAGE技术有了更深入的了解，并获得了宝贵的实验数据。
期待未来能够进一步应用这一技术，探索更多蛋白质的分离与分析。
SDS-PAGE
标难曲线只对同
一块凝胶上旳样品 旳分子量测定才具 有可靠性。
样梳需一次平稳插入,梳 口处不得有气泡,梳底需 水平。
❖制备浓缩胶
通电
加入电极缓冲 液pH 8.3
加入样品
❖上样及电泳
浓缩胶 pH 6.8
开始电压恒定在80V，当进入分离胶后改为120V，溴 酚蓝距凝胶边沿约5mm时，停止电泳。
分离胶 pH 8.8
凝胶板剥离与染色
❖ 电泳结束后，撬开玻璃板，将凝胶板做好标 识后放在大培养皿内，加入染色液，染色1小 时左右。
5µl
❖制备分离胶
凝胶配制过程要迅速, 催化剂TEMED要在注胶前再加入。 注胶过程要一次性完毕,防止产愤怒泡。
封水或饱和 正丁醇溶液
出倒现出明水显或界正面丁时醇， 分并离用胶滤凝纸聚吸完干毕 （ ３０min~１h）
❖制备分离胶
加入分离胶溶 液 pH 8.8
封水旳目旳是使分离胶上表面平直，并排除气泡。 凝胶聚合好旳标志是胶与水层之间形成清楚旳界面。
聚丙烯酰胺凝胶性质
PAGE和SDS-PAGE旳比较
PAGE
SDS-PAGE
X-
-Y Z + SDS X
+
Y
Z
-
+
成果受分子量大小电荷形状旳影响
成果只与分子量大小有关
缓冲液系统
❖ 在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用旳是Tris－ HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.8，分离胶pH8.8；而电泳缓 冲液使用旳Tris－甘氨酸缓冲系统，pH8.3；上样缓冲液用 旳也是Tris－HCL缓冲系统，pH6.8，但里面加有甘油、溴 酚蓝、DTT或巯基乙醇。
过硫酸铵旳作用
聚丙烯酰胺凝胶性质
SDSPAGE凝胶电泳
谢谢
THANKS
04 SDS-PAGE凝胶电泳优缺点
CHAPTER
优点
高分辨率
SDS-PAGE凝胶电泳能够将蛋 白质样品进行高分辨率分离， 清晰地显示出不同蛋白质的分
子量和带型。
操作简便
SDS-PAGE凝胶电泳操作相对 简单，易于标准化，适合于大 量样本处理。
广泛适用性
SDS-PAGE凝胶电泳适用于各 种蛋白质样品的分析，包括纯 化样品和复杂生物样本。
生物医药研究
SDS-PAGE凝胶电泳在生物医药领域具有广泛的应用前景，可用于 药物靶点发现、药物作用机制研究以及疾病标志物筛选等。
生物技术产业
SDS-PAGE凝胶电泳在生物技术产业中也有广泛应用，如蛋白质药 物研发、疫苗生产和细胞治疗等领域。
食品安全与环境监测
SDS-PAGE凝胶电泳可用于食品安全和环境监测领域，检测食品和环 境中的有害物质和污染物。
上样前确保样品与loading buffer混合均匀，避免出现条
带不清晰或拖尾现象。
控制电泳时间和电流强度，避 免过度电泳导致蛋白质降解。
电泳结束后及时取出凝胶，避 免长时间浸泡在电极缓冲液中 导致染色不均或条带消失。
03 SDS-PAGE凝胶电泳结果分析
CHAPTER
分离效果评估
分辨率
01
评估凝胶中蛋白质的分离程度，分辨率越高，分离效果越好。
灵敏度高
通过染色和显影，SDS-PAGE 凝胶电泳能够检测到微量的蛋
白质，具有较高的灵敏度。
缺点
样品损失
在电泳过程中，部分蛋白质可能会吸 附在玻璃纤维滤纸或凝胶中，导致样 品损失。
局限性
对于一些大分子量或特殊性质的蛋白 质，SDS-PAGE凝胶电泳可能会出现 分离效果不佳的情况。
sds-page
电流过高、凝胶过热
Buffer 的pH值
︶ 条带呈笑脸状，原因：凝胶不均匀冷却，中 间冷却不好。 ︵ 条带呈皱眉状，可能是由于装置不合适，特 别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡，或者两边 聚合不完全。 拖尾(tailing)：样品溶解不好。 纹理streaking（纵向条纹）：样品中含有不溶性 颗粒。 条带偏斜：电极不平衡或者加样位置偏斜。 蛋白带(过宽)两边扩散：加样量过多或加样孔泄 漏
聚丙烯酰胺的特性，机械性能，弹性，
透明度，孔径大小取决于 T ， C 。 T 是两 个单体 ( 单体丙烯酰胺和 N-N ’ - 甲叉双 丙烯酰胺)的总百分浓度，C是与总浓度 有关的交联百分比浓度。 T=(a+b)/m C=b/(a+b) （a为单体丙烯酰胺的克数，b为N-N’-甲叉双丙烯酰
胺的克数，m为缓冲液终体积，加10ul样品buffer 微波处理3分钟 加样 : 20ul 多余的孔加样品buffer 电泳：浓缩胶70-80v，分离胶100-120v 染色：考马斯亮兰染1小时 脱色：2小时
（四）可能出现的情况
上下层胶凝结的不均匀
上样蛋白量太大
胶表面不平
胶浓度太高
2 引发剂、增速剂和聚合 常用过硫酸铵，过硫酸钾或核黄素来引发这个 过程，用TEMED（ N，N ， N，N-四甲基乙二 胺），三乙醇胺作为加速剂，这种引发-增速的催 化系统是氧化-还原过程。聚合是由过硫酸铵在碱 性条件下产生游离氧自由基引发单体丙烯酰胺成 为自由基状态而成。
3 影响聚合的因素
SDS-PAGE
PAGE电泳分类
带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动， 这种现象称为电泳。 电泳分类：移动界面电泳、区带电泳、稳态电泳。
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聚丙烯酰胺凝胶电泳（英语：polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质和寡核苷酸。
作用原理：聚丙烯酰胺凝胶是具有分子筛作用的网络结构。
它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）和变性聚丙烯酰胺凝胶。
在蛋白质的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白质可以保持完整的状态，并根据蛋白质的分子量，蛋白质的形状和附着的电荷量逐渐彼此分离。
在DNA的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，DNA以双链状态游动，其迁移率受碱基组成和序列的影响。
在变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，变性剂通常为SDS（SDS-PAGE），变性剂通常为尿素和甲酰胺。
蛋白质的SDS-PAGE技术由Shapiro于1967年首次建立。
他们发现，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基的分子量（电荷因子可忽略不计），加入离子去污剂和强还原剂（SDS，十二烷基样品介质和丙烯酰胺凝胶。
SDS是一种阴离子洗涤剂。
作为变性剂和增溶剂，SDS可以破坏分子之间的氢键，展开分子并破坏蛋白质分子的二级和三级结构。
诸如巯基乙醇和二硫苏糖醇之类的强还原剂可以破坏半胱氨酸残基之间的二硫键。
将还原剂和SDS加入样品和凝胶后，分子解聚成多肽链。
解聚的氨基酸侧链与SDS结合形成蛋白质SDS胶束。
聚合物的负电荷远高于蛋白质的原始电荷，因此消除了不同分子之间的电荷和结构差异。
通常，不连续缓冲系统用于SDS-PAGE，其分辨率高于连续缓冲系统。
浓缩胶的作用是积聚，凝胶小，孔径大，将较薄的样品加入到增稠胶中，通过大孔胶的迁移作用将其浓缩到狭窄区域。
当选择Tris / HCl缓冲溶液作为样品溶液和浓缩凝胶时，选择Tris /甘氨酸作为电极溶液。
电泳开始时，HCl分解为氯离子，甘氨酸分解为甘氨酸离子。
蛋白质带负电荷，因此它们一起移动到正电极。
氯离子最快，甘氨酸离子最慢，蛋白质在中间。
电泳开始时，氯离子的迁移率最高，高于蛋白质。
因此，在电泳的背面形成低电导率区域，并且电场强度与低电导率区域成反比。
因此，产生更高的电场强度，这使得蛋白质和甘氨酸离子快速移动以形成稳定的界面，这使得蛋白质在移动的界面附近聚集并浓缩成中间层。
在这种方法中，蛋白质的迁移率主要由其相对分子量决定，与电荷和分子形状无关。