专家讲座核酸检测实验室建立与应用共46页文档
核酸检测实验室建设方案书
核酸检测实验室建设方案书一、平面布局（一）实验室功能分区普通核酸检测PCR实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、核酸扩增、产物分析等四个区域。
全自动定量PCR实验室通常设置三个工作区，即试剂准备区、标本制备区、核酸扩增和产物分析区，普通PCR 实验室后两个区合并。
一体化自动化分析PCR 实验室原则上设置两个工作区，即试剂准备区、自动检测区，普通PCR实验室后三个区合并。
各个区可组合布置，也可分散布置。
（二）实验室平面布局实验室应在建筑物中自成隔离区，应有出入控制。
试剂准备区、标本制备区和核酸扩增及产物分析区等四个区域在物理空间上必须是完全相互独立的。
可以分散布置。
为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
不能将工作服带出。
每个工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内设备、物品混用。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
整体划分为∶PCR区域、独立缓冲间，及辅助房间区域，缓冲间可兼做防护服更换间。
当缓冲间的门设置互锁时，应在互锁门的附近设置紧急手动解除互锁开关。
保持合理梯度，保证气流从辅助房间流向核心区。
可降低扩增区内的气压以避免气溶胶从本区漏出。
（三）人流、物流流向人流∶工作人员→一更→二更→缓冲间→洁净走廊→缓冲→核心试验区域洁物∶原料→入口→样品接收→传递窗→洁净走廊→缓冲→核心试验区域污物∶污物→洁净走廊→传递窗→高压灭菌→传递窗→外部进入各个区域必须严格按照单一方向进行，不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。
工作人员离开时，不得将工作服带出。
这种人员的单向流动可以降低因人员的流动带来的交叉污染风险。
所有的物品进入实验区必须经过双扉互锁传递窗，利用传递窗消毒后才可进入，实验室内所有物品也必须经过传递窗才可以传递到实验室以外的清洁公共区。
这种物品有组织的单向流动可以降低物品的差错和混淆的风险。
核酸检测实验室运营方案
核酸检测实验室运营方案一、概述随着疫情的持续发展，核酸检测成为防疫工作中至关重要的一环。
为了保障人民群众的健康和社会安全，建立规范高效的核酸检测实验室至关重要。
本方案将就核酸检测实验室的运营进行详细规划和说明。
二、实验室设施1. 实验室场地：实验室应位于远离居民区的地方，面积约1000-1500平方米，能够布局合理、分区明确。
2. 实验室设备：实验室应配备PCR仪、生物安全柜、离心机、冷冻离心机、超声波细胞粉碎仪等专业设备，以及标本收集、保存、运输等相关设备。
3. 实验室环境：实验室内应具备良好的空气流通和超净工作环境，同时要求实验室满足相关安全标准。
三、实验室流程1. 样本采集：实验室应与社区卫生服务中心、医院等医疗机构合作，规范收集各类疑似病例样本，确保采样工作的标准化和高效性。
2. 样本运输：建立合理的样本收集、保存、运输和处理流程，确保核酸样本的完整性和准确性，并做好相应的防护工作。
3. 核酸提取：建立高效的核酸提取流程，采用自动化提取设备，提高核酸提取效率和准确性。
4. PCR检测：严格执行《实验室生物安全操作规范》，建立PCR实验室内质控体系，保障检测结果的准确性和可靠性。
5. 结果分析：对检测结果进行分析和报告，建立完善的信息管理系统，确保结果的准确记录和传递。
四、人员配备1. 实验室主任：具备相关专业背景和丰富的实验室管理经验，负责实验室运营和管理。
2. 技术人员：具备医学检验相关专业背景和执业资格证书，熟悉核酸检测相关技术和流程，具有丰富的实验室实践经验。
3. 管理人员：具备管理、协调能力，负责实验室的日常管理和协调工作。
4. 防护人员：负责实验室的环境清洁和卫生安全工作，确保实验室的高效运转。
五、质控体系1. 样本质控：建立完善的样本质控流程，确保样本的完整性和准确性。
2. 试剂质控：严格执行试剂管理流程，确保试剂的保存和使用符合要求。
3. 设备维护：建立设备维护和管理机制，确保设备的正常运转和准确性。
【实用资料】核酸检测实验室的规范化管理PPT
▪ （ 临六床）用靶 于核 RN酸A的（逆如转H本C录V(R区RTN)A和如）扩扩采增增用检测负的血压标或本建减议进压行情抗凝况处理下，可并尽减快（少3小扩时以增内产）分物离血从浆本，以区避免扩RN散A的至降前解。
▪ 为避免样本间的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反 应混合液的反应管。
▪ 对具有潜在传染危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭 活程序。
▪ 样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取 方法。
3. 扩增区
▪ 下述操作在该区进行：DNA或RNA扩增。 ▪ 在巢式PCR测定中，通常第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢
3．进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即： 试剂贮存和准备区 标本制备区 扩增反应混合物配制和扩增 区 扩增产物分析区。
4．不同工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。工作人员 离开各工作区域时，不得将工作服带出。
（二）工作区域仪器设备配置标准
1．试剂贮存和准备区
2-8℃和-15℃冰箱；混匀器；微量加样器(覆盖1--1000μl)； 移动紫外灯(近工作台面)；消耗品： 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯)； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品。
2．标本制备区
1-8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱；高速台式冷冻离心机； 混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器(覆盖1--1000μl)； 可移动紫外灯(近工作台面)；超净工作台；消耗品; 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯)；
专用工作服和工作鞋；专用办公用品； 如需处理大分子DNA，应备有超声波水浴仪。
新冠病毒检测的生物安全管理与防护(新冠肺炎核酸检测学习专家课堂)
• （四）管控原则：生物安全实验室建设之初应做好对拟从事的病 原微生物进行危险度评估，一定要有科学、合理的总体构思和概 念设计，在此基础上应根据操作过程的梗概进行平面布局工艺设 计，然后再进行空调通风和电控等的具体设计。国内的生物安全 实验室一定要按照国务院发布的《病原微生物实验室生物安全管 理条例》进行管理。该条例对病原微生物的管理原则是：病原微 生物是分类管理，实验室是分级管理。
表1 生物安全柜技术参数及应用对象的异同
生物安全柜类型 I级
正面气流速度 （m/s）
0.36
II级 A1型
0.38-0.51
A2型
0.51
B1型
0.51
气流方式
前面进，后面出， 顶部通过HEPA过滤 器 70%通过HEPA在工 作区内循环，30% 通过HEPA排出到实 验室内 同II级A1，但箱内 排气管道呈负压 30%通过HEPA在工 作区内循环，70% 通过HEPA和气密管 道排出
• ⑴ 院内运输：运送人员进行二级防护并随身携带75%酒精，以便 发生意外时能及时处理。条件允许时，应配备标本转运监控装置。
• ⑵ 长距离运输：
• ①应当按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样 本运输管理规定》办理《准运证书》。
• ② 2019-nCOV标 本 运 输 包 装 属 于 A类，对应的联合国编号为 UN2814。
• 2、风险（risk）：危险发生的概率及其后果严重性的综合； • 3、风险评估（risk assessment）：评估风险大小以及确定是否可
容许的整个过程；
• 4、风险控制（risk control）：减低风险而采取的综合措施；
• 5、气溶胶（aerosol）： 是固态或液态微粒悬浮在气体介质中的分散 体系。其中的气体介质称为连续相，一般为空气；微粒称为分散相， 大小不一，一般粒经为0.001-100微米，属于气溶胶研究的对象。
【专家讲座】核酸检测实验室建立与应用PPT课件
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应用SAS9.0软件PARnaOlyBsiIsTo分f Pa析ram结eter果Estimates
ChiParameter
ChiSq
DF Estimate
Standard 95% Confidence
Error
Limits
Square Pr >
Intercept 0.0028 log10(Dose) 1 0.0011
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标准操作规程(SOP)的编写
核酸标本离心交接操作规程 核酸标本提取及汇集操作规程(科华) 核酸标本扩增检测操作规程（科华） 核酸标本全自动检测分析系统操作规程（CHIRON） 核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件） 核酸标本检测复检操作规程 生物安全柜标准操作规程 可移动紫外线灯标准操作规程 低温高速离心机标准操作规程 ABI 7300型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程
内标的作用 –质控整个反应。 –提示假阴性检测结果。 –监控反应的外部条件 –内标浓度要合适 –保持适度的内标失控.(<0.2%)
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核酸试剂灵敏度评估
概率单位回归分析 (PROBIT） 用于描述剂量-反应或不同因素间的剂量-
反应比较，反应结果应该是以二分类形式 表达的。 概率单位的回归方程为：
PROBIT Pi=A+BXi
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用国际标准品稀释成不同浓度评估血液HBV 核酸筛查方法，结果如下。请计算95%的检 出限量及可信范围CI
序号 浓度 （IU/ml） 阳性数/重复数 概率
核酸检测实验室的规范化管理
教育实验室人员如何正确操作实验设备、使用实验试剂和处置实验废弃物，以 确保生物安全。
实验室人员的应急处理能力培训
应急预案培训
让实验室人员了解应急预案的内容、流程和操作规范，以便在紧急情况下能够迅 速响应。
应急处理能力评估
定期对实验室人员的应急处理能力进行评估和测试，以确保其能够在紧急情况下 胜任工作。
实验室的生物安全事故应急预案
一旦发生生物安全事故，实验室应立即启动应急预案， 进行初步处置，同时向有关部门报告。
在处理生物安全事故时，实验室应严格遵守相关法律法 规和标准要求，确保处置过程合法、科学、规范。
实验室应建立完善的生物安全事故应急预案，明确应急 组织、通讯联络、应急物资准备和应急处置等方面的要 求。
实验室的仪器设备故障应对措施
实验室应定期对仪器设备进行 检查和维护，确保设备正常运 行。
一旦仪器设备出现故障，实验 室应立即停用设备，并及时联 系维修人员进行维修。
在维修期间，实验室应采用备 用设备或者手动操作等方式继 续进行检测工作，保证检测工 作的连续性和稳定性。
实验室应建立设备故障应急预 案，对常见故障进行预防和应 对措施的培训，提高应对能力 。
风。
实验室设施
配备专业的实验室设备，如核酸 提取仪、PCR仪、电泳仪等，以 及相应的安全设施，如生物安全
柜、防护眼镜等。
实验室环境
定期监测实验室环境的各项指标 ，如温度、湿度、空气质量等，
确保符合实验要求。
实验室的软件系统建设
实验室管理体系
建立完善的实验室管理体系， 包括实验室管理规定、实验室 操作规程等，确保实验室各项
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人员疲劳
某实验室在疫情防控期间承担了大量的核酸检测任务，导致人员疲劳，
核酸检测操作培训课件
核酸检测操作培训课件核酸检测操作培训课件随着新冠疫情的爆发和蔓延，核酸检测成为了目前最主要的病毒检测手段之一。
为了提高核酸检测的准确性和效率，许多机构和实验室都开展了相关的操作培训课程。
本文将介绍一些核酸检测操作培训课件的内容和要点。
一、核酸检测的原理和意义在介绍具体的操作步骤之前，首先需要了解核酸检测的原理和意义。
核酸检测通过提取样本中的核酸，利用特定的引物和酶的作用，扩增目标病毒的核酸片段，并通过荧光信号等方式进行检测和定量。
核酸检测的意义在于及时发现感染者，采取相应的隔离和治疗措施，有效遏制病毒的传播。
二、核酸检测的操作步骤1. 样本采集与保存核酸检测的第一步是样本采集与保存。
常见的样本包括鼻咽拭子、咽拭子、唾液等。
在采集样本时，需要注意采集器具的清洁和消毒，避免外界污染。
采集后的样本应妥善保存，避免温度过高或过低，影响核酸的稳定性。
2. 样本处理与核酸提取样本处理与核酸提取是核酸检测的关键步骤之一。
首先需要将采集的样本转移到提取管中，加入相应的提取缓冲液，破坏细胞膜和核酸的结构。
然后通过离心等操作，将核酸从其他组分中分离出来，并将其溶解在适当的缓冲液中，以便后续的扩增和检测。
3. 核酸扩增与检测核酸扩增与检测是核酸检测的核心步骤。
常用的扩增方法包括聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）等。
在扩增过程中，需要添加特定的引物和酶，以选择性地扩增目标病毒的核酸片段。
扩增后的产物可以通过荧光信号等方式进行检测和定量。
三、操作注意事项和常见问题在进行核酸检测操作时，需要注意以下几个方面的问题：1. 严格遵守操作规程和实验室安全规定，确保自身和他人的安全。
2. 保持操作环境的洁净和无菌，避免外界污染对实验结果的影响。
3. 使用高质量的试剂和耗材，确保实验的准确性和可靠性。
4. 注意样本的保存和处理方法，避免核酸的降解和损伤。
5. 定期进行设备的维护和校准，确保设备的正常运行和结果的准确性。
核酸检测室-实验室初步规划与布局
核酸检测室-实验室初步规划与布局XXX布局规划建设依据：XXX生物安全通用要求»、«生物安全实验室建筑技术规范»、«临床扩增实验室管理暂行办法»、«检测和校准实验室能力认可准则在基因扩增检测领域的应用说明»。
实验室分为洗消区、样品受理区、换衣区、试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区，并设有专用走廊，其中试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域应设缓冲间，工作区与缓冲间宜安装连锁装置。
不同功能的工作区应是分隔独立的，各工作区有明显的标志，不能直通，如果紧密连接，需安装物品传递窗，不得逆向流动。
实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。
各工作区顶部应该安装紫外灯，紫外灯波长为254mm,每20㎡一支40W的紫外灯。
一、各区的功能洗消区：放置清洁用具,清洗实验用具等。
样品受理区：样品的接收与受理。
换衣区：换工作服。
试剂准备区：试剂的配制、分装和保存。
样品处理区：样品登记、分装;核酸提取、保存。
扩增区：扩增反应混合物的配制、加样。
扩增产物分析区：扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
扩增前区与扩增后区应严厉分隔，须使用不同的房间，两区之间有一定的间隔。
二、PCR实验室主要设备洗消区：烘箱样品受理区：电脑、打印机。
试剂筹办区：仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等，加样器、天平除了要专用外，还应有定期校准。
试剂分装应在超净台中进行，扩增反应混合液应使用分子生物学级的。
标本制备区：仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、干浴器、混匀器、水浴锅、冰箱等。
扩增区：扩增区的主要仪器是PCR扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、冰箱等。
PCR扩增仪需进行校准。
并配备UPS电源，以防止由于电压的波动，停电对扩增效果的影响。
扩增产物分析区：本区所使用的仪器设备有测序仪、实时荧光定量PCR仪、加样器等。
新冠病毒核酸检测实验室设计与建设SICOLAB
新冠病毒核酸检测实验室设计与建设SICOLAB一、PCR实验室设计规范PCR（聚合酶链式反应）实验室又叫基因扩增实验室《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字[2002]8号）二、PCR实验室简介及分类SICOLAB实验室内会为核酸检测准备4个区域，分别是试剂准备区、样本准备区、扩增区、扩增产物分析区。
其中试剂准备区负责接收患者样本，样本准备区则负责进行对样本的核酸进行提取，扩增区则是扩增复制核酸样本，扩增后分析区就是分析样本内核酸能能否与标准样配对，通过仪器检测的到，就判断成阳性，如果检测不到就是阴性。
PCR实验室分类：普通PCR实验室、全自动定量PCR实验室、一体自动化分析PCR实验室。
三、PCR实验室功能区域SICOLAB试剂准备区：是PCR实验室中最为“洁净”的区域，它不应有任何核酸成分的存在，否则将严重影响检测结果的准确性。
标本的制备应在生物安全柜内进行。
主要设备：冰箱、低温冰箱、混匀器、微量加样器（0.2-1000ul）、移动紫外灯。
样本准备区：核酸提取、贮存，扩增反应管制作。
主要设备：冰箱、超低温冰箱、高速冷冻离心机、混匀器、微量加样器（0.2-1000ul）、移动紫外灯、水浴锅、生物安全柜。
扩增区：扩增反应体系的配置和核酸的提取加入要在扩增区内进行。
主要设备：扩增仪、离心机、微量加样器（0.2-1000ul）、移动紫外灯。
扩增产物分析区：产物分析区最后一个工作区域，用于扩增片段的分析。
主要设备：凝胶成像分析仪、电泳仪、电泳槽、微量加样器（0.2-1000ul）、移动紫外灯。
四、PCR实验室工作流向SICOLAB进入各工作区域必须严格按照单一方向进行。
即试剂准备区→样本准备区→扩增区→扩增产物分析区。
五、PCR实验室压差及气流控制SICOLAB1）试剂准备区是工艺流线的开始，设计为正压或常压，避免外界环境的污染。
2）样品制备区一般为常压或负压，大多数情况下设计成二级生物安全实验室，避免实验产物溢出，污染外界环境。
新冠肺炎监测用PCR实验室的建设与感染控制
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2020年初春突发的这次新冠肺炎疫情，被称之为新中国成立以来我国发生的
传播速度最快、感染范围最广、防控难度最大的一次突发公共卫生事件，更是一
次近百年来最大的全球性公共卫生事件。虽然这次疫情在党中央坚强领导下，经过
全国人民的艰苦努力，疫情防控取得了阶段性决定性胜利，但随着海外疫情的发展
以及国际间人流、物流的必须性，使得疫情防控形势不容乐观。且此次疫情防控也
JINING
FOR DISEASE CONTROL
PREVENTION
（二）PCR实验室各功能区域的压差控制
• 为保护人员不受感染，操作人员需按照三级防护标准进行防护，其次有严格遵守实 验操作规程。
• 为保护标本不受污染，除需严格遵守实验操作规程外，还需从各实验区开展的工作 进行分析:
•☞试剂准备区，该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混 合液的制备。因 此，该区并不产生污染源，但须确保试剂免受外界污染，如该实验
核酸检测实验室生物安全要求(新冠病毒核酸检测专题培训课件)
一级生物安全防护
医用外科口罩、乳胶手套、工作服，可戴医用防护帽
标本 运送人员
口罩气密性测试
PPCAR实R验T室 T检H测R安E全E
医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册
基本要求
• 标本灭活及检测应当在生物安全二级实验室进行 • 同时采用生物安全三级实验室的个人防护 • 制定实验室生物安全体系文件（包括管理手册、程序文件、作业指导书、记录）
压力排风系统
风机
生物安全柜 摆放位置
气流的完整性容易受人员走动、窗 户的开关、门的开启和关闭、空调 运行等因素的影响。为避免上述因 素的干扰，生物安全柜应放在远离 人员活动、物品流动以及可能会扰 乱气流的地方。在安全柜的后面、 左右两侧面各留30 cm的空间，以利 于安全柜的维护。上端应留30～35 cnl空间，以便准确测量空气通过排 风过滤器的速度及排风过滤器的更 换。
核酸提取和检测 安全要求
在生物安全柜内操作
实验结束后安全要求
实验室空气消毒
紫外消毒30分钟或紫 外消毒机照射消毒1小 时。必要时可采用核 酸清除剂等试剂清除
实验室残留核酸。
工作台面消毒
每天实验后，使用0.2% 含氯消毒剂或75%酒精 进行台面、地面消毒
生物安全柜消毒
医疗废物垃圾袋包扎 后用0.2%含有效氯或 75%酒精喷洒外表面。 试管架、实验台面、 移液器等用75%酒精擦 拭。关闭生物安全柜， 紫外灯消毒30分钟。
手部 防护
足部 防护
防护 面屏
手消毒
呼吸
医用垃
防护
圾袋
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l 呼吸道防护是核心！ Ø 穿戴时要先戴口罩再戴帽子，才能保证最后脱口罩。注意摘除口罩的场 所是否安全！
2024版核酸检测医学知识培训课件
对实验人员进行定期培训和考核， 提高其专业技能和素质。
问题处理及应急措施
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问题识别与处理
对实验过程中出现的问题进行 及时识别和处理，避免影响实
验结果。
应急预案制定
针对可能出现的突发事件制定 应急预案，确保实验安全进行。
应急物资准备
准备必要的应急物资和设备， 以应对突发事件的发生。
Chapter
样本类型选择及采集方法
呼吸道样本
包括鼻咽拭子、口咽拭子、鼻咽抽取物、深咳痰液等，首选鼻咽拭子。
采集方法
用采样拭子在鼻咽部或口咽部轻轻旋转擦拭，然后放入含有保存液的采样管中，折 断采样拭子头部，旋紧管盖。
样本保存条件及时限要求
保存条件
样本应保存在2-8℃的环境中，避免 反复冻融。
时限要求
防止泄漏
应确保样本包装严密，防 止在运输过程中发生泄漏 或污染。
接收和处理流程
接收流程
在接收样本时，应核对样本信息、检查样本包装是 否完好、确认样本是否在规定的保存期限内。
处理流程
接收到样本后，应按照实验室规定进行登记、编号、 分装等操作，然后按照相应的检测方法进行核酸检 测。在处理过程中应注意防止交叉污染和生物安全 风险。
等。
定量结果的误读
正确理解病毒载量的意义，避免 将其简单等同于病情严重程度。
忽视质量控制
重视实验过程中的质量控制，确 保结果的准确性和可靠性。
临床意义探讨
辅助诊断
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核酸检测结果可作为疾病诊断的重要依据之一，结合患者临床
表现和其他检查结果进行综合判断。
疗效评估
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通过连续监测患者体内病毒载量的变化，评估治疗效果和病情