α-淀粉酶的制备及应用

工艺流程
实验步骤
• 1.培养基的制备与灭菌 • 发酵培养基：蛋白胨5g，酵母膏2.5g， 葡萄糖0.5g，可溶性淀粉2.5g， KH2PO4 1g，MgSO4.7H2O 0.25g， CaCl2.2H2O 0.1g, H2O 500ml， PH7.0。分装与100ml锥形瓶中，每 瓶50ml，121℃灭菌20min。
2.接种与产酶培养 • 将菌种接种于培养基斜面，35℃培养 三天，然后转接到摇瓶种子培养基， Baidu Nhomakorabea瓶培养一定时间，当菌体进入对数 生长期时，以0.5％接种量接入固体培 养基，在厚层通风制曲箱内，通风保 持37—42℃，培养48小时出去风干。
3.提取 • 麸曲用1％食盐水3—4倍浸泡，3小时 后过滤，调节滤液PH=8，加硫酸铵溶 液沉淀酶，经离心，用浓酒精洗涤脱 水，40℃烘干、磨粉即为成品。
1.PH值对酶活性的影响
• α—淀粉酶通常在PH5.5—8.0时稳定，在 PH4.0以下易失活其作用的最适PH为 5.0—6.0，但不同来源的酶其最适PH值 差别很大。动物的α—淀粉酶在氮离子存 在时其最适作用PH为7.0，高等植物在 PH3.6以下时失活，耐酸性的α—淀粉酶 最适作用PH为4.0左右，在PH2.5—6.5 稳定；非耐酸的α—淀粉酶最适PH为6.5 左右，在PH5.5—9.5稳定。
2.温度对酶活性的影响
• 温度对酶活性有很大影响，温度升高， 酶的反应速度就增加，一般每升高十 摄氏度，反应速度可增加2—3倍，但 是大多数酶都是蛋白质，温度过高则 可导致蛋白质变质，从而使酶失活。 在一定条件下，在某一温度时酶的反 应速度最大。这使得反应速度是最适 合反应温度。
实验器材
• 1.菌种：枯草芽孢杆菌JD—32 生产法 • 2.仪器：培养皿、试管、发酵 罐、灭菌锅、振荡培养箱、高 速冷冻离心机
α—淀粉酶分布
• α—淀粉酶广泛分布于动物、植物及微生物。微生物 的酶几乎都是分泌性的。此酶以Ca2+为必需因子并作 为稳定因子，既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉， 无差别地切断α—1，4链。因此，其特征是引起底物 溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失，最终产物在分 解直链淀粉时以麦芽糖为主，此外，还有麦芽三糖及 少量葡萄糖。另一方面在分解支链淀粉时，除麦芽糖、 葡萄糖外，还生成分支部分具有α—1，6键的α—极限 糊精。一般分解限度以葡萄糖为准是35-50％，但在 细菌的淀粉酶中，亦有呈现高达70％分解限度的。
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项目二 α—淀粉酶的 制备及应用
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α—淀粉酶
淀粉酶属于水解酶类，是催化淀粉、糖原、糊精中糖苷 键水解的一类酶的统称。此类酶广泛存在于植物和微生 物中。根据对淀粉的作用方式不同，可将淀粉酶分为 α—淀粉酶、β—淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、脱支酶。α— 淀粉酶是一种内切酶，其相对分子量约50000左右作用 于淀粉时，可从淀粉分子内部随机切开α—1，4糖苷键 ，不能切开α—1，6糖苷键以及与α—1，6糖苷键相连 的α—1，4糖苷键，但能越过支点切开内部的α—1，4 糖苷键。其水解产物中除含葡萄糖、麦芽糖外还含有具 有α—1，6糖苷键的极限糊精含α—1，6糖苷键的具葡 萄糖残基的低聚糖。