生物化学试验教学大纲-湖北大学生命科学学院

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《生物化学实验》课程教学大纲

《生物化学实验》课程教学大纲

《生物化学实验》课程教学大纲一、课程简介二、课程目标本课程是与理论课《生物化学》相配套的实验实践课程,通过本课程学习,使学生能较系统地掌握有机溶剂沉淀、电泳技术、凝胶过滤技术和薄层层析技术等生物大分子的分离纯化技术和分子量测定技术;掌握分光光度法、滴定法、凯氏定氮法、ELISA法等测定生物大分子含量和测定酶比活力等常用定量检测技术;初步具备发现问题、分析问题和解决问题的能力,能够运用生物化学的理论知识和实验技术对生物现象进行科学分析和判断;养成较强的自主学习意识和能力,能够较好地处理独立自主与团队协作的关系。

三、课程目标与毕业要求对应关系表2.3课程目标与毕业要求对应关系(水产养殖学专业)四、课程目标与教学内容和方法的对应关系1.每个实验项目的学时数和类型如表3所示:(1)“实验类别”项请填写:①基础;②专业;③专业基础;(2)“实验类型”项请填写:①验证性;②综合性;③设计研究;④其他;(3)“要求”项请填写:①必做;②选做;2. 每个设计项目的教学内容、对课程目标的支撑关系、教学方法如表4所示:“教学方法”包括:案例教学、实验指导、查阅文献、阅读报告、小组研讨、理论讲授、自学、视频学习等五、课程学生成绩评定方法1.课程考核与成绩评定方法本课程为考查课,学生成绩采用百分制评定,由平时成绩和实验成绩两部分构成,平时成绩占50 %,实验成绩占50 %。

平时成绩总占比50%;平时成绩的考核项目包括课程思政实践(占5%)、实验态度(占5%)、课堂表现(占20%)、实验操作(占20%)。

实验成绩总占比50%,包含2项考核项目,即实验理论和操作测试(占20%)和实验报告(占30%)等。

各部分的具体评价环节、关联课程目标、评价依据及方法和在总成绩中的占比,如表5所示。

2. 各个考核项目的详细评分标准六、教学资源七、课程目标达成情况评价在课程结束后,需要对每一个课程目标(含思政课程目标)进行达成情况进行定性和定量评价,用以实现课程的持续改进。

生物化学实验Ⅱ 教学大纲

生物化学实验Ⅱ 教学大纲

生物化学实验Ⅱ教学大纲01.教学单位名称:生命科学学院10.实验课程的教学任务、要求和教学目的10.1 教学任务生物化学实验是一门专业基础实验的必修课,本教学大纲是根据生物科学、生物技术、生物药学、药物制剂等专业人才的培养目标所需要的基本理论和基本技能的要求制定的。

本课程的任务是通过教学过程,使学生掌握常规生物化学实验的基本技术和方法,培养学生的实际操作能力、分析解决问题的能力、开拓创新思维的能力、实验设计的思维方法、以及规范书写实验报告等知识。

为学生进一步学习,掌握复杂的综合性的生物化学技术,毕业论文的撰写、从事生物化学和相关学科的教学、研究与生产奠定基础。

10.2 教学要求通过教学过程加深学生对生物化学基本原理的理解,要求同学熟悉并掌握基本生化技术,掌握生物大分子的分离纯化、性质表征、代谢调控等相关的实验技术。

在实验过程当中应遵守实验室规章制度,有序进行实验,严格按照规定程序操作,全面观察,准确如实记录实验数据。

实验结束后,做好善后工作,清洁整理实验器具并清点归还,经指导教师检查无误后方可离开实验室;及时整理实验记录和数据,按要求认真独立完成实验报告,并按时提交;积极参加课后讨论。

10.3 教学目的使学生了解并掌握生物大分子的分离和纯化的相关知识和技能,为专业课的学习和专业技能的培训奠定良好的基础,并通过严格的实验要求和管理,培养学生具有初步的科学实验能力及严格的科研作风,同时验证生化的某些基本理论知识,加深感性认识。

另外,进行一定比例的综合性、设计性实验,将实验理论和实验技能融为一体,从而培养学生的基本实验思想、实验方法、实验技能和综合应用能力;引导学生将所学的知识和技能用于今后的社会实践,培养学生严谨求实的态度、创新的思维方法及团结合作精神,使学生成为求是、务实、创新的专门人才。

11.学生应掌握的实验技术及实验能力11.1熟练掌握以下各项生物化学实验的基本技能各种常用玻璃仪器的洗涤和使用;滴管、移液管、微量加样器的使用;离心机、分光光度计、紫外检测系统、层析系统、恒温水浴、梯度发生器、电泳仪系统、瓦氏呼吸仪等的使用。

《生物化学实验》教学大纲

《生物化学实验》教学大纲

《生物化学实验》课程教学大纲一、课程基本情况课程名称(中文):生物化学实验课程名称(英文):Biochemical experiment课程代码:学分:0。

5总学时:24理论学时:实验学时;24课程性质:学科专业基础课适用专业:园艺适用对象:本科先修课程:生物化学考核方式:实际操作占20%、实验报告占50%、技能考核占30%教学环境:实验室开课学院:生态技术与工程学院(一)课程简介:生物化学实验课程是生命科学教学中重要的基础课,主要围绕生物体的组成成分如:蛋白质,核酸,酶等生物大分子的基本性质等方面入手,帮助学生掌握生物化学的基本实验方法和技能,包括层析、比色、电泳、生化物质的分离、制备、分析和鉴定及实验方法、操作技术和一些基本仪器的原理和使用,培养学生基本实验技能,提高综合分析问题的能力。

(二)实验目的和要求:通过本课程的教学使学生了解和掌握现代生物科学研究对本课程的需求,了解生物化学技术的基本原理、方法和技能,包括生物物质的性质鉴定、含量测定、生化分离技术的分离原理(包括盐析、等电点分离技术、电泳技术、色谱技术等)。

通过学生的独立实验设计和实践,训练学生分析问题和解决问题的能力及实际动手能力,同时培养学生的创新思维及对生命科学探索的兴趣和爱好.要求学生课前预习,写好预习报告,实验过程中仔细观察,认真记录,课后做实验报告。

(三)实验项目列表:实验一生物化学实验基本知识蛋白质及氨基酸的呈色反应学时:3(一)实验类型:综合性(二)实验目的:1 了解实验室规则和常用生化仪器名称,掌握实验记录与实验报告的写法以及实验室一些基本知识,掌握缓冲溶液的配制方法,初步掌握一些仪器的正确操作。

2 掌握鉴定蛋白质的原理和方法.(三)实验内容:蛋白质和氨基酸与一些显色剂反应呈现一定的颜色反应。

(四)要求:通过实验了解蛋白质的一些颜色反应,掌握鉴定蛋白质的方法.(五)每组人数:1人(六)主要仪器设备及配套数:常规仪器25套(七)所属实验室:生物化学实验室实验二蛋白质等电点测定和沉淀反应学时:3(一)实验类型:设计性(二)实验目的:1 熟悉蛋白质的沉淀反应。

《生物化学》课程实验教学大纲

《生物化学》课程实验教学大纲

《生物化学》课程实验教学大纲课程名称:生物化学课程编号:437007总学时:82 总学分: 4.5开设时间:第三学期适用专业:生物技术、食品科学与工程主撰人:审核人:一、实验性质、目的与任务1、生物化学实验是以生物为研究对象,利用生物化学的原理和方法,阐明生物生长,发育,遗传变异机制,揭示生命现象和本质,并为人类服务的一门实验科学,是农学、食品科学与工程专业、生物技术学科相关专业本科生及与中学生物学教师及科技人员重要的专业基础技术。

2、本课程是在植物生物学、动物生物学、微生物学等普通生物学实验有比较全面了解及一定基础训练基础上而开设的实验技术实验,是生物技术、农学、食品科学与工程专业的专业基础课,是深入学习上述三个专业专业知识的必备课程。

3、掌握层析技术、核酸的分离及组分鉴定、酶的特性、透析技术、等电点分离蛋白质等生物化学技术。

二、教学基本要求:1、掌握还原糖与非还原糖的鉴别方法;2、掌握测定酶的最适pH、最适温度等的方法;3、掌握蛋白质与糖的透析技术;4、掌握层析原理、蛋白质层析方法;5、掌握等电点纯化蛋白质的方法;6、掌握核酸组分鉴定的方法;7、掌握滴定法测定Vit C的方法(还原型Vit C的测定方法)。

三、实验项目与类型:四、实验教学内容及学时分配:实验一糖类的颜色反应4学时1、实验目的了解糖类颜色反应的原理;学习应用糖类颜色反应鉴别还原糖与非还原糖的方法。

2、方法原理(1)Molish(莫氏)反应糖与强酸的作用形成糠醛及其衍生物。

糠醛及其衍生物与α-萘酚反应作用生成紫色的化合物,原理是羰基于酚类进行了缩合,这样,将糖与浓酸作用后再与α-萘酚反应作用就能生成紫色的化合物,可鉴别糖(多羟、醛基)。

Molish反应非常灵敏,0.001%葡萄糖和0.0001%蔗糖即能呈现阳性反应。

因此,不可使碎纸屑或滤纸毛混入样品中。

过浓的糖溶液,由于硫酸对它的焦化作用,将呈现红色及褐色而不呈紫色。

需稀释糖溶液后重做。

生物化学实验课程教学大纲

生物化学实验课程教学大纲

生物化学实验课程教学大纲课程名称:生物化学实验课程编码:0830531英文名称:Experiment of Biochemistry学时:64 其中必做:64 学分: 2开课学期: 3适用专业:生物技术/生物工程课程类别:必修课程性质:专业基础课先修课程:化学实验教材:生物工程与技术专业基础实验教程一、课程性质及任务《生物化学实验》是和《生物化学》课程同时开设的实验课程,是理论教学的深化和补充,具有较强的实践性,是一门重要的技术基础课,可作为生物技术、生物科学、生物工程药学专业学生的必修课。

生命学院的学生应该掌握生物化学实验的基本知识和基本技术技能,包括生物化学分离、制备、分析和鉴定技术(如滴定、比色、层析、电泳技术),同时掌握各种仪器的使用。

随着生物化学的飞速发展,新的实验方法和技术不断出现。

还要掌握一些较新的和实用的技术技能,如一些分子生物学的基础实验等。

通过该课程的学习,使学生巩固和加深生物化学理论知识,通过实践进一步加强学生分析问题和解决问题的能力及设计和创新能力的培养,培养学生一定的科学研究能力和严谨的科学态度,为学生进入更高层次的生物化学乃至分子生物学实验打下基础。

二、课程的教学要求实验课程内容分三个层次:基础实验、综合设计性实验和设计性实验。

基础实验是一些加强学生基本实验技能训练的传统实验。

综合设计实验包括一些新近发展起来的生化实验技术。

设计性实验由学生自拟题目,自选仪器,独立设计实验。

并对一些实验内容进行系统的优化组合。

经过多层次的训练后,学生应达到下列要求:1.进一步巩固和加深对生物化学基本知识的理解,掌握生物化学实验的基本知识和基本操作技能。

如生物化学分离、制备、分析和鉴定技术。

2.提高观察问题、分析问题和解决问题的能力。

通过独立思考,深入钻研有关问题,具有初步解决生物化学实验问题的能力。

3.能正确使用仪器设备,掌握仪器操作原理。

4.能独立设计实验,利用所学知识准确分析实验结果。

《生物化学实验》教学大纲

《生物化学实验》教学大纲

《生物化学实验》教学大纲课程编号:08207017 学时:51 学分:1.5开课对象:生物科学专业课程类不:专业必修英文名称:Basic Biology Experiments B一、课程任务、目的生物化学是四年制本科生物专业开设的一门专业基础课,其中生物化学实验是重要环节。

本实验课程通过生物化学分藹、制备、分析、鉴左等实验(如滴定、比色、层析、电泳等),加强对学生差不多技能的训练。

同时要求学生了解把握一些生化研究的理论和技术,为进入生命科学各分支学科的研究邻域打下基础。

二、课程内容与差不多要求实验一甲醛滴定法测定氨基氮一、目的要求:初步把握甲醛滴左法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、器材:滴定管、吸量管、试管三、内容与方法:1、滴定标准甘氨酸,运算氨基氮回收率2、滴泄未知浓度甘氨酸,运算氨基氮3、运算未知甘氨酸浓度实验二考马斯亮蓝染色法测蛋白质含量一、目的要求学习和把握考马斯亮蓝G-250法测蛋白质含量的原理和方法。

进一步把握721型分光光度计的使用方法和原理。

二、器材:721型分光光度计离心机研钵容量瓶刻度吸管试管三、内容与方法1、制备样品溶液2、制作标准曲线3、测定实验三血淸蛋白醋酸纤维薄膜电泳一、目的要求:学习醋酸纤维薄膜电泳的操作,了解电泳技术的一样原理。

二、器材:稳流稳压电泳仪、水平电泳槽、醋酸纤维薄膜、摄子、白瓷反应板、大培养皿三、内容与方法:1、浸泡薄膜2、点样3、电泳4、染色5、漂洗实验四凯氏定氮法测定总氮量一、目的要求:学习凯氏泄氮法的原理和操作技术。

二、器材:凯氏泄氮仪、电炉、消化烧瓶、滴泄管、吸量管三、内容与方法:1、消化2、蒸饰3、滴定实验五Folin —酚法测蛋白质浓度一、目的要求:把握Folin —酚法测蛋白质浓度的原理和方法,学习标准曲线的制备。

二、器材:试管、试管架、吸量管、恒温水浴锅、721分光光度计三、内容与方法:1、制备标准曲线(蛋白质浓度与反应生成的蓝色物质的光吸取值的关系曲线)2、未知浓度的蛋白与Folin-酚试剂反应,测出兰色物质光吸取值3、从标准曲线上查出对应蛋白浓度实验六苯丙氨酸聚氨酶(PAL)活力和比活力测定一、目的要求1、学习一种常用的酶活力测左法,并与前而学过的二种酶活力测左法相比较:2、把握苯丙氨酸解氨酶活力与比活力测左的原理与方法,为后面该酶分离纯化的实验中测活力与比活力所需要;3. 了解紫外分光光度计及其使用。

生物化学实验教学大纲

生物化学实验教学大纲

生物化学实验教学大纲课程编号:080145 适用专业:生物科学学时数:24学分数: 1.51.课程类别:生物化学实验是生物科学专业的专业基础课。

2.教学目的:巩固学生生物化学知识、培养学生基本技能、训练学生创造性思维,为将来从事中学教学打下基础。

3.教学内容:本大纲共编写实验内容包括17个实验,43学时,其中必做实验7个,16学时,选做实验10个27学时。

根据教学计划,本实验课程应开设10个,计24学时,除了开设必作实验7个,16学时,约占总学时的67%外;应根据情况选做实验3个,共8学时,约占总学时的33%。

实验大纲中验证性实验16个,共40学时,占总学时的93.02%,综合性实验1个,共3学时,占总学时的6.98% 。

实验一蛋白质及氨基酸的呈色反应重点难点:重点:几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

难点:蛋白质和氨基酸几种鉴定方法的特点。

教学要求:了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理;掌握几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

实验内容:观察蛋白质和某些氨基酸的呈色反应。

实验二氨基酸的分离鉴定——纸层析法重点难点:重点:纸层析法的操作方法。

难点:对影响Rf 值主要因素的控制。

教学要求:了解纸层析法的基本原理;理解氨基酸纸层析法的原理;掌握纸层析法的操作方法。

实验内容:制备扩展剂,氨基酸的分离鉴定。

实验三蛋白质的等电点测定和沉淀反应重点难点:重点:测定蛋白质等电点的一种方法。

难点:测定蛋白质等电点时,各种试剂的浓度和加入量的准确性。

教学要求:了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义;理解蛋白质的两性解离性质;掌握测定蛋白质等电点的一种方法。

实验内容:酪蛋白等电点的测定,观察蛋白质的沉淀反应。

实验四血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳重点难点:重点:醋酸纤维薄膜的电泳操作技术。

难点:加样量。

教学要求:了解电泳的一般原理;理解醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理;掌握醋酸纤维薄膜的电泳操作技术。

实验内容:血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳。

生物化学实验课程教学大纲

生物化学实验课程教学大纲
出版社,1997年版 4.《生物化学实验原理和方法》.李建武,余瑞元等合编.北京
大学出版社,2004年版
二、本课程与其它课程的联系与分工
本课程宜在无机化学、有机化学及分析化学的基础上学习,以确保 学生学习本课程具有所需要的化学知识及实验操作技能。
三、课程内容及教学基本要求
实验一、氨基酸的纸上层析法 通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理[2];学习纸层析法的 操作步骤[3] 实验二、蛋白质及氨基酸的呈色反应 蛋白质和某些氨基酸的呈色反应的原理[2];几种常用的鉴定蛋白质 和氨基酸的 原理和方法[3] 实验三、血清蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳 电泳技术的原理、分类和应用范围[1];醋酸纤维薄膜电泳分离蛋白 质的原理[2];
生物化学实验课程教学大纲
课程名称:生物化学实验(biochemistry experiment) 课程编号:1313006223 课程类别:学科基础课 总学时数:32 实验时数:32 学 分:1 开课单位:生命科学学院微生物教研室 适用专业:生物技术 适用对象:本科(四年)
一、课程的性质、类型、目的和任务
生物化学实验是生物技术专业的必修课,属于学科基础课。 本课程的目的和任务是教授生物化学实验技术的基础理论及应用, 为专业课的学习和专业技能的培训奠定良好的基础,并通过严格的实验 要求和管理,培养学生具有初步的科学实验能力及严格的科研作风,同 时培养学生严谨的、实事求是作风和与人合作精神,使他们成为团结合 作、务实、创新的专门人才,为将来从事生物教学工作打下坚实的理论 基础及实验技能。
四、实验方式与要求
1.实验前学生必须进行预习,预习报告经教师批阅后,方可进入 实验室进行实验。
2.实验2或3人1组,在规定的时间内,由学生独立完成,出现问 题,教师要引导学生独立分析、解决,不得包办代替。

生物化学实验课教学大纲

生物化学实验课教学大纲

生物化学实验课教学大纲课程编码:学时:36学分:1可成熟型:独立设课开课单位:生命科学学院先修课程:动物学、植物学、无机及分析化学、有机化学等一、实验性质生物化学专业实验是配合生物化学理论教学而设置的一门基础课程,分为基础实验、综合实验与创新实验。

实验按照一学期进行设置,主要实验设置为生化基础实验和部分创新、综合实验。

基础实验可使学生更好地掌握基本理论和基本实验技术,一般实验在3学时内完成;综合实验要求学生运用所学知识解决实际问题,培养学生分析问题解决问题的能力;创新实验由学生自己动手查阅资料,拟定具体实验方案,提倡学生多思多问,有利于学生创新意识的培养,加强了收集信息、分析问题解决问题的能力。

实验室全天开放。

二、实验教学目的和要求生物化学专业实验是配合生物化学理论教学而设置的一门基础课程,通过实验课的教学,力求使学生能够对生物化学的基本理论和概念有更加深刻的认识,激发学生对探索生物化学规律的浓厚兴趣。

更为重要的是,在实验过程中培养学生观察问题、分析问题和解决问题的能力,锻炼学生的实际操作能力。

三、实验项目名称和学时分配四、实验项目具体内容生物化学实验技术实验项目一:皂化价的测定实验目的:使用酸碱滴定法通过脂肪皂化价来推断分子量。

主要仪器:电子天平、水浴锅、冷凝管、酸碱滴定管。

教学方式:讲授、操作。

预习要求:预习滴定分析法的基本原理,熟悉实验操作基本流程。

实验项目二:凯氏定氮法测定蛋白质含量实验目的:掌握使用基本滴定原理和方法测定蛋白质含量和凯氏定氮仪的使用。

主要仪器:凯氏定氮仪、电子天平、通风橱、电炉、酸碱滴定管。

教学方式:讲授、操作。

预习要求:预习“滴定分析的计算”章节内容,熟悉凯氏定氮法的基本原理。

实验项目三:Vc的含量测定实验目的:用滴定法测定并掌握水果和蔬菜中维生素C的测定方法。

主要仪器:电子天平、研钵、移液管、酸碱滴定管。

教学方式:讲授、操作。

预习要求:预习“滴定分析的计算”和“标准溶液”章节内容。

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湖北大学生物化学实验(课程代码)实验教学大纲(第2版)生命科学学院生化教研室2010年7月前言课程名称:生物化学实验学时:64适用专业:生物科学、生物技术、生物工程课程性质:必修一、实验课程简介生物化学实验课程是生命科学本科实验教学的一个重要组成部分,实验性质有基础性、综合性、设计(创新)性三层次,实验项目数共25个,按照学时要求完成必做与选做实验。

在实验过程中要求学生自己动手,独立观察并完成实验报告,注重培养学生创新思维与能力。

二、课程目的通过实验教学可以加强学生对生物化学基本知识和基本理论的理解,掌握现代生物科学与技术的实验原理与技能;同时,通过实验培养学生独立观察、思考和分析问题、解决问题和提出问题的能力,养成实事求是、严肃认真的科学态度,提高学生的科学素养以及敢于创新的开拓精神。

三、考核方式及成绩评定标准生物化学实验课程考核采用笔试与操作能力二种方式;期末成绩评定标准为:平时成绩60%;笔试10%;操作能力30% 。

四、实验指导书及主要参考书1.陈均辉等,《生物化学实验》科学出版社,2003年4月第三版2.蒋立科等,《生物化学实验设计与实践》高等教育出版社,2007年10月第1版五、实验项目实验项目一览表实验类型:演示性、验证性、综合性、设计性、其它实验一蛋白质及氨基酸呈色反应与甲醛滴定法测定氨基氮(3课时)实验类型:验证性实验目的:学习几种常用的鉴定蛋白质与氨基酸的方法,掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。

实验内容:1、茚三酮反应:(1)取两支试管分别加入蛋白质和氨基酸溶液1ml,再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液,混匀,沸水浴加热1-2min,观察颜色由粉色变紫红再变蓝。

(2)在一小块滤纸上滴上一滴0.5%Gly溶液,风干后,再在原处滴上一滴0.1%的印三酮乙醇溶液,在微火旁烘干显色,观察紫红斑点的出现。

2、黄色反应:向7个试管中分别按下表加入试剂,观察各管出现的现象,有的试管反应慢可略放置或用微火加热。

待各管出现黄色后,于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性,观察颜色变化。

(1)标准Gly溶液的滴定。

(2)计算:Gly氨基氮的回收率%=实际测得量∕加入理论值×100%4、未知浓度Gly溶液的滴定氨基氮(mg/ml)=(V未—V对)×N NaOH×14.008实验要求:要求仔细观察并记录实验现象,如颜色等变化,分析实验结果。

实验二氨基酸的分离鉴定――纸层析法(3课时)实验类型:验证性实验目的:学习分配层析的原理;掌握氨基酸纸层析法的操作技术要点;以及氨基酸的呈色反应原理。

实验内容:1、平衡:将展层剂置于层析缸中进行平衡。

2、标记:取层析滤纸一张,在纸的一端距边缘2-3cm处用铅笔划一直线,在此直线上,每隔2-3cm做一记号(点样点)。

3、点样:用毛细管将各氨基酸样品分别点在标记的位置上,干后在原来点样位置再点一次(可用吹风机吹干,但要控制温度不能太高)。

注意,每点的扩散直径不能超过3mm。

4、展层:用线将滤纸缝成筒状(用透明胶粘也可以),注意滤纸的两边不能接触。

缝好后,将滤纸直立于层析缸中。

(点样端在下,展层剂的液面需低于点样线)待溶剂上升15cm左右(约40min),取出滤纸,用铅笔描出溶剂前沿界线,吹风机吹干。

5、显色:用喷雾器均匀喷上茚三酮显色液(要离开滤纸一定距离且要直立喷洒,显色液在滤纸上不能成柱状流下);热风吹干,可见显色的各层析斑点。

6、计算:计用直尺量出原点到溶剂前沿及各层析点中心的距离,分别计算R f值;并通过比较单种氨基酸样品与混合液中氨基酸的R f值,指出相对应的氨基酸。

实验要求:要求仔细观察并记录实验现象,计算并分析实验结果。

实验三醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白(3课时)实验类型:验证性实验目的:学习醋酸纤维薄膜电泳的操作,掌握电泳技术的原理。

实验内容:1、浸泡:用木筷取醋酸纤维素薄膜,识别光泽面和非光泽面,并做记号,放在缓冲液中浸泡20 min。

2、点样:用木筷取出膜条(不能用手接触),夹在两层滤纸之间,轻轻按一下,吸干膜表面水分,膜无光泽面向上平铺在玻璃板上,点样器蘸取少许血清在距膜条一端2-3cm处点样。

3、电泳:将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上,点样面朝下,点样端靠近负极,盖严电泳室,通电,调节电压为160V,电泳25min。

4、染色:用木筷取出膜条,浸泡于染色液中约10min。

5、漂洗:染色后,在浸泡于漂洗液中,漂洗2-3次,洗至无蛋白区底色脱净为止。

实验要求:要求仔细观察并记录实验现象,计算并分析实验结果。

实验四双缩脲法测定蛋白质浓度(3课时)实验类型:验证性实验目的:学习并掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理与方法及标准曲线的绘制。

实验内容:1、绘制标准曲线2、样品测定样品中蛋白质含量(g/100ml)=Y×N/V ×10-3×100Y为从标准曲线上查得的蛋白质浓度(mg/ml),N为稀释倍数,V为样品体积(ml)实验要求:定量实验要求正确使用移液管准确加量,计算并分析实验结果。

实验五酪蛋白的制备与紫外定量分析(4课时)实验类型:综合性实验目的:1、学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法;2、掌握酪蛋白紫外分光光度法定量分析原理与方法实验内容:1、酪蛋白的制备(1)制备酪蛋白粗制品:将一定量牛奶与pH4.7的醋酸缓冲液加热至40℃。

调pH至4.7。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心15分钟(3000r/min)。

取沉淀,得酪蛋白粗制品。

(2)多次水洗沉淀并离心15分钟(3000r/min),弃上清。

(3)有机溶剂洗沉淀:分别用一定量乙醇洗沉淀,布氏漏斗中抽滤。

用乙醇重复洗一次后改用乙醚洗沉淀并抽干。

风干,可得酪蛋白纯品。

(4)称重并计算含量和得率。

含量:酪蛋白g/100 ml 牛乳得率:测得含量/理论含量×100%理论含量为3.5 g/100 ml 牛乳2、酪蛋白的定量测定采用紫外分光光度法,波长280nm,读取吸光度。

以标准蛋白浓度为参照。

实验要求:要求掌握提取蛋白质的原理和方法;学习紫外分光光度计的基本原理和使用方法,计算并分析实验结果。

实验六影响酶促反应的因素(3课时)实验类型:验证性实验目的:加深对酶的性质以及影响酶活因素的认识和理解实验内容:1、温度对酶活力的影响取三支试管,编号后按下表加入试剂:分钟后取出(将2号管内液体分为两半),用碘化钾--碘溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。

2号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10min后,再用碘液实验2、唾液淀粉酶的活化和抑制实验要求:要求仔细观察并记录实验现象,计算并分析实验结果。

实验七枯草杆菌蛋白酶活力的测定(3课时)实验类型:验证性实验目的:学习测定蛋白酶活力的方法,掌握72型分光光度计的原理和使用方法实验内容:1、绘制标准曲线2、酶活测定3、计算酶活1克枯草杆菌蛋白酶在30℃,pH7.5的条件下所具有的活力单位为:(A样-A对).K.V/t.N实验要求:要求掌握测定蛋白酶活力的原理和方法;准确进行定量实验,计算并分析实验结果。

实验八米氏常数的测定(3课时)实验类型:验证性实验目的:了解底物浓度对酶促反应速度的影响,学习测定米氏常数的原理和方法实验内容:1、向6个小锥形瓶中分别加入5ml甲醛与1滴酚酞并用0.1mol/L 标准氢氧化钠溶液滴定至微粉红色2、100ml酪蛋白溶液与胰蛋白溶液分别在37℃水浴10min,准确称量10ml酶液加到酪蛋白溶液中(同时计时),混匀后,取出10ml反应液作为零时样品。

向反应液中加入甲醛、酚酞并用氢氧化钠滴定至终点,记下所用的氢氧化钠的ml数。

在2、4、6、8min时分别取10ml消化样品。

按上述方法操作,每个样品滴定终点颜色应一致,用增加的地定都对时间作图测定初速度。

3、配制不同浓度的酪蛋白溶液,测定不同底物浓度时的活力4、用测得的实验结果,以1/V对1/[S]作图,求出V和Km的数值实验要求:要求掌握测定酶Km的原理和方法;画图、计算并分析实验结果。

实验九维生素C的定量测定(3课时)实验类型:验证性实验目的:掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法实验内容:1、不同样品用不同方法提取(1)松针:用水将松针洗净,用滤纸吸去表面水分。

称取1g,放入研钵中,加1%HCl 溶液5ml一起研磨。

放置片刻,将提取液转入50ml容量瓶中,如此反复2~3次。

最后用1%HCl溶液稀释到刻度并混匀,静置10min,过滤,滤液备用。

(2)新鲜蔬菜和水果类:水洗净,用纱布或吸水纸吸干表面水分。

然后称取20.0g,加2%草酸100 ml置组织搅碎机中打成浆状。

称取浆状物5.0g,倒入50ml容量瓶中以2%草酸溶液稀释至刻度。

静置10min,过滤。

滤液备用。

2、滴定(1)标准液滴定。

准确吸取维生素C溶液1.0ml(含0.1mg维生素C)置100ml锥形瓶中,加9ml1%草酸,用微量滴定管以0.1%2,6-二氯酚靛酚滴定滴定至淡红色,并保持15秒钟即为终点。

由消耗染料体积计算出1 ml染料相当于多少mg维生素C。

(2)样液滴定。

准确吸取滤液两份,每份10.0ml分别放入两个100ml锥形瓶中,滴定方法同前。

3、计算:m=VT/m0×100实验要求:要求掌握滴定法测定维生素C的原理和方法;计算并分析实验结果。

实验十核黄素的荧光光度定量测定实验类型:验证性实验目的:1、把握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。

2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能,把握其基本操作。

实验内容:1、系列标准溶液的制备2、激发光谱的绘制设置λem=540nm为发射波长,在250~500nm范围内扫描,记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线,便得到激发光谱。

从激发光谱图上可找出其最大激发波长λex。

3、标准溶液及样品的荧光测定将激发波长固定在最大激发波长,荧光发射波长固定在最大荧光发射波优点。

测量上述系列标准维生素B2溶液的荧光发射强度。

数据记录于表2中。

以溶液的荧光发射强度为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,制作标准曲线。

在同样条件下测定未知溶液的荧光强度,并由标准曲线确定未知试样中维生素B2的浓度,计算待测样品溶液中的维生素B2的含量。

4、数据记录与结果分析1)激发光谱绘制过程中实验数据记录2)标准溶液及待测溶液的浓度和荧光强度数据记录:3)系列标准溶液浓度与荧光发射强度的标准曲线图:4)则待测溶液的浓度的测量实验要求:要求掌握荧光分光光度法测定维生素B2的原理和方法;计算并分析实验结果。

实验十一植物组织中蔗糖酶的活力测定(5课时)实验类型:综合性实验目的:掌握植物组织中蔗糖酶的提取方法,以及蔗糖酶活力测定的原理实验内容:1、绘制标准曲线:取8支具塞试管按下表加入各试剂室温静置5min后,向每支试管中加7ml蒸馏水,混匀,在510nm下测光吸收值,以葡萄糖含量为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线2、蔗糖酶的提取与活力测定:(1)提取蔗糖酶:称取绿豆芽3.672g于研钵中,以1ml/g加入乙酸缓冲液,在冰浴中用研钵研磨成糊状,以12000r/min离心10min,留取上清夜用于酶活力测定(2)测定吸光值:取两支具塞试管,按下表加入各试剂室温静置5min后,向每管中加7ml 蒸馏水,510nm下比色,测定光吸收值3、酶活力计算:室温,PH4.5条件下,每分钟水解产生1umol葡萄糖所需的酶的量定义为酶的一个活力单位酶活力=测得还原糖的含量(mg)×n×v×1000/W×t上式中:n为稀释倍数v为酶液总体积w为样品重t为反应时间10min实验要求:要求掌握提取酶蛋白提取与活力测定的原理和方法;准确进行定量实验,计算并分析实验结果。

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