临床生化常用的色原及检测波长
常见的生化检测方法
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------常见的生化检测方法Western-blot 法 Western Blot 印迹法是把通过电泳分离的蛋白质组分从凝胶转移至一种固相支持物，通过抗体与附着于固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生特异性反应进行检测。
Western Blot 既可以定性，又可以半定量，是初步鉴定靶蛋白表达的最方便也是最通用的方法。
1、试剂耗材的准备：⑴、转膜缓冲液（48 mM Tris-HCl， 39 mM 甘氨酸， 0. 037% SDS， 20%甲醇）：⑵、 10丽春红染液：⑶、 TBS 缓冲液：⑷、 TBST 缓冲液（含 20%Tween20 的 TBS 缓冲液）：⑸、封闭液（含 5%脱脂奶粉的 TBST 缓冲液）：⑹、一抗、二抗及抗体稀释液：参照说明书，以封闭液或 TBST 进行稀释。
⑺、底物显色液 ECL，4℃ 避光保存，现用现配。
⑻、显影液和定影液。
用水稀释 10-20 倍于铝盒中，可多次使用。
室温避光存放。
2、实验步骤：⑴、蛋白样品制备：1 / 15用细胞裂解液抽提蛋白，并测蛋白浓度。
⑵、取 1mg 蛋白进行 SDS-PAGE。
⑶、转膜：（转膜缓冲液4℃预冷备用，冷却装置于-80℃冰箱冷冻备用）。
⑷、将 2 张海绵垫、 2 张滤纸、转膜夹子及玻棒浸泡在盛转膜缓冲液的铝盒中。
⑸、戴上手套，剪一张与凝胶尺寸相近的 PVDF 膜（83 mm75 mm），左上角剪一缺口作为标记，浸泡在盛有 20mL 甲醇的平皿中约 15 sec，直到膜变半透明。
用纯水冲洗膜2 次。
浸泡在盛转膜缓冲液的铝盒中。
⑹、 SDS-PAGE 结束后，小心地剥下两块凝胶，一块用于考马斯亮兰染色观察电泳情况，另一块浸泡在转膜缓冲液中预平衡。
生物化学检验常用技术
5.标准溶液设置的浓度范围足够大。
2．比较法
己知浓度的标准品和标本作同样处理，使用相同的空白，同时测定 标准管和标本的吸光度，根据测定的吸光度及标准品浓度，可直接计 算出标本的浓度，计算公式为：
CR=(AR ×Cs)/As
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二、发射光谱分析法
处于激发态的待测元素，原子回到基态 时以辐射的形式释放出能量，由此而产生的 光谱称为发射光谱，对元素进行定性与定量 分析的方法。
2、试剂空白：用不加样品，而显色剂和其他试剂都相同的溶液作参比溶液。 选择原则：当显色剂本身有颜色或其它试剂有颜色，被测试样中又无其他有色离子时，选用试剂参比。
3、样品空白：用不加显色剂的样品溶液作参比溶液。 选择原则：当试样溶液有颜色，而试剂、显色剂均无颜色时，选用样品空白。
4、平行操作空白：按样品分析完全相同的操作步骤，用不含待测元素的样品进行平行操作， 以消除操作过程中引入干扰杂质所带来的误差。
可用电极测定的气体
CO2 + H2O === HCO3- + H+ NH3 + H2O === NH4+ + OHSO2 + H2O === HSO3- + H+ 2NO2 + H2O === NO3- + NO2- + H+ H2S + H2O === HS- + H3O+ HCN + H2O === H3O+ + CNHF + H2O === H3O+ + F-
第二节 电化学分析技术
一、电位分析法― ISE
电位分析法 利用电极电位与浓度的关系测定物质含量的电化学分析方法。
离子选择电极 ISE
常用生化检测项目分析方法及参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法)、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法）、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法）、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等.以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法,包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用.2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等,也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗”O”、类风湿因子,以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法.二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等,其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改.各种测定项目的分析参数（analysis paramete）大部分也已设计好,存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测.1．试验名称试验名称(test code）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2．方法类型（也称反应模式) 方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
临床生化检验
光谱分析技术：在一定条件下，相同物质的发射和吸收光谱与该物质呈正比，因此可对该物质进行定性、定量分析。
透射比浊法）、散射光谱（散射比浊法）比色杯：由无色透明，耐腐蚀，耐酸碱的玻璃或石英组成玻璃杯：可见光；石英杯：紫外光光径：0.1cm--10cm, 常用为：1.0cm分光光度计的光源：可见光：钨灯波长360-1000nm；紫外光：氘灯，波长200-340nm常用抗凝剂：草酸钾—氟化钠：是血糖测定标本常用的抗凝剂，25℃可稳定24小时，4℃可稳定48小时肝素：常用于血气分析和部分生化项目的测定1g/L的肝素溶液0.5ml可抗凝5ml血液EDTA：适用于一般血液学检测枸橼酸钠：浅蓝（浓度3.2%-3.8%比例1:9适用于凝血）黑色（浓度3.2%比例1:4适用于血沉）防腐剂：浓盐酸：0.5-1ml浓盐酸/100ml尿液，适用于24小时儿茶酚胺、秀草扁桃酸、17-羟皮质类固醇、17-酮类固醇等检测甲苯：尿液表面形成薄膜，防止细菌繁殖。
1-2ml/100ml尿液，适用于肌酐、尿糖、蛋白质、丙酮等生化项目测定冰醋酸：5-10ml/24小时尿，适用于尿醛固酮测定麝香草酚：抑制细菌生长，适用于钾、钠、氯、钙、氨基酸、糖、尿胆原、胆红素的测定特殊标本采集：临床医生采3个于无菌试管中，第一个做细菌检查，第二个做生化检查，第三个做细胞计数恒定系统误差：与被测物质浓度无关，与干扰物浓度相关；比例系统误差的绝对量与被测物浓度呈正比影响检验结果的生物学因素：婴儿CK、GGT、AST升高，胆红素生理升高但不很少高于85umol/L，血脂低，血钾可达7mmol/L,碱性磷酸酶活性高。
新生儿血糖浓度低老年人肾浓缩能力、肌酐清除率、肾糖阈下降，血尿素升高干燥剂：CaCl2吸收水和酒精；CaO吸收水和酸；硅胶只吸收水（蓝色有效，粉红色无效）玻璃仪器清洁剂配置：重铬酸钾50g，浓硫酸900ml，水100ml 红棕色有效，变绿效力降低，黑色不可使用实验室方法评估指标和实验：指标包括：精密度、准确度、检测能力评估试验：重复性试验、回收实验、干扰试验，方法比较试验实验室全面质控的内容：1有专人负责全面质控工作；2对工作人员进行医德医风教育和业务培训，普及质控知识；3 科学的管理和严格的规章制度是质控方案可以试试的保证；4有标准化的操作规程；5 有分析前和分析后的质量控制程序；6仪器量器的定期鉴定，校正和正确使用；7实验用水、试剂、质控品及校准品的质量符合要求；8采用的各种测定方法的准确度，精密度等技术性能良好；9 选择合适的室内质控方法，常规开展室内质控，对失控结果及时采取相应的处理措施；10参加实验室室间的质量评价活动或能力比对检验，认真分析回报结果，对失控的项目及时检查原因，采取相应的改正措施CILA88的PT方案主要内容要求：每年至少进行3次PT调查，每次调查至少包括5个不同的指控标本，即在一年的时间内对任意一项目至少可得15个测定，对某个特定的分析结果如落于规定限内则判断为接受结果，对某一个接受结果，不再进行优略分级，S1和S2均应＞80，否则判断为不满意，如果在S1或S2连续2次不满意或有2次以上不满意，判断为失败。
酶底物等色原
N-(2- 82692 羟基 -88-4 -3-磺 丙 基)-3 5-二甲 氧基苯 胺钠盐
1066 HDC 3,5-Dichlorophenol Sulfonic Acid, Di-Na 7536 BS
3,5-二 95041 氯苯磺 -38-6 酸.2N a
1832 HTBA 2,4,6-Triiodo-3-hydroxybenzoic acid 58
87 S
line sodium salt monohydrate
-N-(2- -97-5
羟基
-3-磺
丙
基)-3,
5-二甲
基苯胺
钠盐.1
水
1605 Nitro 2-(5-Nitro-2-pyridylazo)-5-(N-propyl-3-sulfopropyla 2-(5- 14320
38 -Paps mino) phenol disodium salt dihydrate
um Chloride.
氯化四 8-9 检测各
Iodonitrotetrazolium chloride
氮唑蓝
种脱氢 酶的电
子受体
1806 MTT 10
3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2h-tetrazol 溴化噻 2348-
iumbromide
唑蓝四 71-2
偶氮胂 1668-
Ⅲ
00-4
1044 4-AA 4-Aminoantipyrine 21
4-氨基 83-07- 用于过
安替吡 8
氧化氢
啉
检测,和
TOOS 联用作
为 HRP 的底物
1475 INT 70
2-(4-Iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyltetrazoli 碘硝基 146-6 色度法
各种生化指标测定方法
2.3 各项指标的测定方法2.3.1 生物学指标的测定于芥蓝菜薹采收期，每处理随机抽取6株，测定芥蓝生物学性状指标，包括株高，薹粗，节数，单株产量和叶面积。
2.3.1.1 株高测定菜薹长度为第一片真叶基部至生长点的距离，取平均值。
2.3.1.2 薹粗测定用游标卡尺测量第5与第6片叶之间的粗度，取平均值。
2.3.1.3节数和节间长度测定节数为第一片真叶基部起至生长点的节数，节间长度=株高/节数2.3.1.4 单株产量测定取第4节位以上植株进行测定，求单株鲜重。
2.3.1.5 蜡粉含量的测定参照Kumar.S方法测定（Kumar S，1987）。
将芥蓝叶片剪成条状，称取1.0g，放于培养皿中，用10ml氯仿浸泡30秒，取出叶片立即烘干。
将培养皿在室温下蒸发干燥，蜡粉含量为培养皿增重（mg/g）。
重复三次。
2.3.2 光和系统指标的测定2.3.2.1 叶面积的测定取第5片及以上共6片叶进行测定，求单株总叶面积。
采用Li-COR 公司生产的Li-3000A 型叶面积仪测量叶面积。
用直尺测量芥蓝叶片的长度（L，叶柄基部到叶尖的距离）和宽度（W，与主脉垂直的最大宽度），用Li- COR公司的Li- 3000A型叶面积仪测量实际叶面积（LA）。
用回归的方法建立实际叶面积与芥蓝叶片长乘以宽面积之间的回归方程，找出最佳回归系数。
2.3.2.2 比叶重测定于各处理中随机取10片叶子，用0.8mm打孔器，在叶片最宽处离主脉两侧的中心位置打孔，将10个小圆片放在烘样盒后在105℃杀青10min，再80℃烘至恒重。
比叶重=总叶干重/总叶面积(g/m2)2.3.2.3 叶绿素含量测定采用95%乙醇浸泡法（李合生，2000），称取剪碎的新鲜样品0.1g放入试管，用95%的乙醇15ml，在黑暗条件下浸泡24h，至叶片表皮变白，取上清夜在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度。
计算公式：叶绿素a（mg/L）=13.95A665－6.88A649 （1）叶绿素b（mg/L）=24.96 A649－7.32A665 （2）类胡萝卜素（mg/L）=（1000A470-2.05C a－114.8C b）/245(1)、(2)相加即得叶绿素总浓度，在按照下式计算叶绿素和类胡萝卜素的含量。
生化试验
实验一 分光光度计线性分辨范围测定一. 目的1.学习分光光度计的工作原理，掌握比色测定的基本操作方法。
2.掌握标准曲线的制作及分光光度计最佳测试浓度范围的确定。
二. 原理比色法是常用的生化分析方法。
利用分光光度计可以很方便地完成多种生物物质的定量分析。
比色法的理论基础是朗伯-比尔定律，其测定浓度范围要求在分光光度计线性分辨范围内。
光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。
肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在400～750nm ；小于400nm 的光线称为紫外光；大于750nm 的光线称为红外光。
当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过，因此光线射出溶液之后，部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。
图1 Lambert-Beer 定律示意图分光光度法依据Lambert-Beer 定律：II 0lg = KCL令A = II 0lg，T =0I I，则A = KCL ，A = -lgT其中：T ：透光率A ：吸光度（有时用光密度OD 表示）I ： 透射光强度 I 0：入射光强度 K ：吸收系数 L ：溶液的光径长度 C ：溶液的浓度从上式可以看出，一束单色光通过溶液后，光波被吸收一部分，其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比，当入射光、吸收系数K 和溶液的光径长度L 不变时，吸光度A 与溶液的浓度C 成正比。
用标准曲线法，即可对未知样品做定量分析。
三. 实验材料及设备1. 仪器UV5200型分光光度计。
2．器材I 0IC L刻度试管：25mL×21；移液器：1mL×1；吸头几支；烧杯：250mL×2，50mL×1；洗耳球：2；滴管：2；移液管（白线）：1 mL×1，2 mL×1，5 mL×1；洗瓶、试管架、移液管架：各1。
四. 试剂的配制0.01mol/L硫氰化铁（Fe (SCN)3）溶液：称取30.000g （过量）KSCN和27.05g FeCl3·6H2O，加入2.5mol/L HCl 100mL,用蒸馏水溶解后定容至10000mL（经验提示：保质期1星期）。
常用生化检测项目分析方法与参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数（analysisparamete）大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
1．试验名称试验名称（testcode）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2．方法类型（也称反应模式）方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
(整理)检验医学专业实验IV临床生物化学检验部分
自动生化分析仪实际K值测定实际K值：理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度，尤其是ε的影响。
ε在波长和温度等不同时有所不同，故有必要获得用户所用分析仪的实际ε，再计算K值，此为~。
一、340nm波长实际K值测定【实验原理】：通过有NAD+（NADP+）参与的反应途径，用NADH或NADPH标准液来校正仪器。
用己糖激酶（HK）方法测定葡萄糖时，葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。
葡萄糖有标准纯品，当反应达到终点时，NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。
在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数，计算出实际K值。
【注意事项】1．减少偶然误差重复测定10次，当CV>5％时，则重新测定10次。
2．减少系统误差使用实际K值计算酶活性。
3．如果实际ε值与理论ε值偏差过大，需对仪器检修和校正。
二、405nm波长实际K值测定【实验原理】：许多酶活性测定时，以人工“色素原”为底物，经酶作用后可释放出在405nm 波长具有吸收峰有色的反应产物，如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯胺(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。
他们在405nm波长时的理论ε分别为18 700、9 870、9 490。
可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε，计算出实际K值。
以ALP实验(产物为4-NP) 为例测定实际K值。
【注意事项】1．4-NP标准品纯度要求较高，必要时需纯化。
2．其他注意事项参见340nm K值校正。
三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下，测定某标准品的含量，若测得的结果偏低，则需要把测得的结果调整至原标准品的含量，此时调整的数值称为校正因子，则校正K值=理论（实际）K值×校正因子=理论（实际）K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为：L-乳酸+ NAD+（LD）→丙酮酸+ NADH + H+在反应过程中，乳酸被氧化生成丙酮酸，同时NAD+还原为NADH。
临床生物化学检验技术考试题库及答案(2)
临床生物化学检验技术试题及答案一选择题（单项选择）1.下列可降低血糖的激素是A 胰高血糖素B 胰岛素C 生长素D 肾上腺素2．长期饥饿后，血液中下列哪种物质含量升高：A 葡萄糖B 血红素C 乳酸D 酮体3．检测静脉血葡萄糖，如果血浆标本放置时间过长，会造成测定结果：A 升高B 降低C 不变D 无法确定4．脑组织主要以什么为能源供给：A 葡萄糖B 氨基酸C 蛋白质D 脂肪5.当血糖超过肾糖阈值时,可出现： A 生理性血糖升高B 病理性血糖升高C生理性血糖降低D 尿糖6.下列哪种物质不属于酮体： A 丙酮 B 乙酰乙酸 C β-羟丁酸 D 丙酮酸7．正常情况下酮体的产生是在B脑垂体C 胰脏D 肾脏8．胆固醇可转化为下列化合物，但除外：A 胆汁酸B 维生素D3C 雄激素D 绒毛膜促性腺激素9．血浆中催化脂肪酰基转运至胆固醇生成胆固醇酯的酶是： A 血浆卵磷脂胆固醇脂酰转移酶B内质网脂酰COA胆固醇脂酰转移酶C 天冬氨酸氨基转移酶D 脂蛋白脂肪酶10．由胆固醇转变成的维生素是A VitAB VitBC VitCD VitD11．蛋白质占人体固体重量的百分率（%）是A 90B 45C 20D 1012．蛋白质的元素组成是A C、P、S、OB C、H、S、OC C、H、O、ND C、P、O、N13．组成蛋白质基本单位的氨基酸种类有B 20种C 21种D 23种14．某溶液中蛋白质的含量为50﹪，此溶液的蛋白质氮的百分浓度为：A 9.0﹪B 8.0﹪C 8.4﹪D 9.2﹪15．蛋白质结构中的α-螺旋属于A 一级结构B 二级结构C 三级结构D 四级结构16.酶活性测定中,对米-曼氏常数(Km)的叙述，那一种是不正确的：A ν=Vmax[S] /（Km + [S]）B 反应速度为最大反应速度一半时，Km =[S]C Km对选择底物浓度有重大意义D Km作为酶的一种特征常数，与酶的性质与浓度有关17.关于同工酶的叙述正确的是A 催化相同化学反应B 不同组织中的含量相同C分子结构相同D 理化性质特性相同18．SI制定义酶活性单位时，代号为：A pmolB U/LC g/LD Katal19．根据国际酶学委员会的决定，酶的一个国际单位是指A．最适条件下，每小时催化生成1mmol产物所需的酶量B．37℃下，每分钟催化生成1μmol产物所需的酶量C．25℃下，其他为最适条件，每分钟催化生成1μmol产物所需的酶量D．在特定条件下，每分钟转化一个μmol底物所需的酶量20．乳酸脱氢酶是由两种亚基组成的四聚体，一般情况下共形成几种同工酶： A2 种B 3种C 4种D 5种21．胆红素主要由下列何种物质分解代谢产生A 白蛋白B 球蛋白C 血红蛋白D 氨基酸22．肝中参与胆红素生物转化的主要物质是A 甘氨酰基B 乙酰基C 葡萄糖醛酸D 甲基23．结合胆红素是A 胆素原B 间接胆红素C 直接胆红素D 胆红素-Z蛋白24.血清标本溶血，对下列哪种检测指标影响最大 A 钾离子B 钠离子C 氯离子D 葡萄糖25.在正常情况下体液中细胞内液与细胞外液钾离子浓度分布是A 细胞外液大于细胞内液B 细胞外液等于细胞内液C 细胞内液大于细胞外液D 以上都不对26.既能增强神经肌肉兴奋性，又能降低心肌兴奋性的离子是： A 钙离子B 镁离子C 氢离子D 钾离子27．嗜铬细胞瘤患者血中下列那项指标升高：A TSHB 儿茶酚胺C 17-酮类固醇D 17-皮质类固醇28.下列哪一组属于急性时相反应蛋白 A．α1-酸性糖蛋白，结合珠蛋白，铜蓝蛋白，C反应蛋白B．转铁蛋白，血红素结合蛋白，甲胎蛋白，结合珠蛋白C．甲胎蛋白，铜蓝蛋白，C反应蛋白，血红素蛋白D．铜蓝蛋白，结合珠蛋白，转铁蛋白，血红素蛋白29.对LDL描叙正确的是 A．运输内源性胆固醇B．运输内源性甘油三酯C．运输外源性胆固醇D．运输外源性甘油三酯30.临床上用于诊断肝脏疾病的酶，下列那组检测最恰当 A．CK GGT ALP AMY B．ALT AST ALP GGTC．AMY LDH α-HBD GGTD．ACP AST CK LDH31.醋酸纤维素薄膜电泳可把血清蛋白分成五条带，由正极到负极的顺序是A. A、α1 、β、γ、α2B.A、β、α1 、α2、γC.A、α1 、α2、γ、βD.A、α1 、α2、β、γ32.唯一能降低血糖的激素是A. 胰岛素E.肾上腺素F.生长素G.甲状腺素33. 下列对血清蛋白质叙述错误的是 A．白蛋白/球蛋白比值为1.5～2.5∶1 B．白蛋白参考范围为35～50g/LC．总蛋白参考范围为60～80g/LD．白蛋白和球蛋白均由肝实质细胞合成34. 血气分析仪直接测定的三项指标是： A.pH、PCO2、TCO2 B.pH、PO2、SATO2 C.pH、PO2、PCO2 D.pH、SB、AB35.正常糖耐量的OGTT结果为 y：A.空腹血糖6～7mmol/L υ?傊鲲?B.口服葡萄糖30～60分钟达最高峰蒪氙C.葡萄糖峰值>10mmol/L 冾赞LQ?瀁D.2小时血糖水平在7～8mmol/L36.. 有关C-反应蛋白(CRP)错误的论述是：D A.是结合肺炎球菌细胞壁C-多糖的蛋白质稫愒 b?C.在急性创伤和感染时血浆浓度升高 ;座弆`瞰?D.在肝细胞内分解37. 反映肾小球滤过功能最可靠的指标是： A.血尿酸 B.血肌酐 C.尿肌酐 D.内生肌酐清除率38.阻塞性黄疸的特征是A.血结合胆红素增多,尿胆原增高B.血结合胆红素增多,尿胆红素阳性C.血未结合胆红素增多,尿胆原增高捩uヾ)D.血未结合胆红素增多,尿胆红素阳性39.gv以下有关酸碱平衡的说法哪项是不正确的 A.血液正常pH为7.35～7.45??B.血液pH<7.35为失代偿性酸中毒C.血液pH>7.45为失代偿性碱中毒 ? 杅禟3?D.仅从pH改变即可确定是代谢性还是呼吸性酸碱中毒40. 胰淀粉酶的活性改变可出现在下列哪种疾病：A.心肌病变 ?皞湡(4赣B.前列腺疾病 a/@.%驛縞?C.骨髓疾病嚛G)儂辺D.胰腺疾病41.Ⅱa型高脂蛋白血症l?j?FAAAAA.血清外观清,总胆固醇值明显升高,甘油三酯正常,脂蛋白电泳β脂蛋白深染B.血清外观混浊,总胆固醇值升高,甘油三酯升高,脂蛋白电泳前β脂蛋白深染攻yd( 1韋?C.血清外观上层有奶油盖、下层透明,总胆固醇值升高,甘油三酯正常,脂蛋白电泳CM深染潠皼u{：?D.血清外观上层有奶油盖、下层混浊,总胆固醇值升高,甘油三酯明显升高,脂蛋白电泳CM深染,前β脂蛋白拖尾 ?jg?pa痝42.&主要用于诊断急性心肌梗死A.CK-MB?B.AMY u?C.ASTm测定D.γ-GT测定? 43.血钙减低常见于：A.甲状旁腺功能亢进 e飸驝崰B. 急性坏死性胰腺炎C.Addison病€? 1沰W?D.慢性肺功能不全44. 代偿性代谢性酸中毒时： ?酰 4"X? A. PCO2↓,pH↓B. PCO2↓,pH不变C. PCO2↓,pH ↑螠馚D. PCO2↑,pH不变45. 下列哪种不是反映肝细胞损伤的酶A.ALTB. ASTC.ACPD. CHE46. 氧饱和度是指是：A.血中存在游离氧的量 9锝竟葧g?B.血液完全被氧气饱和时的氧含量C.血液与空气平衡后的氧气含量 m皫?D.血中氧含量与氧结合量之比值47. A/G倒置可见于：A.肝硬化B.胆结石症C.急性肝炎D.营养不良48. 高蛋白饮食不影响血清哪种物质的检测：A. 尿素B. 血糖C. 尿酸D. 血氨49.以下哪种物质对光敏感，测定时血标本应尽量避光：A. 总蛋白B. 胆红素C. 葡萄糖D. 甘油三酯50. 剧烈运动会使以下哪种指标浓度增高：A. 总蛋白B. 尿素C. 葡萄糖D. ALT51. 离子选择电极法临床常用于下列哪些物质的测定：A. AST ,ALTB. 肌酐，尿素C. 胆固醇，甘油三酯D K+，Na+，Cl-，HCO3-52. 火焰光度法时什么样的血标本会出现假性低血钠或低血钾：A. 高脂或高蛋白血B. 低脂或低蛋白血C. 高溶血D. 高黄疸血53. 利用以下哪种支持介质电泳具有电泳和分子筛双重作用：A. 琼脂糖凝胶B. 醋酸纤维素薄膜C. 聚丙烯酰胺凝胶D. 淀粉胶54. 以下哪种电泳的主要缺点是本底着色高及膜保存较困难：A. 琼脂糖凝胶电泳B. 醋酸纤维素薄膜电泳C. 聚丙烯酰胺凝胶电泳D. 淀粉胶电泳55. 血清蛋白电泳时通常用pH8.6缓冲液，此时各种蛋白质带有的电荷为：A. 白蛋白带正电荷，其他蛋白带负电荷B. 白蛋白带负电荷，其他蛋白带正电荷C. 白蛋白和其他蛋白均带负电荷D. 白蛋白和其他蛋白均带正电荷56.下列哪项不是自动生化分析仪特点：A. 快速、准确、节省试剂B. 提高了工作效率C. 减少了系统误差D. 减少了人为误差57.半自动生化分析仪所用试剂约为全自动生化分析仪的:A. 三分之一B. 一半C. 三倍D. 两倍58.自动生化分析仪自动清洗取样针是为了：A. 提高分析精密度B. 防止试剂干扰C. 防止样品间的交叉干扰D. 提高反应速度59.以NAD+还原成NADH反应为基础的生化分析采用的波长及吸光度变化为：A. 340nm，从小到大B. 400nm，从小到大C. 400nm，从大到小D. 340nm，从大到小60.反渗透水不能去除以下哪种物质：A. 悬浮物B. 微小离子C. CO2D. 微生物61.IFCC 推荐的酶活性浓度测定温度为：A. 38℃B. 20℃C. 37℃D. 25℃62.用双波长测定样品时，有关副波长不正确的是： A. 副波长能补偿发光灯每次闪动给结果造成的差异B. 样品在副波长处的吸光度应为“0”C. 副波长可有助于去除内源性色源D. 副波长应远离主波长63.自动生化分析仪测定时应尽可能减少试剂用量，一般情况下，样品体积占反应总体积的：A. 2%B. 5%C. 10%D. 20%64.多数免疫比浊法采用的校正方法是：A. 二点校正B. 多点校正C. 线性校正D. 单点校正65.如果样本对测定单色光有干扰吸收，为抵消这一影响应采用：A. 平行操作空白B. 样品空白C. 试剂空白D. 溶剂空白66.胆固醇测定试剂中的赋型胆酸盐对血清哪种物质测定有干扰，应设法防止交叉污染：A. 胆红素B. 总胆汁酸C. ALTD. 尿素67.有关干化学法不正确的是：A. 仪器操作不需纯净水B. 仪器校正一次可稳定半年C. 仪器操作需酸碱冲洗液等辅助设备D. 重复性好、快速二填空题１．调节血糖浓度最主要的激素是________和________。
临床常用生化项目应用及临床意义
天门冬氨酸氨基转移酶（AST/GOT）
【检验原理】 GOT/AST作用于底物 L-天冬氨酸和α -酮戊二 酸生成草酰乙酸和谷氨 酸，草酰乙酸转化成丙 酮酸与2.4-二硝基苯肼 在碱性环境中生成红色 的苯腙，在510nm波 长测定吸光度值，计算 其活性。
天门冬氨酸氨基转移酶（AST/GOT）
【参考区间】 男：13-40U/L 女：10-28U/L 【临床意义】 AST 在心肌细胞内含量较多， 当心肌梗死时，血清中 AST 活 力增高，在发病后 6 -12 h 之内 显著增高，在48 h 达到高峰，约 在3 -5 天恢复正常。血清中 AST 也可来源于肝细胞，各种肝病可 引起血清AST 的升高，有时可达 1200U，中毒性肝炎还可更高。 肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎等 也可引起血清AST 的轻度增高。
【危急值】 ≥1500U/L
天门冬氨酸氨基转移酶（AST/GOT）
【医学决定水平】 20U/L 此为排除值，低于此水平时可排除多种与AST增高 有关的疾病。因此应考虑其他的诊断。这个参考范围内的值 还可作为病人自身对照，可与过去和（或）将来的测定值进 行比较。 60U/L 此值高于参考范围上限，当AST测定值超过此水平 时，多种与AST增高有关的疾病均应加以考虑，如肝细胞损 伤、心肌梗塞、肌肉与骨骼疾患，肝后胆道阻塞等，此时同 时测定ALT、ALP、Bil、CK等鉴别是肝脏疾病还是心肌疾患 有重要意义。 300U/L 高于此值通常为急性肝细胞损伤，如病毒性肝炎、 中毒性肝炎等，而一般酒精性肝炎、心肌梗塞、进行性肌营 养不良等测定值均在此水平以下。
丙氨酸氨基转移酶（ALT/GPT）
【检验原理】： GPT作用于L-丙氨酸 和α -酮戊二酸反应生成 丙酮酸和谷氨酸，丙酮 酸与2.4-二硝基苯肼在 碱性条件下显色，在 510nm波长测定吸光 度值，计算其活性。
生化分析仪常用分析方法共有三大类,分别为终点法固定时间法和动力学法
生化分析仪常用分析方法共有三大类，分别为终点法固定时间法和动力学法终点法：指通过一段时刻的反应，反应达到平稳，由于反应的平稳常数专门大，可认为全部底物(被测物)转变成产物，反应液的吸光度不再变化，只与被测物的浓度有关。
这类方法通常称为〝终点〞法，更确切地说应称〝平稳〞法。
单试剂单波长终点法：t1时刻加入试剂〔体积为V〕，t2刻加入样本〔体积为S〕，然后搅拌并反应，之后开始测量反应液的吸光度，在t3时刻反应达到终点，t3－t2为测定时刻。
反应度R＝At3－At2-1×V/(V＋S)，或R＝At3－ARBLK。
其中：Ati为i时刻的吸光度，ARBLK为试剂空白吸光度。
单试剂双波长终点法：差不多上同〝单试剂单波长终点法〞，只是关于每一个测定周期，事实上际吸光度等于Aλ1－Aλ2。
双试剂单波长终点法：t1时刻加入第一试剂(体积为V1)，t2时刻加入样本(体积为S)之后赶忙搅拌，t3时刻加入第二试剂(体积为V2) 并赶忙搅拌，t4时刻反应达到终点。
t3-t2为孵育时刻,t4-t3为测定时刻。
在项目参数中，假如反应起始时刻设为0，那么反应度R=A时刻吸光度-双试剂空白吸光度。
假如反应起始时刻小于0，那么反应度R=At4 -双试剂空白吸光度-t3到t2间设定点的吸光度×〔V1＋S〕/(V1＋S＋V2)。
双试剂双波长终点法：差不多上同〝双试剂单波长终点法〞，只是关于每一个测定周期，事实上际吸光度等于Aλ1－Aλ2。
固定时刻法：又称为一级动力学法、二点动力学法等，指在一定的反应时刻内，反应速度与底物浓度的一次方成正比，即v=k[S]。
由于底物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的变化越来越小。
这类反应达到平稳的时刻专门长，理论上能够在任意时刻段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，必需通过一段延迟时刻才能进入稳固反应期。
t1时刻加入试剂(体积为V)，之后测量试剂空白的吸光度，t2时刻加入样本(体积为S)，t3时刻反应稳固，t4时刻停止对反应进行监测；t2－t3为延迟时刻，t3－t4为测定时刻。
临床生物化学检验-第5章 常用分析技术
(affinity chromatography)
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离子交换层析 (ion exchange chromatography, IEC)：是依据各种离子或离子 化合物与固定相离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的方法。
色谱技术 ，发现了液-液即分配色谱法
固定相-
流动相-
20世纪60年代高效液相色谱，high performance liquid chromatography即HPLC
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1. 按流动相种类分类
气相层析
液相层析
超临界流体 层析 电层析
气体
液体
超临界流体 缓冲溶液、 电场
挥发性有机物
可以溶于水或 有机溶剂中的 各种物资
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高效液相层析法 (high performance liquid chromatography，HPLC)： 是在经 典液相色谱和气相色谱的基础上发展起来的分析技术。 由于高效固定相填料颗粒小而 均匀（1.7~10μm） ，会引起高阻力（小颗粒具有高柱效），因此采用高压输液泵输送 流动相 ，可大大加快分析速度 ，故又称高压液相层析法。
临床应用：作为参考方法测定钙、镁定值或建立新常规方法作比较试验。 优点： 灵敏度高、选择性好、分析速度快。 缺点：需校准物、分析条件要求高、操作较复杂、测定每一种元素需特 定的空心阴极灯、有些反应的显色剂本身的颜色会影响测定的专一性。
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1. 校准曲线法：以校准物浓度（系列浓度）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线 ，在相同条件 下测定待测样品 ，然后在标准曲线上查找待测物质浓度。影响因素较多 ，每次需绘制新标准曲线。
[宝典]邻苯二胺（opd）信息
![[宝典]邻苯二胺（opd）信息](https://img.taocdn.com/s3/m/a1d3c9c481eb6294dd88d0d233d4b14e85243e88.png)
辣根过氧化物酶的色原底物 HRP最常用的色原底物有邻苯二胺(OPD)、2，2’—吖嗪—(3—乙酰苯基噻唑磺酸—6)[2，2’—azino-di(3—ethylben2thiazolinesulphonicacid-6)，ABTS](杂环吖嗪)、四甲基联苯胺(TMB)和4—氨基安替比林：苯酚耦联底物对等。
上述色原底物受HRP作用主要有两种形式的反应：①氧化还原底物的氧化作用，如OPD、ABTS 等；②一个氨基芳香剂与另一个芳香基化合物的氧化耦联，如4—氨基安替比林：苯酚等。
(一)氧化还原色原底物 OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一，其在HRP的作用下，由过氧化氢(H202) 氧化而聚合成2，2’—二氨基偶氮苯(DAB)。
在pH5．0左右时，DAB在波长450nm处有广范围的最大吸收，当pH值降为1．0时，最大吸收波长移动至492nm，同时摩尔消光系数变大，显色加深(图4—2)。
因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。
实际工作中，用强酸尤其是盐酸终止反应后，显色并不稳定，常随时间增长而颜色加深，这是由于反应后剩余的过氧化氢继续氧化OPD而产生非酶催化的DAB的结果。
有人在强酸反应终止液中加入还原剂如亚硫酸钠，因还原剂可迅速完全地将剩余的过氧化氢还原而阻止了OPD的非酶氧化，结果显色稳定，数十小时内不变，而且无需避光。
OPD的缺点是其对机体具有致突变作用。
由于OPD的不稳定性，现在的商品试剂盒中，OPD 均以片剂或粉剂供应，临用时再溶解于相应的缓冲液。
在ELISA测定时，OPD色原底物的具体配方为①显色底物溶液：在0．1mol／L枸橼酸盐缓冲液(pH5．0)中含20 mmol／L OPD和12 mmol／L H202，或10 mmol／L OPD和5．5mmol／L H202；②终止液：2 mol／L硫酸(含0．1 mol／L亚硫酸钠)；③测定波长：492nm。
TMB是一种优于OPD 的新型HRP色原底物。
临床生化常用地色原及检测波长
临床生化常用的色原及检测波长Toos 545nm苯酚（对氯苯酚）505nmNAD（P）H指示系统，波长340nm，项目：ALT、AST、GLUC己糖激酶法、CK、UREA、LDH等。
苯衍生物类，波长400-410nm，如ALP、GGT、CHE等。
过氧化物酶指示系统，项目：TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA等。
可见光波长及其互补色：可见光波长及其相应被吸收的颜色依次为：红色（630～700nm）、橙色（600～630nm）、黄色（570～600nm）、绿色（500～570nm）、蓝色（435～500nm）、紫色（400～435nm）。
★540nm：1. 双缩脲测蛋白：所有蛋白质分子都含有肽键。
在碱性溶液中，肽键与铜离子结合，生成蓝紫色化合物，在540nm处吸光度与肽键的数量呈正比关系，可以计算蛋白质含量。
2. 染料结合法测脑脊液蛋白：在柠檬酸存在的酸性条件下，伊红Y燃料离解成阴离子型，染料的黄色消退，使试剂空白吸光度降低；另外，蛋白质多肽链中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸和色氨酸残基，离解生成带－NH3+基团，与染料阴离子的羧基和酚基借静电吸引而结合成红色蛋白燃料复合物，其540nm处吸光度大小与蛋白质浓度呈比例。
★628nm：1. 溴甲酚绿法测血清白蛋白：在PH4.2的缓冲液中，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚绿（BCG）生成蓝绿色复合物，在波长628nm处有吸收峰。
复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比。
★603nm：1. 溴甲酚紫法（BCP）测血清白蛋白：BCP溶于PH5.2的醋酸缓冲液中，呈黄色。
当它与白蛋白结合后转变为绿色的符合物，在波长603出有最大吸收峰。
★650nm：1. 磷钨酸法测黏蛋白：以0.6mol/L过氯酸沉淀血清中蛋白质时，黏蛋白不被沉淀，仍存留在滤液中，再加磷钨酸使黏蛋白沉淀，然后以酚试剂测定沉淀物中蛋白质的含量。
2. 米吐尔直接显色法测血清无机磷：利用无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸铵复合物，用还原剂对甲氨基酚硫酸盐（米吐尔）还原生成钼蓝。
生化分析仪检测波长
生化分析仪检测波长
生化分析仪可以使用不同的波长进行检测，具体选择何种波长取决于所需分析的目标物质。
常用的波长包括紫外光区（UV区）200-400纳米，可见光区400-700纳米和红外光区（IR区）700纳米以上。
在生化分析中，常用的波长有：
UV区：用于测定DNA、RNA、蛋白质、各种酶的浓度和纯度；
可见光区：用于测定反应物的浓度、葡萄糖、葡萄糖酸、乳酸、酒精等；
IR区：用于测定有机物、无机物的结构和浓度。
需要注意的是，具体选择何种波长还要看待测物质的特性和所使用的检测方法。
不同的波长有不同的适用范围和灵敏度，选择合适的波长可以提高测量的准确性和灵敏度。
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临床生化常用的色原及检测波长Toos 545nm苯酚（对氯苯酚）505nmNAD（P）H指示系统，波长340nm，项目：ALT、AST、GLUC己糖激酶法、C K、UREA、LDH等。
苯衍生物类，波长400-410nm，如ALP、GGT、CHE等。
过氧化物酶指示系统，项目：TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA等。
可见光波长及其互补色：可见光波长及其相应被吸收的颜色依次为：红色（630～700nm）、橙色（600～630nm）、黄色（570～600nm）、绿色（500～570nm）、蓝色（435～500nm）、紫色（400～435nm）。
★540nm：1. 双缩脲测蛋白：所有蛋白质分子都含有肽键。
在碱性溶液中，肽键与铜离子结合，生成蓝紫色化合物，在540nm处吸光度与肽键的数量呈正比关系，可以计算蛋白质含量。
2. 染料结合法测脑脊液蛋白：在柠檬酸存在的酸性条件下，伊红Y燃料离解成阴离子型，染料的黄色消退，使试剂空白吸光度降低；另外，蛋白质多肽链中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸和色氨酸残基，离解生成带－NH3+基团，与染料阴离子的羧基和酚基借静电吸引而结合成红色蛋白燃料复合物，其540nm处吸光度大小与蛋白质浓度呈比例。
★628nm：1. 溴甲酚绿法测血清白蛋白：在PH4.2的缓冲液中，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚绿（BCG）生成蓝绿色复合物，在波长628nm处有吸收峰。
复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比。
★603nm：1. 溴甲酚紫法（BCP）测血清白蛋白：BCP溶于PH5.2的醋酸缓冲液中，呈黄色。
当它与白蛋白结合后转变为绿色的符合物，在波长603出有最大吸收峰。
★650nm：1. 磷钨酸法测黏蛋白：以0.6mol/L过氯酸沉淀血清中蛋白质时，黏蛋白不被沉淀，仍存留在滤液中，再加磷钨酸使黏蛋白沉淀，然后以酚试剂测定沉淀物中蛋白质的含量。
2. 米吐尔直接显色法测血清无机磷：利用无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸铵复合物，用还原剂对甲氨基酚硫酸盐（米吐尔）还原生成钼蓝。
在试剂中加入吐温－80以抑制蛋白质的干扰。
★604nm：1. 邻苯三酚红钼络合显色法测脑脊液总蛋白：邻苯三酚红与钼酸络合形成红色复合物（吸收峰475nm）。
该复合物在酸性条件下与蛋白质形成复合体，其吸收峰移至604nm。
用比色法求蛋白质含量。
★530nm：1. 比浊法测脑脊液蛋白：脑脊液中蛋白质与磺基水杨酸－硫酸钠试剂作用产生沉淀，所形成的浊度在530nm处进行吸光度测定，与同样处理的标准液比较测得蛋白含量。
★415nm：1.亲和层析法测HbA1c：用于分离糖化与非糖化Hb的亲和层析凝胶柱，是交联间－氨基苯硼酸的琼脂糖珠。
硼酸与结合在Hb分子上葡萄糖的顺位二醇基反应，形成可逆的五环化合物，致使样品中的糖化Hb选择性地结合在柱上，而非糖化Hb则被洗脱。
然后用山梨醇解离五环化合物以洗脱糖化Hb，在415nm分别测定解析液的吸光度，计算糖化Hb的百分率。
★550nm：1. 糖化血清蛋白测定：血清葡萄糖能与白蛋白及其他血清蛋白分子N末端的氨基发生非酶促糖化反应，形成高分子酮胺结构。
此酮胺结构能在碱性环境中与硝基四氮唑蓝（NBT）发生还原反应，生成甲？，以1－脱氧－1－吗啉果糖（DMF）为标准参照物，在550nm处进行比色。
★340nm：1. 血清前白蛋白测定：血清中的PA与抗PA抗体在液相中反应生成抗原抗体复合物，使反应液呈现浊度。
当一定量抗体存在时，浊度与血清中PA的含量呈正比，利用340nm处的散射比浊或投射比浊技术，与同样处理的PA标准比较，求得样品种PA含量。
2. 尿微量白蛋白测定：尿液中的白蛋白与抗人白蛋白特异性抗体在缓冲液中反应生成抗原－抗体复合物，产生浊度，与尿中白蛋白浓度呈正比，利用透射比浊法测定340nm处吸光度，与同样处理的标准品制备的标准曲线比较，求得尿液中的白蛋白浓度。
3. 己糖激酶法测血清葡萄糖：在己糖激酶（HK）催化下，Glu和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖－6－磷酸（G-6-P）与ADP。
前者在葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G－6－PD）催化下脱氢，生成6－磷酸葡萄糖醛酸（6－PG），同时使NADP 还原成NADPH。
反应式如下：葡萄糖+ATP —HK—> G6P+ ADPG6P + NADP —G6PD—> 6PG + NADPH + H+NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比。
NADPH在波长340nm有吸收峰，检测吸光度升高速率，计算血清葡萄糖浓度。
4. 葡萄糖脱氢酶法测血清葡萄糖：葡萄糖脱氢酶（GDH）催化葡萄糖脱氢，氧化生成葡萄糖酸（D－葡萄糖酸－&－内酯）。
B－D－葡萄糖+NAD+—GDH—>D－葡萄糖酸内酯+NADH向反应液中加入变旋酶可缩短反应达平衡时间，反应过程中NADH生成量与葡萄糖浓度成正比关系。
5. 血浆乳酸测定：在NAD存在下，乳酸脱氢酶催化乳酸氧化成丙酮酸，同时生成NADH：L－乳酸+ NAD+ —LDH—> 丙酮酸+ NADH + H+在PH9.8时，平衡偏向乳酸氧化成丙酮酸。
加入肼或氨基脲与丙酮酸生成复合物，使丙酮酸不断从反应体系中移去，进一步促进反应向右移动，从而驱动反应的完成。
分光光度计波长340nm，监测吸光度的升高速率，计算乳酸含量。
6. 全血乳酸测定：在NAD+存在下，LDH催化乳酸，氧化成丙酮酸。
加入硫酸肼捕获产物丙酮酸，并促进反应完成。
反应完成后生成的NADH与乳酸为等摩尔关系，在340nm下测定NADH的生成量，计算乳酸的含量。
7. 血浆丙酮酸测定：乳酸脱氢酶催化丙酮酸还原成乳酸，反应如下。
丙酮酸+ NADH + H+—LDH—> L－乳酸+ NAD+分光光度计波长340nm，监测NADH吸光度下降速率，计算样品中丙酮酸浓度。
本法适用于各种任选式自动分析仪。
8. 全血丙酮酸测定：原理同血浆丙酮酸测定，PH7.5条件下利于上述反应（生成乳酸方向）9. 血清（B－羟丁酸）B－HB测定：在有NAD存在时，B－羟丁酸在B－羟丁酸脱氢酶（B－HBDH）催化下，生成乙酰乙酸（AcAc）和NADH。
在波长340nm 处，监测反应中吸光度的上升速率，可以计算血清中B－羟丁酸的浓度。
B－HB + NAD —B-HBDH—> AcAc + NADH + H+10. 钾的酶法测定：磷酸烯醇丙酮酸（PEP）与二磷酸腺苷（ADP）在钾依赖性丙酮酸激酶（PK）催化下，生成丙酮酸和三磷酸腺苷（ATP）。
再在乳酸脱氢酶催化下，所生成的丙酮酸和NADH反应，生成乳酸和NAD。
反应中NADH的消耗量与样品种钾离子浓度呈正比。
因此，在340nm处监测吸光度下降速率，可以计算钾离子含量。
反应式如下：PEP + ADP —K+, PK—> 丙酮酸+ ATP丙酮酸+ NADH + H+ —LDH—> 乳酸+ NAD+11. 酶法测定血浆（血清）碳酸氢根及总二氧化碳：血浆（清）中的碳酸氢根在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）催化下和磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）反应，生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH）催化下，生成苹果酸，同时NADH被氧化成NAD+。
在分光光度计340nm处，吸光度下降速率与样品中HCO3-含量成正比。
反应式如下。
磷酸烯醇式丙酮酸+ HCO3- —PEPC—> 草酰乙酸+ 磷酸草酰乙酸+ NADH + H+ —MDH—> 苹果酸+ NAD+12.紫外分光光度法测血清无机磷：血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成的磷钼酸铵复合物，直接在340nm或325nm波长处测定吸光度。
13. 速率法测定血清ALT：在ALT速率法测定中，酶偶联反应式为：L-丙氨酸+a-酮戊二酸—ALT—> 丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+—LDH—> L-乳酸+NAD+上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中酶活性成正比，可在340nm波长处检测吸光度下降速率（-△A/min），计算出ALT的活力单位。
★600nm：1. 染料结合法测尿微量白蛋白：将尿标本实现用Sephadex G-50凝胶过滤，除去尿中色素及其他干扰成分。
将流出物加BPB染料，使之与白蛋白结合显色，经与同样显色的白蛋白标准液比较，可求得尿中白蛋白含量。
2. 甲基麝香草酚兰比色法测血清镁：血清中镁、钙离子在碱性溶液中能与甲基麝香草酚兰染料结合，生成蓝紫色的复合物，加入EGTA（乙二醇双-N,N,N,N-四乙酸，简称EGTA）可掩盖钙离子的干扰。
★505nm：1. 葡萄糖氧化酶法测血清葡萄糖：葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸（D－葡萄糖酸&内酯），并产生过氧化氢：Glu + 2H2O + O2 —GOD—> 葡萄糖酸+ 2H2O2在色原性氧受体（如联大茴香胺、4－氨基安替比林偶氮酚）的存在下，过氧化物酶催化过氧化氢，氧化色原物质，生成有色化合物。
于505nm处比色即可测的葡萄糖浓度。
★405nm：1. 钠的酶法测定：邻硝基酚-B-D-半乳糖苷（ONPG）在钠依赖性B-半乳糖苷酶催化下生成邻－硝基酚和半乳糖。
邻－硝基酚的生成量和样品中钠离子浓度呈正比。
邻－硝基酚在碱性环境中呈黄色，可在405nm波长处监测吸光度的升高速度，计算钠的浓度。
★460nm：1. 硫氰酸汞比色法测血清氯化物：标本中的氯离子与硫氰酸汞反应，生成极难解离的氯化汞，并释放出相应当量的硫氰酸离子。
后者与试剂中铁离子结合生成色泽很深的橙红色硫氰酸铁，吸收峰在460nm，色泽强度与氯化物的含量成正比。
Hg（SCN）2 2Cl - ——> HgCl2 + 2SCN-3CN- + Fe3+ ——> Fe（SCN）3 （橙红色）★610nm甲基麝香草酚兰比色法测血清总钙：血清中钙离子在碱性溶液中与甲基麝香草酚兰结合，声称蓝色的络合物。
加入适量的8-羟基喹啉，可消除镁离子对测定的干扰，与同样处理的钙标准液进行比较，以求得血清总钙的含量。
★575nm邻－甲酚酞络合酮比色法测血清总钙：邻－甲酚络合酮是金属络合指示剂，同时也是酸碱指示剂，在碱性溶液中与钙及镁螯合，声称紫红色螯合物。
作钙测定时，在试剂中加入8-羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰。
★640nm硫酸亚铁磷钼蓝比色法：用三氯醋酸沉淀蛋白，向无蛋白滤液中加入钼酸铵试剂，与无机磷结合生成磷钼酸铵，在以硫酸亚铁为还原剂，还原成蓝色化合物（钼蓝），进行比色测定。
★510nmCalmagite染料比色法测定血清镁：血清中镁在碱性条件下与Calmagite染料生成紫红色络合物，颜色的深浅与镁的浓度成正比。
溶液中的EGTA可消除钙的干扰，使用表面活性剂可使蛋白胶体稳定，不必去除血清中蛋白质而直接测定镁。