E08203102 盐酸副玫瑰苯胺比色法测定食品中的亚硫酸盐-甲醛吸收法

实验项目编号：实验二

实验名称：盐酸副玫瑰苯胺比色法测定食品中的亚硫酸盐

实验学时：4

实验日期：先不写

实验地点：先不写

实验二盐酸副玫瑰苯胺比色法测定食品中的亚硫酸盐

一、实验目的

l．学习盐酸副玫瑰苯胺显色比色法测定食品中亚硫酸盐的实验原理。

2. 掌握实验的操作要点及测定方法。

二、实验原理

二氧化硫被甲醛缓冲溶液吸收后，生成稳定的羟基甲基磺酸，化学反应式如下：

加入氢氧化钠后，与盐酸副玫瑰苯胺作用，生成紫红色化合物，此络合物于波长560nm 处有最大吸收峰，且在一定范围内其颜色的深浅与亚硫酸盐的浓度成正比，可以比色定量。结果以试样中二氧化硫的含量表示。

三、仪器与试剂

1. 仪器

可见分光光度计；25 mL 带塞比色管；恒温水浴槽。

2. 试剂

（1）0.05mol/L EDTA-2Na 溶液：称取1.8612g EDTA-2Na溶于新煮沸后已冷却的水中，定容至100mL。

（2）甲醛吸收贮备液：称取 2.040 g 邻苯二甲酸氢钾和0.372 g 乙二胺四乙酸钠（简称EDTA-2Na）溶于水中，再加入 5.5 mL37％甲醛溶液，用水稀释至100mL。贮于冰箱，可保存一年；

（3）甲醛吸收工作液：临用时，将上述吸收贮备液用水稀释100倍；

（4）2mol/L 氢氧化钠溶液；

（5）0.3%氨基磺酸铵溶液：称取0.3g 氨基磺酸铵，用少量水溶解，加入1 mol/L 氢氧化钠溶液3.0 mL，用水稀释至100 mL；

（6）0.2%盐酸副玫瑰苯胺贮备液：称取0.2g盐酸副玫瑰苯胺，用1mol/L 盐酸溶液溶解并稀释至100 mL，吸取25.00mL上述溶液于100mL容量瓶中，加入30 mL浓磷酸，用水稀释至刻度;；

（7）1. 00 mg /mL 二氧化硫贮备液：准确称取0. 1625 gNaHSO3 (SO2的纯度为0.62g/g)于100mL容量瓶中，用0.05mol/L EDTA-2Na 溶液溶解，缓缓摇匀以防充氧，使其溶解并用EDTA-2Na 溶液稀释至刻度。

（8）2.5μg/mL 二氧化硫标准工作液：取贮备液0.5mL于200mL容量中，用甲醛吸收工作液定容至刻度。

四、实验步骤

1. 二氧化硫标准曲线绘制：按照表1加入各种溶液，用1 cm 比色杯，以零管调节零点，于波长560 nm 处测定吸光度，以二氧化硫含量对吸光度绘制标准曲线。

管号0 1 2 3 4 5 样品管二氧化硫标准溶液/mL 0 1 2 3 5 10

甲醛缓冲吸收液/mL 10.0 9 8 7 5 0

氨基磺酸铵/mL 0.5，混匀

氢氧化钠溶液/mL 0.5，混匀

盐酸副玫瑰羟胺/mL 迅速加入1.00，立即加塞混匀，25°C恒温10min

二氧化硫含量/μg0 2.5 5.0 7.5 12.5 25

吸光值（A）

2. 样品处理：

称取经均匀捣碎的样品5-10g(试样量可视含量高低而定)于100mL容量瓶中，加入20mL 甲醛吸收液，超声50min，超声功率240W，超声温度25℃，去离子水定容，取滤液备用。

3. 测定：

吸取0.5~ 10.0mL上述试样处理液于20 mL具塞比色管中, 按标准曲线加入试剂并测定，按国标方法计算公式计算结果。

式中：X—试样中二氧化硫的含量（g/kg）；

A—测定用样液中二氧化硫的质量（µg）；

m—试样质量（g）；

V—测定用样液的体积(mL)。

五、注意事项

1. 实验使用氨磺酸钠是为了消除氮氧化合物（如NO3-等）的干扰；

2. 甲醛法测定二氧化硫的显色反应要求在酸性溶液中进行，因此要将含有标准溶液(样品溶液)、吸收液、氨磺酸钠溶液、氢氧化钠溶液的溶液迅速加入强酸性盐酸副玫瑰苯胺

溶液中，使混合液瞬间呈酸性，以利于显色反应的进行。否则酸性不强，导致显色反应不完全，斜率偏低。

3. 显色温度、显色时间的选择及操作时间的掌握是实验成败的关键。应根据实验室条件、不同季节的室温选择适宜的显色温度及时间。操作中严格控制各反应条件。当在25~ 30℃显色时，不要超过颜色的稳定时间，以免测定结果偏低。当室温低于30℃时, 可用恒温水浴显色；高于30℃时可在插入温度计的凉水浴中显色。当室温高于30℃时，样品测定每次不超过15个，因为逐管加药和测定吸光度会占用一定的时间，而在30℃时的显色时间和稳定时间分别为5min和10min。

4. 在实际监测中, 标准曲线最好7d 绘制1次，为保证曲线绘制和样品测定的准确性，可采用加标回收的方法进行检验。

六、实验结果

绘制标准曲线并计算样品中的亚硫酸盐含量。

七、思考题

1. 本实验的操作要点是什么？