河南省农科院畜牧所伊莱特ILLITE(活性微矿)抗菌实验
青贮苜蓿中抑菌活性乳酸菌的筛选及鉴定
株 菌发挥 抑 菌活性 的主要 成分 为有机酸 。 经过 生理 生化 、 碳 源发 酵及 １ ６ Ｓ ｒ Ｄ Ｎ Ａ序 列 同源性 分 析 ，
这 两株乳酸 菌分别被 鉴定 为 Ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓ ｍｕ ｎ ｄ ｔ ｉ ｉ 及Ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｐ ｌ ａ ｎ ｔ ａ ｒ ｕ ｍ 、两株菌的抑 菌活性 物质
在ｐ Ｈ值 范 围及 温度 范围分别表现 出广泛 的耐受性 ， 表明它们 在苜 蓿青 贮 中具 有潜在 的应用价值 关键 词 ： 苜蓿 ； 青贮； 乳酸 菌； 抗 菌活性 ； 筛选
ｄ ｏ ｉ ： ｌ ０ ． １ ３ ３ ０ ２ ￣ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． ｉ ｆ ． ２ ０ １ ６ ． １ ９ ． ０ １ １ 中图分类号 ： ￥ ８ １ ６ ． ５ ＋ ３ 文献标识 码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ １ — ９ ９ １ Ｘ（ ２ ０ １ ６ ） ｌ ９ — ０ ０ ４ ０ — ０ ５
Ｉ ｓ ｏｌ ａｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎｄ ｉ ｄｅ ｎｔ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏｆ ｌ ａｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｂａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｗｉ ｔ ｈ ａ ｎｔ ｉ ｂａｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ａｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｆ ｒ ｏ ｍ ａ ｌ ｆ ａ ｌ ｆ ａ ｓ ｉ ｌ ａｇ ｅ Ｌ ｉ Ｄｏ ｎ ｇ ｘ ｉ ａ ，Ｙａ ｎ ｇ Ｆ ｕ ｙ ｕ， Ｗａ ｎ ｇ Ｙａ ｎ ｐ ｉ ｎ ｇ ，Ｙａ ｎ ｇ Ｈｕ ｉ ｘ ｉ ａ ｏ ，Ｇｕ ｏ Ｌｉ ｎ ｎ ａ Ｗ ａ ｎ ｇ Ｙｕ
ｆ ａ ｌ ｆ ａ ｓ ｉ ｌ ａ ｇ ｅ ．ｔ ｗｏ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｍ ｗ ｉ ｔ ｈ ｓ ｔ ｒ ｏ ｎ ｇ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｅ ｄ ｂ ｙ ｄ ｕ ａ ｌ －ｃ ｕ ｈ ｕ ｒ ｅ ａ ｇ ａ ｒ
莫能菌素的研究进展
莫能菌素的研究进展张军民张连洁（中国农业科学院畜牧所，北京 100094）一、概况莫能菌素（Monensin）亦称莫能霉素、肉桂霉素和瘤胃素，是肉地桂链霉菌（Streptomyces cinnamonensis）的发酵产物（具有五环多醚结构的酸性抗生素），为聚醚类离子载体抗生素中应用最为广泛的药物之一。
目前用作饲料添加剂的聚醚类离子载体抗生素有莫能菌素、盐霉素、拉沙里菌素、那拉霉素和马杜拉霉素。
莫能菌素于1967年发现有抗球虫作用，1971年美国批准其作为抗球虫剂，1984年批准为牛生长促进剂。
制剂为其钠盐，莫能菌素钠为微白褐色至微橙黄色粉末，略有特异臭味。
易溶于低级醇、低级酯、氯仿、丙酮、苯等有机溶剂，不溶于水。
酸性含水环境中易失活，碱性条件下很稳定，其干燥结晶长期保存稳定，在饲料中的稳定性也好。
莫能菌素具有广谱的抗球虫活性，对鸡的6种致病艾美耳球虫均有良好的灭杀作用，而且对控制和预防火鸡、家兔、羔羊、牛犊以及猪球虫病均有显著的效果，且球虫对其不易产生耐药性。
除抗球虫外，莫能菌素对金黄色葡萄球菌、链球菌、枯草杆菌等革兰氏阳性菌，猪痢疾密螺旋体等有较强的抗菌活性，对革兰氏阴性菌无效。
对反刍动物，莫能菌素能提高瘤胃中丙酸的含量，提高饲料利用率和家畜增重速度及增加泌乳产量。
莫能菌素在动物消化道中几乎不吸收。
因此，一般不存在组织残留和向可食性畜禽产品转移的问题。
由于莫能菌素使用无残留、无副作用，成为欧盟至今唯一允许使用的抗生素饲料添加剂。
二、莫能菌素作用机理莫能菌素抗球虫的方式是以干扰球虫细胞内钾离子及钠离子的正常渗透，使大量的钠离子进入细胞，随后为平衡渗透压，大量的水分进入球虫细胞，引起肿胀，为了排除细胞乃多余的钠离子，球虫细胞耗尽了能量，仍无法排除，最后是球虫耗尽能量且过度肿胀而死亡，因其独特的杀球虫作用，与一般化学合成类抗球虫药物不同，所以很难产生抗药性。
在球虫的生活周期中，有三个杀死球虫的阶段，而其主要杀死球虫的时间是在生活周期中的早期——子孢子阶段是发生，在其未侵入肠壁上皮细胞前即将其杀死，然而有些少数漏掉的未被杀死的子孢子，继续发育，莫能菌素仍能在第一世代裂殖子及第二世代裂殖子时发挥作用，将其杀死，使其排出体外的球虫卵囊数降到最少，有利于鸡对球虫形成一定程度的免疫力[1]。
微生物饲料添加剂(多能菌I号)在蛋鸡生产中的实验研究
义。
二 、 粉 授
杂 交棉 人工授粉就 是人工把 采摘
的父 本花粉 涂抹在 已去雄 的母 本花 粉 的柱头上 ， 结出杂交棉种 。为保证 制种
（ 人工去雄操作 时要仔细 。人 二）
工去 雄时 ， 用左手提 住花冠基 部 ， 手 右 拇 指指 甲从 花 萼中部凸 出部位 切入 至 子房壁外 膜 （ 注意 用力要 适度 ， 指甲掐 入不要 太深 ，不 要碰伤 子房壁外 膜 ， 因 为 子房或 子房壁外 膜受伤 便不 能正 常 受精） ，然后与食指 、中指 同时提着花 （ 下转第４ 页 ） ， 料 １ ６． ｋ ， ８ 只 耗 ４ ７ ｇ 平 ５
不 同气温 、 同时 间 ， 冠长度 有所 差 不 花 异， 或与苞叶尖持平 ， 或明显露出苞叶 。 次日 ５： Ｏ ３ 后不易 去雄 ，因为此时有些
母本 已开 始自花 授粉 ，去 雄已失 去意
认 真排查 ， 现一个 摘除一 个 ， 防 发 严格 控自交铃 形成 。在 制种 田制种结束后 ，
、
去 雄
冠， 一同向右向后旋剥 ， 并稍 用力上提 ， 把花冠连同雄蕊一起剥下 ， 注意要 剥得 干净 ， 不要 留有花粉 囊造成 自交铃 。并
杂交 棉制种人 工 去雄是 在杂 交棉
制种 过程中的一项关键技术 。 就是在杂 交棉 的母本自花授粉前 ， 工把母本的 人 花药、 花丝 和花 冠一并去 掉 ， 防止 自交
及时去除母本果枝 末端 亚果枝的花蕾 ， 并连续 ｌ ｄ 摘除花朵 ， ０ 防止自交成铃 。
好用环涂法 ，使柱头 全方位粘着花粉。
若遇雨天 ，在避免花粉沾水 的情况 下 ， 抢雨前 、 错雨后 ， １ ５ ． ｃ 长的吸 用 ． ～２ Ｏ ｍ 管， 一端蘸花粉 ， 套上柱头进行授粉 。 （ 授粉 后 ２ 内遇 雨 ， 四） ｈ 雨后 应补 充授粉 。母本柱头 在湿度 较大 的情况 下， 受精 能力 可维 持 ２ ｄ 但 成 铃率 ～３ ，
犊牛源乳酸菌的筛选及抑菌性能研究
犊牛源乳酸菌的筛选及抑菌性能研究郭奇苑;孙文;徐基利;许丽【摘要】从15日龄健康犊牛的肠道黏膜和食糜分离得到31株革兰氏阳性、无芽孢乳酸菌.通过耐消化道环境筛选得到4株乳酸菌M5、M7、SB1和Z4,在pH=2条件下处理2 h后的存活率分别为39.24%、28.08%、44.20%、23.28%,有较强的耐牛胆盐能力,经人工胃液处理后各菌的存活率均可达到30%以上,且活菌数超过108 CFU/mL.能抵御体外模拟的胃肠道逆环境的影响,且对大肠杆菌的抑制作用明显.抑菌圈直径为16～21 mm.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2010(000)006【总页数】4页(P17-20)【关键词】犊牛;乳酸菌;耐受性;抑菌作用【作者】郭奇苑;孙文;徐基利;许丽【作者单位】东北农业大学动物科学技术学院;东北农业大学动物科学技术学院;东北农业大学动物科学技术学院;东北农业大学动物科学技术学院【正文语种】中文【中图分类】S816.17动物胃肠道微生物区系从多方面影响机体微生态环境的稳定和动物健康。
然而由于动物种类和环境的不同，定植肠道细菌的种类和数量相差很大，定植的能力也不尽相同（Chiquette，2009）。
理想的益生素菌种最好来自同源动物的肠道。
对反刍动物的不同生长阶段使用不同的益生素，并充分考虑其使用目的，才能以最经济的方式达到最理想的效果。
幼犊的腹泻是由寄生在肠道中能产生肠毒素的细菌引起的，微生态制剂中的益生菌可抑制致病菌在肠道的定植，同时可产生对致病菌有抑制作用的生物活性物质。
本试验选取15日龄健康犊牛，对肠道内容物以及肠黏膜上的乳酸菌进行了分离鉴定，筛选耐受性和抑菌效果良好的菌株，从而为开发促进犊牛生长、防治犊牛腹泻性疾病的微生态制剂提供依据。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 样品采集选择15日龄未饲用抗生素的健康荷斯坦犊牛放血屠宰。
结扎截取十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠肠段，冰冻保存，迅速带回实验室。
过氧化氢酶对肉鸡生产性能、抗氧化能力、盲肠微生物及代谢物的影响
中国畜牧兽医 2024,51(3):1086-1093C h i n aA n i ma lH u sb a n d r y &V e t e r i n a r y Me d i c i n e 过氧化氢酶对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁盲肠微生物及代谢物的影响张文翔1,王建平2(1.固始县动物卫生监督所,信阳465200;2.河南科技大学动物科技学院,洛阳471023)摘 要:ʌ目的ɔ本试验旨在研究过氧化氢酶(C A T )对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁盲肠微生物及其代谢物的影响,为C A T 在动物上的应用提供理论依据㊂ʌ方法ɔ选用1日龄黄羽肉鸡600只,随机分为5组:空白对照组(C O N )㊁抗生素组(A n t i )和C A T 低㊁中㊁高剂量组(C A T 1㊁C A T 2和C A T 3),每组6个重复,每个重复20只㊂其中,C O N 组饲喂基础饲粮;A n t i 组在基础饲粮中添加50m g /k g 金霉素;C A T 1㊁C A T 2和C A T 3组在基础饲粮中分别添加100㊁150和200U /k g C A T ,试验期42d ㊂试验结束后,测定生产性能;采集血清㊁盲肠食糜用于测定抗氧化指标㊁微生物菌群及其代谢物含量㊂ʌ结果ɔ与C O N 组相比,C A T 各剂量组平均日增重和平均日采食量均显著提高(P <0.05),且达到了A n t i 组水平,但是增加C A T 剂量没有进一步提高这些指标㊂与C O N 组相比,C A T 各剂量组和A n t i 组血清C A T 和超氧化物歧化酶活性均显著提高(P <0.05),丙二醛㊁蛋白羰基和8-羟基脱氧鸟苷含量均显著降低(P <0.05),且C A T 各剂量组8-羟基脱氧鸟苷与A n t i 组持平㊂盲肠微生物分析显示,与C O N 组相比,C A T 各剂量组变形菌门㊁乳杆菌属和粪杆菌属的数量显著增加(P <0.05),但是梭菌属数量显著降低(P <0.05)㊂与C O N 组相比,C A T 各剂量组盲肠内容物中乳酸㊁乙酸㊁异戊酸含量显著提高(P <0.05),戊酸含量显著降低(P <0.05);C A T 各剂量组甲胺㊁色胺㊁腐胺㊁尸胺和总胺的含量显著降低(P <0.05);C A T 2和C A T 3组亚精胺显著降低(P <0.05),C A T 剂量效应比较分析显示,C A T 2和C A T 3组腐胺㊁尸胺和总胺含量显著低于C A T 1组(P <0.05)㊂ʌ结论ɔ饲粮添加150或200U /k g C A T 可促进动物生长和健康㊂关键词:肉鸡;过氧化氢酶;生产性能;抗氧化能力;盲肠微生物中图分类号:S 829.1文献标识码:AD o i :10.16431/j.c n k i .1671-7236.2024.03.020 开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):收稿日期:2023-08-29基金项目:国家自然科学基金(31272466)联系方式:通信作者张文翔,E -m a i l :584287678@q q.c o m E f f e c t o fC a t a l a s e o n t h eP r o d u c t i o nP e r f o r m a n c e ,A n t i o x i d a n t C a p a c i t y,C e c a lM i c r ob e a n dM e t a b o l i t e s i nB r o i l e r sZ H A N G W e n x i a n g 1,WA N GJ i a n p i n g2(1.S u p e r v i s i o n I n s t i t u t e o f A n i m a lH e a l t ho f G u s h iC o u n t y ,X i n y a n g 465200,C h i n a ;2.C o l l e g e o f A n i m a lS c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,H e n a nU n i v e r s i t y o f S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,L u o y a n g 471023,C h i n a )A b s t r a c t :ʌO b je c t i v e ɔT h eef f e c to f c a t a l a s e (C A T )o nt h e p r o d u c t i o n p e r f o r m a n c e ,a n t i o x i d a n t c a p a c i t y ,c e c a lm i c r o b ea n d m e t a b o l i t e s i nb r o i l e r sw a s i n v e s t ig a t e di nthi ss t u d y ,f o r p r o v i d i n g t h e o r e t i c a l f o u n d a t i o n i nt h ea p p l i c a t i o no fC A Ti na n i m a l p r o d u c t i o n .ʌM e t h o d ɔ6001-d a y-o l d Y e l l o w F e a t h e r e d b r o i l e rc h i c k e n s w e r es e l e c t e d a n dr a n d o m l y d i v i d e di n t o5g r o u ps :B l a n k c o n t r o l g r o u p (C O N ),a n t i b i o t i c g r o u p (A n t i ),a n dl o w ,m e d i u m a n dh i g h -d o s e C A T g r o u ps (C A T 1,C A T 2a n dC A T 3),w i t h6r e p l i c a t e s i ne a c h g r o u p a n d20c h i c k e n s i ne a c hr e p l i c a t e .A m o n g t h e m ,C O N g r o u p w a s f e dw i t hb a s i c f e e d ,A n t i g r o u p a d d e d 50m g /k g c h l o r a m ph e n i c o l t o3期张文翔等:过氧化氢酶对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁盲肠微生物及代谢物的影响t h eb a s i cd i e t,a n dC A T1,C A T2a n dC A T3g r o u p sw e r es u p p l e m e n t e dw i t h100,150a n d200U/k g C A Ti n t h eb a s i cd i e t,r e s p e c t i v e l y.T h e f e e d i n g t r i a l l a s t e df o r42d.A f t e r t h ee x p e r i m e n t,t h e p r o d u c t i o n p e r f o r m a n c ew a sm e a s u r e d,a n ds e r u ma n dc e c a l c h y m ew e r ec o l l e c t e df o rm e a s u r i n g a n t i o x i d a n t i n d i c a t o r s,m i c r o b i a lc o m m u n i t i e sa n d m e t a b o l i t ec o n t e n t.ʌR e s u l tɔC o m p a r e d w i t hC O N g r o u p,t h eAD Ga n d A D F Io fe a c hd o s e g r o u p o fC A T w e r es i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P<0.05),r e a c h i n g t h e l e v e lo f t h eA n t i g r o u p.H o w e v e r,i n c r e a s i n g t h eC A T d o s ed i dn o t f u r t h e ri m p r o v e t h e s e i n d i c a t o r s.C o m p a r e dw i t hC O N g r o u p,t h es e r u m C A Ta n ds u p e r o x i d ed i s m u t a s e a c t i v i t i e sw e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d i na l l d o s e g r o u p s o fC A Ta n dA n t i g r o u p(P<0.05).T h e l e v e l so f m a l o n d i a l d e h y d e,p r o t e i n c a r b o n y la n d8-h y d r o x y d e o x y g u a n o s i n e w e r e s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d(P<0.05),a n dt h e8-h y d r o x y d e o x y g u a n o s i n el e v e l s i na l ld o s e g r o u p so fC A T w e r e c o n s i s t e n tw i t h t h o s e i nA n t i g r o u p.C e c a lm i c r o b i o t aa n a l y s i s s h o w e dt h a t c o m p a r e dw i t hC O N g r o u p,t h en u m b e ro fP r o t e o b a c t e r i a,L a c t o b a c i l l u s a n d F a e c a l i b a c t e r i u m i ne a c hd o s e g r o u p o f C A Ts i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P<0.05),b u t t h en u m b e ro f C l o s t r i d i u m d e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y (P<0.05).C o m p a r e dw i t hC O N g r o u p,t h e l e v e l so f l a c t i c a c i d,a c e t i c a c i da n d i s o v a l e r i c a c i d i n t h e c e c a l c o n t e n t s o f e a c hd o s e g r o u p o fC A T w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P<0.05),w h i l e t h e c o n t e n to f v a l e r i c a c i d w a s s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d(P<0.05);T h el e v e l s o f m e t h y l a m i n e, t r y p t a m i n e,p u t r e s c i n e,c a d a v e r i n e,a n d t o t a l a m i n e i ne a c hd o s e g r o u p o fC A T w e r e s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d(P<0.05);T h el e v e l so fs p e r m i d i n e w e r es i g n i f i c a n t l y r e d u c e di n C A T2a n d C A T3 g r o u p s(P<0.05),a n dac o m p a r a t i v ea n a l y s i so fC A T d o s ee f f e c t ss h o w e dt h a t t h el e v e l so f p u t r e s c i n e,c a d a v e r i n e a n d t o t a l a m i n e i nC A T2a n dC A T3g r o u p sw e r es i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h o s e i nC A T1g r o u p(P<0.05).ʌC o n c l u s i o nɔA d d i n g150o r200U/k g C A Tt of e e dc o u l d p r o m o t e a n i m a l g r o w t ha n dh e a l t h.K e y w o r d s:b r o i l e r;c a t a l a s e;p r o d u c t i o n p e r f o r m a n c e;a n t i o x i d a n t c a p a c i t y;c e c a lm i c r o b e氧化是生命衰老和疾病的最大威胁,环境㊁营养和病原等因素会导致生理过程中产生许多氧化物,同时,机体会本能地启动自身抗氧化系统清除这些氧化物㊂通常情况下,生命自身的氧化和抗氧化是处于相对平衡状态[1-2]㊂但是,对于畜禽而言,在经济性状高度选育㊁集约化生产以及促生长抗生素禁用的综合背景下,动物自身的抗氧化能力变得极其脆弱㊂抗氧化能力降低将对免疫力产生负面影响,对病原的抵抗力下降,最终导致生产性能下降,甚至发生疾病或死亡㊂由此,外源性抗氧化剂的应用随之兴起㊂外源性抗氧化剂主要包括药物类㊁维生素类㊁植物活性成分㊁抗氧化酶类㊁微生物及其代谢物等[3-4]㊂过氧化氢酶(C A T)是机体内的一种抗氧化酶,主要分布于肝细胞㊁红细胞和肠细胞中,约占过氧化物酶体酶总量的40%[5-6]㊂最近研究发现,饲粮添加0.10%C A T能提高乌苏里貉生长前期生产性能㊁养分消化代谢㊁血清生化和免疫指标[7]㊂饲粮添加200U/k g C A T能改善黄羽肉鸡生长性能㊁肠道组织形态和抗氧化能力[8]㊂在母猪和断奶仔猪饲粮分别添加C A T100U/k g和1.5g/k g,显著提高了母猪㊁哺乳仔猪和断奶仔猪的生产性能和抗氧化能力[9-10]㊂可见,C A T在动物肠道内发挥着抗氧化作用,这种作用是否对家禽肠道微生物及其代谢产生影响鲜见报道㊂本研究旨在研究C A T对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁微生物及其代谢的影响,为C A T 在动物上的应用提供理论参考㊂1材料与方法1.1主要试剂和仪器C A T购自洛阳欧科拜克生物技术股份有限公司;兽用金霉素购自金河生物科技股份(银川)有限公司;血清抗氧化物质和氧化产物试剂盒均购自南京建成生物研究所;D N A试剂盒购自生工生物工程(上海)股份有限公司;氨态氮试剂盒购自哈希公司㊂气相色谱仪(7890A型号)和液相色谱仪(1100系列)均购自安捷伦科技(中国)有限公司㊂1.2试验动物与基础饲粮黄羽肉鸡苗购自洛阳立华禽业有限公司㊂试验在河南科技大学动物试验基地进行㊂试验选用1日7801中 国 畜 牧 兽 医51卷龄黄羽肉鸡600只,随机分为5组:空白C O N 组㊁A n t i 组㊁C A T 1㊁C A T 2㊁C A T 3,每组6个重复,每个重复20只㊂其中,C O N 组饲喂基础饲粮;A n t i 组在基础饲粮基础上添加50m g /k g 金霉素;C A T 1㊁C A T 2㊁C A T 3组在基础饲粮基础上分别添加100㊁150㊁200U /k g C A T ㊂试鸡采用地面刨花垫料平养,每个重复为一圈,自由采食和饮水㊂每日检查鸡群健康状况两次㊂试验鸡体重和采食量每周称量一次㊂病死鸡及时捡出并称量体重㊂试验期间,记录初始体重(I B W )㊁终末体重(F B W ),计算平均日采食量(A D F I )㊁平均日增重(A D G )㊁料重比(F /G )和死亡率㊂饲养试验持续至42日龄㊂基础饲粮营养水平参照黄羽肉鸡饲养标准N Y /T3645 2020配制,其原料组成和营养水平见表1㊂表1 基础饲粮组成与营养水平(风干基础)T a b l e 1 C o m p o s i t i o na n dn u t r i t i o n l e v e l s o f b a s a l d i e t (a i r d r y b a s i s )%原料I n g r e d i e n t s 含量C o n t e n t s 营养成分N u t r i e n t c o m p o n e n t s ②含量C o n t e n t s 玉米C o r n 66.3代谢能M E /(M J /k g)12.83豆粕S o y m e a l 21.0粗蛋白质C P 21.22玉米蛋白粉C o r n g l u t e nm e a l5.0钙C a 0.98豆油S o y o i l 3.0总磷T o t a l P 0.66赖氨酸L y s 0.3非植酸磷N o n -p h y t a t eP 0.40蛋氨酸M e t 0.2赖氨酸L ys 0.84食盐S a l t 0.3蛋氨酸M e t0.48石灰粉L i m e s t o n e1.5蛋氨酸+胱氨酸M e t +C y s -C ys 0.75磷酸氢钙D i c a l c i u m p h o s p h a t e 1.4预混料P r e m i x①1.0总计T o t a l100.0①预混料为每千克饲粮提供:维生素A9000I U ;维生素D 34000I U ;维生素E50I U ;维生素K2m g ;维生素B 12mg ;维生素B 25m g ;维生素B 515m g ;维生素B 340m g ;维生素B 62m g ;维生素B 70.1m g ;维生素B 90.55m g ;维生素B 120.01m g ;M n 120m g ;I 1.2m g ;F e 40m g ;C u16m g ;Z n100m g ;S e 0.3m g㊂②依据中国饲料数据库(2020)计算值①P r e m i x p r o v i d e d p e r k g o f d i e t :V A9000I U ;V D 34000I U ;V E50I U ;V K2m g ;V B 12m g ;V B 25m g ;V B 515m g ;V B 340m g ;V B 62m g ;V B 70.1m g ;V B 90.55m g ;V B 120.01m g ;M n 120m g ;I 1.2m g ;F e 40m g ;C u 16m g ;Z n 100m g ;S e 0.3m g .②C a l c u l a t e db y Ch i n e s eF e e dD a t a b a s e (2020)1.3 样品采集饲养试验结束,每个重复随机抽取5只试验鸡,C O 2窒息,心脏采血制备血清,用于测定血清抗氧化活性和氧化产物指标㊂解剖,摘取两侧盲肠,无污染收集内容物,干冰暂时冻存,然后转至-80ħ冻存,以备微生物代谢物㊁种群定量及其代谢物含量分析㊂1.4 样品检测饲料样品C A T 活性,按照G B /T5522 2008分析㊂血清中的C A T ㊁超氧化物歧化酶(S O D )㊁谷胱甘肽过氧化物酶(G P x )㊁丙二醛(M D A )㊁蛋白羰基(P C O )和8-羟基脱氧鸟苷(8-O H d G )按照相应试剂盒说明书测定㊂盲肠微生物菌群由上海派森诺生物科技有限公司采用I l l u m i n aM i s e q 测序平台测定㊂试验鸡盲肠微生物测序及生物信息学分析中,将每个重复的盲肠内容物样品合并,混匀,提取D N A ㊂采用微生物16S r R N A 特异性引物[11](F :5'-T C G T C G G C A G C -G T C A G A T G T G T A T A A G A G A C A G C C T A C G G G -N G G C WG C A G -3',R :5'-G T C T C G T G G G C T C G G -A G A T G T G T A T A A G A G A C A G G A C T A C H V G G -G T A T C T A A T C C -3')对微生物V 3-V 4区进行扩增㊂P C R 扩增体系20μL :5ˑH i g h -F i d e l i t y G C 缓冲液5μL ,D N A 模板2μL ,上㊁下游引物(10μm o l /L)各1μL ,2.5m m o l /L d N T P s 2μL ,H i g h -F i d e l i t yD N A 聚合酶(5U /μL )0.25μL ,d d H 2O8.75μL ㊂P C R 扩增条件为:98ħ预变性2m i n ;98ħ变性15s ,55ħ退火30s ,72ħ延伸30s ,共25个循环;72ħ延伸5m i n ㊂所有样品均重复3次㊂盲肠短链脂肪酸,包括乳酸㊁乙酸㊁丙酸㊁丁酸㊁戊酸㊁异丙酸㊁异戊酸和支链脂肪酸(B C F A ),采用气相色谱法测定㊂生物胺,包括甲胺㊁色胺㊁腐胺㊁尸胺㊁酪胺㊁亚精胺和精胺,采用液相色谱法分析㊂氨态氮(N H 3-N ),按照试剂盒说明书进行定量㊂88013期张文翔等:过氧化氢酶对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁盲肠微生物及代谢物的影响1.5数据统计分析试验数据采用S P S S23.0软件进行单因素方差分析,表中数据表示为平均值和标准误(S E M)㊂组间差异采用T u k e y检验法进行多重比较,显著性水准设为P<0.05㊂其中每个重复的生产性能数据为该重复中20只鸡的平均值,血清指标和盲肠指标的数据为该重复5只解剖鸡的均值㊂2结果2.1生产性能和死亡率分析由表2可知,C A T各剂量组平均日增重和平均日采食量均显著高于C O N组(P<0.05),且与A n t i 组无显著差异(P>0.05),C A T各剂量组间也没有显著差异(P>0.05)㊂试验各组之间料重比和死亡率差异均不显著(P>0.05)㊂表2各组生产性能和死亡率比较分析T a b l e2C o m p a r i s o no n p r o d u c t i o n p e r f o r m a n c e a n dm o r t a l i t y i nd i f f e r e n t g r o u p s项目I t e m s对照组C O N抗生素组A n t i过氧化氢酶组C A TC A T1C A T2C A T3标准误S E MP值P-v a l u e初始体重I B W/g39.941.141.340.840.40.9230.896终末体重F B W/k g1.80b2.15a2.09a2.06a2.13a0.0260.031平均日增重A D G/(g/d)41.9b50.2a48.8a48.1a49.8a2.0120.029平均日采食量A D F I/(g/d)107b126a123a122a124a5.6700.041料重比F/G2.562.512.522.532.490.0840.607死亡率M o r t a l i t y/%4.172.502.503.333.330.7030.329同行数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05);肩标相同字母或无字母标注表示差异不显著(P>0.05)㊂下同I n t h e s a m e r o w,v a l u e sw i t hd i f f e r e n t l e t t e r s u p e r s c r i p t sm e a ns i g n i f i c a n td i f f e r e n c e(P<0.05);W h i l ew i t ht h es a m eo rn o l e t t e r s u p e r s c r i p t sm e a nn o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e(P>0.05).T h e s a m e a sb e l o w2.2血清抗氧化指标比较分析由表3可知,C A T各剂量组血清C A T和S O D 活性显著高于C O N组(P<0.05),且与A n t i组无显著差异(P>0.05),C A T各剂量组间也没有显著差异(P>0.05)㊂同时,血清抗氧化产物分析显示, C A T各剂量组M D A含量均显著低于C O N组(P<0.05),但是只有C A T3组降低幅度与A n t i组相当(P>0.05),且C A T各剂量组之间差异不显著(P>0.05);C A T各剂量组P C O含量显著低于C O N组(P<0.05),显著高于A n t i组(P<0.05),但是无剂量效应;C A T各剂量组8-O H d G水平显著低于C O N组(P<0.05),与A n t i组持平(P>0.05)㊂表3各组血清抗氧化能力比较分析T a b l e3C o m p a r i s o no n s e r u ma n t i o x i d a t i v e c a p a c i t y i nd i f f e r e n t g r o u p s项目I t e m s对照组C O N抗生素组A n t i过氧化氢酶组C A TC A T1C A T2C A T3标准误S E MP值P-v a l u e过氧化氢酶C A T/(U/m L)2.21b3.25a3.05a3.17a2.95a0.128<0.001超氧化物歧化酶S O D/(U/m L)26.3b32.2a30.6a33.0a34.5a0.8760.001谷胱甘肽过氧化物酶G P x/(U/m L)43248746747948525.250.768丙二醛M D A/(n m o l/m L)2.68a1.77c2.11b2.12b1.91b c0.065<0.001蛋白羰基P C O/(n m o l/m L)0.43a0.28c0.35b0.32b0.32b0.017<0.001 8-羟基脱氧鸟苷8-O H d G/(p g/m L)27.5a20.7b23.2b21.3b23.1b1.4260.0202.3盲肠微生物分析各试验组盲肠微生物分析见图1㊂图1A显示了各试验组盲肠微生物门水平数值,包括厚壁菌门(F r i m i c u t e s),分布范围在74.6%~82.6%(P<0.001);拟杆菌门(B a c t e r o i d e t e s),12.2%~14.0% (P=0.662);变形菌门(P r o t e o b a c t e r i a),0.5%~1.4%(P=0.002);放线菌门(A c t i n o b a c t e r i a), 1.4%~2.8%(P<0.001);其他菌门,1.5%~ 7.9%(P<0.001)㊂与C O N组相比,C A T各剂量组变形菌门的数量显著增加(P<0.05)㊂与A n t i 组相比,C A T各剂量组厚壁菌门数量显著减少(P<0.05),其他菌门数量增加(P<0.05)㊂C A T9801中 国 畜 牧 兽 医51卷各组之间门水平微生物差异不显著㊂图1B 为各组盲肠微生物属水平分布㊂其中,罕见小球菌属(S u b d o l i gr a n u l u m ),分布范围在10.9%~15.4%(P =0.056);瘤胃球菌属(R u m i n o c o c c u s ),5.2%~8.0%(P =0.067);乳杆菌属(L a c t o b a c i l l u s ),6.8%~15.2%(P <0.001);拟杆菌属(B a c t e r o i d e s ),10.7%~18.6%(P =0.142);粪杆菌属(F a e c a l i b a c t e r i u m ),6.2%~14.1%(P <0.001);梭菌属(C l o s t r i d i u m ),3.9%~11.8%(P <0.001);丁酸球菌属(B u t yr i c i c o c c u s ),0.5%~1.5%(P =0.052);链球菌属(S t r e p t o c o c c u s ),2.3%~2.8%(P =0.719);双歧杆菌属(B i fi d o b a c t e r i u m ),1.2%~2.3%(P =0.682);嗜热菌属(D e f l u v i i t a l e a ),0.38%~0.41%(P =0.546);其他菌属(o t h e r s ),25.9%~31.9%(P =0.149)㊂与C O N 组相比,C A T 各剂量组乳杆菌属和粪杆菌属显著增加(P <0.05),但是梭菌属显著降低(P <0.05)㊂C A T 各剂量组之间以及与A n t i 组间盲肠属水平微生物的差异均不显著(P >0.05)㊂图1 各组盲肠微生物的门水平(A )和属水平(B )分析F i g .1 A n a l y s i s o f c e c a lm i c r o b e a t t h e p h y l u m (A )a n d g e n u s l e v e l (B )i nd i f f e r e n t g r o u ps 2.4 盲肠微生物脂类代谢物分析试验各组盲肠微生物脂类代谢物比较分析见表4㊂由表4可知,与C O N 组相比,C A T 各剂量组盲肠内容物中乳酸和乙酸显著增加(P <0.05),但是戊酸含量显著降低(P <0.05);C A T 2和C A T 3组异戊酸含量显著降低(P <0.05),总短链脂肪酸显著增加(P <0.05);C A T 2组支链脂肪酸显著增加(P <0.05);与A n t i 组相比,C A T 各剂量组乳酸和乙酸显著提高,戊酸显著降低(P <0.05)㊂另外,C A T 2组乳酸和支链脂肪酸均显著高于C A T 1组(P <0.05)㊂表4 试验各组盲肠内容物短链和支链脂肪酸比较分析T a b l e 4 C o m p a r i s o no n c e c a l l i p i dm e t a b o l i t e s i nd i f f e r e n t g r o u p s μm o l /g 项目I t e m s 对照组C O N抗生素组A n t i过氧化氢酶组C A TC A T 1C A T 2C A T 3标准误S E MP 值P -v a l u e乳酸L a c t i c a c i d 5.03c4.59c7.56b 8.24a8.11a b 0.127<0.001乙酸A c e t a t e 46.4b36.2c51.7a53.4a56.6a1.113<0.001丙酸P r o p i o n a t e 19.6a b17.1b20.8a b22.2a21.7a1.0400.021丁酸B u t y r a t e 14.5a b12.4b16.3a b17.2a b16.8a b1.0720.037戊酸V a l e r a t e6.57a 5.28b4.36c4.19c4.08c 0.205<0.001异丁酸I s o b u t y r a t e 3.934.653.924.233.970.2910.325异戊酸I s o v a l e r a t e 6.02a5.99a5.60a b4.84b4.75b0.2340.001支链脂肪酸B C F A7.95b c6.94c8.41b c11.50a 9.03b0.437<0.001总短链脂肪酸T o t a l S C F A87.6b85.9b95.4a b103.0a107.0a 3.2230.0019013期张文翔等:过氧化氢酶对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁盲肠微生物及代谢物的影响2.5盲肠微生物胺类代谢物比较分析试验各组盲肠微生物胺类代谢物比较分析见表5㊂由表5可知,与C O N组相比,C A T各剂量组盲肠内容物甲胺㊁色胺㊁腐胺㊁尸胺和总胺的含量均显著降低(P<0.05);C A T2和C A T3组亚精胺含量显著降低(P<0.05)㊂与A n t i组相比,C A T各剂量组的甲胺㊁色胺㊁腐胺㊁尸胺和总胺均显著降低(P<0.05)㊂C A T剂量效应比较分析显示,C A T2和C A T3组腐胺㊁尸胺和总胺含量显著低于C A T1组(P<0.05)㊂各组间酪胺和氨态氮均无显著差异(P>0.05)㊂表5试验各组盲肠含氮代谢物比较分析T a b l e5C o m p a r i s o no n c e c a l n i t r o g e nm e t a b o l i t e s i nd i f f e r e n t g r o u p s项目I t e m s对照组C O N抗生素组A n t i过氧化氢酶组C A TC A T1C A T2C A T3S E MP值P-v a l u e甲胺M e t h y l a m i n e/(μg/g)7.71a7.44a5.53b4.64b5.41b0.237<0.001色胺T r y p t a m i n e/(μg/g)17.8a17.3a12.0b10.6b10.9b0.546<0.001腐胺P u t r e s c i n e/(μg/g)227a216a165b123c117c9.482<0.001尸胺C a d a v e r i n e/(μg/g)505a460a352b296c325b c12.63<0.001酪胺T y r a m i n e/(μg/g)19.717.015.915.716.31.0800.165亚精胺S p e r m i d i n e/(μg/g)33.5a30.3a29.5a22.6b23.7b1.206<0.001精胺S p e r m i n e/(μg/g)20.7a b20.6a b21.3a18.2b18.6a b0.7580.028总胺T o t a l a m i n e s/(μg/g)831a769b598c487d513d14.93<0.001氨态氮N H3-N/(m g/g)1.181.271.201.241.270.0380.3243讨论本研究中,3个C A T组(100㊁150和200U/k g)试验鸡的终末体重㊁平均日增重和平均日采食量均显著提高,且料重比显著降低,表明C A T能够改善肉鸡的同化作用和生长性能㊂从理论上,C A T是一个非常有潜力的抗氧化添加剂,但是这方面的研究刚刚起步,报道甚少㊂L i等[12]报道,断奶仔猪饲喂外源性C A T(120U/k g),35日龄后,料重比显著降低,日增重和日采食量有增高趋势,但没有达到显著水平㊂另外,本研究中这些生产性能方面的数据与A n t i组比较差异不显著,表明C A T具有与抗生素类似的促生长效果,但是此方面尚无报道,该效果有待后续研究验证㊂本研究中抗氧化能力分析显示,C A T组的血清S O D和C A T活性显著高于C O N组,且与A n t i组差异不显著;同时,饲粮中添加C A T显著降低了血清蛋白质㊁D N A和脂类的氧化产物,包括P C O㊁8-O H d G和M D A,但是C A T组对P C O和8-O H d G 的降低效果没有达到A n t i组同样的效果;这些数据表明饲粮中添加C A T对肉鸡的抗氧化能力有显著的提高作用㊂类似地,C A T组显著降低了乌苏里貉血清中尿素氮㊁脂多糖和肿瘤坏死因子α,显著增加了血清免疫球蛋白A㊁免疫球蛋白G[7]㊂饲粮中添加C A T显著提高了肉鸡㊁母猪和仔猪初乳肝脏和血清C A T活性㊁总抗氧化能力㊁S O D和G P x活性,降低了M D A含量[8-10,13]㊂但是,在脂多糖应激模型中,饲粮中添加C A T仅对血浆G P x活性有显著的提高作用,对血清C A T活性㊁总抗氧化能力㊁S O D 活性和M D A含量无显著效果[12]㊂可见,C A T应对病原毒素如脂多糖的能力尚有欠缺㊂这也与本研究一致,即C A T组的抗氧化能力多数指标亦未达到A n t i组同等水平㊂肠道微生态对畜禽健康㊁生产性能和产品品质具有重要调控作用[14-16]㊂本研究中,饲粮处理导致盲肠门水平微生物存在显著性差异的有厚壁菌门㊁变形菌门和放线菌门;其中,C A T组的变形菌门显著高于C O N组㊂属水平比较分析显示,乳杆菌属㊁粪杆菌属和梭菌属在组间有显著性差异,其中C A T 组乳杆菌属和粪杆菌属显著高于C O N组,而梭菌属显著低于C O N组㊂乳杆菌属和粪杆菌属多为发酵有益微生物,而梭菌属多属于条件性致病菌[17-19]㊂因此,本研究中这些盲肠微生物数据表明,饲粮中添加C A T对肉鸡肠道微生态具有有益调控作用㊂关于C A T对肠道微生物菌群的影响鲜有报道㊂在呕吐毒素诱导的肉鸡模型中,饲粮中添加C A T显著增加了有助于肠道抗氧化和形态学的微生物,包括乳酸杆菌㊁厌氧菌和厌氧杆菌;降低了有害菌群,如变形杆菌㊁伽马杆菌和肠杆菌[20]㊂Z h o u等[21]报道1901中国畜牧兽医51卷饲喂高表达C A T和S O D的益生菌能降低肠炎模型小鼠肠道活性氧和提高维持肠道稳态的重要微生物㊂这种通过益生菌产生抗氧化酶针对性地解决肠道炎症的思路,在畜禽健康养殖方面值得探讨㊂肠道有益细菌发酵碳水化合物产生的代谢物为短链脂肪酸,主要包括乳酸㊁乙酸㊁丙酸㊁丁酸和戊酸[22]㊂短链脂肪酸具有为机体提供能量㊁调节机体免疫㊁调控肠道细胞代谢㊁维持肠道电解质平衡并促进矿物质吸收利用和改善肠道菌群结构等多种生理功能[23-24]㊂本研究中,C A T组乳酸㊁乙酸㊁丙酸以及总短链脂肪酸含量显著提高,表明饲粮中添加C A T 促进了肠道菌群对碳水化合物的发酵,对机体的肠道微生态㊁营养和健康均具有潜在的调控作用㊂更重要的是,本研究中饲粮中添加C A T显著降低了盲肠胺类代谢物,包括甲胺㊁色胺㊁腐胺和尸胺㊂胺类物质是氨基酸代谢的残渣,是肠道主要的有害物质,这些残渣不仅有直接的毒理作用,还导致有害菌群的扩增,严重危害机体健康[25]㊂关于C A T以及抗氧化酶类添加剂对机体肠道微生物代谢的影响鲜有报道,本试验结果表明,C A T可以作为一种抗氧化酶类添加剂应用于动物生产,但是未来仍需要更多㊁更深层次的探讨㊂4结论本试验条件下,饲粮中添加150~200U/k g的C A T可显著提高肉鸡平均日增重㊁平均日采食量㊁血清C A T和S O D活性;增加盲肠中有益菌群如变形菌门㊁乳杆菌属和粪杆菌属的数量,提高盲肠中乳酸㊁乙酸㊁异戊酸以及总短链脂肪酸的含量,降低甲胺㊁色胺㊁腐胺㊁尸胺和总胺的含量㊂参考文献(R e f e r e n c e 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多元有机稀土抗菌促生长剂在畜牧业中的应用研究
禽水产养殖业上的应用研究表明： 它可 以促进猪 的生长发育 、 提高蛋鸡的抗病能力、 提高产蛋率、
淀饲料中的毒素和抗 营养 因子有关 。因为稀土 离子是 带正 电荷 的金 属离子 ， 与带负 电荷 的 阴 它
一
１ 一 ２
中国饲料添加剂
２０ ０７年第 ７期 （ 总第 ６ 期 ） １
ｅ ｒｈ ｇ ｏ ｈ ｐｒｍｏｅ ｎ ｔ ｅ ａ ｉ ｌ ｅ ｄ ｎ ｅ ｄｎｇ ａｅ ｉｔｏ ｕ ｅ ｒｉｕｌｒｙ ｉ ｅｐａ ｅ ．Ｉ ａ ｔ ｒｗｔ ｏ ｔ ｒｏ ｎ ｍａ ｆｅ ｓａ ｄ ｆｅ ｉ ｒ ｎ ｒ ｄ ｃ ｄ ｐａ ｔ ａｌ ｎ ｔ ｐ ｒ ｔ ｈ ｃ ｈ ｉ ｈ ａ ｉ ｆｐ ｐ ｌｒｚ ｔ ｎ ａ ｄ ａ ｐ ｉａｉ ｎ ｏ ｈ ｌｉｒ ａ ｉ ａ ｅ ｅ ｒｈ ｇｏ ｈ ｐ ｏ ｔｒｉ ｅ ｓ ｔｅ ｂ ｓｓ ｏ ｏ ｕ ａ ｉａ ｉ ｎ ｐ ｌｃ ｔ ｔ ｅ ｍｕｔｏ ｇ ｎ ｃｒ ａ ｔ ｒ ｗｔ ｒ ｍｏ ｅ ｎ ｔ ｏ ｏ ｆ ｒ ｈ ｎ ｍａ ｆ ｅ ｓａ ｄ ｆｅ ｉｇ． ａ ｉ ｌ ｅ ｄ ｎ ｅ ｄｎ Ｋｅ ｏ ｄｓ ｍｕ ｔ ｒａ ｉ ａ ｅ ｅ ｒｈ ｇｏ ｈ ｐ ｏ ｔｒ ｕ ｔ ｎ；ｈａ ａ ｔｒｓｉ ｙ Ｗ ｒ ： ｌ ｏ ｇ ｃ ｒ ａ ｔ ｒ ｗｔ ｒ ｍｏ ｅ ；ｆ ｃｉ ｃ ｒ ｃｅ ｔｃ；ｍｅ ｈ ｎ ｓ ａ — ｉ ｎ ｒ ｏ ｉ ｃ ａ ｉｍ ｐ ｐｙ ｎ ｆ ｃ ｌｉ ｇ ｅ ｅ ｔ
徐淑倩 ， ： 等 多元有机稀土抗菌促生长剂在畜牧业 中的应用研究
一 １ １一
多 元 有 机 稀 土 抗 菌 促 生 长 剂 在
畜 牧 业 中 的 应 用 研 究
徐 淑倩 刘树年 李 跃 李 敬
（ 化学 工业 （ 国 ） 全 饲料 添加剂 工程技 术 中心 ， 合反应而沉 嗜碱 性细胞 的合成 及 分 泌激 素 的功 能有 抑 制 作 淀下 来 ， 而消 除 了饲 料 中的抗营养 因子及 阴离 用 。 从 子毒 素等对 畜禽 的不利 影响 ； 土离子 还具有粘 稀 稀 土 中的 Ｓ ｍ¨作 用 于大 白 鼠， 甲状 腺 结 使 着性 ， 别 易于 被 纤维 素 吸 咐 ， 特 这样 便 集 中了正 构 和 Ｔ 、。 。Ｔ 浓度 都发生 变化 。 电荷 ， 而提 高 了肠 液 的 电位差 ， 而又 络合 大量 ２７ 多元有机稀 土 的抗 菌消炎作 用 从 ． 的阴离子毒素和抗营养 因子并随纤维素排出体 ２７ １ 稳定细胞膜及溶酶体膜 ．． 外； 同时又相 对地 减少 了纤维素对 其他 营养物质 多元 有机稀 土 离子 与 细胞 磷脂 和肽 链上 的 的吸 咐所带 来 的损 失 。所 以 ， 畜禽饲 料中添加 羧基有较 强 的亲和力 ， 在 因此能稳定 地 附着 在细胞 多元 有 机稀 土 抗 菌促 生长 剂 ， 可改 善饲 料 品质 、 膜及 溶 酶 体 膜 上 ， 而抑 制 溶 酶 体 释 放 炎症 物 从 提高 饲料 利 用 率 ， 而 提 高畜禽 的生产 性 能 ， 从 并 质 ， 面炎症减 轻 ， 使创 加速 愈合 。 可使用 户获 取显著 的经 济效益 。 ２７２ 多元 有机稀 土具有类 似 肾上腺 皮质 激素 ．． 的作用 ２ ３ 多元有 机稀 土的 “ 级钙 ” 用 ． 超 作 在 生物 体 内 ， 离 子 对 于 维 持 细 胞 正 常 功 钙 多元 有机稀 土 离子 能抑 制 血 液 中细 胞 成分 能 、 肉收缩 、 肌 信息传 递 、 神经 冲动传导及 骨髓 的 的增殖及 液体从 血管 中的过度渗 出 ， 而促进 肉 从 形 成等 方面 均起着 十分重要 的作用 ， 而稀 土离子 芽组 织 的生 长及 上 皮 组 织 的代 谢 ， 进炎 症 愈 促 因与钙 离子 性质及半 径相 似 ， 土离子 的电荷一 合 。 稀 般 是正 三 价 （ Ｅ¨ ） 高 于 钙 离 子 （ ａ ） 因而 ２７ ３ 对 细菌 的抑 制作用 Ｒ ， ｃ“ ， ． 离 子势 大 ， 因此人们 称稀 土 离子 为 “ 超级 钙 ” 从 ， 适 当浓度 的稀土能够 抑制细 菌 的生长 ， 防止 而使多元有机稀土抗菌促生长剂具有“ 超级钙” 炎症扩散 。 ２ ８ 多 元有机稀 土对神 经系统 的作用 ． 的作用 。 ２４ 多元有机稀土可作为动物生理激活剂 ． Ｄ ｒ ｉ等 曾报道 ， ｏｖ ｏｎ 将氯化镧和低 渗阿拉伯 稀 土可作 为动 物生理 激活剂 ， 激活 动物体 内 糖溶液一 起注人 大 鼠颈动 脉 ， 发现 镧离子 可通过 大 鼠小动 脉血 管 内皮 细胞 的 紧密 连接 处 而 进 入 多种酶 的 活性 。稀 土离 子 还 具 有 特 殊 的 ４ ｆ电 子， 能产 生一 系 列 的光 、 磁生 物 效应 ， 土元 脑部 。氯化镧 可拮 抗 去 甲 肾上腺 素对 脑 部 糖原 电、 稀 素在动 物体 内可充 当金属 活化剂 ， 激活 多种酶 系 磷酸化 酶 的激 活作用 ， 影响鸡脑 突触小 体对 神 可 统 ， 高多种 酶 的活性 （ 淀 粉酶 、 白酶 、 肪 经递质 的摄取 与 释放 。氯 化 镧对 大 鼠的神 经末 提 如 蛋 脂 酶等 ） 从 而提 高 动 物对 饲 料 的消 化 吸收 率 ， ， 促 梢摄取 谷氨 酸有 非竞 争 性抑 制作 用 。镧 可 明 显 进动物 生长 。 因此 ， 以将多元 有机稀 土抗菌促 抑制 大 鼠脑部游 离神经末 梢前膜 的钙离子 通道 。 可 ． 生长剂 作为 一种很好 的生 理激 活剂 ， 促使 动物所 ２９ 对 皮肤 的作 用 多元 有机稀 土化合物 如氨基 酸稀土 、 氯化稀 摄 人 的营养 物质得 以充分 的消化 和吸 收。 ２ ５ 多元有 机稀 土对消 化系统 的作用 ． 土等涂抹 于人 体或动物破 损皮肤 ， 其作用 在于 收 稀 土有 促进保 护效应 。大 量的实验 表 明： 多 敛伤 口、 消炎抗 菌 。另外 由稀土 配制 的稀 土消 炎 元 有机 稀土 可促进 细胞 的活性 、 胰 岛素细胞 的 痛在 对小 鼠的实验 中有抗 炎 、 对 镇痛 的明显 药效 ， 分泌有 调节 作用 、 胃粘 膜起保 护作用 。 对 而 副作 用 比临床 的消炎 痛小 。 从组织形态学观点来分析 ， 稀土化合物治愈 ２ ６ 多元有机��
黏细菌的筛选及其抗菌活性的初步分析(河南农业科学)
收稿日期:2007211215作者简介:刘冰花(19702),女,陕西西安人,讲师,硕士,主要从事生物化学教学及生物制药研究。
黏细菌的筛选及其抗菌活性的初步分析刘冰花(成都大学医护学院,四川成都610015)摘要:为了从黏细菌中筛选生物活性物质,以兔粪、腐木为原料,采用选择培养基、加热、冷冻等方法分离到3株黏细菌;重点研究了1号菌,发现1号菌胞外物、胞内物均具有抗菌活性,且抗菌谱不同,其中胞外物对G +细菌有较强的抑菌作用,胞内物对部分G +细菌及G -细菌有抑菌作用,两者对真菌均无抑菌作用。
将1号菌胞外物进行薄层层析和硅胶柱层析,得到了抑制放线菌生长的单一组分。
关键词:黏细菌;筛选;抗菌活性;纯化中图分类号:Q939.15 文献标识码:A 文章编号:100423268(2008)0420111204Screening of Myxobacteria and Preliminary Analysis ofIts Antibiotic ActivityL IU Bing 2hua(School of Medicine and Nurse ,Chengdu University ,Chengdu 610015,China )Abstract :In order to screen the bioactive compound from Myxobacteria ,three strains of Myxobacteria were obtained from dung of hare and rotting wood by means of selective medium ,heating treatment and freezing treatment ,etc.The antibiotic of the No.1strain intracellular and exterior was detected by filter paper method.Both the interior and the exterior matter of the No.1strain had the antibacterial activity ,showing different antibiogram.The intracellular matter inhibited both the growth of Gram 2positive bac 2teria and some Gram 2negative bacteria ,such as Escherichia coli ,but the bacteriostatic activity to Gram 2negative bacteria was more powerful.Neither the interior nor exterior matter of the No.1strain cell in 2hibits fungus.The antibiotic of the No.1strain extracellular was isolated by thin 2layer chromatography (TLC )and silica gel column chromatography.An anti 2S treptomyces microf lavus active component was obtained by purification with silica gel column chromatography.K ey w ords :Myxobacteria ;Screen ;Antibiotic activity ;Purification 黏细菌是最高等的原核生物类群,是以滑动方式运动的具有复杂的多细胞行为的革兰氏阴性细菌[1]。
等离子体活化水冰对纯培养及三文鱼片表面单增李斯特菌杀菌效果研究
郑州大学学报(理学版)J.Zhengzhou Univ. ( Nat.Sci.Ed.)第51卷第3期2019年9月Vol. 51 No. 3Sep. 2019等离子体活化水冰对纯培养及三文鱼片表面单增李斯特菌杀菌效果研究焦浈,朱育攀，许航博，马若男(郑州大学物理工程学院河南省离子束生物工程重点实验室 河南郑州450052)摘要：研究等离子体活化水冰(PAW-icc )对纯培养以及人工接种于三文鱼片表面单增李斯特菌的杀菌效果$并通 过发射光谱检测等离子体中主要活性物质，测定PAW-ice 氧化还原电位、pH 值和电导率$同时检测染菌三文鱼片 在贮藏过程中总挥发性盐基氮(TVB-N)含量和pH 值的变化•结果显示:与无菌水冰(sterile water-icc, SW-icc)相 比$ PAW-icc 对单增李斯特菌纯培养杀菌效果显著，可以使细菌降低1~3个.CFU/mL 值,杀菌效率取决于PAW 制备时间、制备体积以及PAW-icc 处理时间；此外，在4 T 贮藏5天过程中，与SW-icc 相比，PAW-icc 可以有效抑制 染菌三文鱼片表面单增李斯特菌生长并减缓三文鱼片TVB-N 值和pH 值上升•此结果表明PAW-ice 对三文鱼片表 面单增李斯特菌的控制具有良好应用前景.关键词：等离子体活化水冰；单增李斯特菌；三文鱼片；杀菌效果；保鲜中图分类号：0539, S983 文献标志码：A 文章编号：1671-6841( 2019) 03-0097-07DOI ： 10. 13705/j.issn.1671-6841. 20190220引言食物的品质极易受微生物影响，单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes , L. monocytogene),简 称单增李斯特菌，是国际上公认的四大食源性致病菌之一*1+,该菌在自然界中分布广泛，容易污染食品,其 中在水产品及肉制品中的污染最为严重*2+ .三文鱼,又名大马哈鱼或鮭鱼，因其肉质鲜美,营养价值高,口感好，是制作刺身的良好材料，也是最成功 的水产养殖品种之一*3+,但三文鱼容易因微生物酶和脂质自氧化而变质*4+ .目前最常见的三文鱼保鲜技术是 低温、辐照、保鲜剂、真空包装等*5+ .在这些保鲜技术中,冰的贮藏被广泛应用,除了经济效益以外,冰还能提 供低温和高湿环境，然而细菌在普通自来水冰中不能被有效灭活*6+ .因此,改进三文鱼冰鲜贮藏方法是一个 亟待解决的问题.大气压低温等离子体作为一种新型的物理杀菌技术，已被广泛应用于食品安全领域.等离子体活性成分 复杂，其中活性氧(reective oxygen species , ROS )被认为是杀菌的主要成分，它可以对细胞DNA 、蛋白质、脂 质和糖类等生物大分子造成氧化损伤，从而导致细胞死亡*7+ .此外，研究发现大气压低温等离子体中的电子、 激发态原子、紫外线、自由基等成分在液面下可以和水分子相互作用产生更多种类的活性物质,这种被等离 子体处理后富含活性成分的水溶液被称为大气压低温等离子体活化水(plasma-activated water , PAW )* 近 年来,PAW 对多种食源性致病菌的杀灭效果也逐渐被发现*_0+ ,具有高效、简单、便携、安全等特点,极有可 能替代和辅助传统食品杀菌技术.随着对PAW 杀菌研究的不断深入，人们普遍认为PAW 的杀菌能力归因于 溶液的高氧化还原电位(oxidation-reduction potentia., ORP )、低pH 值以及过氧化氢的积累*8-101 EAW 在低温 环境下制备成的冰被称为等离子体活化水冰(PAW-ice )，这是一个全新的概念.与自来水冰相比,PAW-ice 不但 具有冰的特性，可以提供低温环境，而且还具有PAW 的特性，能够杀灭多种细菌.因此,PAW-ice 有望成为一种 全新的冰鲜杀菌技术.据文献所知，目前还没有关于PAW-icc 在水产品杀菌保鲜方面的报道.收稿日期：2019-01-25基金项目：国家自然科学基金项目(11605159,11704343)；河南省科技攻关项目(182102311115).作者简介：焦浈(1976#),女,江苏宜兴人,教授,主要从事辐射生物学效应研究,E-mail ： jiaohen@ zzu.zdu.zn ；通信作者:马若男 1989—)，女，河南郑州人，讲师，主要从事等离子体生物医学研究，E-mail ： mrn19890324@ .98郑州大学学报（理学版）第51卷因此，本文首次探究PAW-ice对纯培养及接种于新鲜三文鱼片表面单增李斯特菌的杀灭效果.首先研究不同制备体系PAW-ice的杀菌效率和ORP、pH值、电导率等物理化学特性;并通过发射光谱技术检测等离子体中主要激发态活性物质；同时检测染菌三文鱼片在冷藏过程中总挥发性盐基氮（total volatile basic nitrogen,TVB-N）含量和pH值的变化.1实验材料与方法1.1实验材料1.1.1材料准备实验所用菌株为单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes,L.monocytogene'）,菌种购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌株编号为ATCC19115.供试材料为新鲜三文鱼.三文鱼在当地家乐福超市购买,运回实验室后放置于4T的冰箱储藏,直至使用.1.1.2细菌培养与三文鱼接种细菌培养:取0.1mL甘油保藏的单增李斯特菌接种到30mL胰蛋白胨大豆肉汤（tryptone soya broth,TSB）培养基中，37°C、180rpm摇床培养24h,之后平板划线，37°C恒温箱倒置孵育24h.挑取单菌落到30mL的TSB液体培养基中,37C、180rpm摇床培养16h，测定0D值，稀释若干梯度后，最终得到菌液浓度为1P106CFU/mL,以备下面处理菌悬液和浸染三文鱼片使用.三文鱼片表面接种单增李斯特菌:将三文鱼从冰箱中取出，并切成约为2cmX4cm的片状（约5g）.并置于超净工作台紫外灯管下正反面照射20min.然后将三文鱼片置于无菌培养皿中,在其两侧均匀涂抹1mL 上述准备好的菌悬液,置于超净工作台中充分晾干，每侧30min.1.1.3大气压低温等离子体发生装置及PAW-ice的制备大气压低温等离子体发生装置:本研究采用一种空心电极介质阻挡放电装置产生大气压低温等离子体.该装置由高压交流电源（电压峰值为25kV,频率为20kHz）、铜制电极和绝缘介质石英管构成.本实验所用工作气体为空气，气体流速为300slm,放电电压为100kV,放电电流为0.48mA.PAW-ice制备:将等离子体射流末端置于无菌水液面下20mm处进行放电处理制备PAW,然后再用改良过的制冰机将PAW制成PAW-ice.PAW-ice1是100mL无菌水经等离子体活化30min后制成冰；PAW-ice2、PAW-ice3分别是500mL无菌水经等离子体活化30min、60min后制成冰.1.2PAW-ice处理1.2.1PAW-ice处理纯培养的单增李斯特菌悬液取0.5mL上述准备好的菌悬液分别与9.5mL的SW-ice、PAW-ice1、PAW-ice2和PAW-ice3分别作用0min、5min、15min、30min,其中SW-ice处理组设为对照组.1.2.2PAW-ice处理染菌三文鱼片因处理三文鱼片所需的冰较多,考虑到PAW-ice的制备成本,选用PAW-ice2用于后续实验.将人工染菌的三文鱼片分别置于1500mL PAW-ice（分3批制备，每批500mL）和SW-ice上，每组5片，置于4C保存5天，贮藏期间保证冰盒中的冰每天更换一次，其中SW-ice处理组设为对照组.1.3发射光谱诊断等离子体中的活性物质发射光谱法（opticel amission spectrum,OES）是诊断等离子体中活性物质的常用方法*101.采用光谱仪（AvvSpee-2048-8,Avvntes,荷兰）检测等离子体在100-900nm波长范围内的发射光谱信号.1.4PAW-ice主要理化特性测定本研究通过测定0RP、pH值和电导率来评估PAW-ice的物理化学特性.将制备好的PAW-ice在50C水浴锅中快速融化，采用pH/ORP测量仪（Mettler-Toledo,LE501,瑞士）和电导率仪（DDB-303A,上海雷磁）对刚制备好的PAW-ice的0RP、pH值及电导率进行即时检测.1.5PAW-ice的杀菌效果测定采用平板菌落计数法对细菌总数进行测定.纯培养单增李斯特菌杀菌效果评价:PAW-ice对细菌悬液处理结束后立即将混合物置于40C水浴锅中融化2min，取100-L混合液用无菌水进行稀释涂布、计数.每组3个平行实验，结果以菌落总数的对数la CFU/mL表示.第3期焦浈，等：等离子体活化水冰对纯培养及三文鱼片表面单增李斯特菌杀菌效果研究99人工染菌三文鱼片杀菌效果评价:PAW-ice处理染菌三文鱼片5天，期间每天同一时间点取5g三文鱼片于无菌均质袋中,加入45mL无菌水,用均质器处理3min,制成匀浆液，然后取100-L匀浆液用无菌水进行稀释涂布、计数海个时间点5个平行实验,结果以菌落总数的对数'CFU/g表示.1.6三文鱼总挥发性盐基氮(TVB-N)测定总挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)是评价鱼类品质的重要指标.本实验采用Lin等的方法测定三文鱼的TVB-N含量*11+.每个时间点5个平行实验,结果以mg N/100g表示.1.7三文鱼pH测定取5g三文鱼片剪碎,加入90mL蒸馏水漩涡震荡15min后静置5min,过滤后测定滤液pH.1.8统计学分析实验指标进行3次独立重复实验.数据以平均值土方差表示,并采用分析软件SPSS17.0进行数据处理.冰的ORP、电导率、pH值、纯培养单增李斯特菌数以及同一处理组在不同贮藏时间的三文鱼表面单增李斯特菌数、鱼片pH值、TVB-N值数据的分析方法为Student-Newman-Keua；s法,P,0.05表示数据间具有显著性差异；不同处理组在相同贮藏时间的三文鱼表面单增李斯特菌数量、鱼片TVB-N值、pH值数据的分析方法为配对'检验(paired-sample'test),显著性差异表示为&P,0.05、**P,0.01、***P,0.001.实验数据图均采用Origin8.0作图.2结果与讨论2.1发射光谱诊断等离子体活性成分结果OES是诊断大气压低温等离子体中激发态活性成分的常用技术,可以根据谱线的位置分析得到粒子的种类,从而判断等离子体主要成分•如图1所示,以空气为气源的大气压低温等离子体激发时,发射光谱以位于300〜420nm的N*第二正带系(9——4$—)、400〜520nm的N；第一负带系(4*.—P*.)、560〜730nm的N*第一正带系(43-g—B3-u)、730〜900nm的氮原子(N)和777nm、844nm的氧原子(O)为主*12+•其中激发态N与O主要通过高能电子碰撞N*与O*解离产生的,途径如下：e+N*'N( 4S)+N( 2D)+e；e+O*'0(3P)+O(1D)+e*13+.其次,在311〜316nm附近也检测到羟基自由基(OH)的谱峰,推测OH很可能是通过高能电子碰撞水蒸气解离产生的,途径为e+H*0'H+OH+e*14+.图1空气等离子体放电的发射光谱图•Fig.1End-on optical emission spectre of air plasma discharoe2.2PAW-ice物理化学性质检测结果强氧化性(高ORP值)可以破坏细胞,导致细菌的氧化损伤*10+,因此ORP是评估PAW-ice是否具有杀菌能力的一个重要指标•如图2(a)所示,最初SW-ice的ORP为187mV,经过等离子体处理后,PAWOce1、PAWOce2、PAW-ice3的ORP分别显著上升至539mV、571mV、575mV( P,0.05),呈现强氧化性.其次，随着PAW制备时间延长,PAW-ice3的ORP仅略高于PAW-ice2,两者并没有显著差异(P〉0.05),这说明对于500mL制备体系而言,PAW-ice中的氧化性物质在等离子体处理30min后就会达到饱和水平.100郑州大学学报（理学版）第51卷如图2（ b ）所示，SW-ice 的pH 值为6.72,经过等离子体处理后，PAW-ice1、PAW-ice2、PAW-ice3的pH 值分别显著下降至2.32、2.91、2.60（P , 0.05）.推测pH 降低主要是由于大气压低温等离子体中带正电荷 的离子与水分子发生置换反应产生H U （ MJH 2O ' H 2OJM ； H 2OJH 2O ' H + （ H 2O ） + ・OH ）*15 +或者由于以空 气为工作气体产生硝酸和亚硝酸等酸性物质*14 + .对于相同的等离子体处理时间（PAW-ice1、PAW-ice2）,随 着PAW-ice 制备体积增大,PAW-ice 的pH 值显著提高（P ,0. 05）,说明增大制备体积会导致酸性物质浓度 降低；对于相同的制备体积（PAW-ice2、PAW-ice3）,随着等离子体处理时间的延长,PAW-ice 的pH 值显著降 低（P ,0. 05）,说明酸性物质含量随着处理时间的增加而累积.电导率能反应溶液传导电流的能力,溶液中的带电离子越多,电导率越大*@+ •如图2（ c ）所示,与SW-ice （电导率为1.96 -S/cm ）相 比，PAW-ice1、PAW-ice2、PAW-ice3的 电导率均显著 上 升至2.8 mS/cm 、 0. 58 mS/cm 、1. 6 mS/cm （ P ,0. 05）.此结果表明大气压低温等离子体在PAW-ice 中产生大量带电离子,推测 这些带电离子可能是由于水分子和自由电子或带电粒子相互作用产生RONS 或其他活性成分,在PAW-ice 杀菌过程中发挥重要作用P 寸于相同的制备体积,PAW-ice3电导率明显高于PAW-ice2 （ P , 0. 05 ）,说明随着 处理时间的增加，带电离子在PAW-ice 中不断积累；对于相同的制备时间，PAW-ice1电导率明显高于 PAW-ice2（P ,0. 05）,说明随着处理体积的增大，PAW-ice 中的带电离子浓度降低.7 6 5 4 3 21A O O O O O O O OO O O O O O 7 6 5 4 3 2 1SW-ice PAW-icel PAW-ice2 PAW-ice3SW-ice PAW-icel PAW-ice2 PAW-ice32.8.4.O 62.843.Z Z Z L L 00(-，旨必旦/船曲吟C 0.0D B 0A 〜D 表示不同处理组数值具有显著性差异（P , 0. 05）.图2 不同处理组氧化还原电位% pH 、电导率的数值Fig.2 The values of ORP , pH and electrical conductivity in different groups2. 3 PAW-ice 对单增李斯特菌的杀菌效果2・3・1 PAW-ico 对纯培养李斯特菌的杀菌效果 单增李斯特菌经过不同处理组（SW-ice 、PAW-icel 、 PAW-ico2、PAW-ice3）处理不同时间（0 min 、5 min 、15 min 、30 min ）的菌落总数结果如图3所示.菌落的初始 数量为6.2 ' CFU/mL , SW-ice 处理5 min 后，菌落数量下降至6.0 ' CFU/mL.随着处理时间的延长，菌落数 量几乎维持不变（P 〉0. 05）,表明冰提供的低温环境并不能有效抑制细菌生长.但经PAW-ice 处理后的细菌 总数可以降低1〜3 ' CFU/mL ,显著低于SW-ice 组（P , 0. 05 ）,说明PAW-ice 对单增李斯特菌的杀菌效果 主要是因为PAW 具有较强的杀菌性能,而非冰提供的低温环境•对于PAW-ice2、PAW-ice3组，与细菌作用5 min 后，菌落数分别降低至5. 2 ' CFU/mL 和4. 9 ' CFU/mL , 具有显著性差异（P ，0. 05）.但随着处理时间增加,菌落总数维持不变（P 〉0. 05）.说明两者杀菌效果接近,且与 细菌作用5 min 后,PAW-ice 的杀菌成分耗尽，因此杀菌效率并未随处理时间的增加而提高.对于PAW-icel 组，细菌总量随处理时间的增加而显著下降（P , 0. 05）,在5 min 、15 min 、30 min 处的细菌 数量分别为4.7 ' CF6/mL 、4. 1 ' CF6/mL 、3. 3 ' CFU/mL.因此,PAW-ice 处理时间相同时,PAW-ice1的杀菌 效率显著高于PAW-ice2、PAW-ice3的杀菌效率（P ,0.05）.推测可能是由于PAW-ice1的pH 值与电导率明显 高于PAW-ice2、PAW-ice3（图2（b ）、（c ）），说明pH 值与电导率是评估PAW-ice 杀菌效率的重要指标.以上结果表明PAW-ice 对单增李斯特菌具有较强的杀菌效果,其杀菌效率依赖于PAW 的制备体积、制 备时间和PAW-ice 与细菌的作用时间.PAW 制备体积越小、制备时间越长，PAW-ice 处理细菌越久，PAW-ice 的杀菌效果越好,这为PAW-ice 在今后的杀菌应用提供了理论参考.鉴于研究PAW-ice 对接种于三文鱼片表面单增李斯特菌的杀菌效果需要制备大量的PAW-ice ,因此采 用大的制备体积（PAW-ice2、PAW-ice3 ）将会更加节能，并且PAW-ice2、PAW-ice3在5 min 时能够降低 1 ' CF6/mL （杀菌率为90%）,在实际应用中也是具有价值的；此外PAW-ice2与PAW-ice3的杀菌效率接第3期焦 浈，等：等离子体活化水冰对纯培养及三文鱼片表面单增李斯特菌杀菌效果研究101近，因此选用短的制备时间(PAW-ice2)将会更加节能.综合以上两点,在接下来研究PAW-ice 对接种于三文 鱼片表面单增李斯特菌杀菌效果及三文鱼片在冷藏过程中TVB-N 与pH 值的影响时均采用PAW-ice2.2. 3.2 PAW-ice 对接种于三文鱼片表面单增李斯特菌的杀菌效果 图4为两组三文鱼片在4 C 贮藏5天 过程中单增李斯特菌菌落总数的变化情况.两组三文鱼片单增李斯特菌数量初始值为2.7 a CFU/mL.随着 贮藏时间的延长,SW-ice 处理组单增李斯特菌数量显著提高(P , 0. 05 ),到第5天时,菌落总数已经达到 5. 1 ' CFU/mL.PAW-ice 处理组单增李斯特菌数量在前3天缓慢下降至2. 5 ' CFU/mL ,之后显著提高(P ,0. 05),到第5天时,菌落总数为3.6 ' CFU/mL ,远低于SW-ice 组(P , 0. 001).此结果表明,PAW-ice 对接种 于三文鱼片表面的单增李斯特菌也有很好的杀菌效果,在5天的贮藏时间内,能够有效抑制细菌增殖•处理时间/mina 〜d 表示在相同处理时间下不同处理组的杀菌效率具有显著性差异(P ，0. 05) ； A 〜D 表示在相同处理组中不同处理时间A 〜F 表示在相同处理组中不同贮藏时间的杀菌效率具有显著性差 异(P , 0.05) •在相同的贮藏时间下，PAW-ice 与SW-ice 的数据显 著性差异表示为 & 0. 05、&& P , 0.01 &&& 0.001.图4 PAW-ice 对接种于三文鱼片表面单增李斯特菌在4 °C 、5天贮藏过程中的杀菌效果Fig.4 PAW-ice inactivation efficacy against L. monocytogenesinoculated on salmon strips during storage at 4 C for 5 days图3 PAW-ice 对纯培养的单增李斯特菌杀菌效率Fig.3 PAW-ice inactivation efficacy against puracultured L. monocytogenes (L U L m S /報痪齟尿(-w .m S /報痪齟尿2. 4 PAW-ice 对三文鱼片总挥发性盐基氮(TVB-N )的影响在微生物和内源酶的作用下,蛋白质被分解为三甲胺、二甲胺、氨、氮类及其他碱性小分子物质,这些物 质统称为挥发性盐基氮(TVB-N )*16 +.三文鱼片在4 C 贮藏5天过程中TVB-N 值的变化情况如图5所示.两 组三文鱼片TVB-N 的初始值为5.77 mg N/100 g ,随着贮藏时间的延长,两组TVB-N 值均呈现上升趋势 (P ,0. 05),但PAW-ice 组TVB-N 值始终低于SW-ice 组，主要是PAW-ice 能有效抑制三文鱼表面单增李斯 特菌的增殖,从而减少微生物对蛋白质的分解•到第5天时,SW-ice 组的TVB-N 值为13.2 mg N/100 g ,而 PAW-ice 组则远低于SW-ice 组(P , 0.01),为8.43 mg N/100 g ,仍属于一级鲜度*17 +.此结果表明,PAW-ice 可以显著减少三文鱼片中TVB-N 的形成,提高三文鱼的新鲜程度.2. 5 PAW-ice 对三文鱼片pH 值的影响pH 值是评判鱼肉品质高低的重要指标之一,鱼肉的腐败程度和pH 值成正比*16 + .两组三文鱼片在4 C 贮藏5天过程中pH 值的变化情况如图6所示,随着贮藏时间的延长,样品pH 值呈现增长趋势(P , 0. 05). 结合TVB-N 的结果分析可知,这主要是由于随着贮藏时间的延长,细菌分解蛋白质产生氨和胺类等碱性物 质使pH 值升高.由于PAW-ice 起到抑制细菌繁殖的作用,使得PAW-ice 组的pH 值整体显著低于SW-ice 组 (P ，0. 001).这与庞彩霞*18 +等用银杏叶提取物处理金线鱼鱼丸后pH 值的变化结果相似•3结论人们对水产品品质和安全性的要求越来越高,目前常用的低温贮藏等方法已不能满足水产品加工保鲜 的要求.因此,本文首次提出了 一种新型冷杀菌保鲜技术#—大气压低温等离子体活化水冰(PAW-ice ),并 研究了 PAW-ice 对纯培养与接种于三文鱼片表面单增李斯特菌的杀菌效果,以及对在冷藏过程中的三文鱼 片TVB-N 及pH 值的影响.结果表明:PAW-ice 能够有效杀灭单增李斯特菌,其杀菌效率与PAW的制备时102郑州大学学报（理学版）第51卷(bn 02.N a旦/»N 出 A l 贮藏时间/天A 〜E 在表示在相同处理组中不同贮藏时间的TVB-N 值具有显著性差异（P ，0. 05） •在相同的贮藏时间下，PAW-ice 与SW-ice的数据显著性差异表示为& P ，0.05、&& P , 0.01 &&& P , 0. 001.图5 PAW-ice 对三文鱼片在4 °C 、5天贮藏过程中TVB-N 值的影响Fig.5 Effects of PAW-ice treatments on TVB-N value of ealmon strips during storage aS 4 C foe 5 days A 〜D 表示在相同处理组中不同贮藏时间的pH 值具有显 著性差异（P ，0.05 ） •在相同的贮藏时间下,PAW-ice 与SW-ice 的数据显著性差异表示为& P , 0. 05、&& P , 0.01、&&& p ,0. 001.图6 PAW-ice 对三文鱼片在4C 、5天贮藏过程中 pH 值的影响Fig.6 Effects of PAW-ice treatments on pH vvlue oO salmon strips during storage aS 4 C for 5 days 间、制备体积以及PAW-ice 处理时间密切相关;其次,PAW-ice 能够有效抑制接种于三文鱼片表面单增李斯 特菌的生长繁殖，同时显著减缓三文鱼片pH 值、TVB-N 值的升高,提高三文鱼片的新鲜程度.因此,PAW-ice 有望成为一种应用于食品安全领域的新型杀菌技术.本研究仅对PAW-ice 在水产品杀菌领域进行初步探索, 今后将对PAW-ice 杀菌机理、PAW-ice 对水产品感官品质以及营养成分的影响进一步探索,并研发适用于大 规模工业化应用的大气压低温等离子体装置,从而加快PAW-ice 在食品工业中的应用进程•参考文献：[1 ] GARNER D , KATHARIOU S. Fresh produce-associated listeriosis outbreaks , sources of concern , teachable moments , and in sights * J ]. Journal of food protection , 2016, 79( 2) : 337-344.[2:姜晨，增田泰伸，木村守，等.复配抑菌剂对单增李斯特菌的抑制作用及其保鲜效果[J ] •食品工业科技，2017, 38( @):92-97.[3] ASCHE F , ROLL K H , SANDVOLD H N , et al. Salmon aquaculture ： cempanies and increesed production [ J ] . Aquacul ture ecenomics and manaaemenS , 2013 , 17( 3) : 322-339.[4 + LERFALL J , ROTH B , SKARE E F , d al. Pre-mortem stress and the subsequen effect on flesh quality oO filletedAtlantic salmon ( Salmo salar L. ) during ice storaae [ J + . Food chemistry , 2015 , 175 : 157-165.[5:张新林，谢晶，杨胜平，等.三文鱼气调保鲜技术的研究进展[J ].食品工业科技，2016, 37(4) : 395-399.[6 + LI J B , LIN T , LU Q, d al. Changes in physicechemiccl properties and bactericidal efficiency of acidic electrolyzed water iceand avvilable chlorine deccy kinetics during storaae [ J ] . LWT-food science and technolocy , 2014, 59( 1) : 43-48.[7 + JOSHI S G , COOPER M , YOST A , eS aL Non-thermal dielectric-barier discharoe plasma-induced inactivvtion invvlvvs oxida-tivv DNA damage and membrane lipid peroxidation in Escherichia colc [ J ] . Antimicrobial agents and chemotherapy , 2011, 55 (3) : 1053-1062.[8 ] TIAN Y , MA R N , ZHANG Q , ei aL Assessmeni of the physicochemical properties and ^0x 0-1 effects of water activvted bynon-thermal plasma abovv and benesth the water surface [ J ] . Plasma processes and polymers , 2015 , 12( 5 ) : 439-449.[9 ] MA R N , WANG G M , TIAN Y , et al. Non-thermal plasma-activvted water inactivvtion of food-borne pathogen on fresh produce[J ] . Journal of hazardous materials , 2015 , 300: 643-651.[10 + QI ZH , TIAN E Q , SONG Y , et al. Inactivvtion of shewanell a putrefaciens by plasma activvted water [ J + . Plasma chemistryand plasma processing , 2018 , 38( 5) : 1035-1050.[11 + LIN C M , KUNG H F , HUANG Y L , et al. Histamine production by Raoultella ornithinolytica in canned tuna mest at vvriousstoraye temperatures [ J ] . Food centrol , 2012 , 25 ( 2) : 723-727.[12 ] XIAO D Z , CHENG C , SHEN J , et al. Characteristics of atmospheric-pressure non-thermal N 2 and N 2/O 2 gas mixture plasmajet[ J]. Journal of applied physics , 2014, 115( 3) :033303.第3期焦浈，等：等离子体活化水冰对纯培养及三文鱼片表面单增李斯特菌杀菌效果研究103[13+YU S,CHEN Q Z,LIU J H,et al.Dielectric Varrier structure with hollow electrodes and its recoil effect*J].Applied physics letters,2015,106(24)：244101.*14+KANAZAWA S,KAWANO H,WATANABES,eS al.Observation of OH radicols produced by pulsed discharges on the surface of a hiquid*J+.Plasma sources science and technology,2011,20(3)：034010.*15+SHAINSKY N,DOBRYNIN D,ERCAN U,et al.Plasma acid：water trected by dielectric bairier discharye*J].Plasma processes and polymers,2012,9：555-629.*16+LIU T,WANG J J,LI J B,et e of acidic electrolyzed water ice for preserviny the quality of ehrimp*J+.Journal of aaricul-tud and food chemistri,2013,61(36):8695-8702.*17]丁婷，李婷婷，励建荣.0T冷藏三文鱼片新鲜度综合评价*J].中国食品学报，2014,14(11):252-259.*18]庞彩霞,王利民.银杏叶提取物对冷藏金线鱼鱼丸的保鲜效果研究*J].食品研究与开发,2017,38(13):194-198.Plasma-activated Water Ice Inactivation of ListeriaMonocytogenes i n Pure Culture and Salmon StripsJIAO Zhen,ZHU Yupan,XU Hangbo,MA Ruonan(Henan Key Laboratory of Ion-beam Bioengineering,School of Physics and Engineering,Zhengzhou Uniersito,Zhengzhoe450052,China)AbstracC:Thc potential of PAW-ico for the inactivation of Listeric moeocytogenei in pure culturv or aCifm cially inoculated on salmon strips was firstly presented.Meanwhile,the main activa substanccs in the plasma were detected by optied emission spcctrosccpy,and thc oxidation-reduction potentid(ORP), pH value and electrical ccnductivity were alss determined.Moreevao,the eaacts of PAW-ico on the totd volatile basic nitrooen(TVB-N)and pH of salmon strips were determined.The csu O s showed that,ccm-pared with steOle wateoicc,PAW-lco had a remarkable effect on the pure culture of L.mogocytogenes, which could reduco the bacterio by1〜3lg CFU/mL,and the sterilization eSOciency depended on the PAW's preparation time,valume and PAW-ico procossiny time.In addition,during storaae at4弋for5 days,compared with sterile water-ico,PAW-ico could inhibit the growth of Lmytogenes on the sur-faco of salmon strips and slow down the increasc of TVB-N and pH value.Thus,PAW-ico had a good prospect in controlling L..。
多菌发酵植物源杀菌剂的成分测定及体外抑菌作用
厌氧发酵 4 d 所 得。 发 酵 底 物 为 由 红 糖、 豆 粕、 茶 粕、 桔 子 ( Citrus reticulata ) 、 李 子 ( Prunus salicina
基金项目:国家自然科学基金面上项目( 31870093)
作者简介:张自平( 1995—) ,男,重庆江北区人,硕士生;李市场 ( 1978—) ,男,通 信 作 者,河 南 周 口 人,副 教 授,博 士,硕 士 生 导 师,主
质谱条件主要包括:电喷雾离子源 ( electrospray ionization,ESI) 温 度 550 ℃ ,质 谱 电 压 5 500 V ( 正
模式) / - 4 500 V ( 负 模 式) ,帘 气 ( curtain gas, CUR) 25 psi,碰 撞 诱 导 电 离 ( collision-activated dissociation,CAD) 参数设置为高。 在三重四 级 杆 ( QQQ) 中,每 个 离 子 对 根 据 优 化 的 去 簇 电 压 ( declustering potential, DP ) 和碰撞能 ( collision energy,CE) 进行扫描检测 [ 12] 。
同一物质在不同样本中的质谱出峰进行积分校正 [ 13] 。
1. 4 对细菌的抑菌性
采 用 96 孔板微量肉汤法 [ 14] 测定最低抑菌浓度( minimum inhibitory concentrations, MIC) 。 第 1 孔至
第 11 孔添加 190 μL MHB 培养基和 10 μL 在 NB 培养基中培养至对数期的供试菌液,培养基中 FBA 体
摘要:为了明确通过发酵方式得到的植物源杀菌剂的主 要 成 分 和 体 外 抑 菌 能 力,采 用 液 质 联 用 法 对 杀 菌 剂 进
酵母葡聚糖抑菌活性初探
２ 方法
称取酵母 粉 １０００ｇ溶 于 １０００ｍＬ、６％ 的 ＮａＯＨ 溶液中，加 热 搅 拌 ４ｈ，冷 却 至 室 温，离 心 （４０００ｒ／
收稿日期：２０１７－１０－１３ 基金项目：河南省高等学校重点科研项目（５１０００７８７）：家禽肠道生物保护关键技术研究利用。 作者简介：江青东（１９７８－），男，河南商城县人，博士，副教授，从事分子营养与免疫方面的研究。
Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｓｔｕｄｙｏｎｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｙｅａｓｔｇｌｕｃａｎ
ＪＩＡＮＧＱｉｎｇｄｏｎｇ，ＺＨＡＮＧＬｉｈｅｎｇ，ＷＡＮＧＸｉｎｌｅｉ，ＨＥＣｈａｏ
（ＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙａｎｄＥｃｏｎｏｍｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５００１１）
２．１ 菌悬液的制备 将菌种接种于培养基上，并在培养皿上作以标
记。细菌、霉菌和酵母菌分别置于 ３７℃培养箱内进 行培养 ２４ｈ。分别挑取已经活化的菌种置入无菌生 理盐水中，摇匀，制成菌悬液，调整其浓度为 １０６ － １０７ｃｆｕ／ｍＬ，以备用。 ２．２ 酵母葡聚糖最低抑菌浓度的测定
将酵母葡聚糖水溶液 分 别 稀 释 成 浓 度 为 ２０、 １０、５、２．５、１．２５和 ０．６２５ｍｇ／ｍＬ的稀释液，分别吸 取各稀释液 ０．５ｍＬ和菌悬液 ０．１ｍＬ，加在固体培 养基上，混合后加热至 ６０℃，充分混匀，待其冷 却 后，置于 ３７℃恒温培养箱中进行观察、培养，以不生 长细菌的酵母葡聚糖溶液最低浓度为最小抑菌浓度 （见表 １）。
抗菌检测报告
抗菌检测报告
本报告旨在对某一特定产品的抗菌性能进行测试和评估，以确保其符合相关标
准和法规要求。
本次检测由专业实验室进行，测试结果如下：
一、抗菌性能测试。
经过实验室测试，该产品在对抗菌性能的评估中表现出色。
在对常见细菌如大
肠杆菌、金黄色葡萄球菌等的抑制能力方面，该产品的抗菌效果明显，抑菌率达到了90%以上。
这表明该产品具有较强的抗菌能力，能够有效地抑制常见细菌的生
长和繁殖。
二、抗菌机理分析。
经过实验分析，该产品的抗菌机理主要包括物理性抗菌和化学性抗菌两种方式。
物理性抗菌主要通过表面微纹理和特殊结构设计，能够有效破坏细菌细胞壁，从而实现抗菌效果。
而化学性抗菌则是通过添加抗菌活性成分，如银离子等，能够与细菌细胞内的蛋白质、核酸等结合，破坏细菌的代谢活动，达到抑菌的效果。
三、抗菌效果持久性评估。
在持久性评估实验中，该产品的抗菌效果表现出良好的持久性。
经过长时间的
模拟使用和洗涤，产品的抗菌性能并未明显下降，依然能够保持较高的抗菌率。
这表明该产品的抗菌效果具有较好的持久性，能够在长期使用过程中保持较高的抗菌能力。
四、结论。
综上所述，经过专业实验室的抗菌性能测试和评估，该产品在抗菌性能方面表
现出色，具有较强的抗菌能力和持久性。
因此，该产品符合相关标准和法规的抗菌要求，可在相关领域中得到推广和应用。
以上为本次抗菌检测报告的全部内容，如有任何疑问或需要进一步了解测试细节，请随时与我们联系。
河南自主研发杀菌剂2-巯基苯并噻唑锰锌获美国专利
： 型
的单用 ， 且不 影响苄 嘧磺 隆 防除莎草 和 阔叶杂草 的效
０ ９ ． 环酯 草 醚 的开发要 点
建议与其他作用机理不 同的药剂混用或轮换使
用， 与苄 嘧磺 隆混 用 ， 对 大龄稗 草 的防效 好于 两药 剂
果。使用后要注意抗性发展，推荐使用环脂草醚＋ 丙
草胺＋ 苄嘧磺 隆三 元 复配 。 （ 刘 洋）
一
层锌 元素 ， 解决 了 ２ ． 巯 基苯 并噻 唑锰 的稳定 难题 ，
据了解， ２ ． 巯基苯并噻唑锰锌是新乡市农业科学
院 自主研 发 的新 型农用 杀菌剂 ， 属 杂环类 锰锌 络合 物 ， 经 多年试 验 ，对 苹果斑 点落 叶病 、柑 橘疮痂 病 、板 栗 炭 疽病 及 农 作物 细 菌 性病 害 等有 良好 的 防效 。２ ０ １ ４ 年 该 项专 利 曾获 得 国知 识 产权 局 发放 的发 明专 利
； － ｎ Ｉ 南 自主研 发杀菌剂 ２ 一 巯基苯并噻唑锰锌 获美国专利
２月 ２ １日，新 乡市农 科 院专家 王振 军率 队研 制 的农 用 杀菌剂 ２ 一 巯基 苯 并噻 唑锰锌 ， 日前 获得 了美 国专 利授 权 ，并于近 日拿 到 了美 国授 权专 利证 书 。 物 叶片造 成伤 害 ，很难 大面积 推广应 用 。 ”王振 军介 绍 说 ，“ 我们 在 ２ 一 巯 基苯 并噻 唑锰微 粒 内核外络 合 了
据悉， 评 价报 告 由环 保署 首次 组建 的一个 新 的合 作 团队完成 ， 该 团队 由两个野 生动物 机 构和美 国农业
部组 成 ， 以实现 美 国生态 学学会 （ Ｅ Ｓ Ａ ） 的咨询 需求 。 如果 Ｅ Ｐ Ａ确 定某 种农药 “ 可 能影 响 ”所 列物 种 ， 法律 会要求 Ｅ Ｐ Ａ与 Ｆ Ｗ Ｓ和 Ｎ Ｍ Ｆ Ｓ协 商 。然后 ，三个 机 构 合作 研 究 以确 定注 册 审 查 的农药 是 否会 危 及所 列 物种 ，并在需 要 时制 定减 缓措 施或农 药使 用 限制 。
银线草提取物的抑菌活性测定
１ ． ２ ． ４ 抑 菌 活 性测 定
用牛津杯法测定各种提取物的抑菌活洼。 无菌操作台中将培养基倒 入平皿 ， 每个平皿约 １ ５ ～ ２ Ｏ ａ ｒ Ｌ ， 待凝固。 吸取 Ｏ ． １ ｍ Ｌ配好的菌悬液加入凝 固的平板 ，将其涂布均匀 ，每个平板放 ３ 个牛津杯 ， 每个 牛津杯加入 ５ ０ １ ｘ Ｌ的样品溶液 ， 另设阳性对照和空白对照 。平板在 ４ Ｃ 放置 ２ ｈ ， 然后 在３ ７ ℃恒温箱内培养 １ ８ ～ ２ ４ ｈ 。测定抑菌圈直径， 每组实验重复三次。
科技・ 瓣
・ 争Ｉ 奄
银线草提取物的抑菌活性测定
李 黎星 （ 中 国人 民武装 警 察部 队工 程大 学 ， 陕 西 西安 ７ １ ０ ０ ８ ６ ）
【 摘 要】 以研 究银 线草提取 物的不同萃取相对大肠杆菌等 ６种细菌的抗茵作 用为 目的 ， 将银线草提取分 离， 每种萃驭相进行抑 茵实验 。 结 果表 明， 银 线草提取物 中抑 茵活性 最强的为 乙酸 乙酯相， 且对蜡 状芽孢杆菌 、 表 皮葡萄球菌和大肠杆菌抑制作用较强。 【 关键词 】 银 线草 ； 提取物 ； 抑 茵活性
牛蛙背皮抗菌肽粗提物的抑菌活性
牛蛙背皮抗菌肽粗提物的抑菌活性夏一赫;杭柏林;黄东明;张冰清;徐彦召;胡建和【期刊名称】《河南科技学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(045)002【摘要】研究旨在分析牛蛙背皮抗菌肽粗提物的抑菌活性.通过甲醇浸提法制备了牛蛙背部皮肤的抗菌肽粗提物,以琼脂糖扩散法检测粗提物的抑菌活性,用倍比稀释法测定粗提物的最小抑菌浓度(MIC),通过测定生长曲线和杀菌动力学曲线分析粗提物的抑菌特性,借助显微镜观察菌体形态和染色变化,用pH计测定细菌培养基的pH值.结果表明:牛蛙背皮抗菌肽粗提物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有抑菌活性,MIC分别为62.5 μg/mL和31.25 μg/mL,但对白色念珠菌没有抑菌活性;在低质量浓度(1×MIC)时,在迟缓期没有抑菌活性,但从对数期开始发挥抑菌活性;在高质量浓度(3×MIC)时,10 min内即开始发挥抑菌活性;粗提物作用后的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌呈现相反的革兰染色结果,菌体形态从杆状或球状变为丝状;培养2h后,粗提物可提高大肠杆菌培养液的pH值,但对金黄色葡萄球菌培养液的pH值没有影响.结果提示,牛蛙背皮抗菌肽粗提物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有较好的抗菌活性,为后续研究和临床应用奠定了基础.【总页数】7页(P43-49)【作者】夏一赫;杭柏林;黄东明;张冰清;徐彦召;胡建和【作者单位】河南科技学院动物科技学院,河南新乡453003;河南科技学院动物科技学院,河南新乡453003;河南科技学院动物科技学院,河南新乡453003;河南科技学院动物科技学院,河南新乡453003;河南科技学院动物科技学院,河南新乡453003;河南科技学院动物科技学院,河南新乡453003【正文语种】中文【中图分类】S852.4【相关文献】1.牛蛙皮肤抗菌肽Ranalexin 基因的原核表达及其抑菌活性 [J], 谢芳;韩文瑜;雷连成;韩俊友;胡博2.中国林蛙皮抗菌肽的提取纯化及抑菌活性检测 [J], 王战勇;李宁;苏婷婷3.牛蛙背皮抗菌肽粗提物的抑菌活性 [J], 夏一赫杭柏林黄东明张冰清徐彦召胡建和;4.抗菌肽粗提物对肉鸡生长性能、粪便微生物菌群结构及经济效益的影响 [J], 乔恒鑫;轩松5.牛蛙(Rana catesbeiana)蛙皮抗菌肽基因的克隆、测序及其表达 [J], 韩俊友;乔红伟;赵瑞利;胡博;谢芳;王金玲;郑伟;雷连成;韩文瑜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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伊莱特（活性微矿）抗菌实验
检测单位: 河南省农科院畜牧所
检测样品: 伊莱特（活性微矿）
检验类别: 药敏检测
报告日期: 2017年8月4日
伊莱特（复合矿物）检测实验
1.实验日期：2017年7月1日-2017年7月31日
2.送检单位：韩国龙宫伊莱特株式会社
3.实验目的:检测伊莱特（活性微矿）对猪大肠杆菌（Escherichia coli，
E.coli）、猪链球菌(Streptococcus suis,SS)、猪沙门氏菌（Paratyphoid of
pigs,SC）和猪副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPS）的影响，以及对比其他药物其效果如何。
4.实验地点：河南省农科院畜牧所
5.实验员：朱文豪张青娴王治方
6.实验方法
6.1实验材料
伊莱特（活性微矿）由韩国龙宫伊莱特株式会社提供；大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌及副猪嗜血杆菌由河南省农科院畜牧所提供；烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD) 由广州鼎国生物有限公司提供；乳牛血清购自北京四季青生物试剂有限公司；麦康凯培养基、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）和胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）培养
基均购自北京陆桥技术有限公司；DNA 提取试剂盒等购自大连宝生物公司；SS 培养基和药敏纸片购自杭州滨和微生物试剂有限公司。
6. 2 伊莱特（活性微矿）药敏片的制备
6. 2.1药敏片的制备：取定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片，取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎，经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
6. 2.2药液的制备（用于商品药的试验）：按伊莱特（活性微矿）治疗量0.2-0.3%配制药液。
及1000ml水2-3g药，配制药敏片所用的药液，使每个药敏片含量达到50ug/片。
6. 2.3抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液适量，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密封，切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
6.3 病原菌的复苏培养
将冻干粉的各个菌种从超低温冰箱拿出，加1mL无菌生理盐水混匀之后培养基接种。
将大肠杆菌接种在普通琼脂上或者麦康凯培养基上、链球菌接种在TSA 培养基上、沙门氏菌接种在SS培养基上、副猪嗜血杆菌病接种在0.001%NAD 和5% 乳牛血清的TSA 培养基上培养。
37℃培养24h可见大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌生长；培养36-48 h可见副猪嗜血杆菌生长。
6.4药敏试验
6.4.1划线接种
在“超净台”（或自制无菌操作台）中，用（酒精灯）经火焰灭菌的接种环从病料中挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式：用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2，然后找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可将待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，将少量混
悬液倒入平皿培养基上，轻晃平皿使铺匀，放置5-10min）。
6.4.2贴药敏片
将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。
为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。
为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上，一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴4-5片），每种药敏片的名称要记住。
6.4.3培养观察
将平皿培养基倒置放于37℃温箱中培养24小时以及48h后，观察效果。
7.观测指标
7.1药敏实验的结果，在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。
过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。
其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。
7.2 药物敏感实验判定标准参考表1，抑菌圈直径在15mm以上为高敏，10mm以下为低敏，无抑菌圈为不敏。
表1 药物敏感实验判定标准
抑菌圈直径（mm）敏感度
20以上极敏
15-20 高敏
10-14 中敏
10以下低敏
0 不敏
8实验结果
表2药敏试验结果
药物种类
细菌
E.coli SS SC Hps
伊莱特19 4 22 23 头孢噻呋24 26 28 25 头孢他啶23 23 27 27 氟苯尼考19 25 26 28 克林霉素22 3 0 0 阿米卡星15 0 22 0 卡那霉素18 0 24 9 头孢拉定22 26 30 17 阿奇霉素14 2 28 22 诺氟沙星12 10 20 17 恩诺沙星13 11 18 8 先锋V 20 26 25 18 氧氟沙星12 12 21 16 新霉素21 24 23 9 四环素0 5 10 0 氨苄西林18 2 26 5 阿莫西林20 0 27 11 环丙沙星21 13 20 14
9.影响药敏结果的因素
9.1培养基：应根据试验菌的营养需要进行配制。
倾注平板时，厚度适合（约5-6mm），不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18-20ml为宜。
9.2细菌接种量：细菌接种量应恒定，如果太多，抑菌圈变小。
9.3药物浓度：药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。
9.4培养时间：一般培养温度和时间为37℃、12-24小时。
但有些细菌生长缓慢，如副猪嗜血杆菌，要培养36-48h才能生长良好，因此要推迟观察时间，而得到准确的抑菌圈。
10. 结论
在本实验中可以看到伊莱特（活性微矿）对大肠杆菌（19mm）、沙门氏菌（22mm）以及副猪嗜血杆菌（23mm）都有显著的抑菌效果，达到了高敏药物的效果，而对链球菌（4mm）效果不明显。
为何会有这样的反差呢？分析发现伊莱特（活性微矿）在抑菌效果上的显著表现，主要针对G－菌，而对G＋表现为不敏。
在生产中，应选择高敏药物进行治疗，但有时候药物的适口性相对较差，伊莱特（活性微矿）作为一种矿物质可以避免这种情况，在给动物预防和治疗疾病的时候，通过积极饮食达到好的治疗效果。