临床生化常用的色原及检测波长

临床生化常用的色原及检测波长

Toos 545nm

苯酚（对氯苯酚）505nm

NAD（P）H指示系统，波长340nm，项目：ALT、AST、GLUC己糖激酶法、C K、UREA、LDH等。

苯衍生物类，波长400-410nm，如ALP、GGT、CHE等。

过氧化物酶指示系统，项目：TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA等。

可见光波长及其互补色：可见光波长及其相应被吸收的颜色依次为：红色（630～700nm）、橙色（600～630nm）、黄色（570～600nm）、绿色（500～570nm）、蓝色（435～500nm）、紫色（400～435nm）。

★540nm：

1. 双缩脲测蛋白：所有蛋白质分子都含有肽键。在碱性溶液中，肽键与铜离子结合，生成蓝紫色化合物，在540nm处吸光度与肽键的数量呈正比关系，可以计算蛋白质含量。

2. 染料结合法测脑脊液蛋白：在柠檬酸存在的酸性条件下，伊红Y燃料离解成阴离子型，染料的黄色消退，使试剂空白吸光度降低；另外，蛋白质多肽链中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸和色氨酸残基，离解生成带－NH3+基团，与染料阴离子的羧基和酚基借静电吸引而结合成红色蛋白燃料复合物，其540nm处吸光度大小与蛋白质浓度呈比例。

★628nm：

1. 溴甲酚绿法测血清白蛋白：在PH4.2的缓冲液中，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚绿（BCG）生成蓝绿色复合物，在波长628nm处有吸收峰。复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比。

★603nm：

1. 溴甲酚紫法（BCP）测血清白蛋白：BCP溶于PH5.2的醋酸缓冲液中，呈黄色。当它与白蛋白结合后转变为绿色的符合物，在波长603出有最大吸收峰。★650nm：

1. 磷钨酸法测黏蛋白：以0.6mol/L过氯酸沉淀血清中蛋白质时，黏蛋白不被沉淀，仍存留在滤液中，再加磷钨酸使黏蛋白沉淀，然后以酚试剂测定沉淀物中蛋白质的含量。

2. 米吐尔直接显色法测血清无机磷：利用无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸铵复合物，用还原剂对甲氨基酚硫酸盐（米吐尔）还原生成钼蓝。在试剂中加入吐温－80以抑制蛋白质的干扰。

★604nm：

1. 邻苯三酚红钼络合显色法测脑脊液总蛋白：邻苯三酚红与钼酸络合形成红色复合物（吸收峰475nm）。该复合物在酸性条件下与蛋白质形成复合体，其吸收峰移至604nm。用比色法求蛋白质含量。

★530nm：

1. 比浊法测脑脊液蛋白：脑脊液中蛋白质与磺基水杨酸－硫酸钠试剂作用产生沉淀，所形成的浊度在530nm处进行吸光度测定，与同样处理的标准液比较测得蛋白含量。

★415nm：

1.亲和层析法测HbA1c：用于分离糖化与非糖化Hb的亲和层析凝胶柱，是交联间－氨基苯硼酸的琼脂糖珠。硼酸与结合在Hb分子上葡萄糖的顺位二醇基反应，形成可逆的五环化合物，致使样品中的糖化Hb选择性地结合在柱上，而非糖化Hb则被洗脱。然后用山梨醇解离五环化合物以洗脱糖化Hb，在415nm分别测定解析液的吸光度，计算糖化Hb的百分率。

★550nm：

1. 糖化血清蛋白测定：血清葡萄糖能与白蛋白及其他血清蛋白分子N末端的氨基发生非酶促糖化反应，形成高分子酮胺结构。此酮胺结构能在碱性环境中与硝基四氮唑蓝（NBT）发生还原反应，生成甲？，以1－脱氧－1－吗啉果糖（DMF）为标准参照物，在550nm处进行比色。

★340nm：

1. 血清前白蛋白测定：血清中的PA与抗PA抗体在液相中反应生成抗原抗体复合物，使反应液呈现浊度。当一定量抗体存在时，浊度与血清中PA的含量呈正比，利用340nm处的散射比浊或投射比浊技术，与同样处理的PA标准比较，求得样品种PA含量。

2. 尿微量白蛋白测定：尿液中的白蛋白与抗人白蛋白特异性抗体在缓冲液中反应生成抗原－抗体复合物，产生浊度，与尿中白蛋白浓度呈正比，利用透射比浊法测定340nm处吸光度，与同样处理的标准品制备的标准曲线比较，求得尿液中的白蛋白浓度。

3. 己糖激酶法测血清葡萄糖：在己糖激酶（HK）催化下，Glu和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖－6－磷酸（G-6-P）与ADP。前者在葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G－6－PD）催化下脱氢，生成6－磷酸葡萄糖醛酸（6－PG），同时使NADP 还原成NADPH。反应式如下：

葡萄糖+ATP —HK—> G6P+ ADP

G6P + NADP —G6PD—> 6PG + NADPH + H+

NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比。NADPH在波长340nm有吸收峰，检测吸光度升高速率，计算血清葡萄糖浓度。

4. 葡萄糖脱氢酶法测血清葡萄糖：葡萄糖脱氢酶（GDH）催化葡萄糖脱氢，氧化生成葡萄糖酸（D－葡萄糖酸－&－内酯）。

B－D－葡萄糖+NAD+—GDH—>D－葡萄糖酸内酯+NADH

向反应液中加入变旋酶可缩短反应达平衡时间，反应过程中NADH生成量与葡萄糖浓度成正比关系。

5. 血浆乳酸测定：在NAD存在下，乳酸脱氢酶催化乳酸氧化成丙酮酸，同时生成NADH：

L－乳酸+ NAD+ —LDH—> 丙酮酸+ NADH + H+

在PH9.8时，平衡偏向乳酸氧化成丙酮酸。加入肼或氨基脲与丙酮酸生成复合物，使丙酮酸不断从反应体系中移去，进一步促进反应向右移动，从而驱动反应的完成。分光光度计波长340nm，监测吸光度的升高速率，计算乳酸含量。

6. 全血乳酸测定：在NAD+存在下，LDH催化乳酸，氧化成丙酮酸。加入硫酸肼捕获产物丙酮酸，并促进反应完成。反应完成后生成的NADH与乳酸为等摩尔关系，在340nm下测定NADH的生成量，计算乳酸的含量。

7. 血浆丙酮酸测定：乳酸脱氢酶催化丙酮酸还原成乳酸，反应如下。

丙酮酸+ NADH + H+—LDH—> L－乳酸+ NAD+

分光光度计波长340nm，监测NADH吸光度下降速率，计算样品中丙酮酸浓度。本法适用于各种任选式自动分析仪。

8. 全血丙酮酸测定：原理同血浆丙酮酸测定，PH7.5条件下利于上述反应（生成乳酸方向）

9. 血清（B－羟丁酸）B－HB测定：在有NAD存在时，B－羟丁酸在B－羟丁酸脱氢酶（B－HBDH）催化下，生成乙酰乙酸（AcAc）和NADH。在波长340nm 处，监测反应中吸光度的上升速率，可以计算血清中B－羟丁酸的浓度。

B－HB + NAD —B-HBDH—> AcAc + NADH + H+

10. 钾的酶法测定：磷酸烯醇丙酮酸（PEP）与二磷酸腺苷（ADP）在钾依赖性丙酮酸激酶（PK）催化下，生成丙酮酸和三磷酸腺苷（ATP）。再在乳酸脱氢酶催化下，所生成的丙酮酸和NADH反应，生成乳酸和NAD。反应中NADH的消耗量与样品种钾离子浓度呈正比。因此，在340nm处监测吸光度下降速率，可以计算钾离子含量。反应式如下：