9402中药材DNA条形码分子鉴定法
中药材dna条形码分子鉴定指导原则
中药材dna条形码分子鉴定指导原则【知识文章】中药材DNA条形码分子鉴定指导原则导语：中药材是中国传统独特的资源，其药材种类繁多，但存在着品质和真伪鉴定等难题。
中药材的分子鉴定指导原则，通过应用DNA条形码技术，可以有效提高中药材鉴定的准确性和可靠性。
本文将介绍中药材DNA条形码分子鉴定原理及其应用，并探讨其在传统中药材鉴定中的价值和前景。
一、DNA条形码技术简介DNA条形码技术是一种利用物种特异性基因序列进行组织或生物样本分类和鉴定的技术。
其基本原理是通过放大目标DNA片段，并根据其序列差异性进行比对，从而实现物种鉴定。
DNA条形码技术具有高保真性、高重复性和高鉴定率等优点，成为生物多样性研究的重要工具。
二、中药材DNA条形码分子鉴定的原理中药材DNA条形码分子鉴定主要是利用基因序列的遗传差异作为鉴定依据。
在大量中药材样本中，选择一段特定的核酸序列作为DNA条形码，如ITS2（内转录间隔区）、rbcL（Rubisco大亚基）、matK(maturase K)等。
使用PCR技术从不同药材样本中扩增目标基因片段，测定其序列，并将其与参考数据库中的已知序列进行比对和匹配，从而进行中药材的鉴定。
三、中药材DNA条形码分子鉴定的应用1. 提高鉴定准确性和可靠性：传统的中药材鉴定方法受制于样品的形态学差异和外部环境因素，鉴定结果常受到人为主观因素的干扰。
而DNA条形码技术通过分子水平的信息，弥补了传统鉴定方法的不足，提高了鉴定的准确性和可靠性。
2. 探寻中药材资源：DNA条形码技术可以追踪和识别中药材的基因信息，帮助发现和保护珍稀的中药材资源。
通过对中药材进行DNA条形码分析，可以确定其真正的品种和产地，为中药材资源的可持续利用提供科学依据。
3. 提高市场监管和品质保障：中药材市场普遍存在品质和真伪问题，影响了消费者的信心。
中药材DNA条形码分子鉴定技术可以快速检测中药材的真伪，提供可靠的品质鉴定和来源溯源，有助于改善市场监管和品质保障体系。
中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则及其在《中国药典》(20重点
中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则及其在《中国药典》(20重点DNA条形码分子鉴定法是一种基于DNA序列的分子鉴定方法，广泛应用于物种鉴定、中药材真伪鉴定等领域，并已在《中国药典》(20重点)中得到重要的应用。
以下将介绍中药材DNA条形码分子鉴定法的指导原则及其在《中国药典》(20重点)中的具体应用。
1.样本选择：选择符合《中国药典》(20重点)规范的中药材样本，同时保证样本的完整性和纯度。
如有需要，可以根据实际情况对样本进行处理，如去除外部的附着物等。
2.DNA提取：选择适宜的DNA提取方法，根据样本的不同特点和纯度要求，选择合适的提取试剂盒和操作流程，提取出高质量的DNA。
3.DNA扩增：根据《中国药典》(20重点)中药材的DNA条形码序列，选择适宜的引物，进行PCR扩增。
在扩增过程中，注意控制扩增反应的条件，选择合适的PCR仪和反应体系，保证扩增的特异性和可重复性。
4.序列读取和比对：对扩增得到的DNA序列进行测序，选择合适的测序平台和方法，确保测得的序列质量高。
将测序得到的序列与相关数据库中的已知序列进行比对，找到最佳匹配的物种。
5.鉴定结果验证：对鉴定结果进行验证，如测序重复性验证、鉴定结果与形态学特征的对比等，确保鉴定结果的准确性和可靠性。
《中国药典》(20重点)作为中药材质量评价的权威参考，对于中药材DNA条形码分子鉴定法的应用也给出了明确的指导和要求。
《中国药典》(20重点)中明确了中药材DNA条形码分子鉴定法的使用范围和方法，规定了鉴定所需的样本数量、测序平台的选择、引物的设计和数据库比对的要求等。
此外，根据中药材DNA条形码分子鉴定法的特点和应用需求，还可以结合其他分子鉴定方法，如SNP分析、核糖体DNA序列鉴定等，进一步提高中药材的鉴定准确性和可靠性。
综上所述，中药材DNA条形码分子鉴定法作为一种重要的中药材质量评价手段，已在《中国药典》(20重点)中得到明确的指导和应用。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术是一种基于DNA序列差异进行物种鉴定和分类的方法，广泛应用于动
植物物种鉴定、食品安全追溯和生物多样性保护等领域。
中药材作为传统药材，其真伪和
质量问题一直备受关注，而DNA条形码技术可以提供一种快速、准确、可靠的方法来鉴定
中药材的真伪和质量。
DNA条形码技术可以用于中药材的物种鉴定。
中药材的名称和外观特征往往是相似的，而且不同地区和不同种植条件下的中药材可能存在着形态上的差异，从而增加了鉴定的难度。
利用DNA条形码技术可以对中药材进行快速鉴定，通过对其基因组的特定区域进行PCR扩增和测序，可以比较DNA序列的异同来鉴定中药材的物种。
这种方法相对传统的形
态学鉴定方法来说更加快速、准确，并且可以通过与公开数据库比对来验证鉴定结果的正
确性。
DNA条形码技术还可以用于中药材的地理来源鉴定。
中药材的品质和功效与其产地关
系密切，不同地区和不同种植条件下的中药材可能存在着化学成分上的差异。
利用DNA条
形码技术可以通过对中药材基因组的比对分析来确定其地理来源，从而实现对中药材产地
的快速鉴定。
这对中药材的质量控制和地理产地认证具有重要意义。
DNA条形码技术在中药材鉴定中具有广阔的应用前景。
这种技术可以快速、准确地鉴
定中药材的真伪和质量，同时可以对中药材中的混淆品种进行鉴定，还可以用于中药材的
地理来源鉴定。
DNA条形码技术是中药材鉴定领域中一种很有潜力的新技术。
中药材DNA条形码鉴定研究进展
中药材DNA条形码鉴定研究进展近年来，随着DNA条形码技术的快速发展，中药材DNA条形码鉴定研究也取得了长足的进展。
中药材是中医药学的重要组成部分，其安全性和有效性对于患者的治疗非常重要。
因此，确保中药材的质量和真实性成为了一个迫切的问题。
DNA条形码鉴定技术以其高分辨率、高灵敏度和快速的特点，成为中药材鉴定领域的重要手段。
DNA条形码是通过分析中药材基因组DNA的一小段特定基因序列来进行鉴定的。
目前，主要有两种方法用于中药材DNA条形码的鉴定。
一种是对整个基因组进行测序，然后通过进行分子鉴定比对来确定中药材的物种；另一种是通过选取一个或多个具有高变异性的基因进行快速测序，以从而判断中药材的真实性。
DNA条形码鉴定技术在中药材鉴定中的应用已取得了一些重要的进展。
首先，通过对中药材的DNA条形码进行比对，可以准确鉴定中药材的种属。
例如，对于那些外形相似但植物学特征不同的中药材，如桂枝和白花蛇舌草，通过DNA条形码技术可以迅速鉴定它们的物种。
其次，通过DNA条形码技术还可以检测中药材的真实性。
许多中药材市场上存在着掺杂、替代和伪劣产品的问题，这给患者的治疗带来了很大的风险。
DNA条形码技术可以通过对中药材基因组DNA进行比对，准确判断中药材的物种，从而保证患者选择到真实的中药材。
虽然中药材DNA条形码鉴定技术在中药材质量鉴定中的应用前景广阔，但其中也存在一些挑战和问题。
首先，中药材的DNA条形码鉴定技术还处于起步阶段，研究较少，对于很多中药材的DNA条形码特征还不清楚。
其次，中药材的DNA条形码鉴定技术需要建立起一个全面的数据库，以便与标准样品进行比对。
然而，由于目前中药材种类繁多，对每个物种进行DNA条形码测序是一个巨大的工程。
最后，中药材的DNA条形码鉴定技术需要高质量的DNA样品，而中药材作为植物材料，其DNA样品的提取和质量保证也是一个挑战。
综上所述，中药材DNA条形码鉴定技术是中药材质量鉴定的重要手段。
中药材DNA条形码分子鉴定指导原则
中药材DNA条形码分子鉴定指导原则1. 背景中药材存在多基原物种及同名异物、同物异名等问题，鉴于传统基原鉴定、性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定方法存在局限性，为保证中药材临床应用安全、准确、有效，有必要增加中药材DNA条形码分子鉴定法。
2. 定义及原理DNA条形码分子鉴定法是利用基因组中一段公认的、相对较短的DNA序列来进行物种鉴定的一种分子生物学技术，是传统形态鉴别方法的有效补充。
由于DNA序列是由腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)四种碱基以不同顺序排列组成，因此一定长度DNA序列能够区分不同物种。
中药材DNA条形码分子鉴定是以ITS2为主体条形码序列鉴定中药材的方法体系，其中植物类中药材选用ITS2为主体序列，psbA-trnH为辅助序列，动物类中药材采用COI为主体序列，ITS2为辅助序列，符合中药材鉴定简单、精确的特点，有明确的判断标准，能够实现对中药材及其基原物种的准确鉴定。
本指导原则用于规范中药材DNA条形码分子鉴定法，为其应用提供指导。
3. 适用范围适用于中药材(包括药材、药材粉末及部分药材饮片)及基原物种的鉴定。
4. 方法流程中药材DNA条形码分子鉴定法主要包括供试品处理、DNA提取、PCR扩增、测序、序列拼接及结果判定，以下内容详细说明各流程中的主要原理及注意事项。
1）供试品处理除特殊标明外，药材使用75%乙醇擦洗表面后晾干，称取10-100 mg备用。
具体见各药材项下。
2）DNA提取DNA的提取包括破碎细胞壁、释放DNA，DNA的分离和纯化，DNA的浓缩、沉淀与洗涤等基本步骤，目前常用试剂盒法，包括植物基因组DNA提取试剂盒和动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒。
由于植物类中药材种类繁多，可根据所研究中药材的具体情况对提取方法加以改进。
植物细胞内储存了大量次生代谢产物，如多糖、多酚等，这些物质在提取DNA的过程中与DNA共沉淀，形成粘稠的胶状物难以溶解或产生褐变，严重影响DNA提取的产量与质量，以及后续的PCR扩增实验。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术是一种基于DNA序列的分子鉴定技术，可以通过对DNA序列的比对和分析，快速准确地鉴定物种的身份。
由于中药材的鉴定涉及众多物种和其混合体，传统的鉴定方法往往耗时费力，且易受到操作者主观因素的影响。
而DNA条形码技术通过分析DNA 序列，可以提供客观准确的鉴定结果，因此在中药材鉴定中具有广阔的应用前景。
DNA条形码技术可以用于中药材真伪鉴定。
中药材市场上常常存在着以次充好、混杂夹杂的情况，给消费者的权益造成了损害。
传统的鉴定方法需要对中药材的形态特征进行观察和比对，容易受到干扰和误判。
而DNA条形码技术可以在分子水平上鉴定中药材的真伪，不受外观特征的影响，提供客观准确的结果。
DNA条形码技术还可以用于中药材的质量控制。
中药材的质量控制是保证中药药效和安全性的关键环节。
传统的质量控制方法往往需要对中药材的化学成分进行分析，耗时费力且易受到多种因素的影响。
而DNA条形码技术可以通过对DNA序列的分析，提供客观准确的中药材质量信息，为中药材的质量控制提供科学依据。
DNA条形码技术在中药材鉴定中具有广泛的应用前景。
通过DNA条形码技术，可以快速准确地鉴定中药材的真伪和种属，并提供中药材质量控制的科学依据，从而保证中药的质量和安全性。
随着DNA条形码技术的不断发展和应用推广，相信其在中药材鉴定领域将发挥越来越重要的作用。
中草药DNA条形码分子鉴定：从基因到基因组
中草药 DNA条形码分子鉴定：从基因到基因组鉴定中药的“真伪优劣”是确保中药质量的关键所在, 而其中“真伪”更是中药临床用药安全的重要前提, 特别是针对贵重药材以及有毒中药而言。
DNA条形码作为一项快速准确鉴定物种的方法在药用植物基原以及药材鉴定中的应用已非常广泛。
通过构建标准的 DNA条形码参考数据库是该技术应用的主要形式。
尽管不同学者提出了诸多用于植物鉴定的DNA条形码 , 但由于片段长度的限制 , 单一序列或多序列组合的条形码在近缘种之间的鉴定仍有很大的局限性。
植物叶绿体基因组作为用于筛选DNA条形码序列的研究热点 , 其本身也可作为超级条形码 (Super barcode)用于系统进化、亲缘关系以及物种鉴定研究。
本研究围绕 DNA条形码鉴定技术 , 首先以《日本药局方》 ( 以下简称“药局方” ) 中收载的生药材为对象 , 构建了药局方生药DNA条形码分子鉴定系统；其次 , 选取人参属药用植物作为名贵药材代表、乌头属药用植物作为有毒中药代表, 分别对该技术在这两个属中的应用进行了研究；最后, 利用高通量测序技术测定了乌头属叶绿体基因组 , 为叶绿体基因组作为超级条形码奠定基础, 为筛选适合该属的高变异分子标记提供依据。
本研究主要内容及结论如下：1、建立了一套以 ITS2 序列为主 psbA-trnH序列为辅的汉方生药材标准DNA条形码数据鉴定系统。
该系统为用户提供了汉方草药信息查询、 DNA条形码物种鉴定以及从样品采集到数据分析的标准操作流程三项主要功能。
共搜集来自日本及中国不同地区的基原植物和生药材样本共计576 份, 从中获取的标准序列覆盖了97.3%的药局方 ( 十六版 ) 收载生药品种。
另外搜集了100份待测样本 , 用来检验数据库的鉴定效果。
通过 BLAST结果显示 ,100 份样品中有 71 份样品获得的结果与标签上所标注的物种一致 , 即准确鉴定到物种水平。
其余29 份样品鉴定到属水平。
中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则
中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则中药材是中医药临床应用和科学研究的基础，但鉴别中药材的真实性和质量一直是一个难题。
传统的鉴定方法主要依靠形态学和理化指标，但存在鉴定时间长、主观性强以及易于被人为操控等问题。
近年来，随着生物技术的快速发展，DNA条形码技术在中药材的鉴定领域得到了广泛的应用。
本文将从DNA条形码技术的基本原理、优势与限制、样品处理、提取DNA、PCR扩增、基因测序、序列分析等几个方面，对中药材DNA条形码分子鉴定法的指导原则进行详细介绍。
首先，DNA条形码是通过测定标准DNA序列中的特定区域来区分不同物种的遗传信息。
常用的DNA条形码区域包括核糖体RNA基因、细胞色素氧化酶基因和叶绿体基因等。
构建DNA条形码库是DNA条形码分子鉴定的基础，需要采集并鉴定大量的中药材样本，建立起不同中药材与特定DNA序列之间的关系。
其次，DNA条形码技术相比传统鉴定方法具有许多优势。
首先，DNA条形码技术能够在非常短的时间内进行鉴定，省去了传统鉴定方法中冗长的观察和测量步骤。
其次，DNA条形码技术具有高效、准确、标记度高的特点，能够通过鉴定物种特异的DNA序列来确定中药材的真实性。
此外，DNA条形码技术还可以检测混淆品种和假冒品种等鉴定难题。
然而，DNA条形码技术也存在一些限制，比如对受污染或者加工过程中DNA含量较低的样本的鉴定效果不佳，需要进行更多的优化。
需要注意的是，中药材DNA条形码分子鉴定仍然处于不断完善和发展的阶段，目前的研究成果主要集中在一些常见中药材上。
对于一些罕见的、加工过程中DNA含量较低或者污染严重的中药材，仍然存在一定的挑战。
因此，在进行中药材DNA条形码分子鉴定时，应结合实际情况综合运用DNA条形码技术与传统的鉴定方法，以取得更可靠和准确的结果。
综上所述，DNA条形码分子鉴定技术在中药材的鉴定中具有广阔的应用前景。
本文从DNA条形码技术的基本原理、优势与限制、样品处理、提取DNA、PCR扩增、基因测序、序列分析等几个方面，详细介绍了中药材DNA条形码分子鉴定法的指导原则。
中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则及其在《中国药典》(20重点
《中药制剂分析》课程论文中药材 DNA 条形码分子鉴定法指导原则及其在《中国药典》 (2015年版中的应用药学(药物分析方向 2012级指导教师:高晓霞2015 年 11月摘要:中药材存在多基原物种及同名异物、同物异名等问题,鉴于传统基原鉴定、性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定方法存在局限性,为保证中药材临床应用安全、准确、有效, 有必要增加中药材 DNA 条形码分子鉴定法。
如今分子生物学技术在中药材鉴定领域的应用已逐步深入。
《中国药典》 2010年版收载了乌梢蛇饮片、蕲蛇饮片、川贝母药材的 DNA 分子鉴定方法,而《中国药典》 2015年版收载了“中药材 DNA 条形码分子鉴定法指导原则” , DNA 条形码分子鉴定法是利用公认的相对较短的 DNA 序列来进行物种假定的一种分子生物学技术, 是传统形态鉴别方法的有效补充。
这标志着中药材的分子鉴定由实验室科研层面进入国家标准的应用层面。
关键词:中药材; DNA ;鉴定;指导原则一、中药材 DNA 条形码分子鉴定指导原则 [1]1.1定义及原理该鉴定方法主要适用于中药材 (包括药材、药材粉末及部分药材饮片及基原物种的鉴定。
DNA 条形码分子鉴定法是利用基因组中一段公认的、相对较短的DNA 序列来进行物种鉴定的一种分子生物学技术, 是传统形态鉴别方法的有效补充。
由于 DNA 序列是由腺嘌呤 (A 、鸟嘌呤(G 、胞嘧啶(C 、胸腺嘧啶(T 4种碱基以不同顺序排列组成,因此一定长度 DNA 序列能够区分不同物种。
中药材 DNA 条形码分子鉴定指导原则通过对大样本量中药材进行 DNA 条形码分子鉴定研究, 建立以 ITS2为核心, psbA-trnH 为辅的植物类药材 DNA 条形码鉴定体系和以 COI 为主、 ITS2为辅的动物类药材 DNA 条形码鉴定体系。
1.2方法与步骤中药材 DNA 条形码分子鉴定法主要包括供试品处理、 DNA 提取、 PCR 扩增、测序、序列拼接及结果判定,以下内容详细说明各流程中的主要原理及注意事项。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术是一种通过特定DNA序列标记生物多样性并实现物种鉴定的方法，它在中药材鉴定中具有重要的应用价值。
中药材鉴定是指通过对中药材的性状、组织学特征和化学成分进行分析，确定其品种和质量，保证中药材的安全和有效性。
传统的中药材鉴定方法主要依靠外观、性状和化学成分等特征，但这些指标易受环境和处理过程的影响，存在误判的可能性。
而DNA条形码技术能够识别特定的DNA序列，能够准确地鉴定中药材的种类和来源，具有不受杂质和质量变异的影响的优势。
DNA条形码技术在中药材鉴定中应用广泛并取得了显著的成果。
DNA条形码技术可以用于中药材的种类鉴定。
中药材普遍具有多个品种，这些品种在形态特征上相似，很难通过传统的鉴定方法进行区分。
而DNA条形码技术可以通过分析中药材中的特定DNA序列，快速且准确地鉴定中药材的种类。
对柴胡这一常用中药材进行DNA条形码分析可以区分柴胡的不同品种，有效避免了药材混淆的风险。
DNA条形码技术可以用于中药材的产地鉴定。
中药材的产地是影响其质量和功效的重要因素之一。
通过分析中药材中的DNA序列，可以确定其来源地，为质量评价提供科学依据。
对当归这一常用中药材进行DNA条形码分析可以判断其产自不同地区，从而对不同产地的当归进行质量比较和评价。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用DNA条形码技术是一种基于DNA序列的物种快速鉴定方法，对于中药材的质量控制及药材鉴定具有较大意义。
本文从DNA条形码技术的原理、方法及应用角度，探讨其在中药材鉴定中的应用。
一、DNA条形码技术原理及方法DNA条形码技术是利用DNA序列特征来快速鉴定物种的技术。
该技术基于全球各地物种DNA中高度保守的基因区域（例如核糖体RNA基因组），选择某个特定基因区域，并将其扩增为条形码序列。
由于不同物种基因组序列存在极大差异，因此，通过对条形码序列的分析，即可区分不同物种。
DNA条形码技术的实验步骤主要包括：1.提取DNA：通过不同方法（如CTAB法、酚/氯仿法、快速CTAB法等）从植物体内提取总DNA。
2.扩增DNA：选定核糖体RNA基因组的特定区域，设计专用引物，进行PCR扩增。
3.测序：将扩增的PCR产物进行测序，获得DNA序列。
4.分析：使用不同的分析软件进行比较分析，确定条形码序列并进行物种鉴定。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用是基于其快速、准确的鉴定优势，将其应用于中药材的种质资源管理、品种鉴定、生产流通监管等方面，从而保障中药材的品质安全。
1.种质资源管理中药材种质资源的管理涉及到大量的种植和采集工作，通过DNA条形码技术可以快速鉴定不同地域和品种的中药材种质资源，避免资源的重复采集及交叉利用，保护中药材种质资源的多样性和完整性。
2.品种鉴定中药材的品种多样，而不同品种的活性成分含量和药效有很大差异，因此精确鉴定品种对保障中药材的质量非常重要。
使用DNA条形码技术对中药材品种实现快速、准确的鉴定，并有效地避免假冒伪劣产品的流通。
3.生产流通监管中药材的质量和安全对人们的健康至关重要，因此建立完善的生产监管体系显得尤为关键。
DNA条形码技术可以用于中药材的质量追溯，在源头、生产、销售等各个环节进行监管，避免中药材质量出现瑕疵，确保消费者用药安全。
DNA条形码技术在中药材鉴定中应用广泛，但目前国内仍存在一些不足。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用随着人们对中药材的需求日益增长，中药材鉴定工作也变得越发重要。
传统的鉴定方法往往需要对植物的形态、生态环境以及化学成分进行分析，这种方法需要很长时间，且结果容易受到人为因素的影响。
而DNA条形码技术的出现，则为中药材的鉴定提供了一种全新的方法。
DNA条形码技术通过分析植物的DNA序列，可以快速准确地鉴定中药材的真伪和品种，成为中药材鉴定中的一项重要技术。
DNA条形码技术是一种新兴的分子生物学技术，它利用特定的DNA区段作为标志，通过测序和比对分析来识别不同的生物种类。
在中药材鉴定中，DNA条形码技术的应用主要分为样品采集、DNA提取、PCR扩增、测序比对和鉴定结果分析等几个步骤。
首先是样品采集。
以中药材的鉴定为例，采集样品时需要选择具有代表性的部位，并确保样品的新鲜性和完整性，以保证能够提取到高质量的DNA。
其次是DNA提取。
DNA提取是DNA条形码技术的第一步，它能够将植物细胞中的DNA 分离出来。
传统的DNA提取方法包括CTAB法、酚/氯仿法等，这些方法需要大量昂贵试剂和设备，且存在操作复杂、耗时长等缺点。
而近年来，一些新的高效、快速的DNA提取试剂盒逐渐应用到中药材的DNA提取中，大大提高了DNA条形码鉴定的效率和准确性。
接着是PCR扩增。
PCR扩增是DNA条形码技术的关键步骤，通过PCR扩增能够从复杂的混合物中，扩增出感兴趣的DNA片段。
在中药材鉴定中，通过PCR扩增可以选择适当的DNA条形码区域进行扩增，例如rbcL、matK、trnH-psbA等DNA片段，以便进行后续的测序分析。
然后是测序比对。
PCR扩增出的DNA片段将通过测序进行比对分析，这样可以获得精确的DNA序列信息，并与数据库中的DNA序列进行比对，从而对中药材进行鉴定和分类。
通过测序比对，可以鉴定中药材的真伪和种属，避免因为外观相似而导致的混淆误用问题。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用，可以提供非常精确和可靠的鉴定结果，具有以下几点优势：1. 高度准确性。
中药材DNA条形码分子鉴定指导原则
中药材DNA条形码分子鉴定指导原则DNA条形码是一种通过对生物体DNA序列的特定区域进行PCR扩增和测序，从而对物种进行鉴定和分类的技术。
在中药材领域中，DNA条形码可以用于鉴定中药材的真实成分，防止假冒伪劣产品的流通。
下面是中药材DNA条形码分子鉴定的指导原则：一、选择合适的DNA条形码区域为了能够准确地对中药材进行鉴定，需要选择合适的DNA条形码区域。
通常选择的DNA条形码区域应具备以下特点：具有一定的可变性，能够区分不同物种；长度适中，便于PCR扩增和测序；能够被现有的测序技术很好地扩增和测序。
二、建立中药材DNA条形码数据库为了能够对中药材进行准确的鉴定，需要建立中药材DNA条形码数据库。
该数据库应包含各个物种的DNA条形码序列信息，以及相应物种的形态学特征、药理学特性等信息。
数据库的建立可以通过对已鉴定的标本进行DNA提取、PCR扩增和测序，然后将所得到的DNA条形码序列与相关物种信息关联起来。
三、开发高效的检测方法为了能够高效地对中药材进行DNA条形码分子鉴定，需要开发出高效的检测方法。
这包括DNA提取方法、PCR扩增方法、测序方法等。
在选择和优化这些方法时，需要考虑到中药材样品中可能存在的复杂成分、DNA的纯度和浓度等因素。
四、建立可靠的鉴定标准为了能够准确地鉴定中药材，需要建立可靠的鉴定标准。
这包括比对DNA条形码序列与数据库中已有序列的相似度，以及形态学特征、药理学特性等多方面的综合评估。
通过与已知物种进行对照和比对，可以判断出中药材样品中的物种成分和其相对含量。
五、参考样本的采集和保存为了能够建立准确和可靠的中药材DNA条形码数据库，需要采集具有代表性的参考样本，并进行相应的保存。
在采集样本时，需要详细记录样本的产地、采集时间、形态学特征等信息，以便进行后续的鉴定工作。
六、验证和应用对于建立的中药材DNA条形码数据库，需要进行验证和应用。
验证的方法包括通过对已知物种的样品进行鉴定，比对鉴定结果与已有数据库的一致性。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术是一种通过对物种特有DNA序列进行快速、准确鉴定的新技术。
该技
术已广泛应用于植物和动物的起源和分类研究，同时也被用于食品、药品、中药材的鉴定。
中药材因为其种类繁多，且原材料来源复杂，存在伪品、混杂品等问题，因此在中药材鉴
定中应用DNA条形码技术可以有效地解决这些问题。
DNA条形码技术是基于物种特异性的基因序列进行鉴定的，不同物种的DNA序列有着
明显的差异，因此可以通过这些差异来进行鉴定。
在中药材鉴定中，DNA条形码技术可以
利用物种特异性的cpDNA和rDNA序列进行鉴定，这些序列具有高度的可变性和物种特异性，可以用于识别和鉴定物种。
在具体的应用中，DNA条形码技术可以应用于中药材的质量控制、品种鉴定、地理分
布和遗传多样性研究等方面。
例如，在中国政府支持的“中药材DNA条形码鉴定系统”中，已建立了大量的DNA条形码数据库，通过对中药材样品进行PCR扩增和测序，可以对样品
进行比对和鉴定，同时还可以通过比对数据库中的物种信息来进行快速鉴定。
此外，DNA条形码技术还可以用于中药材的原材料验证和市场追溯，通过对市场上中
药材样品进行鉴定，可以快速识别出伪品和混杂品，避免无效成分和有害成分的出现，同
时还可以追溯材料的来源和加工过程，保障中药材的质量和安全。
综上所述，DNA条形码技术对中药材鉴定具有重要的应用价值，可以有效解决中药材
鉴定中经常出现的问题，并为中药材的质量控制和市场安全提供了技术保障。
随着技术的
不断完善和推广，DNA条形码技术将在中药材鉴定中发挥更加重要的作用。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用DNA条形码技术是一种基于DNA分子序列独特性的分子生物学技术，可用于物种鉴定和分类。
该技术通过对物种特异性DNA序列的扩增和测序，生成一组短而独特的序列，作为物种鉴定标记。
由于DNA条形码技术具有高精度、快速、准确、稳定等优点，因此在自然资源保护、食品安全检测、药材鉴定等领域有着广泛的应用。
中药材是我国独特的药物资源，但由于中药材的来源、生长环境、采收、储藏等因素的影响，导致同种中药材的品质存在差异。
因此，中药材的鉴定和质量检测是保障中药药效和安全的重要措施。
而DNA条形码技术恰好可以满足中药材鉴定的需求。
一、物种鉴定中药材物种鉴定的关键在于快速而准确地区分不同中药材品种。
DNA条形码技术利用物种特异性DNA序列，可以准确地区分不同中药材品种。
例如，利用嵩草属中的内转录间隔区ITS序列作为DNA条形码标记，可以快速、准确地识别不同嵩草属物种，为中药材品种的鉴定提供有力的支持。
2、多种中药材物种的鉴定许多中药材常常会混杂在一起，或者不同的中药材制剂中含有相同或相似的草药成分。
因此，多种中药材的鉴定是中药材鉴定的一项重要任务。
DNA条形码技术可以对多种中药材进行快速、准确的鉴定，同时还可以检测到中药材中的混杂品种，从而保证中药材的品质和药效。
例如，利用DNA条形码技术可以对中华三七、益母草等多种中药材进行混合物鉴定，同时可以鉴别其混杂品种，从而有效保障中药材的品质和药效。
二、混淆品鉴定在实际的中药材质量检测中，DNA条形码技术已经得到广泛应用，并取得了显著成效。
例如，通过对中国23种常用中药材的DNA条形码测序，发现部分中药材存在混合、掺杂等情况，从而及时纠正问题，保证中药材的品质和安全。
随着DNA条形码技术的发展，相信其在中药材鉴定领域中将有更广泛的应用，为中药材提供更加精确、快捷的鉴定方法。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用DNA条形码技术是一种基于DNA序列变异的标记方法，可以对不同物种进行快速、准确的鉴定。
随着近年来DNA条形码技术的发展，其在生物多样性研究、食品检测、医学诊断等领域得到了广泛应用。
中药材作为传统中药文化的重要组成部分，一直是中药学研究的热点领域之一。
然而，由于中药材来源繁杂、品种繁多、混淆鉴别等问题的存在，导致中药材品质和安全的鉴定难度较大。
因此，DNA条形码技术在中药材鉴定中具有重要价值。
DNA条形码技术依靠分子生物学方法对DNA序列进行分析，从而对物种进行鉴定。
其主要以rbcL、matK和ITS等基因作为目标序列，使用PCR技术对DNA进行扩增，再通过高通量测序技术将DNA序列读取出来，最后与数据库比对完成物种鉴定。
由于DNA条形码技术具有快速、准确、无需体外培养等特点，因此在中药材鉴定中具有诸多优势。
首先，DNA条形码技术可以直接从中药材样品中提取DNA，无需对中药材进行繁琐的前处理，降低了鉴定成本和时间。
其次，DNA条形码技术可以对不同形态相似但基因序列不同的中药材进行鉴定，有效避免混淆鉴别的问题。
此外，DNA条形码技术还能对中药材的来源地、生长环境等进行分析，有助于评估中药材的品质和安全性。
目前，越来越多的研究表明，DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用已经得到了广泛认可。
例如在一些重要的中药材如黄芪、三七、当归等的鉴定中，DNA条形码技术已经被证实能够准确鉴定不同品种。
此外，DNA条形码技术也被应用于对中药材市场中的假冒伪劣产品进行鉴定，有助于维护中药材市场的规范和安全。
中药材dna条形码分子鉴定指导原则
中药材dna条形码分子鉴定指导原则文章标题：中药材DNA条形码分子鉴定指导原则一、中药材DNA条形码分子鉴定的背景和意义在当今社会，中医药在世界范围内得到了广泛的认可和应用。
然而，众多的中药材种类和繁杂的生态环境使得中药材的质量和安全问题备受关注。
中药材的快速、准确的鉴定方法成为了迫切需要解决的问题之一。
DNA条形码技术作为一种高效、精准的鉴定方法，被广泛应用于中药材的鉴定领域。
二、中药材DNA条形码分子鉴定的基本原理中药材DNA条形码分子鉴定是利用特定基因或基因组片段的序列差异，通过建立数据库和引入生物信息学的方法，对中药材进行鉴定和鉴别的一种技术。
DNA条形码技术是通过对中药材DNA中的特定序列进行扩增、测序和比对，从而进行鉴定和分析。
这项技术不受中药材的形态特征和外部环境的影响，具有高度的准确性和可靠性。
三、中药材DNA条形码分子鉴定的关键技术及应用1. 样品选择：合理的样品选择是中药材DNA条形码分子鉴定的关键，应尽量选择未经加工、优质的样品。
2. DNA提取：中药材的DNA提取是中药材DNA条形码分子鉴定的关键步骤之一，需要选择合适的提取方法以保证提取的DNA的质量和纯度。
3. DNA扩增和测序：通过PCR扩增和测序技术，可以获取到中药材的DNA条形码序列信息。
4. 数据分析：建立中药材的DNA条形码数据库，并通过生物信息学方法对测序数据进行分析，从而进行鉴别和鉴定。
中药材DNA条形码分子鉴定技术已经在中药材的鉴定、质量控制和市场监管等方面得到了广泛的应用。
它能够迅速、准确地鉴定中药材的真伪、来源和品质，为中药材的质量和安全提供了可靠的技术手段。
四、对中药材DNA条形码分子鉴定的个人观点和理解中药材DNA条形码分子鉴定技术的出现，无疑在中药材的鉴定领域起到了革命性的作用。
它不但能够有效避免中药材形态特征受季节、地域等因素的影响，还能够为广大消费者提供更加真实、可靠的中药材产品。
然而，也应该注意到，中药材DNA条形码分子鉴定技术在实际应用过程中还存在一些挑战和难点，例如样品的处理和数据库的建立等方面，需要不断改进和完善。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用DNA条形码技术在中药材品种鉴定中具有重要的应用价值。
传统的中药材鉴定方法主要依靠观察植物的形态特征、显微镜下的解剖结构以及化学成分等进行鉴定，但这些方法容易受到环境因素、人为因素的影响，误判率较高。
而DNA条形码技术通过提取物种特异的DNA序列，以DNA序列的差异性为依据，可以准确鉴定中药材的物种。
利用DNA条形码技术可以鉴定多种菊科植物，如菊花、蒲公英等，提高了中药材的品种鉴定水平。
DNA条形码技术可以应用于中药材的真伪辨别。
中药材市场上经常出现伪劣产品，有些植物的外形相似，很难通过肉眼观察来辨别真伪。
而DNA条形码技术可以通过提取物种特异的DNA序列，与已知真品进行比对，快速准确地辨别中药材的真伪。
利用DNA条形码技术可以鉴定鹿茸和马鞭草的真伪，避免消费者购买到伪劣产品。
DNA条形码技术可以应用于中药材的质量控制。
中药材的药效主要来源于其中的有效成分，而不同物种中有效成分的含量也有所不同。
通过测定中药材中物种特异的DNA序列，可以直接估算其中有效成分的含量，从而实现对中药材的质量控制。
利用DNA条形码技术可以测定桑白皮的有效成分桑黄素的含量，为桑白皮的质量评价提供了一种新的方法。
DNA条形码技术还可以应用于中药材的源头溯源。
中药材通常来自于不同地域的植物，而不同地域的环境条件、土壤成分等会对中药材的品质产生影响。
通过比对中药材中物种特异的DNA序列，可以准确推断中药材的产地。
这有助于消费者了解中药材的来源，选择符合自己需求的产品。
DNA条形码技术在中药材鉴定中具有广泛的应用前景。
它可以提高中药材的品种鉴定水平，辨别中药材的真伪，进行中药材的质量控制，实现中药材的源头溯源等，为中药材产业的发展提供了一种高效准确的技术手段。
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用
DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用DNA条形码技术是一种通过对物种特定基因区域进行扩增和测序，从而快速、准确地鉴定物种的方法。
它在生物多样性研究和物种鉴定中已经得到广泛应用。
在中药材鉴定中，DNA条形码技术也具有重要的应用价值，能够帮助解决中药材鉴定中的难题，提高鉴定的准确性和效率。
DNA条形码技术主要通过两个步骤来完成物种鉴定：DNA提取和测序分析。
从中药材样品中提取DNA，一般使用CTAB法、核酸快速提取试剂盒等常用方法。
然后，选择合适的DNA区域进行扩增和测序分析，常用的DNA区域有叶绿体DNA的rbcL、matK、trnH-psbA以及核基因DNA的ITS等。
1. 物种鉴定与反假阳性鉴定：中药材常常是由多个物种混合而成的，通过DNA条形码技术可以准确鉴定中药材中的物种组成，避免了传统鉴定方法中容易出现的混淆和错误。
中药材的质量控制中，常常出现违规物种、假冒伪劣的情况，DNA条形码技术可以帮助鉴定中药材的纯度和质量。
2. 针对混杂品种的鉴定：目前，市场上许多中药材的品种繁多，一种药材中可能会混杂多个品种。
传统的形态鉴定方法往往鉴定困难，而且需要耗费大量的人力物力。
DNA条形码技术可以通过快速、可靠地鉴定物种的方式来解决该问题。
3. 鉴定中药材的地理来源：中药材的地理来源对其品质和功效有很大的影响。
通过DNA条形码技术，可以将中药材的遗传信息与不同地理来源的样本进行比对，从而准确鉴定中药材的地理来源。
4. 反伪造和防掺假：传统的中药材鉴定方法容易被人为伪造，而且对于一些外观相似的伪种和假材料难以鉴别。
借助DNA条形码技术可以对中药材进行快速检测，鉴别真伪。
5. 中药材资源调查和保护：随着经济的发展，野生中药资源面临着破坏和消失的危险。
DNA条形码技术可以对中药材的野生和栽培资源进行调查和监测，并提供科学依据来保护和合理利用中药材资源。
三、存在的问题和发展方向1. 样品处理的影响：中药材样品中含有多种化学成分和多种物质，如中药材中的多糖、木质素、黑色素等会对DNA提取的效果产生影响。
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加样品量，同时应增加β-巯基乙醇和PVP的使用量。 叶、花、全草类 该类药材采用试剂盒法一般都能成功提取其DNA，对于保存时间较
久的叶、花、全草类药材可适当增加水浴时间，同时适当降低水浴温度，如56℃水浴过夜等。 果实、种子类 果实及种子类中药材中多富含油脂，研磨时易被氧化，且易粘着在研钵
壁上，损失较大，提取时需增加样品量。另外，对研磨后的材料可用丙酮浸提，去除脂溶性 酚类化合物。
实验结果在3家以上实验室能够重现，同一样品在不同实验室获得DNA条形码序列应相 同。
3. 方法适用性考察 采用DNA条形码分子鉴定法对20批次以上药材或基原物种进行测定，积累数据，确定 种内序列变异大小，保证该测定方法的适用性。 4. 基原物种对比验证 以分类学家确认的基原物种叶片为对象，采用该方法获得DNA条形码数据，与相应药 材产生的DNA条形码数据进行对比，避免内生真菌等污染，保证结果准确性。 四. 注意事项 1. 实验场所应具备分子生物学实验室的基本条件。 2. 本法暂不适用于混合物与炮制品的鉴定及硫磺熏蒸等造成不适用的情况。 3. 为防止外源真菌污染，实验前须将实验用具进行高压灭菌，并用75%乙醇擦洗药材 表面。有些药材本身含有内生真菌，如果内生真菌存在于药材的外围组织，则选用内部组织 进行实验。如果真菌遍布整个药材，植物类药材需选用psbA-trnH条形码(真菌内不含有该基 因片段)，不能选用ITS2序列。为进一步确保实验结果不被真菌污染，实验者可在GenBank 数据库应用BLAST方法对所获ITS2序列进行检验，以确保序列鉴定准确。 4. 本法用于鉴定药材的基原物种，不能确定药用部位。 5. 必要时结合其他鉴别方法综合判断。 6. 种内阈值的确定。同一物种的不同样品间存在一定的变异范围，即种内变异阈值。 不同物种，不同条形码序列均会影响种内变异范围。各基原物种的种内变异范围(种内遗传
1 新增指导原则。若正文品种采用该法，则按方法予以收载。
本法主要包括供试品处理、DNA提取、DNA条形码序列PCR扩增、电泳检测和序列测 定、序列拼接及结果判定，主要步骤如下。
1. 供试品处理 按药材和饮片取样法(《中华人民共和国药典》附录IIA)取样，除另有规定外，药材和 饮片使用75%乙醇擦洗表面后晾干，称取10-100 mg备用。具体见各药材项下。 2. DNA提取 DNA的提取包括使用研钵或研磨仪破碎细胞，释放DNA，用试剂盒法进行DNA的分离 和纯化等步骤，目前常用试剂盒包括植物基因组DNA提取试剂盒和动物组织/细胞基因组 DNA提取试剂盒，实验选用的试剂盒须能够提取到满足后续实验要求的模板DNA。 由于植物类中药材种类繁多，可根据所鉴定的中药材的具体情况对提取方法加以改进。 例如：植物细胞内含有大量多糖、多酚等次生代谢产物，这些物质在提取DNA的过程中与 DNA共沉淀，A提取的产量与 质量，以及后续的PCR扩增实验。但如在提取DNA过程中加入抗氧化剂β-巯基乙醇，则可抑 制氧化反应，避免其褐化。再如：PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种 不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA提取过程中酚的污染；同时它也能和多糖结合， 有效去除多糖。因此若将PVP和β-巯基乙醇配合使用，能够有效地防止DNA提取过程中多酚 及多糖的污染。此外，乙二胺四乙酸(EDTA)能螯合Mg2+或Mn2+，从而抑制DNA酶(DNase) 活性，防止DNA被其降解；在天然状态下，DNA与蛋白质以DNA蛋白质复合物(DNP)的形 式存在，十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与DNA形 成复合物，使细胞中的DNP释放出来，该复合物在高盐溶液(>0.7mol/L NaCl)中能充分溶解， 存在于液相中，通过有机溶剂抽提，去除蛋白质、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使 DNA分离出来。三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCl)(pH8.0)溶液可提供一个缓冲环境，防止DNA 被降解。 根、根茎、茎木类、皮类 通常根和根茎组织中多酚、多糖含量高，在研磨时多酚极 易氧化成醌类，使DNA带有一定颜色，在纯化过程中很难去除，影响后续的PCR反应，所 以在提取根及根茎类药材DNA时一定要注意多糖、多酚的去除。提取此类药材DNA时水浴 时间一般为90分钟，对于质地坚硬的根、根茎类和茎木类药材，可以延长水浴时间并降低水 浴温度，如56℃水浴8-12小时，使得DNA充分释放到缓冲溶液中。此外，根茎类药材由于富 含纤维和淀粉等贮藏物质，需加大样品量才能提取到足量DNA，可用大体积离心管(5 mL或 15 mL)抽提。皮类中药材组织中富含薄壁组织和纤维等，加液氮不易研磨成细粉，需适当增
PCR条件(变性时间、退火温度与时间及延伸时间)和产物纯化(考察不同纯化试剂盒)，保证 实验方法的准确性。
2. 精密度考察 （1）重复性
至少用3批供试品，每批3次或同批供试品进行6次测定试验后对结果进行评价。实验结 果判定应基本一致。 （2）中间精密度
考察实验室内部条件改变(如不同人员、不同仪器、不同工作日和实验时间)对测定结果 的影响，至少应对同实验室不同操作人员的结果进行考察。 （3）重现性
3. PCR扩增 植物类中药材及其基原物种扩增ITS2或psbA-trnH序列，动物类中药材及其基原物种扩 增COI序列，通用引物及扩增条件如下，特殊规定见各药材项下。 ITS2序列扩增正向引物ITS2F：5′-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3′；反向引物ITS3R： 5′-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3′ 。 psbA-trnH 序 列 扩 增 正 向 引 物 psbAF ： 5′-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3′ ； 反 向 引 物 trnHR ： 5′-CGCGCATGGTGGATTCACAATCC-3′ 。 COI 序 列 扩 增 正 向 引 物 HCO2198 ： 5′-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3′ ； 反 向 引 物 LCO1490 ： 5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3′。 PCR反应体系以25 μL为参照，包括：1×PCR缓冲液(不含MgCl2)，2.0 mmol/L MgCl2， 0.2 mmol/L dNTPs，0.1 μmol/L引物对，模板DNA，1.0 U Taq DNA聚合酶，加灭菌双蒸水至 25 μL。设置未加模板DNA的PCR反应为阴性对照。 ITS2序列扩增程序：94℃ 5分钟；94℃ 30秒，56℃ 30秒，72℃ 45秒，35-40个循环； 72℃ 10分钟。psbA-trnH序列扩增程序：94℃ 5分钟；94℃ 1分钟，55℃ 1分钟，72℃ 1.5 分钟，30个循环；72℃ 7分钟。COI序列扩增程序：94℃ 1分钟；94℃ 1分钟，45℃ 1.5分 钟，72℃ 1.5分钟，5个循环；94℃ 1分钟，50℃ 1.5分钟，72℃ 1分钟，35个循环；72℃ 5 分钟。
9402 中药材DNA条形码分子鉴定法1
本法用于中药材(包括药材及部分药材饮片)及基原物种的鉴定。 DNA条形码分子鉴定法是利用基因组中一段公认的、相对较短的DNA序列来进行物种 鉴定的一种分子生物学技术，是传统形态鉴别方法的有效补充。由于不同物种的DNA序列 是由腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)四种碱基以不同顺序排列组成，因此 对一定长度的DNA序列进行分析即能够区分不同物种。 中药材DNA条形码分子鉴定是以核糖体DNA第二内部转录间隔区(ITS2)注1为主体条形 码序列鉴定中药材的方法体系，其中植物类中药材选用ITS2为主体序列，以叶绿体psbA-trnH 注2为辅助序列，动物类中药材采用细胞色素c氧化酶亚基I(COI)注3为主体序列，ITS2为辅助序 列。 一、仪器的一般要求 所用仪器有电子天平、离心机、聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)仪、 电泳仪和测序仪。 DNA 序列测定用测序仪，是一台具有自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自 动电脑控制的测定 DNA 片段中碱基顺序或大小，以及定量用精密仪器。测序方法主要采用 双脱氧链终止法，又称 Sanger 法，传统 Sanger 法采用同位素标记，目前常用的自动测序仪 是基于毛细管电泳和荧光标记技术的 DNA 测序仪，从而大大提高了 DNA 测序的速度和准 确性。4 种双脱氧核苷酸(ddNTP)的碱基分别用不同的荧光进行标记，在通过毛细管时，不 同长度的 DNA 片段上的 4 种荧光基团被激光激发，发出不同颜色的荧光，被电荷藕合元件 图像传感器(charge-coupled device，CCD)检测系统识别，并直接翻译成 DNA 序列，获得供 试品的峰图文件和序列文件。 测序仪的配置包括毛细管电泳仪、计算机、液晶显示器及数据采集和分析软件。仪器主 要具有进样、电泳、检测、清洗四大功能，其中进样部分的主要作用是放置待检测的样品； 起电泳功能的主要部件是毛细管和泵，在 60℃条件下电泳，区分不同长度的 DNA 片段；检 测部件主要是激光电源、激光管、光电转换装置；清洗部分主要作用是对毛细管进样口的清 洗，保证自动灌胶、上样、电泳过程中无交叉污染。 二、 测定步骤
动物药材 肌肉类动物药材如海龙、蛇类、蛤蚧等，需使用75%乙醇擦拭表面消除外源 性污染，待乙醇挥发后进行充分磨碎。含有脂类较多的动物内脏器官如蛤蟆油，首先用不含 蛋白酶K和十二烷基硫酸钠(SDS)的缓冲液浸泡药材，SDS是一种阴离子表面活性剂，在55～ 65℃条件下能裂解细胞，释放出核酸；然后在试剂盒消化缓冲液中增加SDS含量，有利于脱 去脂类。角甲类药材如龟甲、鳖甲和鹿茸等，由于DNA含量较低，样品量要适当增大，也 可用大体积离心管抽提。壳类药材如石决明、瓦楞子、蛤壳等，由于存在共生或寄生生物， 提取前需进行去除。
4. PCR产物检测 采取琼脂糖凝胶电泳方法检测PCR产物。电泳后，PCR产物应在相应的DNA条形码序列 长度位置(具体见各药材项下)出现一条目的条带，阴性对照应无条带。 5. 测序 使用DNA测序仪对目的条带进行双向测序，PCR扩增引物作为测序引物，测序原理同 Sanger测序法。有目的条带的样品在测序仪上进行双向测序。 6. 中药材DNA条形码序列获得 （1）序列拼接 对双向测序峰图应用有序列拼接功能的专业软件进行序列拼接，去除引物区。 （2）序列质量与方向 为确保DNA条形码序列的可靠性，需去除测序结果两端信号弱或重叠峰区域，序列方 向应与PCR扩增正向引物方向一致，获得相应的DNA序列。 7. 结果判定 将获得的序列在中药材DNA条形码鉴定系统()中应用BLAST注 4(Basic Local Alignment Search Tool)方法进行结果判定。具体流程为登录中药材DNA条形码 鉴定数据库系统网站，在主页点击“物种鉴定”。根据需鉴定物种的种类，选择对应的鉴定 数据库，如点击植物类药材鉴定(ITS/ITS2)。将需要鉴定的物种序列复制后粘贴到“植物类 药材鉴定(ITS/ITS2)”的序列输入栏，点击“提交”按钮，进行BLAST鉴定。BLAST比对结 果中，在“序列比对信息”栏查看相关比对信息，在“物种鉴定结果”栏显示查询序列与数 据库中目标序列的序列相似性注5及目标序列对应的基原物种。如果植物类药材ITS/ITS2序列 比对后最接近的物种为真菌，则需采用psbA-trnH序列重复上述方法流程。 二. 中药材DNA条形码数据库构建原则 建立中药材DNA条形码数据库时，应在药材原产地及主产地采集供试品，采用经典分 类方法确定其基原，采集样本尽可能覆盖其分布区，每个物种采集来自不同产地样本20份以 上。根据具体药材测定ITS2、psbA-trnH或COI等DNA条形码序列，分析确定该药材DNA条 形码序列种内变异大小。对实验获得或国际基因数据库(GenBank)中的中药材DNA条形码序 列必须经过核准后方可录入中药材DNA条形码数据库，同时需定期对数据库进行更新。 三. 方法学验证 1. 影响因素考察 考察DNA条形码分子鉴定法的影响因素，包括DNA提取(样品量、水浴温度和水浴时间)、