包合物的制备

（二）包合物形成的验证方法
1．薄层色谱法（TLC） ⑴ 硅胶 G 板的制作 将 1 份固定相（硅胶 G）和 3 份含有 0.5%CMC-Na 的水溶液在研钵中向一方向 研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动斜面器进行涂 布（厚度为 0.2~0.3mm） ，取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，然后在
分子容纳在内，形成分子囊（ molecule
目前，常用包合物的主分子以环糊精（ CYD）为最多。环糊精系淀粉用嗜碱性 芽孢杆菌经培养得到的环糊精葡聚糖转位酶（ Cyclodextrin 用后所形成的产物。是由 6~10 个 D-葡萄糖分子以 1，4-糖苷键连接面成的环状低聚 糖化合物。 环糊精为水溶性、 非还原性的白色结晶性粉末。 常见的有α -、 β -、 γ-CYD 三种，分别由 6， 7， 8 个葡萄糖分子构成。 药物作为客分子经包合后，溶解度增大，稳定性提高，液体药物可粉末化，可 防止挥发性成分挥发，掩盖药物的不良气味或味道，调节释药速率，提高药物的生 物利用度，降低药物的刺激性与毒副作用等。 符合下列条件之一的有机药物，通常都可以与环糊精包合成包合物：药物结构 中的原子数大于 5 个且药物的稠环小于 5 个；药物分子量在 100~400 之间；药物在 水中的溶解度小于 10mg/ml； 药物的熔点低于 250℃。 也有药物符合上述条件而不能 与环糊精包合的，如几何形状不合适；也有因环糊精用量不合适而不能包合的。无 机药物大多数不宜与环糊精包合。环糊精包合物的制备方法很多，有饱和水溶液法、 研磨法、喷雾干燥法、冷冻干燥法以及中和法等，其中以饱和水溶液法（亦称重结 晶法或共沉淀法）为最常用。 包合物根据主分子的构成可分为多分子包合物、单分子包合物和大分子包合 物；根据主分子形成空穴的几何形状又分为管形包合物（ channel 或 tunnel inclusion compound） 、 笼形包合物 （ chathrate 或 cage inclusion compound） 和层状包合物 （layer
三、实验内容与操作
（一）莪术挥发油-β环糊精包合物的制备
1．莪术挥发油的制备 将莪术粉碎成中等粉末，取 200g，加入 10 倍量的蒸馏水，经挥发油提取器提 取 3.0 小时，得棕褐色油状液体，用无水硫酸钠脱水后，即得莪术挥发油，备用。 2．莪术挥发油乙醇溶液的制备 精密吸取莪术挥发油 1ml，加无水乙醇 5ml，溶解，即得，备用。 3．β -环糊精饱和水溶液的制备 称取β-环糊精 8g，置烧杯中，加蒸馏水 100ml，在 60±1℃条件下制成饱和水 溶液，保温，备用。 4．莪术挥发油-β环糊精包合物的制备 将β-环糊精饱和水溶液 100ml 置烧杯中，于磁力搅拌器上，60℃恒温，另精密 吸取莪术油乙醇液 5ml，缓慢滴入到 60℃的β -环糊精饱和水溶液中，不断搅拌，并 用 5ml 无水乙醇洗涤移液管，同时将洗涤液滴入到β -环糊精饱和溶液中。待出现浑 浊逐渐有白色沉淀析出，继续搅拌 4 小时（本实验中为掌握方法，可暂定搅拌 1 小 时） ，停止加热，继续搅拌至室温，最后置冰箱中放置 12 小时（实验中也可用冰浴 冷却） ，待沉淀析出完全后，抽滤，用无水乙醇 5ml 洗涤三次，抽滤至干，50℃以下 干燥，称重，计算收得率。
四、实验结果与讨论
1．包合物的含油率、利用率及吸收率见表 1。 表 1. 包合物的含油率、利用率及吸收率 样品 包合物 2．包合物形成的验证 （1）绘制 TLC 图，说明包合前后的特征斑点与 Rf 值的情况，说明包合物的形成。 含油率% 利用率% 收得率%
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（2）绘制 DTA 图，说明包合前后与混合物等的峰形与峰温，说明包合物的形成。 3．含量测定结果见表 2 表 2.包合物的含量测定结果 样品 挥发油 包合物 Ax Ar Cx Cr %
含油率 包合物中实际含油量( g ) 100% 包合物量( g )
（1 ） （2 ） （3 ）
利用率
包合物中实际含油量(ml) 100% 投油量(ml)
包合物实际量( g ) 100% 环糊精( g ) 投油量( g )
包合物收率
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（四）含量测定（紫外分光பைடு நூலகம்度法）
1．对照品溶液的制备 精密称取莪术醇 250mg， 置 25ml 量瓶中， 加无水乙醇溶解并定容至刻度， 摇匀， 精密吸取其 1ml ，置 50ml 容量瓶中，加 10%聚山梨酯-80 1ml ，用无水乙醇定容至刻 度（0.2mg/ml ） 。 2．样品溶液的制备 ⑴莪术挥发油样品液的制备 精密量取莪术挥发油 0.1ml，置 25ml 容量瓶中，加 10%聚山梨酯 -80 0.5ml，加 无水乙醇稀释并定容至刻度，即得。 ⑵莪术挥发油 -β环糊精包合物样品溶液的制备 精密称取相当于含有 0.1ml 莪术挥发油量的包合物， 加 20ml 无水乙醇， 振摇 10 分钟，静置 1 小时，过滤，滤液置 25ml 容量瓶中，加 10%聚山梨酯 -80 0.5ml，加无 水乙醇定容至刻度，即得。 ⑶空白溶液的制备 精密量取 10%聚山梨酯 -80 即得。 3．测定方法 精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各 0.5ml，置 100ml 容量瓶中，用 0.2% 香草醛硫酸液定容至刻度，摇匀，放置 30 分钟，于 510nm 处测定吸收度，按下式 计算莪术醇含量。 Cx=（ Ax/Ar） Cr 式中 Cx-供试品溶液的浓度， Ax-供试品溶液的吸收度，Cr 为对照品溶液的浓度， Ar-对照品溶液的吸收度。 0.5ml 置 25ml 容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，
五、思考题
１.制备包合物的关键是什么？应如何进行控制？ 2．制备包合物时，主分子对客分子有何要求？ 3．验证包合物的方法有哪些？
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inclusion compound ） 。 本实验的客分子为莪术挥发油， 具有较强的挥发性， 临床证明具有抗肿瘤作用。 莪术醇是莪术油中抗癌有效成分。现有莪术油静脉注射液及乳剂等剂型，但稳定性 较差，对光敏感，强光下易分解。将莪术油制成包合物后，可减少莪术油的挥发， 使液态油状态改变成固体粉末，便于配方，还可具有缓释作用。
（三）莪术油 -β环糊精包合物中含油量的测定
1．精密量取莪术油 1ml，置圆底烧瓶中，加蒸馏水 100ml，用挥发油测定法提取 莪术油，并计量。 2．称取相当于 1ml 莪术挥发油的包合物置圆底烧瓶中，加水 100ml，按上述方法 提取莪术挥发油并计量。 根据所测数值，利用下述公式计算包合物的含油率、利用率及收得率。
实验十六 包合物的制备及其验证
实验目的
1．掌握饱和水溶液法制备包合物的工艺。 2．掌握包合物形成的验证方法。
实验指导
包合技术系指一种分子被包嵌于另一种分子的空穴结构内，形成包合物 （inclusion 子（ guest compound）的技术。这种包合物是由主分子（ host molecule）和客分 molecule）两种组分加合组成，主分子具有较大的空穴结构，足以将客 capsule） 。 glucanotransferase ）作
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110℃活化 30 分钟，取出后立即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度 （可通过透射光和反射光检视） 。 ⑵ 样品液的制备 ① 莪术挥发油样品液的制备（ A） 精密吸取莪术挥发油 0.5ml，加无水乙醇 9.5ml，溶解，即得，备用。 （0.05μl 油 /μl 乙醇） 。 ② 莪术挥发油-β环糊精包合物样品液的制备（B） 精密称取包合物适量（相当于含有 0.5ml 莪术挥发油的量） ，加无水乙醇 9.5ml ， 振荡，取上清液，备用。 ⑶ TLC 条件 用微量进样器精密分别吸取样品液 A、 B 各 10μl，点于同一硅胶 G 板上，以石 油醚：乙酸乙酯（ 9：1）为展开剂，展开前将板置展开槽中饱和 10 分钟，上行展开， 展距 15cm，1%香草醛浓硫酸液为显色剂，喷雾烘干显色。 2．差热分析（DTA） ⑴ 样品的制备：莪术挥发油为样品 a，β -环糊精为样品 b，包合物为样品 c，按 包合物中的比例量称取莪术挥发油与β-环糊精， 制成莪术挥发油与β -环糊精的混合 物为样品 d。 ⑵ DTA 条件：测定气 N 2 为 40ml/min，量程为± 100uV，升温速度为 10℃ /min， 走纸速度 600mm/h，样品与参比物的称量大致相等。