纸层析法分离氨基酸
纸层析法分离氨基酸
纸层析法分离氨基酸一、前言1、分离氨基酸的主要方法：(1) 离子交换法，根据氨基酸是两性电解质这一特征,以及目的氨基酸与杂质氨基酸pK、pI值的差异,利用离子交换树脂对各种氨基酸吸附能力的不同对氨基酸进行分离纯化。
离子交换法的分离步骤主要包括树脂的处理、装柱、平衡、加样、洗脱等步骤. 离子交换法也有自身的局限性，由于离子交换法是利用氨基酸等电点的不同，所以当两个或者多个氨基酸的等电点相近时，便无法分离，另外，氨基酸在树脂当中扩散速度较快，就要求料液的流速也相对较慢，这样自然造成了分离的缓慢，离子交换本身的生产原理也决定了反应难以连续还进行，这给工厂自动化生产带来影响，难以大规模地推广。
(2) 沉淀法，沉淀法是历史最悠久的分离纯化方法，目前仍在工业上发挥着重大的作用。
氨基酸工业中常用沉淀法有等电点沉淀法，特殊试剂沉淀法和有机溶剂沉淀法。
沉淀法原理是根据某些氨基酸可以与某些有机或者无机化合物结合而形成沉淀，可以利用这种性质向溶液中加入特定的沉淀剂，使目标氨基酸沉淀，与其他氨基酸分离，在分离后再将氨基酸与沉淀剂分离即可。
现在较为成熟的分离方法有精氨酸与苯甲醛在低温条件下，缩合成溶解度小的苯亚甲基精氨酸，从而析出沉淀，析出的沉淀用盐酸处理即可分离得到目标氨基酸精氨酸的盐酸盐；亮氨酸与邻-二甲苯-4-磺酸反应，可生成亮氨酸的磺酸盐。
沉淀法的优点是方法简单，选择性强，但是缺点同样明显，沉淀剂回收困难，造成废液排放污染加剧。
(3) 萃取法，萃取法主要包括反应萃取法、溶剂萃取法、反向微胶团萃取、液膜萃取法等。
其中，反应萃取法是选择适当的萃取剂，使萃取剂解离出来的离子与氨基酸解离出来的离子发生反应，生成可以溶于有机相的物质，从而使氨基酸从水相进入有机相，进而分离氨基酸。
溶剂萃取法，由于氨基酸是离子型化合物，氨基酸在物理萃取时难以高效提取的，因此常用化学发来萃取氨基酸。
(5) 电透析，由于氨基酸拥有不同的等电点，故可以通过控制溶液的PH值，使氨基酸带有正负电荷，即当PH大于等电点时，带有负电荷，将氨基酸放置在电场中，会带上负电，并且移向正极，相反，PH值小于等电点时，则带上正电荷，氨基酸向负极移动。
(2023)纸层析法分离氨基酸实验报告(一)
(2023)纸层析法分离氨基酸实验报告(一)实验报告：纸层析法分离氨基酸实验目的通过纸层析法分离并鉴定氨基酸的类型及其浓度。
实验原理纸层析法是一种简单的分离技术，它的分离原理就是根据溶液成分在固定相上的不同运移速度而分离出各种化合物的方法。
氨基酸属于碱性氨基酸、酸性氨基酸和非极性氨基酸三类，它们在纸层析上的运移速度不同，可以通过将样品施加到起始线处，用溶剂上升将样品分离成单独的氨基酸，从而鉴定氨基酸的类型和浓度。
实验步骤1.准备好样品；2.准备纸层析板和移层溶剂；3.在纸层析板上留下起始线处，将样品点于起始线上；4.将纸层析板浸泡在移层溶剂中，注意不要使样品触及移层溶剂；5.待溶剂上升至足够高处后将纸层析板取出晾干；6.可选择用氨基酸定性试剂对氨基酸进行鉴定。
实验结果经过实验，分离出了6种氨基酸，它们是： 1. 苯丙氨酸 2. 丝氨酸3. 脯氨酸4. 缬氨酸5. 赖氨酸6. 天冬氨酸结论纸层析法是一种常用的分离技术，适用于分离和鉴定氨基酸等化合物。
通过本次实验，我们了解了氨基酸在纸层析上的运移规律，并成功地分离出了样品中的6种氨基酸。
实验分析在实验中，我们使用纸层析法分离鉴定了氨基酸。
纸层析法是一种简便易行的分离方法，常用于生物学和化学研究中。
它的原理是利用固定相吸附和液态相洗脱分离成分，从而实现混合物分离和提纯的过程。
氨基酸是构成蛋白质的基本单位，其种类丰富，具有重要的生物学和化学意义。
氨基酸的分离和鉴定对于深入研究生命科学和化学领域的相关问题具有十分重要的意义。
在实验中，我们采用纸层析法将溶液中的氨基酸分离开来。
由于氨基酸的不同极性和分子大小不同，它们在纸层析中的运移速度存在较大差异，可以通过纸层析进行分离。
在实验中，我们通过将氨基酸样品点于纸层析板上的起始线处，并将其浸泡于移层溶剂中，利用溶剂的上升，将氨基酸分离开来。
实验不足与改进在实验过程中，我们虽然成功地分离出了样品中的氨基酸，但存在一定的不足。
氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究生物化学和生物学具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定是了解其性质和结构的关键步骤之一。
本实验旨在通过纸层析法对混合氨基酸溶液进行分离和鉴定，以探究纸层析法在氨基酸分析中的应用。
实验步骤：1. 实验前准备：准备好混合氨基酸溶液、纸层析纸、色谱槽和色谱溶液。
2. 制备纸层析纸：将纸层析纸剪成适当大小的长方形，用铅笔在距离底部1.5cm处画一条水平线，再在该线上距离左边1cm处画一个小点。
3. 装置纸层析槽：将纸层析纸的底端浸入色谱槽中，确保纸层析纸上方的溶液不超过纸层析纸的底端。
4. 样品加载：用微量吸管将混合氨基酸溶液滴在纸层析纸上的小点上，尽量避免溶液滴到纸层析纸以下的溶液中。
5. 开始分离：将色谱槽盖好，待溶液上升至纸层析纸的顶端时，取出纸层析纸，迅速标记各个斑点的位置。
6. 斑点分析：将纸层析纸放入紫外灯下观察，记录各个斑点的颜色和位置。
结果与讨论：通过纸层析法，我们成功地将混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
在紫外灯下观察，我们可以清晰地看到在纸层析纸上出现了多个斑点。
根据斑点的颜色和位置，我们可以初步判断其中的化合物。
在本次实验中，我们使用的混合氨基酸溶液包含了苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸三种氨基酸。
根据实验结果，我们可以看到在纸层析纸上出现了三个主要的斑点。
根据颜色和位置的初步判断，我们可以推测第一个斑点为苏氨酸，第二个斑点为甘氨酸，第三个斑点为丙氨酸。
然而，仅凭颜色和位置的初步判断还不足以确定化合物的身份。
为了进一步确认各个斑点的化合物，我们可以利用已知标准物质进行对照。
通过比较已知标准物质的斑点与实验样品的斑点，我们可以准确地鉴定各个斑点所代表的氨基酸。
结论：通过纸层析法，我们成功地对混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
根据初步判断，我们可以推测出混合溶液中的苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸的存在。
氨基酸的分离鉴定纸层析法
氨基酸的分离鉴定纸层析法引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于生物体的正常生理功能至关重要。
因此，准确地分离鉴定氨基酸成分对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
纸层析法是一种简单而有效的分离和鉴定氨基酸的方法。
本文将介绍氨基酸的分离鉴定纸层析法并探讨其应用。
一、纸层析法的原理纸层析法是利用气相平衡原理进行物质分离的一种方法，其原理是根据物质在纸上各组分的相对亲疏性，通过运动距离的差异来分离物质。
在氨基酸的分离鉴定中，纸层析法通过将待测氨基酸溶液滴于纸上，然后将纸立起来，将纸的下端浸入相应的溶剂中，使得溶剂上升，通过毛细作用将氨基酸上提，最终实现氨基酸的分离和鉴定。
二、纸层析法的步骤1. 准备工作：制备纸层析板和显色剂。
2. 样品处理：将待测氨基酸溶解于适量的溶剂中，使其浓度适宜，然后滴于纸层析板上。
3. 运行纸层析：将纸层析板立起，纸的下端浸入相应的溶剂中，待溶剂上升到一定高度后，取出纸层析板。
4. 显色：将纸层析板放置于显色剂中，通过氨基酸与显色剂的反应，使得氨基酸在纸上显色。
5. 结果鉴定：根据显色的位置、颜色和强度等特征，对氨基酸进行鉴定和定量分析。
三、纸层析法的应用1. 氨基酸组成分析：纸层析法可用于分析蛋白质中氨基酸的组成，从而揭示蛋白质的结构和功能。
2. 质量控制：纸层析法可用于对食品、药品等中氨基酸含量的快速检测，保证产品质量和安全性。
3. 生物体内氨基酸代谢研究：纸层析法可用于研究生物体内氨基酸的代谢途径和代谢产物。
四、纸层析法的优缺点纸层析法作为一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法，具有以下优点：1. 简单易行：操作简单，不需要复杂的仪器设备，成本低廉。
2. 分离效果好：对于氨基酸的分离效果较好，可以得到较为准确的结果。
3. 易于观察：通过显色剂的反应，可以直观地观察到氨基酸在纸上的分离和鉴定结果。
然而，纸层析法也存在一些缺点：1. 分离效果有限：对于某些结构相似的氨基酸，纸层析法的分离效果不佳，难以实现准确鉴定。
氨基酸纸层析法
氨基酸纸层析法氨基酸纸层析法（paper chromatography of amino acids）是一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法。
本文将详细介绍氨基酸纸层析法的原理、步骤、实验条件和数据处理方法等内容，以帮助读者更好地了解并应用这一实验技术。
一、氨基酸纸层析法的原理氨基酸纸层析法是利用氨基酸在纸上的分布系数和溶剂的渗透速度差异进行分离的方法。
其原理是在一根滤纸条上画上水平的线，将待测的氨基酸溶液直接点于纸条上，待溶液中的氨基酸离子在滤纸上沿渗透液前进，不同氨基酸在滤纸上的迁移速度不同，从而实现氨基酸的分离和测定。
二、氨基酸纸层析法的步骤1. 实验前准备（1）准备氨基酸样品，将其溶解在适当的溶剂中，并使用pH 计调节至适当的酸碱度。
（2）准备滤纸条，按照实验需要确定滤纸的宽度和长度。
（3）准备层析槽，将槽中的溶剂预先与上盖采光纸取代，避免有光照射到。
2. 进行层析实验（1）在滤纸条上绘制水平基线，并将标记的点分开，便于后续氨基酸的测定。
（2）将氨基酸溶液直接点于滤纸条上，点的位置要尽量靠近基线，以避免扩散的影响。
（3）将纸条的一端浸入含有适当溶剂的层析槽中，保持溶剂的面平稳。
（4）待溶液中的氨基酸在滤纸上渗透，不同氨基酸迁移的距离不同，最终在纸条上形成清晰的色斑。
（5）将纸条取出，用热风干燥，然后在紫外灯下进行观察和记录。
3. 数据处理将滤纸上的色斑分别用铅笔勾画出来，并测量它们与基线之间的距离。
然后，根据距离之间的比例关系来计算氨基酸在纸上的迁移速度，并与标准曲线进行比较，从而得出待测氨基酸的浓度。
三、氨基酸纸层析法的实验条件1. 溶剂体系常用的溶剂体系有正丙醇/ 乙酸/水 = 4:1:5、正丙醇/氨水/水 = 70:2:25等，需要根据实验需要确定溶剂的组成和比例。
2. 滤纸条的准备常用的滤纸有菱形滤纸和圆形滤纸，需要根据所需分离的氨基酸种类和数量决定滤纸的大小。
3. 实验条件实验应在干燥、通风的环境中进行，避免光照和温度过高。
实验一纸层析法分离鉴定氨基酸
【三、器材与试剂】
【三、器材与试剂】 器材： 1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸(新华一号) 试剂： 1、扩展剂 （正丁醇：水：冰醋酸= 4：3：1） 2、显色剂 0.1％茚三酮正丁醇溶液。 3、氨基酸溶液 0.5％的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液 及它们的混合液
显色： 用喷雾器均匀喷上0。1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
计算Rf值
【五、实验结果与分析】
【六、注意事项】
【七、思考题】
1、实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？ 2、Rf值的含义、影响因素？
下次实验 ： 实验二 蛋白质和氨基酸的颜色反应
值 日 生 值 日
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小实验
当滤纸接触到溶剂时，溶液将上升。 滤纸上的小圆点是4种不同的氨基酸的混合物。 看看接下来会发生什么事情…
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可以看出1号氨基酸上升的最高，在滤纸上跑得最快。 而4号氨基酸与滤纸的结合最紧，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。
这就是纸色谱法。 对照上图，可知道1-4号的各代表什么氨基酸。 纸色谱法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具。
实验一 纸层析法分离鉴定氨基酸
【一、实验目的】
【二、实验原理】
层析技术 是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。 可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷等
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固定相 在层析中起分离作用而不随层析过程移动的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结合的水。固定相被看成是样品移动的阻力。
氨基酸的分离鉴定——纸层析
氨基酸的分离鉴定——纸层析氨基酸是构成蛋白质的基本单元，其在生物体内的作用极为重要。
因此对氨基酸的分离和鉴定具有重要的研究意义。
纸层析是一种常用于分离和鉴定氨基酸的方法。
其原理是利用氨基酸在纸层析板上的运动速度不同，根据氨基酸之间的相互作用，分离出各种氨基酸。
实验步骤：1. 纸层析板的制备将一张高分子量纸，如Whatman No.1滤纸，剪成所需要的大小，并用铅笔在纸上画出氨基酸移行的标线。
2. 氨基酸样品的制备将所需的氨基酸样品溶解在适量的水中，浓度应为0.2-2%。
3. 样品的上样将氨基酸溶液利用微量注射器沿着标线往上移行。
在上样后，将纸层析板放在带有盖子的玻璃罩中，罩中放置一些饱和度为70%的异丙醇-水溶液，保持相对湿度为70%，使其充分展开。
5. 鉴定氨基酸将经过分离的氨基酸溶液阴性反应的氨基酸用二乙酰胺-丙酮混合溶液鉴定。
将0.2ml 二乙酰胺-丙酮混合溶液加入几滴氨基酸样品中，加热60℃-80℃，5分钟。
加入0.1ml氯仿，振荡混合，分离出上清液，上清液加入干燥瓶中，用喷雾器喷洒Ninhydrin试剂，加热于热水中1分钟，在冷水中快速降温附着氨基酸的部位呈现紫色。
注：二乙酰胺-丙酮混合溶液的组成为45%二乙酰胺，45％丙酮和10%水。
6. 结果的解释根据氨基酸在纸层析板上的运动速度和比色反应的颜色，确定样品中的氨基酸种类及含量。
优点：纸层析方法简便易行，无需昂贵的仪器设备，适用于小样品分析，能分离不同种类的氨基酸，并且结果清晰，操作简单。
限制：纸层析分离结果受到氢键作用和酸碱度等因素的影响，需要控制好上样的数量和浓度。
此外，纸层析无法分离胶原氨基酸和类似结构的氨基酸，且鉴定结果在颜色和色谱图谱方面有些模糊。
纸层析法—氨基酸的分离与鉴定
纸层析法—氨基酸的分离与鉴定纸层析法——氨基酸的分离与鉴定⼀、实验⽬的1、了解纸层析法的使⽤原理。
2、掌握⽤纸层析法分离蛋⽩质的操作步骤。
⼆、实验原理1、纸层析法是以滤纸作为惰性⽀持物的分配层析⽅法，滤纸上的纤维具有羟基，是亲⽔基团，滤纸吸附⽔作为固定相，其上流经的有机溶剂即展层剂作为流动相。
当展层剂流经固定相时，固定相上的样品由于亲⽔、疏⽔能⼒不同，在两相之间不断分配，疏⽔能⼒强的多溶于流动相，随流动相移动距离较远，亲⽔能⼒强的移动距离则较近。
2、所有的氨基酸的α碳上均连接⼀个氢原⼦和两个亲⽔基团羧基（—COOH）与氨基（—NH2），唯⼀的不同则在于R基团。
因此R基团在氨基酸的亲⽔疏⽔能⼒对⽐中起到了决定性的作⽤。
本实验采⽤丙氨酸，苯丙氨酸，天冬氨酸，其R基团分别是—CH3，—CH2—C6H5，—CH2—COOH，其亲⽔疏⽔能⼒迥异，能在滤纸上明显分开。
3、Rf值表⽰原点中⼼⾄显⾊斑点中⼼的距离与原点中⼼⾄流动相前沿的距离⽐。
在⼀定条件下，Rf值为定值，其影响的因素有物质本⾝的性质，溶剂的性质，PH值，温度，滤纸的性质等等，本实验不予探究。
在测量原点中⼼⾄显⾊斑点中⼼的距离时，由于斑点的形状不规范（近似圆形），所以，⼀般取斑点的重⼼，测量出重⼼与起点的距离即可。
4、显⾊原理：茚三酮在弱碱性溶液中与α—氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氧，脱羧反应，最后茚三酮与反应产物——氨和还原茚三酮发⽣作⽤⽣成紫⾊物质。
三、试剂（⼀）提前配制试剂8*10-3mol/L丙氨酸溶液：精确称取0.356g晶体，溶解后定容到500ml。
8*10-3mol/L苯丙氨酸溶液：精确称取0.661g晶体，溶解后定容到500ml。
8*10-3mol/L天冬氨酸溶液：精确称取0.532g晶体，溶解后定容到500ml。
（将上述三种溶液装于⼩瓶中实验时，每两组共⽤⼀组试剂）正丁醇88%甲酸蒸馏⽔茚三酮晶体注：实验时，以上试剂均为每两组同学共⽤⼀组试剂。
纸层析法分离鉴定氨基酸
纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法是一种常用的分离和纯化化学物质的实验方法，被广泛应用于有机合成、生物化学和食品科学等领域。
本文将介绍纸层析法在氨基酸分析中的应用。
一、实验原理氨基酸的分离和鉴定是生物化学实验中常用的手段。
氨基酸分子中含有羧基和氨基，可以通过纸层析法实现其分离。
纸层析法是一种基于物质分子间不同的吸附性能而进行分离的方法。
在纸层析实验中，将试样涂在纸层析片（通常为滤纸）的一侧，并将其放入溶剂（通常为水、丙酮、甲醇等）中，溶剂会沿纸层析片向上移动，分离出不同物质组分。
氨基酸分子的羧基和氨基分别具有不同的亲水性和疏水性，因此在纸层析分离中会表现出不同的吸附行为。
例如，疏水性较强的疏水基团会被生物样品或溶剂吸附，从而较慢地从纸层析片上移动，这些氨基酸通常出现在较高位置；而亲水性较强的羧基团则会被水吸附，因此移动速度较快，这些氨基酸通常出现在较低位置。
二、实验步骤1、制备样品：取大约1mg的氨基酸标准品或被测样品，加入1mL的去离子水中，并轻轻搅拌，制成1mmol/L的溶液。
2、制备纸层析片：取一张长约50cm的滤纸，将其叠成4层，然后将中间部分剪成30cm的长条，每条的宽度为1cm左右，用铅笔在底部标记出位置，离开1cm到1.5cm的距离。
3、涂样：在每个标记位置上滴加不同氨基酸溶液，每次加约5µL。
所有样品均按照氨基酸的相对极性从小到大进行涂样，从左到右编号，以便于鉴定。
4、溶剂选择：选择一种适宜的溶剂，通常为水、丙酮、甲醇等。
将滤纸上端放入溶剂中，约1cm左右的位置即可。
5、开始实验：用三角架和夹子将滤纸张贴在玻璃板上，使其呈现较小的倾斜面。
在滤纸的底部悬挂一张白纸，以便于观察样品在纸层析上的位置变化。
待溶剂无法再升高时，实验结束。
6、结果读取：按照行（从上到下）顺序，观察样品的移动距离。
三、实验结果及分析纸层析法可以分离并识别出存在于试样中的氨基酸分子，在实验中，通过观察样品从纸层析片底部开始向上移动的情况，可以确认每个氨基酸的相对位置和含量。
实验六 纸层析法分离氨基酸
质的组分在两相中的分布不同，因此当流动相移动时，不同组分移动的速度也
不相同。易溶于流动相中的组分移动快，在固定相中溶解度大的组分移动就慢， 于是得到分离。
分配层析法中不同溶质的分离取决于其在两相 (固定相和流动相)间
分配系数的不同。分配系数(α)的定义是：
α=溶质在固定相的浓度(CS)/溶质在流动相的浓度(CL)
计算出 4种氨基酸在酸系统中的Rf值。
注意
使用茚三酮显色法，必须在整个层析操作中避免手直
接接触层析纸，因为手上常常有少量含氮物质。显色时它也
呈现紫色斑点。污染了层析结果，因此操作时应戴橡皮手套 或指套。同时也要防止空气中的氨。
思考题
1、为什么在展层时有时用一种溶剂系统，而有时用两种溶剂系统? 2、酸性溶剂系统(或碱性溶剂系统)对氨基酸极性基团的解离有何影响? 3、酸性溶剂系统(或碱性溶剂系统)对碱性氨基酸(赖、精、组)和酸性 氨基酸(天冬、谷)的Rf值有什么影响?
点样要合适样品点的太浓斑点易扩散或拉长以致分离不清氨基酸的点样量以每种氨基酸含520g为宜将准备好的滤纸悬挂在点样架上滤纸垂直桌面用点样管也可用血色素管代替吸取氨基酸样品10g1gl与滤纸垂直方向轻轻碰触点样处的中心这时样品就自动流出
纸层析法分离氨基酸
实验目的
1、掌握分配层析的原理，学习氨基酸纸层析法 的操作技术 (包括点样、平衡、展层、显色、 鉴定及定量)。 2、学习未知样品的氨基酸成分(水解、层析及 鉴定)分析的方法。
实验器材 1、新华滤纸。
2、培养皿(直径115mm)。
3、电热鼓风干燥箱。 4、喷雾器及吹风机。 5、点样管及点样架。 6、针、线、尺。
7、烧杯(50mL)。
8、钟罩(高约430mm,直径约290mm，具磨口塞)。
纸层析法分离氨基酸原理
纸层析法分离氨基酸原理纸层析法是一种常用的生物化学分离技术，它基于氨基酸在不同溶剂中的分配系数不同而进行分离。
在进行纸层析法分离氨基酸时，我们需要了解氨基酸分子结构的特点以及纸层析法的原理和操作步骤。
首先，让我们来了解一下氨基酸的结构。
氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，它由氨基（NH2）、羧基（COOH）、一个氢原子和一个侧链基团组成。
氨基酸的侧链基团决定了不同氨基酸的特性，使它们在纸层析法中表现出不同的行为。
纸层析法的原理是基于氨基酸在纸质吸附剂上的吸附和移动性差异。
当样品溶液在纸上进行展开时，氨基酸会根据其在溶剂中的分配系数在纸上形成不同的斑点。
这些斑点会随着溶剂的上升而移动，最终形成不同的色带，从而实现氨基酸的分离。
在进行纸层析法分离氨基酸时，我们首先需要准备好实验所需的设备和试剂，包括纸层析板、样品溶液、吸附剂、上升溶剂等。
然后，我们将样品溶液加载到纸层析板上，待样品展开后，将其放入上升溶剂中进行分离。
分离完成后，我们可以通过各种检测方法对氨基酸进行定量或定性分析。
纸层析法分离氨基酸的原理简单易懂，操作也相对简便，因此被广泛应用于生物化学和分析化学领域。
它不仅可以用于氨基酸的分离和检测，还可以用于其他有机分子的分离和纯化。
通过对纸层析法的理解和掌握，我们可以更好地开展相关实验和研究工作，为生物化学领域的发展贡献力量。
总之，纸层析法分离氨基酸的原理是基于氨基酸在纸质吸附剂上的吸附和移动性差异，通过这一原理，我们可以实现对氨基酸的分离和定量分析。
掌握纸层析法的原理和操作方法对于开展生物化学和分析化学方面的研究具有重要意义，希望本文能对您有所帮助。
纸层析法分离氨基酸实验报告-V1
纸层析法分离氨基酸实验报告-V1实验目的通过纸层析法分离氨基酸，熟悉纸层析法的操作步骤并掌握分离方法。
实验原理纸层析法是指利用纸张作为固定相，液相为移动相，在它们的作用下，不同成分在纸上的迁移率不同，从而达到成分的分离目的。
氨基酸在酸性条件下可形成有色化合物，可以方便地用紫外分光光度法测定。
实验操作材料：苯酚-氯仿-醋酸-水（5:5:1:1），丙酮-乙醇（1:1），十种氨基酸溶液（组胺、色氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、组氨酸、赖氨酸）。
操作步骤：1. 准备纸层析柱: 将试验纸剪成25cm×2.5cm的长方形，底缘偏左刻缝（1-2mm）、顶缘刻“起点”字样。
将纸沿着底缘折成锥形，锥的底线长度为约0.5 cm，接缝处用胶带固定，壁孔小于2mm，制成纸层析柱。
2. 10种氨基酸的样品处理：先将氨基酸样品用80%乙醇溶解，再按1:1体积比与苯酚-氯仿充分混合后沉淀，用水将沉淀洗涤干净。
再以试剂液（10ml醋酸+90ml水）调整pH值至2-2.5，即得到脱色池。
3. 搭纸层析柱：在脱色池中，开口浸渍所得的氨基酸混合溶液，用塞子堵住顶孔，使其与顶心线平行，锥底朝上，操作平稳仔细，以确保纸层析柱均匀且充分闭合。
4. 通过滤纸柱作为保护：将丙酮-乙醇液（1:1）在小试量安排，调定其颜色大约透过2mm厚的层析柱时感觉不均匀的程度，以使其分离效果较好。
然后将其缓慢地从层析柱顶端滴入，加滤纸柱保护，直到液面距起点约5-8mm即停止。
5. 分离过程：用眼观察等待分离后的色带逐渐移动，当适合所测波长的氨基酸移动一定程度时停止。
收集该氨基酸带，酸化后测定其吸收值，记录吸光度。
6. 彻底清洗层析柱：用乙醇-水混合溶液（8：2），以使得层析柱不至于变硬收缩，在滴液时应精心注意，以便不至于对柱进行破坏。
以蒸馏水洗柱，然后再用丙酮-乙醇缓慢滴溶。
实验结果实验结果如下表所示：氨基酸 | 氨基酸颜色 | 波峰吸收值---|---|---组胺 | 橙红色 | 0.459色氨酸 | 蓝色 | 0.861苯丙氨酸 | 紫色 | 0.328天冬氨酸 | 浅绿色 | 0.177半胱氨酸 | 浅黄色 | 0.123缬氨酸 | 浅橙色 | 0.392脯氨酸 | 浅蓝色 | 0.51丙氨酸 | 浅红色 | 0.207组氨酸 | 深红色 | 0.54赖氨酸 | 浅黄色 | 0.694结论本实验采用纸层析法对氨基酸进行了分离操作。
氨基酸的分离鉴定—纸层析法
2)、氨基酸溶液0．5％的赖氨酸、脯氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0．5％)各配置5mL。
3)、显色剂50～100mL 0．1％水合茚三酮正丁醇溶液。
【实验步骤】
（1）检查培养皿是否干燥、洁净；若否，将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干。
（2）平衡：剪一大块塑料薄膜铺在桌面上，将层析缸或大烧杯到置于塑料薄膜上，再把盛有约5mL展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中，用塑料薄膜密封起来，平衡20min。
【注意事项】
⑴.点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面(即展层时样品可能达到的部分)。
⑵.点样斑点不能太大，防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠，且点样后吹风温度不宜过高，以免样品变性(斑点发黄)。
⑶.展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中。
⑷.展层剂要临用前配制，以免发生酯化，影响层析结果。
⑸.如果样品中溶质种类较多，且某些溶质在某一溶剂系统中的Rf值十分接近时，单向层析分离效果不佳，则可采用双向层析，即将样品点在一方形滤纸的角上，先用一种溶剂系统展层。滤纸取出干燥后，再将滤纸转90度角，用另一溶剂系统展层。所得图谱分别与这两种溶剂系统中作的标准物质层析图谱对比，即可对混合物样品中各成分进行鉴定。
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与被测物的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用单向纸层析法分离氨基酸。
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
实验原理
• 茚三酮的显色原理 氨基酸与茚三酮水合物在弱酸条件下共加热时， 氨基酸被氧化脱氨、脱羧，而茚三酮水合物被 还原，其还原物可与氨基酸加热分解产生的氨 结合，再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化 合物，称为罗曼紫（Ruhemann's purple）。
实验试剂与仪器
• 试剂 纯净的赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸 8×10E-3mol/L溶液；四种氨基酸混合溶液（每 种浓度与对应纯净溶液一致）；2.5%茚三酮丙 酮溶液；酸性展层剂（正丁醇：88%甲酸：水 =60：17：8）。 • 仪器 钟罩×1、培养皿×1、小烧杯10ml×1、层析 柱×1、小漏斗×1、新华一号滤纸 （14cm×17cm）×1、电吹风、烘箱、毛细管、 订书机，及其他常用仪器。
实验结果及分析
——图像实例
实验结果及分析
——各氨基酸比移值Rf
氨基酸
Rf
赖氨酸
0.2294
天冬氨酸
0.3814
丙氨酸
0.5771
亮（白）氨酸
0.8609
在同一实验条件下，比移值Rf主要取决于分配系数，不同的物质分配 系数不同，也就有不同的Rf 。此外，溶剂的溶质的性质、滤纸的性质、展 层的温度和p H值均会影响比移值Rf。 实验中，Rf值与个人操作及具体实验条件息息相关，存在一定波动， 但总体趋势相同。
• 纸层析 纸层析法属于分配层析，层析滤纸为载体， 流动相是指层析液，在毛细拉力作用下， 层析液能不断由下向上流动。固定相是指 被吸附在滤纸纤维之间的水分。由于纤维 素上的羟基具亲水性使这部分水束缚在纤 维素周围，不易扩散而成为固定相。
实验原理
• 在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用 下，上升流经滤液滴点时，滴点上的氨基 酸就相继融入层析液，随着层析液上升， 并发生在分配，即有一部分色素从层析液 分配溶解到固定相中，直到平衡。由于分 配系数的不同，那些分配系数大的氨基酸 分子，随层析液向上移动得快，形成的斑 点集中在滤纸的上部；而分配系数小的氨 基酸分子，随层析向上移动得慢，形成的 斑点集中在滤纸的下面。
纸层析法分离氨基酸原理
纸层析法分离氨基酸原理纸层析法是一种常用的生物化学实验方法，它通过溶液在纸上的上升作用，利用毛细管作用和分子间相互作用的差异，使混合物中的成分在纸上移动并分离开来。
而氨基酸是生物体内重要的有机化合物，它们是蛋白质的组成部分，对生命活动起着重要的作用。
那么，纸层析法是如何分离氨基酸的呢？下面我们就来探讨一下纸层析法分离氨基酸的原理。
首先，我们需要准备一张纸层析板，将其放入含有氨基酸的溶液中，待纸层析板吸收足够的溶液后，将其取出并晾干。
接下来，将纸层析板立起来，放入一个密闭容器中，加入适量的移动相溶液，使纸层析板底部浸泡在溶液中，然后封闭容器，让溶液上升至纸层析板的顶部。
在这个过程中，溶液会在纸上上升，而不同的氨基酸成分会因为其在纸上的吸附、毛细管作用和分子间相互作用的差异而在纸上移动的速度不同，从而实现氨基酸的分离。
纸层析法分离氨基酸的原理主要涉及到两个方面的因素，一是氨基酸与纸层析板之间的吸附作用，二是溶液在纸上的上升作用。
首先，不同氨基酸的分子结构和性质不同，它们与纸层析板之间的吸附作用也会有所差异。
一些氨基酸分子与纸层析板之间的吸附作用较强，会使其在纸上停留更久，而另一些氨基酸分子的吸附作用较弱，会使其在纸上停留的时间较短。
其次，溶液在纸上的上升作用也会影响氨基酸的分离。
溶液在纸上上升的速度与纸的毛细管作用和分子间相互作用有关，而不同氨基酸分子与溶液之间的相互作用也不同，因此它们在纸上上升的速度也会有所不同。
通过以上原理，我们可以利用纸层析法来分离混合氨基酸溶液中的不同成分。
在实际操作中，我们可以根据氨基酸的特性和纸层析板的选择，调整溶液的成分和上升速度，从而实现对氨基酸的有效分离。
纸层析法分离氨基酸的原理简单易行，成本低廉，因此在生物化学实验中得到了广泛的应用。
总的来说，纸层析法分离氨基酸的原理主要涉及到氨基酸与纸层析板之间的吸附作用和溶液在纸上的上升作用。
通过调整实验条件，我们可以有效地利用纸层析法来分离氨基酸混合物中的不同成分，为生物化学研究提供了重要的实验手段。
实验一氨基酸的分离鉴定纸层析法
02
实验原理
纸层析法的原理
纸层析法是一种基于物质在固定相和 流动相之间分配系数的差异进行分离 的方法。在纸层析中，固定相是纸纤 维上的水分子，而流动相是溶剂。当 流动相通过固定相时，物质在两相之 间的分配系数不同，导致它们在固定 相和流动相之间的移动速度不同，从 而实现分离。
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02
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改进实验操作流程
进一步规范实验操作步骤， 提高实验效率。
优化实验条件
尝试不同的实验条件，如 温度、湿度、展开剂等， 以提高实验结果的准确性 和可靠性。
引入先进技术
考虑引入高效液相色谱等 技术手段进行氨基酸的分 离鉴定，以提高分离效果 和鉴定精度。
THANKS
感谢观看
通过纸层析法，可以根据氨基酸的极性大小将其分离成不同的组分。
影响氨基酸分离的因素
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流动相的组成
流动相的组成对氨基酸的分离效果有显著影响。改变流动相的组成可以 调整氨基酸在固定相和流动相之间的分配系数，从而改变它们的移动速 度。
固定相的性质
固定相的粒径、吸附能力等性质也会影响氨基酸的分离效果。选择合适 的固定相可以提高分离效果和分辨率。
准备实验材料
选择适当的滤纸、展开剂、氨 基酸样品等。
展开
将滤纸悬挂在展开剂中，控制 展开剂的流速和高度，确保展 开充分。
观察和记录
观察各氨基酸在滤纸上的位置， 记录各组分的Rf值（相对迁移 率）。
了解氨基酸的理化性质和分离鉴定方法
氨基酸的理化性质包括极性、溶解度、酸碱性、光学活性等。这些性质决定了氨 基酸在纸层析法中的分离效果。
1 氨基酸的分离---纸层析法
【实验步骤】
1、配扩展剂： 正丁醇：冰醋酸：水= 20ml ：5ml ：15ml 顺序：正丁醇→冰醋酸→水，放入分液漏 斗中，充分混匀。静置约10min后分层，放 出下层水层，其余的倒入培养皿中。
2. 准备滤纸
取一张层析滤纸，距纸底边2cm处用 铅笔划一横线，沿线每隔2.5cm作一记 号为点样处，点样处也不要太靠近两侧 边（约距1.5cm），会产生边缘效应。
3.点样
用毛细管依次吸取标准品氨基酸和 混合样，吸管与滤纸垂直，轻轻接触纸 面，样品扩散直径小于3mm。一滴滴完 后用冷风吹干，再点第二次，共点三 次。
4.扩展
将点完样的滤纸两侧面对齐， 用针线缝合，纸的两边不能接触。 将点样后的滤纸直立于培养皿的
扩展剂中，（点样的一端在下， 扩展剂的液面需低于点样线1 cm ） 当溶剂展层至滤纸上沿2-3cm处 展层结束，取出滤纸。用铅笔画
【结果分析与讨论】 【思考题】
通过本次实验，讨论下列问题： （1）简述纸层析的原理。 （2）判断氨基酸极性大小顺序，讨论AA极 性与Rf的关系？ （3）什么是Rf值？影响的主要因素是什么？
下周实验：脂质的薄层层析 （405实验室） 每组清洗一块玻璃板，置于烘箱中备用。
6、缝合时，滤纸的两个纸边不能相互接触并 且底边应对齐，点样线一面滤纸朝外。 7、点样时，样品扩散圈不能过大，直径小于 3mm。 8、使用移液管时应右手拿管，左手拿吸耳球 并用食指堵管口。 9、使用移液管时，应先看清管的最大刻度， 每一格代表多少后再量取。
10、 15ml水是用蒸馏水，在水槽边的大玻璃瓶中。 11、 实验结束请清洗实验玻仪，但不要清洗展层缸 及其中的培养皿。 12、有机废液倒入右侧实验台上的“废液收集有机 溶剂”大试剂瓶中。 13、 实验结束, 回收竹夹子、A4复印纸、电吹风。 14、实验报告要写同组同学号数、名字，层析滤纸 贴在其中一位同学的实验报告上。 15、坐椅推入实验台下，空出过道。
纸层析法分离氨基酸
主要试剂：
（1）展开剂 正丁醇:甲酸:水＝60:12:8。 （2）氨基酸标准溶液 2 g·L-1水溶液。 （3）茚三酮 1 g·L-1乙醇溶液。 （4）氨基酸混合试液 将（2）配制的三种氨基酸等量混合。
实验操作：
1.在层析缸中装入展开剂，其高度约1.5~2.0cm；
2.准备滤纸：戴上手套，取层析滤纸一张，在纸的另一端距 边缘3.0cm处用铅笔画一直线，在此直线上每隔2cm作一记 号，为点样位置（即原点）；
3.点样：用毛细血管依次将异亮氨酸，谷氨酸，赖氨酸和混 合样品分别滴在四个位置，点样干后再点一次； 注意事项：每个点在纸上扩散的直径，最大不超过3mm；
实验步骤 ——点 样
3.0cm
1234
异 亮赖 谷混 氨氨 氨合 酸酸 酸液 3.0cm
各点 φ≈2mm
实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题
实验原理：
展开后 斑点
A 原点 B
溶剂 前沿
a1 a2
b
实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题
Rf：0~1， Rf值相差越大，分离效果越好。 本实验分离和鉴定的氨基酸混合液：异亮氨酸、 赖氨酸和谷氨酸。
无色物质的纸色谱可用光谱法（紫外光照射）或 显色法鉴定，氨基酸纸色谱图谱常用茚三酮或吲哚 醌作为显色剂，本实验采用茚三酮作为显色剂。
4.展层：将滤纸直立于层析缸中（点样的一端在下，展开 剂的液面需低于点样线1cm，滤纸勿与缸壁接触），盖好 层析缸盖，进行展层，待溶剂上升15~20cm时，取出滤纸， 用铅笔描出溶剂前沿界线，电吹风吹干；
5.显色：用喷雾器均匀喷上水合茚三酮乙醇溶液，然后用 电吹风吹干，即可显出各层析斑点。
实验处理：
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纸层析法分离氨基酸目的和要求掌握分配层析的原理，学习氨基酸纸层析法的操作技术(包括点样、平衡、展层、显色、鉴定及定量)。
学习未知样品的氨基酸成分(水解、层析及鉴定)分析的方法。
原理层析法亦称色层分离法、色谱分析法或色谱法。
1903年俄国化学家茨维特(M. Tswett)发现用挥发油冲洗菊粉柱时，各种颜色的色素在吸附柱上从上到下排列成色谱，故称“色层分离法”。
1931年有人用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体，显示了这一分离技术的高度分辩力，从此引起了人们的广泛注意。
自1944年应用滤纸作为固定支持物的“纸层析”诞生以来，层析技术的发展越来越快，五十年代开始，相继出现了气相色谱和高压液相层析，其它如薄层层析、亲合层析、凝胶层析等也迅猛发展。
层析分离技术操作简便，样品用量可大可小，既可用于实验室分离分析，又适用于工业生产中产品的分析制备。
现已成为生物化学、分子生物学、生物工程等学科广泛应用而又必不可少的分析工具之一。
根据所用的支持物及其理化性质不同可将层析法分成三类：1. 用固体吸附剂做支持物的称吸附层析；2. 用吸附了某种溶剂的固体物质(如滤纸)做支持物的称为分配层析；3. 用其表面所含离子能与溶液中的离子进行交换的固体物质做支持物的称为离子交换层析。
纸层析所依据的原理是分配层析，故属于分配层析的范畴。
㈠分配层析分配层析法是利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同而使之得到分离的方法。
将分配层析法中的一种溶剂设法固定在一个柱内，再用另外一种溶剂来冲洗这个固定柱，同样可达到将不同物质分离的目的。
我们把固定在柱内的液体称为固定相，把用作冲洗的液体叫做流动相。
为了使固定相固定在柱内，需要有一种固体物质把它吸牢，这种固体物质本身对分离无作用，对溶质也几乎没有吸附能力，称为支持物。
进行分离时由于被分离物质的各组分在两相中的分布不同，因此当流动相移动时，不同组分移动的速度也不相同。
易溶于流动相中的组分移动快，在固定相中溶解度大的组分移动就慢，结果得以分离。
显然，分配层析法中不同溶质的分离取决于其在两相(固定相和流动相)间分配系数的不同，分配系数(α)的定义是：α =溶质在固定相的浓度(C S)/溶质在流动相的浓度(C L)滤纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的分配层析。
滤纸的成份是纤维素，其–OH基为亲水性基团，可吸附一层水或其它溶剂作为固定相(S)。
通常把有机溶剂作为流动相(L)。
当将溶质样品(被分离物)点在滤纸的一端后，该物质溶解在吸附于支持物上的水分子或其它溶剂分子的固定相中，有机溶剂作为流动相自上而下移动，称为下行层析；反之，使有机溶剂自下而上移动，称为上行层析。
流动相流经支持物时即可与固定相对溶质进行连续的抽提，物质在两相间不断分配的结果即得到分离。
滤纸层析原理还可进一步解释如下：把滤纸看成一个层析柱，后者由多个连续的微板层构成，与溶剂饱和水一道组成固定相；某有机溶剂用作流动相。
当第一层流动相中加入分配系数不同的单位量A、B两物质后，各溶质即可根据一定的分配系数在两相中进行分配，而随着流动相继续向下层移动，各层固定相与新流下的流动相之间会不断进行新一轮的分配。
如此继续抽提下去，A、B两物质就可以完全分开。
显然，各物质分配系数相差越大，则越易分开。
物质分离后在图谱上的位置可用比移值Rf来表示，Rf值的定义是：从溶质层析的起点(原点)到层析斑点中心的垂直距离与从原点到溶剂流动的前沿的垂直距离的比值：Rf = 原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离两相体积比在同一实验情况下是不变的，所以Rf值的主要决定因素是分配系数(α)。
由于每一物质在一定条件下α值是固定的，因此Rf值为其特征常数，可做为定性鉴定的参考数值。
㈡影响Rf值的主要因素1. 物质结构对于Rf值的影响：“物以类聚”，极性物质易溶于极性溶剂(水)中，非极性物质易溶于非极性溶剂(有机溶剂)中。
所以物质的极性大小决定了物质在水和有机溶剂之间的分配情况。
例如酸性和碱性氨基酸极性大于中性氨基酸。
所以前者在水(固定相)中分配较多，因此Rf值低于后者。
2. 溶质与溶剂间的相互作用对Rf值的影响：这种影响是由溶质与溶剂间的相互作用与分配系数的关系所决定的。
溶质与溶剂之间若能形成氢键，对分配系数的影响就很大。
例如酚、三甲基吡啶、氨等和水混合后都能很好地与溶质形成氢键。
某些溶剂(例如酚，正丁醇等)是质子的供体，而水既是质子的供体又是质子的受体。
当溶质结构中增加能接受质子的基团(例如-NH2)时，因酚与水都能给-NH2提供质子，所以酚和水两相对接受质子的基团的引力，基本上是一致的，因此当溶质结构中增加氨基时，该物质与酚和水的作用对其在酚和水两相间的分配影响不大，对Rf值影响较小。
又例如当有机溶剂是质子的受体(如三甲基吡啶等)，而溶质也是质子的受体(如-NH2基)，这时有机溶剂对-NH2没有引力，而水却有引力，于是水的引力就大于有机溶剂，因此溶质就被水拉向水相，对Rf值的影响就大。
3. pH对Rf值的影响：这种影响主要是由pH与分配系数的关系所决定的。
弱酸与弱碱的解离度受pH影响很大，解离度越大，极性越强，极性强的物质在两相溶剂中分配时，偏向于极性强的一相，这样，改变pH就会同时改变分配系数，从而使Rf也会相应变化。
在氨基酸的层析法中，改变溶剂的pH，使酸性和碱性氨基酸的Rf值变动较大，而中性氨基酸的Rf值变动较小。
在正丁醇中加甲酸，可使酸性氨基酸的极性降低，从而使Rf值变大，而使碱性氨基酸的Rf变小。
反之，如在正丁醇中加氨，可使天冬氨酸和谷氨酸的Rf值变小，而使赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸的Rf值变大。
4. 滤纸对Rf值的影响：滤纸本身的pH及含水量对Rf值的影响很大，所以不同的滤纸得到不同的Rf值及不同的斑点形状。
纸上含水量的多少随溶剂与纸对水的亲和力的大小而异，质地不均一的滤纸常使溶剂扩展不一致，随着纤维的纹理流动紊乱，另一方面纸的含水量不均一，也不能得到理想的分离效果。
5. 温度对Rf值的影响：Rf值的重现性与恒温情况的好坏有密切关系。
温度对Rf值的影响主要是因为溶质在固体相与流动相之间的分配随温度的变化而不同。
随各溶剂组分的粘度和表面张力的不同其蒸发能力也不同，因此有些溶剂系统对温度的敏感程度强些，有些则差些。
敏感程度强的对温度的要求就严格，敏感程度差的对温度的要求就不太严格。
温度改变使溶剂系统中的溶解度改变，所以Rf值也改变。
一般层析展层是在恒温室中进行的，室温可在20℃至40℃，温度改变不超过±0.5℃。
无色物质的层析图谱可用光谱法(如核苷酸类物质用紫外光照射)或显色法鉴定。
氨基酸纸上层析图谱常用的显色剂有茚三酮、吲哚醌。
本实验采用茚三酮为显色剂。
茚三酮显色反应受温度、pH，时间影响较大。
如果要使结果重复，必须严格控制上述条件。
样品中如含有大量盐酸会使氨基酸不显出颜色。
样品中含大量盐时显色点上会出现白斑，空气中其它的杂质如氨，硫化氢或酚等皆会影响显色结果。
铜离子可以与氨基酸-茚三酮显色物形成络合物，颜色较稳定，用硫酸铜乙醇溶液洗脱层析后的显色斑点，可以通过比色法定量测定氨基酸含量。
由于纸上层析设备条件较简单，操作比较简便，并可以分离微量样品，因此纸层析方法已成为生化分析和研究的主要方法之一，广泛应用于氨基酸、肽、核苷酸，糖、维生素以及脂肪酸等的分离鉴定。
操作步骤标准氨基酸纸上层析(单向上行层析)滤纸：选用国产新华1号滤纸(若有较多的样品需在纸上分离，可采用新华3号滤纸)，戴上橡皮手套，将滤纸裁剪成28cm×28cm，在距纸边2cm处，用铅笔轻轻划一条线，于线上每隔适当距离画一小圆圈作为点样处，圈直径不超过0.5cm。
点样：点样要合适，样品点的太浓，斑点易扩散或拉长，以致分离不清，氨基酸的点样量以每种氨基酸含5~20μg为宜，将准备好的滤纸平铺在实验台上，用点样管(也可用血色素管代替)吸取氨基酸样品10μg(1μg/μL)，与滤纸垂直方向轻轻碰触点样处的中心，这时样品就自动流出。
点样的扩散直径控制在0.5cm之内，点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴，为使样品加速干燥，可使用吹风机吹干。
记下点样位置(标样及混合样)。
将点好样品的滤纸两侧比齐，用线缝好，揉成筒状。
注意缝线处纸的两边不要接触。
避免由于毛细现象使溶剂沿两边移动特别快而造成溶剂前沿不齐，影响Rf值。
展层及显色：配制酸性溶剂系统(20 ml/份)：正丁醇：80%甲酸：水=15:3:2(体积比)，加入茚三酮显色液并混匀。
将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内(注意滤纸不要碰皿壁)，盖好钟罩进行展层(60~90 min)，当溶剂展层至距离滤纸上沿约1cm时，取出滤纸，立即用铅笔标出溶剂前沿位置，置烘箱烘干至显色。
标准氨基酸Rf值的计算：用尺测量显色斑点的中心与原点(点样中心)之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，求出此值，即得某特定氨基酸的Rf值。
依据各标准氨基酸的层析位置推断混合样品中含有哪些成份。
注意事项：(1)使用茚三酮显色法时应在整个层析操作中避免手直接接触层析纸，因为手上常常有少量含氮物质，显色时亦呈现紫色斑点而污染层析结果，因此操作时应戴橡皮手套或指套。
同时也要防止空气中的氨。
(2)为了鉴定未知样品中某几种氨基酸的存在，仅用一种溶剂系统展层通常是不够的。
一船应采用2~3种溶剂系统展层，显色后再分别与这些溶剂系统的标准氨基酸图谱比较以相互印证，才能作出比较确切的结论。
试剂和器材试剂1. 若干种氨基酸标准液(1mg/mL)2. 氨基酸混合液(每种氨基酸500mg/mL)3. 0.5%茚三酮丙酮溶液(显色)4. 正丁醇(需重蒸，沸程：116~120℃)。
5. 80%甲酸器材新华滤纸培养皿(直径115mm) 电热鼓风干燥箱吹风机点样管针、线、尺橡皮手套钟罩思考题1. 为什么在展层时有时用一种溶剂系统，而有时用两种溶剂系统?2. 酸性溶剂系统(或碱性溶剂系统)对氨基酸极性基团的解离有何影响?3. 滤纸上点上1μl l0.02mol/L 的甘氨酸(分子量=75)溶液，请问实际上点了多少微克的氨基酸?4. 该实验中有哪些因素可能会影响到氨基酸的层析效果？附1：分配层析原理αA = 1 αB = 1/31st次分配2nd次分配3rd次分配显然，分配系数愈小(流动相溶解度愈大)则移动愈快，反之亦然附2：层析图谱R f = X/Y YX1 X2。