Q_JBSW 045-2019混合型饲料添加剂 液态溶菌酶
溶菌酶资料
溶菌酶----新型免疫抗菌抗病毒药物、饲料添加剂溶菌酶研发背景：抗生素是人类应用最广泛的抗菌药物，不仅用于临床，也广泛用于畜禽饲养和农业方面。
在过去的50多年中，由于饲用抗生素在养殖中的长期使用导致大量耐药菌株的产生，且病原菌抗药性逐年增强，致使疗效下降，剂量提高，造成动物疾病越防越难防，越治越难治，给养殖业造成很大的损失和危害。
同时也给全人类的健康造成严重的影响。
因此，世界卫生组织于1994年就细菌耐药性的监测结果给全世界提出了警示：细菌对抗生素产生的耐药性正在以惊人的速度增加，而现在的抗生素药物正在失去原来的疗效。
因此寻求广谱、高效的新一代饲用抗菌药物已成为迫在眉睫的摆在人类面前的课题。
澳大利亚昆士兰大学医学系博士生导师、高级研究员王雯禾博士（1993年毕业于英国剑桥大学达尔文学院获微生物营养学博士学位），一直致力于生命科学的研究和发展，历经十多年的研究发现：酶广泛存在于生物体内，参与新陈代谢等多种生理功能，其中对微生物细胞壁具有水解功能的抗菌酶，如溶菌酶lysozyme能够溶解微生物细胞壁而使微生物死亡，而且溶菌酶lysozyme在人和动物的唾液、眼泪、乳汁以及肌体组织中大量存在，是人和动物自身重要的免疫因子，与人和动物的健康息息相关。
溶菌酶lysozyme的溶菌（杀菌）作用与传统的抗生素药物相比，具有对某一病原菌所有血清型都有效的优点，克服了一种抗生素只能预防一种或其中一种血清型病原菌的不足，更不存在药物残留和耐药性的问题。
王雯禾博士认为，溶菌酶lysozyme作为畜禽、水产饲料添加剂在替代抗生素，控制耐药菌，生产绿色肉蛋奶食品方面是最佳的选择。
并多次鼓励和支持国内年轻的科学家、学者，致力于这一伟大的、划时代的、对全人类的健康有杰出贡献的产品的开发和研究。
并于2003年10月推出最早用于防治动物疾病的产品--溶菌酶系列,由于它不但能溶解（杀死）细菌，增强动物的免疫能力，而且还能和病毒结合使病毒失活，所以它作为预防动物疾病的新型饲料添加剂，正在动物疾病防治的许多领域被广泛应用。
进口饲料和饲料添加剂产品登记证目录(2019—07)
Pioneer®1152 Silage Inoculant
混合型饲料添加剂
Feed Additives Mixture
青贮饲料
Silage
美国科汉森有限公司威斯康辛州工厂
Chr. Hansen Inc., Plant WI, USA
2019.11—
2024.11
新办
(2019)外饲准字392号
2019.11—
2024.11
新办
(2019)外饲准字382号
混合型饲料添加剂酿酒酵母
Feed Additives MixtureSaccharomyces cerevisiae
威灵赐壮
Wellingstrong
混合型饲料添加剂
Feed Additives Mixture
畜禽、水产养殖动物
Livestock, Poultry, Aquaculture animals
勃林格殷格翰动物保健（丹麦）公司
Boehringer Ingelheim Animal Health Denmark A/S, Denmark
2019.11—
2024.11
新办
(2019)外饲准字397号
奶牛维生素预混合饲料
Vitamin Premix for Cow
好奶牛
BIOCOW PREMIX
2019.11—
2024.11
新办
(2019)外饲准字394号
混合型饲料添加剂香味物质
Feed Additives Mixture Flavouring Substances
爱乐吸粉剂
Aromax Dry
混合型饲料添加剂
Feed Additives Mixture
Q_JHSW 006-2019混合型饲料添加剂 L-赖氨酸
ICS65.120B 46 Q/JHSW 金河生物科技股份有限公司企业标准Q/JHSW 006—2019 混合型饲料添加剂 L-赖氨酸（报批稿）2019-11-26发布2019-12-26实施前言本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由金河生物科技股份有限公司提出。
本标准由金河生物科技股份有限公司起草。
本标准由金河生物科技股份有限公司批准。
本标准主要起草人：张兴明、张明明。
本标准为首次发布。
混合型饲料添加剂 L-赖氨酸1 范围本标准规定了混合型饲料添加剂L-赖氨酸产品的技术要求、试验方法、检验规则、标识、包装、运输、贮存和保质期。
本标准适用于以L-赖氨酸盐酸盐为原料，以单硬脂酸甘油酯为载体加工而成的混合型饲料添加剂L-赖氨酸。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 5917.1 饲料粉碎粒度测定 两层筛筛分法GB/T 6435 饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定GB 10648 饲料标签GB 12904 商品条码 零售商品编码与条码表示GB 13078 饲料卫生标准GB/T 14699.1 饲料 采样GB/T 18823 饲料检测结果判定的允许误差GB 34466 饲料添加剂 L-赖氨酸盐酸盐《定量包装商品计量监督管理办法》（2005）中华人民共和国农业部公告 第1773号《饲料原料目录》中华人民共和国农业部公告 第2045号《饲料添加剂品种目录（2013）》3 要求3.1 感官本品为类白色至微黄色颗粒状物。
3.2 加工质量指标3.2.1 水分水分不大于10%。
3.2.2 粒度95%通过孔径为850μm的试验筛。
3.3 产品成分分析保证值产品L型L-赖氨酸（以盐酸盐计）含量不低于35.0%；产品M型L-赖氨酸（以盐酸盐计）含量不低于40.0%；产品H型L-赖氨酸（以盐酸盐计）含量不低于45.0%。
溶菌酶在饲料中的应用
溶菌酶在饲料中的应用李鑫1 ，谭志坚1 ，凌欣华2，李巧贤3(1 佛山市正典生物技术有限公司，广东佛山 528138；2 梅州市畜牧兽医技术推广站，广东梅州 514021；3 广东现代农业集团研究院，广东广州 510630)溶菌酶（Lysozyme）又称胞壁质酶或N-乙酰胞质聚糖水解酶，是动物体内一种非特异性免疫因子，具有抗菌消炎、抗病毒、增强免疫力、促进双歧杆菌等有益菌增殖的作用。
本文介绍了溶菌酶的特性、分类和作用机理，重点综述了溶菌酶作为饲料添加剂在猪、鸡、鸭、反刍动物以及水产动物等饲料中的应用。
溶菌酶广泛存在于鸟类和家禽的蛋清中，亦存在于哺乳动物的泪液、唾液、血浆、乳汁、胎盘、体液及组织细胞内，其中以蛋清中含量最丰富。
溶菌酶对革兰氏阳性菌有抗菌作用，而对没有细胞壁的动物体细胞不会产生不利影响，因而安全性很高。
口服溶菌酶，可阻止流感和腺病毒繁殖。
作为抗生素的替代品，溶菌酶被WHO和许多国家认定为无毒、无害、安全的应用于食品和饲料添加剂领域，2010年被我国卫生部批准为食品添加剂。
1 溶菌酶的特性溶菌酶，又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，能水解肽聚糖中的N-乙酰葡萄糖和N-乙酰胞壁酸之间的β-1,4糖苷键，以此破坏细菌的细胞壁，具有较强的抑菌抗菌活性。
溶菌酶是一种白色、微白色结晶型或无定型粉末,无臭、味甜且易溶于水，不溶于丙酮和乙醚等有机溶剂，在干燥室温可长期保存。
化学性质非常稳定，对热也极为稳定。
当pH在1.2-11.3范围内剧烈变化时，其结构几乎不变。
在酸性环境中，溶菌酶对热的稳定性很强,在pH4-7范围内，100℃处理1 min仍能保持原酶活性，pH3时能耐100℃加热处理45 min,但在碱性环境中溶菌酶对热稳定性较差。
最适pH为6.6，作用的最适温度为45～50℃，等电点pH10.5-11。
2 溶菌酶的分类2.1 c型溶菌酶, 主要分布在脊椎动物和昆虫中, 大部分虾溶菌酶属于c型,如凡纳滨对虾、日本囊对虾、斑节对虾、罗氏沼虾、日本沼虾的溶菌酶。
溶菌酶在猪、禽上的应用
摘要：在畜牧养殖中，抗生素不仅作为动物发病时治疗的药物进行使用，还会作为促生长剂添加到动物的饲料中使用，目前全球75%的抗生素都用到了动物的生产养殖中。
持续广泛的滥用抗生素，不仅导致了细菌耐药性的产生，也使得肉食品中抗生素残留加大，威胁到了人类的健康。
因此，为了减少抗生素的过度使用、维护环境的安全性，寻找合适的抗生素替代品变得尤为紧迫和重要。
关键词：溶菌酶；猪；禽；应用溶菌酶在猪、禽上的应用顾振宏1，赵子惠2，蒋东平1（1.甘肃省白银市平川区畜牧兽医技术服务中心甘肃白银730900；2.甘肃省畜牧兽医研究所甘肃平凉744000）收稿日期：2023-03-08基金项目：猪IFN-λ1基因克隆、原核表达及抗PoRV 活性研究（项目编号:21JR7RA718）作者简介：顾振宏（1987.9—），男，本科，兽医师，主要从事动物防疫、检疫工作。
1溶菌酶的概述1.1溶菌酶的渊源溶菌酶是1922年由Fleming 从人的唾液和泪水中发现的一种具有溶解有些细菌作用的物质，因此将其命名为溶菌酶。
溶菌酶是一种单体碱性球蛋白，它的相对分子量为14.4ku ，溶菌酶的肽链包括129个氨基酸残基，其中包含18种氨基酸。
溶菌酶肽链N 末端由第40~88位氨基酸残基构成β-反平行折叠结构，含有4对由含硫氨基酸Cys 构成的二硫键，而C 末端由第1~39位和第89~129位氨基酸残基折叠形成α-螺旋结构。
肽链之间的活性位点是溶菌酶的功能核心，能够识别和水解细菌细胞壁的聚糖，从而发挥溶菌作用[1]。
溶菌酶是一种具有杀菌作用的天然抗感染物质，具有序列保守性和无毒副作用的碱性蛋白。
它广泛存在于人体各种组织、禽类和鸟类蛋清中，以及哺乳动物的泪液、血浆、唾液和乳液等液体中。
此外，微生物中同样含有溶菌酶[2]。
据来源不同可分为以下四类：微生物溶菌酶、植物溶菌酶、动物溶菌酶和蛋清溶菌酶[3]。
目前绝大多数的溶菌酶是从蛋清中提取而来的，经常采用的提取方法是：亲和层析法、离子交换树脂法、聚丙烯酸沉淀法和直接结晶法等。
溶菌酶检验标准
术语和定义溶菌酶酶活性单位：在25℃、pH值为6.2的条件下，于450nm处每分钟引起溶酶小球菌体（Micrococcus Lysodeiktidus）溶液吸光度下降0.001所需要的酶量为一个酶活性单位U。
本定义适合“比浊法”。
溶菌酶效价：溶菌酶在一定浓度范围内，其对数计量与抑菌圈直径（面积）呈对数关系，通过检测其对微生物的抑制作用，比较标准品与样品产生抑菌圈的大小，计算出样品的效价，单位为u。
本定义适合“管碟法”。
技术要求外观和性状要求粉酶为白色或微黄色的结晶或无定形粉末。
技术指标粉酶水分含量：≤12%。
粉酶粒度：420μm孔径分析筛筛上物≤4%。
粉酶炽灼残渣：≤10.0%。
酶活（效价）指标表1 产品成分分析保证值项目指标粉状50型溶菌酶酶活性（效价），≥U/g（u）500000卫生指标符合GB 13078和NY/T 722的有关规定。
试验方法本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682中规定的三级水，所用试液中的标准溶液，在没有注明其他要求时均要求按GB/T 601，GB/T 602制备。
外观的测定取样品少许放入烧杯，下衬白纸进行目测。
粉酶水分的测定按GB/T 6435 规定进行检测。
粉酶粒度的测定按GB/T 5917 规定进行检测。
粉酶炽灼残渣的测定按《中国兽药典》规定进行检测。
卫生指标的测定按饲料卫生标准GB13078和NY/T 722规定的方法进行。
溶菌酶酶活性（效价）的测定溶菌酶微生物测定法系在适宜条件下，通过检测溶菌酶对微生物的抑制作用，计算出溶菌酶活性（效价）的方法。
依据试验设计原理不同，可分为比浊法和琼脂扩散法（即管碟法）。
试剂和溶液溶酶小球菌（Micrococcus Lysodeiktidus）将溶酶小球菌接种于固体培养基上，置37℃培养48小时，用无菌水将菌体洗下，用纱布滤过，滤液离心后，倾去上层清液，用水洗涤菌体数次，然后用少量水悬浮，冰冻干燥，得淡黄色粉末，供测定用，保存一年。
Q_12ATQ 013-2019混合型饲料添加剂 酶制剂
B46天津奥特奇生物制品有限公司企业产品标准Q/12ATQ 013—2019代替Q/12ATQ 013-2017 混合型饲料添加剂酶制剂2019-03-06发布2019-03-07 实施前言本标准根据GB/T 1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求进行编写。
本标准的附录A、B、C、D、E为规范性附录。
本标准由天津奥特奇生物制品有限公司提出并起草。
本标准主要起草人：徐素惠、张旭。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——Q/12ATQ 013-2017。
混合型饲料添加剂酶制剂1 范围本标准规定了混合型饲料添加剂酶制剂的要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输、贮存。
本标准适用于以淀粉酶（产自枯草芽孢杆菌）、β -葡聚糖酶（产自长柄木霉）、纤维素酶（产自长柄木霉）、蛋白酶（产自米曲霉）为主要原料，以轻质碳酸钙、硫酸钙、二氧化硅和啤酒酵母粉为载体经混合、搅拌而成的混合型饲料添加剂酶制剂。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 5917.1—2008 饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T 6435—2014 饲料中水分的测定GB 10648 饲料标签GB/T 13079—2006 饲料中总砷的测定GB/T 13080—2004 饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T 14699.1—2005 饲料采样JJF 1070—2005 定量包装商品净含量计量检验规则国家质量监督检验检疫总局令（2005）第75号《定量包装商品计量监督管理办法》3 要求3.1 感官色泽均匀，无发霉变质、无结块、无异味、无异嗅。
3.2 加工质量指标3.2.1 粉碎粒度产品应全部通过2 mm分析筛，0.6 mm筛上物应不大于10%。
3.2.2 混合均匀度产品应混合均匀，其混合均匀度之变异系数（CV）应不大于5%。
食品添加剂 溶菌酶 标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准 食品添加剂 溶菌酶1 范围本标准适用于从鸡蛋清中提取溶菌酶，然后经提取、精制等工艺制得的食品添加剂溶菌酶。
2 技术要求 2.1 感官要求感官要求应符合表1的规定。
表1 感官要求项 目要 求检验方法固体液体色泽 白色至淡黄色 浅黄色至深褐色 将适量试样均匀置于烧杯或白瓷盘内，于自然光线下观察其色泽和状态。
状态粉末液体2.2 理化指标理化指标应符合表2的规定。
表2 理化指标2.3 微生物指标微生物指标应符合表3的规定。
表3 微生物指标项 目指 标 检验方法菌落总数/[CFU /g （mL ）] ≤ 50000 GB 4789.2 霉菌和酵母菌/[CFU /g （mL ）] ≤ 100 GB 4789.15 大肠杆菌/[MPN/g （mL ）] ＜ 3.0 SN/T 0738 沙门氏菌/25g （mL ） 不得检出 GB 4789.4金黄色葡萄球菌/25g （mL ）不得检出GB 4789.10定性检验附 录 A项 目指 标 检验方法固体液体酶活力/[u/mg （mL ）] ≥ 符合声称附录A 中A.3 水分，w /% ≤ 6 — GB 5009.3 灰分，w /% ≤ 1.50.3 GB 5009.4 pH3.0～7.0 附录A 中A.4 铅（Pb ）/（mg/kg ） ≤ 2.0 GB 5009.12 总砷（以As 计）/（mg/kg ）≤1.0 GB 5009.11检验方法A.1 一般规定本标准除另有规定外，所用试剂的纯度应在分析纯以上，所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，应按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备，实验用水应符合GB/T 6682中三级水的规定。
试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.2 鉴别试验0.01%醋酸盐缓冲溶液（pH 5.4）于279 nm～281 nm处有最大吸收。
A.3 酶活力的测定A.3.1 方法原理溶菌酶可水解细菌的细胞壁，造成溶壁微球菌的溶解而引起溶液吸光度值的降低。
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Q/JBSW 江西嘉博生物工程有限公司企业标准
Q/JBSW045-2019混合型饲料添加剂液态溶菌酶
2019-09-01发布2019-09-10实施
Q/JBSW045-2019
前言
本标准起草单位：江西嘉博生物工程有限公司。
本标准主要起草人：周志、李成龙。
本标准为首次发布。
混合型饲料添加剂液态溶菌酶
1范围
本标准规定了混合型饲料添加剂液态溶菌酶的原料要求、技术要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存。
本标准适用于以饲料添加剂溶菌酶按一定比例溶于纯化水中，制成的混合型饲料添加剂液态溶菌酶。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T9724化学试剂pH值测定通则
GB10648饲料标签
GB/T13079饲料中总砷的测定
GB/T13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法
GB/T13091饲料中沙门氏菌的检测方法
GB/T13092饲料中霉菌总数测定方法
GB/T17480饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法
GB/T18823饲料检测结果判定的允许误差
GB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局令（2005）第75号《定量包装商品计量监督管理办法》中华人民共和国农业部公告第1773号《饲料原料目录》
中华人民共和国农业部公告第1849号《混合型饲料添加剂生产企业许可条件》
中华人民共和国农业部公告第2045号《饲料添加剂品种目录（2013）》
3原料要求
生产产品所用原料应符合《饲料原料目录》的规定，所用添加物应符合《饲料添加剂品种目录（2013）》的规定，严禁使用国家明令禁止的添加物和化学制品。
4技术要求
4.1感官
液态，色泽一致，久置有少量沉淀，无发霉变质及异味、异嗅。
4.2pH值
pH值应为3.0～7.0。
4.3卫生指标
总砷不大于10mg/L，铅不大于20mg/L，霉菌总数不大于4.0×104cfu/ml，黄曲霉毒素B1不大于10ug/L，沙门氏菌不得检出。
4.4主要营养成分
表1
产品名称
混合型饲料添加剂液态溶菌酶
Ⅰ型Ⅱ型Ⅲ型Ⅳ型
溶菌酶，u/ml≥100≥500≥1000≥2000 5试验方法
5.1感官
取适量样品，在非阳光直射条件下，观其色泽、形态，嗅其气味。
5.2pH值
pH值的测定按GB/T9724执行。
5.3溶菌酶
溶菌酶的测定按附录A执行。
5.4总砷
总砷的测定按GB/T13079执行。
5.5铅
铅的测定按GB/T13080执行。
5.6霉菌总数
霉菌总数的测定按GB/T13092执行。
5.7沙门氏菌
沙门氏菌的测定按GB/T13091执行。
5.8黄曲霉毒素B1
黄曲霉毒素B1的测定按GB/T17480执行。
6检验规则
6.1批次
以同批原料、同一配方、相同设备的每日生产量为一个批次。
6.2采样
按GB/T14699.1执行。
6.3检验
6.3.1出厂检验
出厂产品由本公司质检部门负责检验，检验项目为感官、pH值和溶菌酶。
产品检验合格后方可出厂，每批出厂产品应附有质量检验合格证（章）和使用说明。
6.3.2型式检验
型式检验为全项目检验，每年不得少于一次。
如有下列情况之一时，应进行型式检验：
a)主要原、辅材料，配方，生产工艺或设备发生较大改变时；
b)停产半年以上再恢复生产时；
c)出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时；
d)国家有关部门监督检验与抽查时。
6.4判定规则
检测结果判定的允许误差按GB/T18823执行。
6.5复检规则
产品在检验中如有一项指标不符合本标准时，应重新加倍抽样进行复检。
复检结果中仍有一项指标不符合本标准时，则该批产品判为不合格品。
7标签、包装、运输和贮存
7.1标签
按GB10648执行。
7.2包装
包装物采用无毒、无害，对产品质量无影响的材料。
包装规格（净含量）为：100ml、200ml、500ml、1L、2L、5L、10L，也可根据用户提出的净含量要求进行包装。
包装净含量允许误差应符合《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。
7.3运输
产品在运输过程中应防止日晒雨淋、包装破损，严禁与有毒、有害物质混运。
7.4贮存
产品应贮存于阴凉、通风、干燥处，严禁与有毒、有害物质混贮。
在上述条件下，自生产之日起，产品保质期为8个月。
附录A
（规范性附录）
溶菌酶活力的测定
A.1原理
在一定浓度的浑浊溶液中，溶菌酶可以水解细菌细胞壁上的肽聚糖，从而使细菌裂解而浓度降低，透光度增强，因此可以根据其透光度的变化来测定溶菌酶的含量。
A.2试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂；蒸馏水或去离子水或符合GB/T6682中规定的三级水或相当纯度的水。
试验中所用试剂、制品，均按GB/T603的规定制备。
A.3仪器和设备
A.3.1移液枪：精度为5ul，量程为50～1000ul。
A.3.2分析天平：感量0.0001g
A.3.3酸度计
A.3.4匀浆器
A.3.5紫外可见分光光度
A.3.6恒温水浴锅
A.3.7涡旋混合器
A.4分析步骤
A.4.1底物的制备
菌种为溶菌小球菌，将其接种与营养琼脂培养基上，置35℃±2℃培养48小时，用生理盐水将菌体洗下，用纱布滤过，滤液离心后，倾去上层清夜，再加生理盐水适量，如此反复洗涤菌体数次，取下层沉淀，供测定用；或者将洗涤后的菌体用少量水悬浮，冰冻干燥，得淡黄色粉末，供测定用，可保存一年。
或直接购买成品。
A.4.2试样溶液的制备
精密称取式样适量（约相当于溶菌酶活力125000IU)，置100ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml置25ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，即得。
A.4.3底物悬浮液的制备
另外称取底物（即菌体）5-15mg，加磷酸盐缓冲液4-5ml，在匀浆器内研磨5分钟，倾出，用磷酸盐缓冲液稀释到适当体积，使悬浮液在25℃±0.1℃时，用磷酸盐缓冲液调零，用分光光度法，在450nm 波长处测定吸收度为0.65-0.75时（临用前配制)，进行酶活力测定。
A.4.4测定
精密量取25℃±0.1℃底物悬浮液3ml，放入比色皿中，用分光光度法，在450nm 波长处测定吸收度，作为零时读数，然后量取25℃±0.1℃时的试样0.15ml 溶液，加入上述比色皿中，迅速混合，用秒表计算时间，至60秒时在测定吸收度；同时精密量取磷酸盐缓冲液0.15ml，同法操作，作为空白试验，测得零秒的读数及60秒的读数。
A.4.5结果计算
用于酶解反应的稀释酶液中溶菌酶活力按（A.1）计算；
（A 0-A）-（a 0-a)
X=
————-—--—×103
M
式中：
X：式样中的溶菌酶的活力的，单位为每毫克（u/mg）
A 0：试样零时吸收度；A：试样60秒时吸收度；a 0：空白零时吸收度；a ：空白60秒时吸收度；
M ：测定液中试样的重量，单位为毫克（mg）
103：转化因子。
每个试样取两个平行样进行测定，以其算平均值为结果，结果保留整数。
A.4.6重复性
同一试样两个平行测定值的相对偏差，不超过10%。