G+球菌的鉴定

三、作为推测性鉴定的重要试验
1、菌落特征 溶血：血平板上菌落周围的溶血有助于一些
细菌的初步鉴定 α溶血: 菌落周围有一草绿色的环，疑似肺 炎链球菌和草绿色链球菌。 β溶血：在菌落周围有一完全溶血环，疑似 金葡菌和溶血性链球菌。如化脓性链球菌周 围产生宽阔清晰的溶血环，无乳链球菌产生 一个狭窄的溶血环。
微球菌的鉴别
1、主要特征：G+球菌，菌体较大，四联或
簇状排列，触酶试验阳性。
2、临床意义：主要存在于泥土、水及正常人
和动物皮肤表面，一般不致病，但可为条件 致病菌，引起伤口等局部组织感染，也能引 起心内膜炎等疾病。
2、镜下形态
（1）G+球菌、葡萄状、单个或成双排列的
疑似葡萄球菌 （2） G+球菌、球杆状、链状（长短不一） 排列的疑似链球菌 （3） G+球菌、矛头状、成双或短链状排列 的疑似肺炎链球菌 （4） G+球菌、成簇、四联状排列的疑似微 球菌属等
3、触酶试验

触酶试验阳性的G+球菌：葡萄球菌属、微球菌属、 口腔球菌属、动球菌属、克氏考克菌属、差异球 菌属等
圆形凸起，周围有不同溶血现象。 3、溶血现象：①α溶血②β溶血 ③γ溶血 4、草绿色链球菌的鉴定：人体上呼吸道的正常 菌群，通常不致病。如果在血液和无菌体液中检 出草绿色链球菌，有临床意义
4、推测性鉴定：
根据溶血及关键性试验，对链球菌进行 推测性鉴定分群 ①.A群链球菌：β溶血，杆菌肽敏感 ②.B群链球菌：β溶血，CAMP试验阳性 ③.C群链球菌：β溶血，CAMP试验阴性、杆 菌肽耐药、6.5%NaCl耐盐试验阴性 ④.D群链球菌： β溶血， 6.5%NaCl耐盐试验、 胆汁七叶苷阳性，45℃生长

肺炎链球菌的菌落及菌体形态
肺炎链球菌的鉴别
1、形态：G+球菌，矛头状，成双或短链状 排列 2、菌落特征：在血平板上，菌落细小，中央 凹陷，周围有草绿色溶血环 3、主要生化反应：分解菊糖，胆盐溶菌试验 阳性，OP试验阳性 4、肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌菌落相似， 应加以鉴别：①OP试验；②胆汁溶菌试验
血浆凝固酶试验---玻片法
血浆凝固酶试验---试管法
(3)意义
凝固酶试验阳性的葡萄球菌：金黄色葡萄球
菌、中间葡萄球菌、施氏葡萄球菌聚集亚种、 猪葡萄球菌（11~89%阳性）
凝固酶试验阴性的葡萄球菌：表皮葡萄球菌、
腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌、木糖葡萄球 菌、头状葡萄球菌、沃氏葡萄球菌等10余种。
检查方法
标本 脓汁，血液，分泌物等 直接涂片镜检 分离培养
革兰阳性葡萄球菌 色素，溶血， 触酶试验 血浆凝固酶 发酵甘露醇
生长现象 生化反应
肠毒素检查
幼猫试验
临床意义
1.化脓性感染： （1）皮肤及软组织感染 （2）内脏器官感染：肺炎、关节炎、骨髓炎 （3）全身性感染 ：败血症、心内膜炎等
致病性与免疫性
革兰氏阳性球菌的种类
1、葡萄球菌属
3、微球菌属 5、气球菌属 7、创伤球菌属
2、链球菌属 4、肠球菌属 6、孪生球菌属 8、乏养球菌属
一、革兰氏阳性球菌的基本特征： 在血平板上生长，但在中国篮、麦康凯平 板上不生长，提示为革兰氏阳性球菌。 二、革兰氏阳性球菌的基本鉴定试验： 1.触酶试验是鉴定革兰氏阳性球菌的重要试 验，任何G+球菌必须先做触酶试验，是鉴别葡 萄球菌与链球菌的初步依据 2.凝固酶试验是鉴定葡萄球菌的重要试验


4、血浆凝固酶试验


（1）原理：金葡菌可产生两种凝固酶。一种是结合 凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中纤维蛋白原变成 纤维蛋白附着于细菌表面上，发生凝集，用玻片法测 出。另一种是菌体生成后释放于培养基中的游离凝固 酶，能使凝固酶原变成凝血酶类物质，从而使血浆凝 固，可用试管法测出。 （2）方法： a.玻片法：取血浆和生理盐水各一滴分别滴到清洁 玻片上，挑去待检菌落分别与血浆及盐水混合，如血 浆中出现明显凝集颗粒而盐水中无自凝现象者为阳性。 b.试管法：取试管两支，分别加入0.5ml（经生理盐 水1：4稀释）的血浆，挑取菌落数个加入测定管充分 研磨混匀，用一只阳性菌株加入对照管，37℃水浴34小时。血浆凝固者为阳性。
猩 红 热 皮 疹
3.超敏反应性疾病：
A.急性肾小球肾炎: 多见于儿童和青少年， 大多数由A群M12型链球菌引起。临床表现 为蛋白尿、浮肿和高血压。 B.风湿热:主要在咽炎后有可能发生，由A族
链球菌的多种型别引起群链球菌——人类呼吸道、阴道、直肠正常菌群 -新生儿：败血症、脑膜炎 -婴幼儿：败血症、化脓性关节炎、肺炎 -成年人：肾盂肾炎、肺炎、子宫内膜炎 甲型溶血性链球菌——口腔、鼻咽腔正常菌群 -亚急性细菌性心内膜炎 -龋齿 D族链球菌——呼吸道、泌尿生殖道的正常菌群 可引起泌尿道感染、败血症和心内膜炎。
肠球菌种间鉴别
种名 粪肠 甘露醇 山梨醇 精氨酸 阿拉 动力 黄色素 伯糖 30℃ + + + -
屎肠
鹑鸡
+
+
-
+
+
+
+
+
-
铅黄
鸟肠
+
+
+
+
-
+
+
-
+
-
坚韧 恶臭
+
-
+ -
-
-
-
临床意义

粪肠球菌与屎肠球菌主要引起医院感染， 最常见为尿路感染（大部分与尿道器械操作、 导尿有关），其次为腹部和盆腔等部位的创 伤和外科术后感染。

4、意义：正常存在人的口腔及鼻咽部，抵抗力降 低时，引起大叶性肺炎、支气管肺炎。化脓性脑 膜炎、中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑脓肿、菌血 症和心内膜炎等。
肠球菌的鉴别
1、形态：G+球菌，单个、成双或短链状排
列。 2、菌落特征：血平板上，较小、灰白色，湿 润，凸起、有α或无溶血环的菌落。 3、生化反应
低血压，猩红热样皮疹伴脱屑，严重出现
休克。
（4）烫伤样皮肤综合征
红斑 起皱 大疱 脱落
腐生葡萄球菌：引起尿路感染、前列腺炎、
外伤和败血症
溶血性葡萄球菌：引起心内膜炎、败血症、
腹膜炎、尿道感染、外伤感染等。
链球菌的鉴别要点
1、形态：G+球菌，单个、成双或呈链状排列。
2、菌落特征：血平板上，菌落较小，灰白色，
链球菌的镜下形态
所致疾病
（1）化脓性感染：引起皮肤、皮下组织感染 丹毒、脓胞疮、痈、淋巴管炎，败血症等
管状淋巴管炎 网状淋巴结炎——丹毒
2.猩红热 (scarlet fever)
由产生致热外毒素的化脓性链球菌 所致。细菌经咽喉粘膜侵入机体，增殖 并产生毒素引起高热、全身红疹等症状， 病后获得较强的免疫力。
6、杆菌肽敏感试验

原理：A群链球菌对杆菌肽非常敏感，而其他链球菌对 杆菌肽通常耐药，故此试验可鉴别A群链球菌。 方法：将被检链球菌，密涂于血平板上，将杆菌肽纸片 贴于血平板表面，35℃24小时观察结果


结果判断：在杆菌肽周围出现明显抑菌环 ＞10mm为阳性，则被推断为A群链球菌 ＜ 10mm为阴性，为其他群的链球菌。
触酶试验阴性的G+球菌：链球菌属、肠球属、乏 养菌属、气球菌属、狡诈球菌属、费克篮姆菌属、 孪生球菌属、戈鲁毕卡菌属、创伤球菌属、乳球 菌属、明串珠菌属、足球菌属等

3、触酶试验

（1）原理：具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能 催化过氧化氢，放出新生态氧，继而形成分子氧， 出现气泡。
（2）方法：用接种环挑取固体培养基上的菌落置 于洁净的玻片上，然后滴加3%过氧化氢溶液一滴， 观察结果。 （3）结果判断：在5秒内释放大量的气泡为阳性。
2.毒素性疾病：
（1）食物中毒
进食含肠毒素食物后1～6h潜伏期， 出现恶心、呕吐、上腹痛、腹泻等症 状。呕吐最为突出。大多数病人于1～
2d内可自行恢复，预后良好。
（2）假膜性肠炎：
实质为菌群失调性肠炎，多为耐药金葡 菌感染产生肠毒素所致。
（3）毒素休克综合征
多见于月经期女性，表现为急性高热，
5、CAMP试验

原理：B群链球菌在血平板上能产生CAMP因子，可促 使金葡菌β 溶血素的活性，故在血平板上两种细菌交界 处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。其他链球菌 一般不产生CAMP因子，无此现象。 方法：在血平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条横线， 再于该直线的垂直平分线处用被检菌接种一条垂直短线， 两线相距3-5mm左右，35℃24小时观察结果。 结果观察：在被检菌接种线与金葡接种线之间有一个箭 头形或半月形透明溶血区为阳性，可推断为B群链球菌。 无溶血区为阴性。 意义：作为B群链球菌的鉴定指标之一
7、奥普妥辛实验（OP试验）
原理：Optochin（乙基氢化去甲奎宁）干扰肺
炎链球菌叶酸的合成，可抑制其生长，其他链 球菌如草绿色链球菌对其不敏感。 方法：将待检的a溶血的链球菌均匀的涂布于 血平板上，贴放Optochin纸片（含药5mg)35℃ 孵育18-24小时，观察抑菌圈的大小。 结果判断：抑菌圈＞14mm为肺炎链球菌，无 或见很窄的抑菌圈为草绿色链球菌。 意义；鉴别肺炎链球菌与草绿色链球菌。
主要的G+球菌 鉴别要点
金黄色葡萄球菌鉴别要点
1、镜下形态：
G+球菌，单个，成簇或葡
萄状排列 2、菌落特征：在血平板上菌落圆形凸起， 边缘清楚，表面光滑，金黄色或白色，周 围有β溶血环 3、主要生化反应：触酶、DNA酶和血浆凝 固酶试验阳性，发酵甘露醇。
葡萄球菌的镜下形态
金黄色葡萄球菌的菌落形态