有机酸检测方法
苹果有机酸的测定方法(液相色谱)
苹果有机酸的测定
一、实验目的
1、了解HPLC的工作原理及其构造
2、熟悉HPLC法测定有机酸的操作步骤
二、实验原理
三、实验仪器与试剂
1、仪器：Waters公司的HPLC分析仪（组合型）包括7725i六通阀，510型高压泵，481型紫外-可见光检测器，HW-2000型色谱工作站；CQ250型超声波提取器，高速离心机，Milli-Q超纯水制备装置；PH试纸。
2、试剂：甲醇（色谱纯），超纯水，磷酸二氢铵（分析纯，中国四川成都金山化工厂）。
七种有机酸的标品溶液：草酸（0.025mg/ml）、酒石酸（0.25 mg/ml）、苹果酸（0.75mg/ml）、乳酸（1.0 mg/ml）、乙酸（1.0 mg/ml）、柠檬酸（0.6 mg/ml）、琥珀酸（0.9 mg/ml）。
四、色谱条件：色谱柱：Hypersil BDS C18柱（4.6mm×250mm，5 m）
流动相：0.5% NH
4H
2
PO
4
（PH=2.5）
进样量：20ul
检测波长：210 nm
流速： 1.0ml/min
柱温：室温
五、样品预处理
苹果的预处理：准确称取苹果果肉2.0000g于研钵中，加少许80%乙醇研磨至糊状，移至10ml离心管（共用去80%乙醇5ml），4000rpmin，离心10min。
取上清液至蒸发皿水浴中70℃蒸干，冷却、加入流动相4ml溶解、10000rpmin离心10min，0.45μm超滤，上机。
六、撰写实验报告。
果酒有机酸含量的测定方法
果酒有机酸含量的测定方法
果酒是一种含有很高有机酸的饮品，例如苹果酒、草莓酒、葡萄
酒等，因此测定果酒的有机酸含量对于了解饮品的质量和口感有着重
要的作用。
下面就介绍一种测定果酒有机酸含量的方法。
（一）实验原理
使用碱溶液滴定果酒中的有机酸，有机酸和碱反应产生盐和水，
反应速度快，且滴定结束点明显，准确度高。
（二）实验步骤
1.称取10毫升的果酒，加入50毫升蒸馏水稀释至100毫升，混
匀待用。
2.取25毫升这个混合溶液，加入几滴酚酞指示剂，并加入
0.1mol/L的氢氧化钠溶液，搅拌均匀。
3.用0.1mol/L盐酸滴定氢氧化钠至混合液颜色变为粉红色，记
录所需的滴定计数N。
（三）计算结果
（1）计算盐酸的摩尔浓度（C）。
C=0.1mol/L（由于盐酸与氢氧化钠的滴定反应是一对一的反应，因此
盐酸的摩尔浓度与氢氧化钠的摩尔浓度相等）
（2）计算有机酸含量（m/V）。
m/V = N*C*88.01/1000
其中，N为滴定计数，C为盐酸浓度，88.01为分子量，1000为溶液的
体积（单位为毫升）。
以上就是测定果酒有机酸含量的实验步骤，需要注意的是，在实
验过程中应该保证实验器材的干净和精准，以确保实验结果的准确性。
高效液相色谱测定山楂中的有机酸
液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于有机化学和生物学实验中的高效分离分析技术。
它可以用于鉴定、分离和定量分析物质，并且重要的是，它可以应用于复杂混合物中的成分。
本文旨在介绍液相色谱技术
在测定山楂中有机酸的应用。
首先，根据样品的结构、水溶解性和热稳定性等，对山楂水提液样品
进行改性处理。
然后，用高效液相色谱分析水提物质中的有机酸成分，其中，在反相条件下采用阴离子交换型分离柱，使用梯度沉淀浓缩方法，改变梯度组成，优化参数，检测山楂中的有机酸的含量。
最后，使用常规的HPLC/UV检测装置测试所获得的检测数据。
本文以分析山楂有机酸为例，实验结果显示，有机酸的含量为2.3%。
因此，
可以得出结论：通过高效液相色谱可以准确地测定山楂中的有机酸含量。
总之，所述的高效液相色谱方法能够准确地测定山楂中的有机酸。
由
于它具备快速、灵敏和可重复性的优点，因此，这种技术对于工业生
产尤为重要，用于对山楂中的有机酸的含量进行快速、准确的检测。
有机酸的分析
A = h×半宽度（峰高一半处色谱峰宽度）
A=（底×高）／2
A值=积分仪求得总面积的94％。
计算：
①某一组分的比例=(一组分峰面积／94%）/（总峰面积／94％）
②以标准曲线来计算含量，以含量为横坐标，峰面积为纵坐标。
一般用高压气瓶供给（N2、He )
固定相固体——固体吸附剂
液体——担体+固定液
1906年，俄国植物学家茨威特分离植物叶绿体中色素而得名，玻璃管中装CaCO3,石油醚溶解植物叶绿体倒入管内，再用石油醚做淋洗剂，结果，柱子中被分成几个不同颜色的谱带。
气相色谱流程示意图：
从记录仪得到的色谱图
保留时间——从进样到出现组分浓度极大点（色谱峰最高点）的时间tR，
最小检测量10-11g／ml。
2.2.2、高效液相色谱的类型
流动相——液相
固定相——①固体吸附剂
②液相+支持剂
③离子交换树脂
④凝胶
按分离原理分：
1.液—固吸附色谱2.液—液分配色谱
3.离子交换色谱4.空间排阻色谱
2.2.3高效液相色谱仪的基本组成
1.输液系统——高压泵、贮液器、过滤器、梯度洗脱装置
2.进样系统——进样器
21气相色谱法gcgaschromatography流动相气体由载气带着物料气体一般用高压气瓶供给n2he固定相固体固体吸附剂液体担体固定液1906年俄国植物学家茨威特分离植物叶绿体中色素而得名玻璃管中装caco3石油醚溶解植物叶绿体倒入管内再用石油醚做淋洗剂结果柱子中被分成几个不同颜色的谱转子流量计汽化室检测器微电流放大器记录仪电脑转子流量计汽化室检测器微电流放大器记录仪电脑净化器流量计色谱柱汽化室检测器记录器净化器流量计色谱柱汽化室检测器记录器净化器流量计色谱柱汽化室检测器记录器放空载气入口接色谱柱散热片加热块汽化室示意图载气入口接色谱柱散热片加热块汽化室示意图从记录仪得到的色谱图保留时间从进样到出现组分浓度极大点色谱峰最高点的时间tr在一定固定相一定操作条件下各组分的值可用来作定性分析
总有机酸测量
气相色谱法：乳酸、乙酸、丙酸和丁酸含量，用气相色谱法测定，测定条件为：检测器F1D，柱2m×4 mm，固定相Pora—pak Q(80目)，柱温220O C，汽化室和检测器温度260O C，N2=65 mL／min，Air=550 mL／min，H2=55 mL／min，灵敏度l6×l0x，纸速5mm／min酸碱滴定法测定总有机酸含量1 、氢氧化钠溶液(0．1 mol·L-1)的配制取适量氢氧化钠加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，静置，澄清后备用。
取澄清的氢氧化钠饱和溶液5．6mL，加新沸放冷的蒸馏水使成1 000 mL，摇匀。
2 、供试品溶液的制备精密称取板蓝根提取物0．4 g，置50mL锥形瓶中，无水乙醇溶解，即得。
3、样品含量测定供试品溶液中，加入酚酞指示液2滴，用标定好的氢氧化钠滴定液(0．074 9 mol·L-1)滴定，滴定至溶液显粉红色。
每1 mL氢氧化钠滴定液相当于9．916 mg 的水杨酸(C7H603)，总有机酸以水杨酸计。
反相高效液色谱法测定板蓝根总有机酸中水杨酸的含量1 、色谱条件Kromasil C18柱(4．6 mm x 250mm，5 µm)；流动相乙腈-1％醋酸水溶液(25：75)，检测波长225 nm，流速10 mL/min-1，柱温为室温，理论塔板数按水杨酸计算不低于3 000。
2、对照品溶液的配制精密称定干燥的水杨酸对照品10．6 mg，100 mL量瓶甲醇定容，摇匀，0．45µm微孔滤膜过滤，即得对照品溶液。
3 、供试品溶液的制备精密称取板蓝根提取物0.25 g，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1 mL，置100 mL量瓶，甲醇稀释至刻度，摇匀，用0．45µm微孔滤膜滤过，取续滤液即为供试品溶液。
4 、线性关系的考察精密量取上述配制的对照品溶液0.25，1．0，2．0，3．0，5．0，6．0 mL置10 ml量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，0．45µm微孔滤膜过滤，取上述溶液在选定的色谱条件下，分别进样10µL,以峰面积为纵坐标，含量为横坐标，绘制标准曲线。
高效液相色谱检测葡萄及葡萄酒中7种有机酸方法的建立
高效液相色谱检测葡萄及葡萄酒中7种有机酸方法的建立沈 燕1，张正文1，刘兴凯1，王福成2，邵学东1*（1.君顶酒庄有限公司，山东烟台 265607；2.烟台市蓬莱区葡萄与葡萄酒产业发展服务中心，山东烟台 265699）摘 要：目的：建立了利用高效液相色谱测定葡萄及葡萄酒中7种有机酸的检测方法。
方法：色谱条件为Hi-Plex H色谱柱（300 mm×7.7 mm，8 μm），PL Hi-Plex H保护柱（50 mm×7.7 mm，8 μm）；紫外检测波长210 nm；流动相为0.006 mol·L-1的硫酸；流速0.6 mL·min-1；柱温55 ℃；进样量10 μL。
结果：草酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸和乙酸出峰时间均在20 min以内；标准曲线线性关系良好，相关系数（R2）在0.999 9～1.000 0；检出限在0.031 4～0.722 3 mg·L-1；加标回收率在95.24%～102.04%，其相对标准偏差在0.16%～1.87%。
结论：该方法操作简单，检测时间短，具有较高的准确性和精确性。
关键词：有机酸；葡萄；葡萄酒；高效液相色谱；检测方法Establishment the Method of Seven Kinds of OrganicAcids in Grape and Wine by High Performance LiquidChromatographySHEN Yan1, ZHANG Zhengwen1, LIU Xingkai1, WANG Fucheng2, SHAO Xuedong1*(1.Junding Castle Co., Ltd., Yantai 265607, China; 2.Yantai Penglai District Grape and Wine Industry DevelopmentService Center, Yantai 265699, China)Abstract: Objective: To establish a HPLC method for the determination of 7 organic acids in grape and wine. Method: The chromatographic conditions were Hi-Plex H column (300 mm×7.7 mm, 8 μm) and PL Hi-Plex H protective column (50 mm×7.7 mm, 8 μm). UV detection wavelength 210 nm; sulfuric acid with 0.006 mol·L-1 mobile phase; flow rate 0.6 mL·min-1; column temperature 55 ℃. The sample size was 10 μL. Result: The peak time of oxalic acid, citric acid, tartaric acid, malic acid, succinic acid, lactic acid and acetic acid were all within 20 min. The standard curve has a good linear relationship with the correlation coefficient（R2） ranging from 0.999 9 to 1.000 0. The detection limit was 0.031 4～0.722 3 mg·L-1. The recoveries ranged from 95.24% to 102.04%, and the relative standard deviations ranged from 0.16% to 1.87%. Conclusion: The method is simple to operate, short detection time, and has high accuracy and accuracy.Keywords: organic acid; grape; wine; high performance liquid chromatography; detection method有机酸是葡萄果实及葡萄酒中体现风味的主要物质之一，其含量是衡量葡萄果实成熟度和品质的重要参数，在葡萄酒的酿造中发挥着关键作用，对酒的感官质量有一定的影响，与酒的物理化学以及微生物稳定性有着紧密联系[1-4]。
高效液相色谱法对果汁中有机酸含量的标准曲线的制作
高效液相色谱法对果汁中有机酸含量的标准曲线的制作一、引言果汁作为一种受欢迎的饮品，其质量以及营养成分的检测备受关注。
其中，有机酸是其中的一种重要成分，其含量的检测可以为果汁的质量控制提供重要的依据。
因此，本文将介绍一种高效液相色谱法（HPLC）来对果汁中有机酸含量进行检测，并说明制作标准曲线的方法。
二、实验设计为了制作有机酸标准曲线，我们需要以下实验设计：1. 实验仪器：高效液相色谱仪（HPLC）和外部标准品有机酸（如苹果酸、柠檬酸、草酸等）。
2. 实验步骤：（1）准备所需样品和标准品。
（2）进行液体色谱分析，采用C18反相色谱柱，流动相为含有0.5% H3PO4的水甲醇溶液。
（3）建立样品和标准品的色谱图，测定各有机酸的峰面积。
（4）根据标准品峰面积的测定值，制作有机酸的标准曲线。
3. 测量标准曲线：（1）根据标准曲线的浓度范围和间隔，分别取一定量的标准品，制备一系列不同浓度的标准溶液。
（2）将标准溶液进行色谱分析，测定各有机酸的峰面积。
（3）根据色谱图上的峰面积值和标准品的浓度，将数据输入计算机，进行数据回归和拟合，制作出有机酸的标准曲线。
4. 用标准曲线测定果汁中有机酸的含量。
（1）取一定量的果汁样品，经过预处理后，进行液体色谱分析。
（2）测定各有机酸的峰面积。
（3）根据标准曲线计算果汁中有机酸的含量。
三、结论通过上述实验设计，我们可以制作出果汁中有机酸的标准曲线，并用该曲线来检测果汁中有机酸的含量。
这种基于HPLC技术的方法不仅准确、速度快、操作简单，而且可靠性高，为果汁质量的检测提供了可靠的方法。
气相色谱法同时检测复合酸化剂中6种有机酸的方法
气相色谱法同时检测复合酸化剂中6种有机酸的方法随着化学工业的快速发展，复合酸化剂作为一种重要的催化剂，在有机合成和化学制品生产过程中发挥着重要作用。
然而，复合酸化剂中常常含有多种有机酸，由于其种类繁多、浓度不同，传统的分析方法往往不适用。
本文将介绍一种采用气相色谱法同时检测复合酸化剂中6种常见有机酸的方法。
2. 方法介绍2.1 样品制备首先，将复合酸化剂样品粉末加入适量的溶剂中，进行超声处理以使样品充分溶解。
然后，用滤纸滤除悬浮物，并将滤液转移至干燥瓶中。
在样品制备过程中，需要注意防止其他杂质的污染和挥发损失。
2.2 色谱条件设置本方法采用气相色谱仪进行分析，使用6种适当的色谱柱进行分离和定量。
根据样品的特性和要求，选择合适的色谱柱类型和尺寸，例如，常用的色谱柱包括DB-5、DB-1、HP-5等。
色谱仪的工作温度、进样量和分析时间等参数也需要根据实际情况进行优化和调整。
2.3 标准曲线制备与定量为了准确地检测样品中的有机酸含量，需要制备一组含有已知浓度的标准溶液，并进行气相色谱分析。
根据标准曲线上的峰面积与浓度的线性关系，可以计算出样品中每种有机酸的浓度。
标准曲线的制备过程需要注意样品的稀释配比和浓度范围的选择。
3. 实验步骤3.1 样品准备将复合酸化剂样品粉末称取适量，加入溶剂中，并进行超声处理使其充分溶解。
3.2 样品处理用滤纸滤除悬浮物，并将滤液转移到干燥瓶中。
保持样品瓶密封，以防止挥发和污染。
3.3 标准曲线制备准备一系列含有已知浓度的标准溶液，并进行气相色谱分析，记录每种有机酸的峰面积和浓度。
3.4 色谱分析将样品和标准溶液以相同的方式进样到色谱仪中，根据标准曲线进行定量分析，计算每种有机酸的浓度。
4. 结果与讨论使用本方法进行分析后，可以得到复合酸化剂中6种有机酸的浓度值。
常见的有机酸包括乙酸、丙酸、戊酸、己酸、庚酸和癸酸。
通过比较不同样品的有机酸含量，可以评估复合酸化剂样品的质量和纯度。
滴定检测葡萄酒有机酸过程的注意事项
滴定检测葡萄酒有机酸过程的注意事项滴定分析是将已知准确浓度的标准溶液滴入被测物质的溶液中，直到加入的溶液物质的量刚好按化学计量关系反应完全，然后根据加入的标准溶液的浓度和消耗的体积计算出被测物质的含量的分析方法。
因为这种方法是基于测量溶液的体积，所以也称为容量分析法。
一、滴定分析法分类1.直接滴定法（酸碱滴定法）：凡能满足滴定分析要求的反应都可用标准滴定溶液直接滴定被测物质。
例如用NaOH标准滴定溶液可直接滴定HCl、H2SO4等试样。
2.返滴定法（配位滴定法）：返滴定法（又称回滴法）是在待测试液中准确加入适当过量的标准溶液，待反应完全后，再用另一种标准溶液返滴剩余的第一种标准溶液，从而测定待测组分的含量。
这种滴定方式主要用于滴定反应速度较慢或反应物是固体，加入符合计量关系的标准滴定溶液后，反应常常不能立即完成的情况。
例如，铝离子与EDTA（一种配位剂）溶液反应速度慢，不能直接滴定，可采用返滴定。
3.置换滴定法（氧化还原滴定法）：置换滴定法是先加入适当的试剂与待测组分定量反应，生成另一种可滴定的物质，再利用标准溶液滴定反应产物，然后由滴定剂的消耗量，反应生成的物质与待测组分等物质的量的关系计算出待测组分的含量。
这种滴定方式主要用于因滴定反应没有定量关系或伴有副反应而无法直接滴定的测定。
例如，用重铬酸钾标定硫代硫酸钠溶液的浓度时，就是以一定量的重铬酸钾在酸性溶液中与过量的KI作用，析出相当量的碘，以淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠溶液滴定析出的碘，进而求得硫代硫酸钠溶液的浓度。
4.间接滴定(沉淀滴定):有些待测组分不能与滴定剂直接反应，但可通过其他化学反应间接测定其含量。
比如溶液中几乎不存在钙离子的氧化还原反应，而草酸钙沉淀是其与草酸根离子相互作用形成的。
过滤清洗后，加入硫酸溶解，用高锰酸钾标准滴定液滴定草酸根离子，从而间接测定钙离子含量。
滴定分析法的优点：操作简单；对仪器要求不高；有足够高的准确度，误差不高于0.2%；方便，快捷；便于普及与推广。
有机酸收集和检测(例)
1、毛竹：样品的准备和处理在 2.0g/kg的高锰酸钾中消毒30min,常温下在温水中浸泡24h,分别采用0,100,500,1000,2000μmol等5种不同浓度氯化铝溶液作为培养液，各浓度下采用5个培养皿（内置滤纸2片并高温灭菌），加培养液20ml，用镊子（经乙醇消毒）分散放入30颗饱满的种子，然后将培养皿放入人工气候箱中（28℃左右，湿度80%左右），隔3d更换1次培养液，培养2周，合并同一试验单元下5个培养皿中培养液，在旋转蒸发仪上浓缩至2ml左右，用超纯水定容至5ml，微孔滤膜后作为供试品溶液。
本实验着重于对几种小分子有机酸的分离和鉴定，以及对超高效液相色谱法这种新方法条件和适用性的探索。
2、大豆：植株培养及根系分泌物的收集与制备选取饱满且大小一致的大豆种子，用清水仲洗干净，经浓度30% H2O2消毒10 min，用去离子水仲洗3~5 次，至无H2O2；将种子用饱和CaSO4浸泡2 h 后，分散放在底部有湿润滤纸的托盘上，用湿润滤纸或纱布覆盖，于黑暗处催芽24 h；选择芽势一致的大豆种子播于装有灭茵石英砂的倒置玻璃瓶（容积为 3 L）中，每瓶播种30 粒，出苗 5 d 后定植11 株；每天用标准营养液浇灌（pH 值为6.3010.01）1 次，每次300 mi，视水分损失状况适量补充水分。
植株于室内光照培养，每天光照/黑暗时间为14 h/10 h；培养温度为白天25~30 C，夜间20 C。
分别在大豆生长的苗期、花期、鼓粒期和成熟期收集根系分泌物。
收集根系分泌物的当天，早晨光照培养植株 2 h 后，用3 L 去离子水淋洗玻璃瓶内石英砂，以去掉养分离子和根系上的分泌物，然后在原条件下继续光照培养；光照6 h 后，用2 L 去离子水淋洗植物根系，收集淋洗液即为根系分泌物；立即向根系分泌物中加入浓度为0.01 g/L 的微生物抑制剂（Microspur Sicheres Trinkwasser，Germany）和 3 滴浓H3PO4，抑制微生物对根系分泌物的分解作用；将收集的根系分泌物800 ml置于旋转蒸发仪中，在40 ℃下减压浓缩至8 ml，于-20 ℃冷冻备用。
[工学]食品中有机酸的分离与测定
![[工学]食品中有机酸的分离与测定](https://img.taocdn.com/s3/m/d0ab1c61b307e87101f696aa.png)
二、试剂 草酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸、琥珀酸、 延胡索酸所有溶液均用重蒸馏水配制。用 10mmol/L磷酸盐缓冲溶液配制各分析样 品浓度为0.01mol/L， 4℃下保存不超过 3d,使用之前应用分离缓冲溶液稀释到所需 浓度。电泳缓冲溶液为pH6.5的 10mmol/LPBS,其中添加溴化十六烷基溴 化吡啶0.4mmol/L和β-CD15.0mmol/L. 所有溶液在电泳之前均需要用0.25um醋酸 纤维膜过滤。
六、结果计算 将同一色谱条件下得到的样品色谱图和 有机酸标准溶液色谱图进行对照，根据色 谱峰的保留时间定性。必要时可在样液中 加入一定量的某种有机酸标准液以增加峰 高方法来进行定性。根据峰面积或峰高进 行定量，再根据样品稀释倍数即可求出样 品中各有机酸的含量。 图7-3是上述色谱条件下的桔子提取液色谱 图。
三、试剂 离了交换树脂:使用阳离了交换树脂 AmberLite(一种人工合成的酚甲醛离子交 换树脂)CG120、阴离了交换树脂 AmberLite CG4B ; AmberLite IRA410。 四、仪器 气相色谱仪:装有氢火焰离了检测器，程序 升温装置。 色谱柱:填充10%SiLicone Dc560 （6080日）的3mm X 2m不锈钢柱或玻璃柱。
五 操作方法 1 样品处理 (1) 固体样品:称取5-10g样品(视有机酸含量而 定)于加有石英砂的研钵中研碎，用25 mL80% 乙醇转移到50mL锥形瓶中，于750C水浴中加热 浸提15min，在20000r/min下离心20min,沉淀 用10mL80%乙醇洗涤两次，离心分离后，合并 上清液并定容50mL。取5mL上清液于蒸发皿中， 在75℃水浴上蒸干，残渣加5mL流动相溶解，离 心，上清液经0.45um滤膜在真空下超滤后进样。 (2)液体样品:吸取5mL样液(视有机酸含量酌情 减)于蒸发皿中，在75 ℃ 水浴上蒸干，残渣加 5mL 80%乙醇溶解，离心，上清液水浴蒸十， 残渣加5mL流动相溶解，离心，上清液经 0.45um滤膜于真空下超滤后进样。
有机酸的分析与检验——柠檬酸含量的测定
有机酸的分析与检验——柠檬酸含量的测定
一、简介
柠檬酸（Citric Acid）是常见有机酸，也是最重要的植物性中性有机酸之一、它是一种白色结晶或粉末，味道酸性，在干燥空气中可以通过很高的温度失去水分而形成结晶。
柠檬酸的主要用途是作为食品的调味料和果汁的酸度调节剂，它也可以用作酶抑制剂，以及用于酸性颜料的酸性调节剂，以及作为生物化学实验。
为了更好的检测柠檬酸的含量，需要开展测定。
二、柠檬酸含量测定
1）准备
准备柠檬酸标准溶液（0.02mol/L），准备规定的分析试剂：
0.02mol/L氢氧化钠溶液、0.01mol/L铝酸钠溶液以及0.02mol/L硫酸。
2）酸度调节
将待测样品（100ml）加入容量瓶，加入适量的0.02mol/L氢氧化钠溶液和0.01mol/L铝酸钠溶液调节酸度，调节至pH=3.0～3.2，放置30分钟。
3）滴定
将酸度调节后的溶液取10ml到滴定管，加入适量硫酸滴定，使用加氢站式滴定仪，调节pH值至7.2，滴定至面色略有变化（粉红色），记录滴定液滴定量V1（滴），其中1ml=20滴。
4）计算
柠檬酸含量（C）的计算公式：
C（柠檬酸）＝V1（滴）÷20（ml）÷V2（ml）×C1（mol/L）。
鉴别甲酸乙酸草酸的方法
甲酸、乙酸和草酸是常见的有机酸，它们在化学性质上有所不同，可以通过以下几种方法进行鉴别：
1. pH值检测：在水中，草酸具有最强的酸性，其pH值约为1.5，而甲酸和乙酸的pH值分别约为3.5和4.8，因此可以通过检测pH值来初步鉴别这三种酸。
2. 碳酸钠试剂检测：将少量的碳酸钠加入酸溶液中，如果产生气泡则表明该酸溶液中含有甲酸或乙酸，如果无气泡则表明该酸溶液中为草酸。
3. 钡盐试剂检测：将少量的氯化钡溶液加入酸溶液中，如果产生白色沉淀则表明该酸溶液中含有草酸，如果无沉淀则表明该酸溶液中为甲酸或乙酸。
4. 二次酸化反应检测：将酸溶液加入硫酸中加热，如果产生有刺激性气味的气体，则表明该酸为甲酸；如果产生香味并有少量无色烟雾，则表明该酸为乙酸；如果无明显变化，则表明该酸为草酸。
需要注意的是，这些方法仅适用于简单混合溶液的鉴别，如果需要准确测定甲酸、乙酸和草酸的含量或纯度，需要使用更加精确的化学分析方法，如色谱法、质谱法等。
气相色谱法同时检测复合酸化剂中6种有机酸的方法
气相色谱法同时检测复合酸化剂中6种有机酸的方法1.实验仪器和试剂准备首先，准备所需的实验仪器和试剂。
主要的实验仪器包括气相色谱仪、色谱柱、样品溶液注射器、进样口、检测器等。
主要的试剂包括六种有机酸的标准品、气体载气（如氮气或氦气）、溶剂（如乙腈、乙醇等）等。
2.样品制备将复合酸化剂样品称取一定量，加入适量的溶剂中，将其溶解均匀。
根据样品中有机酸的含量确定样品的稀释倍数，将溶解后的样品适量稀释。
然后，使用0.45微米的过滤器过滤样品，去除其中的固体颗粒。
3.标准曲线的建立准备六个浓度不同的标准品溶液。
首先，准确称取六个不同浓度的标准品溶液，并用溶剂将其稀释至相应的浓度。
然后，使用标准品溶液制备不同浓度的混合标准品溶液，并使用相同方法对样品溶液进行稀释。
4.色谱参数的设置使用气相色谱仪进行系统的校正和参数设置。
主要的参数包括进样量、进样模式、色谱柱类型、流动相类型、流速、检测器温度、柱温等。
根据样品的物理特性和所需的分离效果，可以适当调整这些参数。
5.样品注射和分析将标准品溶液和样品溶液分别用样品溶液注射器注入进样口。
在进样时，要确保每次注射的样品体积一致，以保证结果的准确性。
然后，打开气相色谱仪，启动分析程序，让色谱柱逐渐升温，使样品成分逐渐分离。
6.结果的处理和分析通过检测器记录并显示样品的色谱图。
根据标准品的峰面积和浓度的关系建立标准曲线，并据此计算样品中各有机酸的浓度。
根据峰面积的大小，可以定性、定量分析样品中的有机酸。
同时，可以通过计算峰高比或峰面积比，确定样品中各有机酸的相对含量。
总结：气相色谱法是一种简便、快速、灵敏的分析方法，可以同时检测复合酸化剂中的多种有机酸。
通过合适的样品制备、标准曲线建立和色谱参数设置，可以获得准确的结果。
该方法可以广泛应用于食品、化妆品、制药等领域中对有机酸含量的测定。
气相色谱及质谱联用法测定挥发性有机酸
气相色谱及质谱联用法测定挥发性有机酸1范围本标准规定了烟草及烟草制品中挥发性有机酸[包括甲酸(Formic acid)、乙酸(Acetic acid)、丙酸(Propanoic acid)、异丁酸(Isobutyric acid)、丁酸(Butyric acid)、异戊酸(Isovaleric acid)、戊酸(Valeric acid)、3-甲基戊酸(3-Methylvaleric acid)、4-甲基戊酸(4-Methylvaleric acid)、己酸(Hexanoic acid)、庚酸(Heptanoic acid)、辛酸(Octanoic acid)、壬酸(Nonanoic acid)、癸酸(Decatoic acid)]的气相色谱－质谱联用测定方法。
本标准适用于烟草及烟草制品中挥发性有机酸（甲酸、乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、3-甲基戊酸、4-甲基戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸）的测定。
本标准测定烟草及烟草制品中挥发性有机酸的检出限和定量限见附录A中表A.1。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
YC/T 31 烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法3原理用丙酮萃取试样中的挥发性有机酸，气相色谱/质谱联用-选择离子监测法测定，内标法定量。
4试剂与材料除特别要求以外，均应使用色谱纯级试剂。
4.1 丙酮。
4.2 甲酸，纯度应不低于98%。
4.3 乙酸，纯度应不低于98%。
4.4 丙酸，纯度应不低于98%。
4.5 异丁酸，纯度应不低于98%。
4.6 丁酸，纯度应不低于98%。
4.7 异戊酸，纯度应不低于98%。
4.8 戊酸，纯度应不低于98%。
4.9 3-甲基戊酸，纯度应不低于98%。
4.104-甲基戊酸，纯度应不低于98%。
4.11 己酸，纯度应不低于98%。
土壤 有机酸 标准方法
土壤有机酸标准方法1. 土壤有机酸是指土壤中含有的有机物质中的酸类物质，对土壤肥力和微生物活动具有重要影响。
2. 标准方法通常采用酸碱滴定法来测定土壤中的有机酸含量，其原理是利用酸碱中和反应来测定有机酸的含量。
3. 有机酸的主要来源包括植物残体、根系排泄物、微生物代谢产物等，能够为土壤提供能量和营养元素。
4. 有机酸对土壤的酸碱性起着调节作用，能够影响土壤pH值的稳定性和微生物的活性。
5. 通过测定土壤中有机酸含量，可以评估土壤的肥力状况和有机质含量。
6. 标准方法中常用的有机酸测定仪器包括紫外-可见分光光度计、pH计等，通过测定样品的光谱吸收值和pH值计算有机酸含量。
7. 有机酸的测定还可采用色谱-质谱联用技术，能够更准确地鉴定和分析不同种类的有机酸成分。
8. 有机酸的测定步骤包括样品制备、提取、净化、分析和结果计算，需要严格按照标准方法操作。
9. 土壤中不同类型的有机酸包括腐殖酸、腐殖酸、蛋白酸等，各种有机酸的含量和作用各不相同。
10. 标准方法还要求对测定过程中的干扰物质（如水溶性盐等）进行识别和排除，以确保测定结果的准确性。
11. 有机酸含量的测定需要在恒温、恒湿和暗光条件下进行，以避免光照和外界环境的影响。
12. 土壤中的有机酸还可以通过红外光谱分析技术来进行定性和定量分析，以确认有机酸的种类和含量。
13. 标准方法中也包括了样品的采集、保存和预处理的要求，以保证样品的代表性和测定结果的可靠性。
14. 有机酸的测定结果可以用于评估土壤的抗逆性和环境质量，为土壤环境保护和农业生产提供科学依据。
15. 有机酸的测定不仅适用于农业土壤，也适用于森林土壤、草原土壤等不同类型的土壤样品。
16. 标准方法中还包括了样品的收集深度、数量和重复性等要求，以保证测定结果的可比性和准确性。
17. 有机酸测定的结果还可以用于土壤肥力管理和施肥方案的制定，有助于提高农作物的产量和质量。
18. 有机酸的测定还可以用于研究土壤有机质的分解和循环过程，对土壤生态系统的功能和稳定性具有重要意义。
有机酸的测定方法
有机酸的测定方法有很多，如酸碱滴定法、酯化法、比色法、液相色谱法、离子色谱法、毛细管电泳法、气相色谱法等。
例如：酸碱滴定法是对有机酸检测常用的方法，对有机酸的溶液进行定量，并使用标准浓度的碱性溶液进行滴定，当酸碱中和达到终点时，通过化学反应的公式来计算出有机酸的浓度。
这个方法对有机酸的计算并不是非常精准，要把握好终点的滴定量，多一滴或少一滴都会影响到有机酸浓度的准确度。
具体使用哪种方法，需要根据实际检测要求和条件来选择。
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甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、苯乙酸、阿魏酸甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、仪器与设备waters2695 Alliance SeparationsModule高效液相色谱仪;waters2996 PhatadiodeArray二极管阵列检测器;Heraeus离心机;HORIBApH计。
色谱分析(1)混标配置。
分别准确称取适量上述10种有机酸并用超纯水溶解或稀释,以孔径0. 45μm 的微孔滤膜过滤,转移至50mL容量瓶中,定容,配制浓度为100mg/L的储备液,保存于4℃冰箱中。
(2)标准曲线绘制。
有机酸标准液的配置:根据紫外吸收灵敏度,将草酸、酒石酸、苹果酸、甲酸、丙二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸、丙酸按照0. 2∶2. 5∶5∶5∶5∶2. 5∶5∶5∶5∶5的比例配制混标,逐级稀释,配制成A、B、C、D、E五个浓度级别的标准溶液,以绘制标准曲线。
其中A级别标准溶液浓度为0. 2; 2. 5, 5, 5, 5, 2. 5, 5, 5, 5, 5(μg/mL);B、C、D分别为上一个级别浓度的5倍稀释,E级为D级的2倍稀释。
并将这10中有机酸编号为:OA01-OA10。
(3)色谱条件。
反相C18柱CAPCellPAK C18MG 4. 6mm×250mm, 5um, pH范围: 2~10,流动相: 0. 1%H3PO4的去离子水和乙腈(V/V)98∶2;检测器波长: 210nm;流速: 1mL/min;进样量: 20u;l柱温: 35℃;(4)流动相配置。
取1mLH3PO4用超纯水稀释至1000mL,经孔径为0. 45μm的微孔滤膜过滤,超声脱气后备用。
乙腈(色谱纯)超声脱气备用。
阿魏酸阿魏酸的测定:称取风干样品1.0000g置50ml量瓶中，加入乙酸乙酯约45ml，超声处理30min 并静置过夜，加乙酸乙酯到刻度，摇匀，过滤，吸取滤液25ml水浴蒸干，残渣加甲酸溶解并移入10ml容量瓶，定容之后用荧光分析仪测定。
实验仪器KQ-360DE型数控超声波清洗器、玻璃仪器烘干器、TDI5-WS多管架自动离心机、电子天平、RF-540荧光分光光度计。
实验药品乙醇、乙酸乙酯、1%碳酸氢钠、2%碳酸钠等试剂均为分析纯,水为亚沸高纯去离子水,阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号: 0773-9910)。
激发波长和发射波长的选择精密称取阿魏酸对照品12. 00 mg,置100 mL容量瓶中,加2%碳酸钠溶解,室温下对不同浓度的阿魏酸对照溶液在200-600 nm波长范围内进行激发波长扫描,阿魏酸的最大激发波长(λex)为343 nm,固定该激发波长,扫描得发射谱图,得到其发射波长(λem)为463 nm,且随着阿魏酸浓度的增加其波长没有偏移,荧光强度随着阿魏酸浓度的增加而增大,因此,选择该最大激发波长和最大发射波长(即λex/λem为343 nm/463 nm)作为后继测定的工作条件。
标准曲线精密量取适量的阿魏酸对照品溶液,分别稀释成浓度为0. 3、0. 6、1. 2、1. 8、2. 4、3μg/mL标准溶液,选定激发波长和发射波长条件下,测定其荧光强度,以阿魏酸对照品溶液的浓度为横标轴(x),以荧光强度为纵坐标轴(y),得回归方程为y=19.469x +4·805 8,r=0.997,结果表明进样量在0. 3-3μg/mL范围内线性关系良好。
样品测定精密称取当归药材0. 5 g,置具塞三角瓶中,加1%碳酸氢钠25mL,超声提取30min,离心10min,取上清,加稀盐酸调pH值至2-3,用乙酸乙酯10 mL萃取3次,取上清液合并为30 mL 乙酸乙酯液,再加2%碳酸钠20 mL,萃取3次[4]。
取下层溶液用2%碳酸钠定容至100 mL,微孔滤膜滤过液取1 mL,加2%碳酸钠溶液稀释至10 mL。
即作为供试品溶液高效液相色谱法测定阿魏酸的含量潘成学贾欣申小静郑州大学药学院郑州市450052· 23 ·摘要目的建立妇科调经片q-阿魏酸含量测定方法：方法采用HPLC法，使用C。
柱，流动相为甲醇一0．1％磷酸溶液(30：70)，流速1．0 ml／min，紫外检测波长313 nm。
结果阿魏酸线性范围0．0388—0．3104 tzg，平均回收率97．16％：结论所建立的方法稳定可靠、灵敏、准确、简便，可用于该制剂的质量控制。
关键词妇科调经片阿魏酸HPLC中图分类号：11927．2 文献标识码：A 文章编号：1672．3422(2005)18-0023-02Determination of Content of Ferulic Acid by HPLCPAN Chengxue，JIA Xin。
SHEN XiaojingSchool of Pharmacy，Zhengz hou Universit)’，Zhengzhou，450052，China ABSTRACT Objective To establish a RP—HPLC method for determinating content of ferulicacid in Fuketiaojing tablet．Methods The content was determined by HPLC．The analysis was carriedon C 1 8 column，the mobile phase was consisted of methanol一0．1％phosphoric acid(30：70)withthe flow rate at 1．Oml／min and the UV detection wavelength was at 3 1 3 nm．Results The linear re．gression for Fuketiaojing tablet was over the range of 0．0388～0．3104 Ixg(r=0．9999)．The averagerecovery rate of Fuketiaojing tablet was 97．16％(RSD =0．17％．n：5)．Conclusion This methodwas sensitive，accurate，reproducible and exclusive．KEY WoRDS Fuketiaojing tablet：Ferulic acid：HPLC已有文献’ 采用高效液相色谱法对妇科调经颗粒中芍药苷的含量测定的报道；对于妇科调经片，文献一采用HPLC方法对阿魏酸进行了含量测定，但采用的流动相为甲醇一1％冰醋酸(30：70)。
我们采用高效液相色谱法，对妇科调经片及其中的药材当归、川I芎中阿魏酸进行含量测定。
1 仪器与试药1．1 仪器高效液相色谱仪(P200II，大连依利特科学仪器有限公司生产)，UV200 11紫外可见波长检测器，ODS C。
色谱柱，Echrom98色谱工作站。
1．2 试药阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：773—9202)；妇科调经片(河南仲景保健药业有限公司)；甲醇为色谱纯；水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果2．1 色谱条件与系统适用性试验ODS C。
色1 河南省人口和计划生育科学技术研究院郑州市450002谱柱(4．6 mm ×250 mm，5 m)；流动相：甲醇一0．1％磷酸溶液(30：70)；流速1．0 ml／min，柱温40℃，检测波长313 nm；进样量10 l。
理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000。
2．2 线性关系考察精密取阿魏酸对照品，分别制成浓度为3．88 g／ml、7．761xg／ml、15．52txg／ml、23．28 g／ml、31．041xg／ml的样品，进样量101xl，测定阿魏酸峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，阿魏酸的进样量(x)为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，Y=0．03126255X一0．2889704：(r=0．9999，n =5)，表明阿魏酸在0．0388～0．31041xg之问呈良好的线性关系。
2．3 精密度试验精密吸取同一对照品溶液10 ，重复进样5次，测定其峰面积积分值，结果其色谱峰的相对标准差为0．72％，表明其精密度良好。
2．4 样品含量测定2．4．1 对照品溶液制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每12．5oe／ml的溶液，即得。
2．4．2 供试品溶液的制备取装量差异项下本品同批次(040428)10片，除去包衣，研细，混匀，取约l g，精密称定，分别置5O ml具塞锥形瓶中，精密加甲醇l5 ml，密塞，称定重量，超声处理60 rain，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，续滤液用微孔滤膜滤过，即得。
2．4．3 阳性对照品溶液的制备依据处方中的比例，按供试品溶液的制备方法制备缺当归和川芎的阳性对照溶液。
结果经进样证明阴性无干扰。
2．4．4 样品含量测定分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各l0 l，进样，由峰面积计算阿魏酸的含量，同法制备并测定l0批中试产品，计算阿魏酸的含量，测定结果见表l。
表1 样品含量测定结果2．4．5 稳定性试验精密吸取对照品溶液lO l，注入液相色谱仪，按0、2、4、6、8 h各测定1次阿魏酸峰面积，并计算阿魏酸含量，RSD=0．50％。
2．4．6 重现性试验取批号为040428的样品，按供试品溶液制备方法制备5份供试液，测定分别测定阿魏酸含量，其RSD=0．46％。
2．4．7 回收率试验取批号为040428的样品(阿魏酸含量81．841．zg／片)20片，精密称定重量：医药论坛杂志2005年9月第26卷第18期7．0346g，平均片重0．3517g／片，研细，取0．5g，精密称定，共取5份，分别加入阿魏酸对照品适量，进样量l0 l，测定阿魏酸峰面积，计算阿魏酸含量，计算回收率，测定结果见表2。
表2 回收率测定结果取样量(g)样品中含量加入量测得值回收率平均回收率RSD(％)【g ( g ( g) (％) (‘ )0．498l ll5．9 l20．0 232．34 97 030．50Il l16．6 l20．0 233．26 97．220．5158 120．0 l20．0 236．80 97．33 97．16 0．170．499l 116．1 l20 0 232．44 96 950 4974 l l 5 7 l 20 0 2 2 44 97 ，R3 讨论因当归、川芎中均含有阿魏酸，为保证制剂质量，我们对药材中当归和川芎中的阿魏酸含量也进行了测定。