菌种甘油保存方法精编WORD版
甘油保藏真菌实验步骤
甘油保藏真菌实验步骤以甘油保藏真菌实验步骤为标题，本文将介绍甘油保藏真菌的实验步骤及其原理。
真菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，不仅在生态系统中起着重要的角色，还对人类的生活和健康产生着重要的影响。
因此，为了研究和保藏真菌的多样性和功能，甘油保藏法成为了一种常用的方法。
甘油保藏真菌是一种简单且有效的方法，它可以延长真菌的保藏时间，并且能够保持真菌的活性和生物学特性。
下面将详细介绍甘油保藏真菌的实验步骤。
实验步骤如下：步骤一：准备所需材料和设备1. 真菌菌株：选择要保藏的真菌菌株，确保其纯度和活力。
2. 甘油溶液：制备一定浓度的甘油溶液，常用的浓度为20%。
3. 培养基：选择适合真菌生长的培养基，如琼脂培养基。
步骤二：培养真菌菌株1. 在琼脂平板上点菌：使用无菌技术，在琼脂平板上点菌，培养真菌菌株。
2. 培养真菌：将琼脂平板放置在适当的温度和湿度条件下，培养真菌，通常在25-30摄氏度下培养。
步骤三：收集真菌菌株1. 真菌生长：观察真菌的生长情况，当真菌菌落达到一定大小时，可以进行下一步操作。
2. 收集真菌菌落：使用无菌的移液管或铲子，将真菌菌落从琼脂平板上收集到无菌试管中。
步骤四：甘油保藏真菌1. 添加甘油溶液：向无菌试管中加入适量的甘油溶液，使真菌菌落完全浸泡在甘油溶液中。
2. 混合均匀：轻轻摇晃试管，使甘油溶液与真菌菌落充分混合。
3. 封闭试管：用无菌瓶塞或铝箔封闭试管，防止外界的污染。
步骤五：保存真菌1. 温度和湿度：将封闭的试管存放在适当的温度和湿度条件下，通常在4摄氏度下保存。
2. 检查真菌：定期检查保存的真菌，观察其菌落的生长情况和活力。
甘油保藏真菌的原理是利用甘油的保湿性和抗冻性，使真菌菌株在低温下长时间保存。
甘油可以增加真菌的渗透压，防止真菌细胞脱水和冻结，从而保持真菌的活性和生物学特性。
总结一下，甘油保藏真菌是一种简单有效的方法，通过将真菌菌株浸泡在甘油溶液中并在低温下保存，可以延长真菌的保藏时间并保持其活性和生物学特性。
甘油保存菌株
甘油保存菌株
甘油保存菌株是一种常见的微生物保存方法，它可以有效地保护微生物的生命活力和遗传信息，使其长期保存并可随时使用。
甘油保存菌株的方法简单易行，适用于各种微生物，是微生物学研究中不可或缺的一种技术手段。
甘油保存菌株的原理是利用甘油的保护作用，将微生物细胞悬液与甘油混合后，冷冻保存在-80℃或液氮中。
甘油可以渗透进入细胞内部，形成一层保护膜，防止细胞在冷冻过程中受到损伤。
同时，甘油还可以降低细胞内水分的含量，减少细胞在冷冻过程中的结晶和破裂，从而保护细胞的完整性和生命活力。
甘油保存菌株的优点是保存时间长，可达数年甚至数十年之久，保存的菌株可以随时使用，不需要频繁传代和培养，可以减少微生物的变异和突变。
此外，甘油保存菌株的方法简单易行，不需要特殊的设备和技术，适用于各种微生物，是一种经济实用的微生物保存方法。
甘油保存菌株的操作步骤如下：首先，将微生物细胞悬液与甘油按照一定比例混合均匀，通常甘油的浓度为15%-20%。
然后，将混合液分装到冷冻管中，标明保存的菌株名称和保存日期，放入-80℃或液氮中保存。
在需要使用时，将冷冻管取出，解冻后进行传代和培养即可。
需要注意的是，甘油保存菌株的成功与否与保存前的细胞状态和保存条件密切相关。
因此，在进行甘油保存前，需要对菌株进行筛选和培养，保证细胞的健康状态和生命活力。
同时，在保存过程中，需要严格控制保存温度和保存时间，避免细胞受到不必要的损伤和死亡。
甘油保存菌株是一种简单易行、经济实用的微生物保存方法，可以有效地保护微生物的生命活力和遗传信息，是微生物学研究中不可或缺的一种技术手段。
甘油冷冻保藏法
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。
（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。
（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。
（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。
（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。
也可用没有球部的管状安瓿管。
塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。
（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。
细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。
一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。
（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。
（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。
将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。
将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4-5分钟，即可使悬液结冰。
甘油保藏真菌实验步骤
甘油保藏真菌实验步骤以甘油保藏真菌实验步骤为标题，我们将介绍如何使用甘油来保藏真菌样品。
甘油是一种常用的保存剂，能够有效保护真菌不受环境变化的影响，从而保持其生活活力和保存样品的完整性。
实验步骤如下：1. 准备所需材料和设备- 甘油溶液：将甘油加入蒸馏水中，浓度通常为20%或50%。
- 真菌样品：可以是培养皿上的菌落、孢子悬液或真菌菌丝体等。
- 冻存管或其他合适的保存容器。
- 称量器、移液器、滤纸等实验用具。
2. 准备甘油溶液- 根据需要的浓度，称量适量的甘油和蒸馏水。
- 将甘油加入蒸馏水中，充分搅拌混合，直至甘油完全溶解。
3. 处理真菌样品- 将真菌样品转移到一个干净的培养皿或容器中。
- 使用移液器逐滴加入甘油溶液，将样品浸泡在甘油中。
注意避免气泡的产生。
- 如果样品体积较大，可以使用滤纸轻轻吸去多余的液体。
4. 转移样品至保存容器- 使用移液器或其他合适的工具，将处理好的真菌样品转移到冻存管或其他保存容器中。
- 注意将样品尽量放置在冻存管或容器的中央，避免接触到容器的壁面。
5. 密封保存- 将冻存管或容器盖紧，确保密封性良好，避免甘油溶液的蒸发和外界的污染。
- 可以在容器表面标记保存日期、真菌名称等相关信息，方便后续使用和管理。
6. 存储条件- 根据不同的真菌种类和实验需求，选择适当的存储温度和条件。
- 大多数真菌可以在4摄氏度下长期保存，但某些特殊真菌可能需要更低的温度或其他特殊的存储条件。
通过以上步骤，我们可以使用甘油成功保藏真菌样品。
甘油的作用是降低真菌细胞内部的水分含量，减少细胞膜的冻融损伤，从而保持真菌的活力和保存样品的完整性。
同时，甘油还具有抗菌作用，可以抑制真菌样品的微生物污染。
需要注意的是，甘油保存的真菌样品在使用前需要重新培养，以恢复其生长能力。
此外，在保存过程中，我们还应定期检查样品的状态，确保保存环境的稳定性和样品的健康状态。
总结：甘油保藏真菌是一种常用的方法，可有效保护真菌的完整性和生活活力。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法
1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
甘油冷冻保藏法
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。
（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。
（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。
（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。
（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。
也可用没有球部的管状安瓿管。
塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。
（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。
细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。
一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。
（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。
（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。
将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。
将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4-5分钟，即可使悬液结冰。
甘油冷冻保藏法
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。
（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。
（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL（LB）的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。
（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。
（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。
也可用没有球部的管状安瓿管。
塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。
（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。
细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。
一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。
（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。
（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。
将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。
将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4-5分钟，即可使悬液结冰。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法
Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
菌种保藏方法甘油
菌种保藏方法甘油
甘油是一种常用的菌种保藏方法，具体步骤如下：
1. 准备甘油溶液：用无菌蒸馏水将甘油稀释至10-20%的浓度。
可以使用无菌瓶或试管来制备溶液。
2. 菌种准备：将需要保藏的菌种以活菌母液或活菌培养物的形式准备好。
3. 混合菌种和甘油溶液：将相应的菌种接种到甘油溶液中。
通常可用无菌吸管将菌种转移到甘油溶液中。
4. 混匀：轻轻摇动或翻转瓶子，确保菌种均匀分散在甘油溶液中。
5. 分装：将混匀的菌种溶液分装到无菌小容器中，如无菌管或试管中。
每个容器通常只需要接种几滴。
6. 标记和封存：在容器上标记菌种名称、时间和保藏条件，并用无菌盖子或锡箔密封容器。
7. 保藏：将标记好的菌种容器存放在适当的温度和湿度条件下，如4冰箱或-80冰箱。
注意事项：
- 进行所有步骤时，确保操作环境和操作器具都是无菌的，以防止其他细菌或真菌的污染。
- 甘油保藏法适用于大多数菌种，但并非适用于所有菌种。
某些菌种对甘油不耐受或易于受损，可能需要使用其他保藏方法。
- 在保藏期间，定期检查菌种的存活情况，并根据需要制备培养物以进行后续的实验或培养。
菌种甘油保存方法
菌种苦油保存要领之阳早格格创做
1 将要保存菌种交种于LB液体培植至对于数死少久（肉眼睹培植体系内浑浊即可）
2 将苦油密释至浓度为50%（等体积蒸馏火加等体积苦油，苦油需要缓缓吸）
3 将苦油、2 ml离心管、枪头等考查用品于121℃灭菌20min
4无菌条件下将菌液取50%浓度苦油1:1等体积混同于离心管中，苦油末浓度为25%
5于-20℃冰箱内保存
灵验期1年
再次使用钱30°火浴后交种到固体培植基上即可
平常是曲交把支躲液交到液体培植基中，让后死少24-48h 后，将菌液再次转交到新的液体培植基中.新的菌液便不妨划线培植了.
本初菌种没有敷的情况下先扩繁十个固体培植基
如果用菌液的话交种到液体培植基上
步调是固液液用第两个真验第三个保存。
菌种甘油管保藏操作方法
菌种甘油管保藏操作方法
菌种甘油管是用于保存微生物菌种的一种常用方法。
以下是菌种甘油管保藏操作方法的步骤：
1. 准备好所需材料，包括菌种甘油管、保存微生物菌种的培养基、无菌赛瓶、无菌一次性注射器、无菌棉签等。
2. 在无菌条件下，准备培养基。
一般使用甘油-酵母提取液培养基，将其加热至溶解。
3. 取一小块接种棒蘸取菌液，接种到培养基上。
轻轻转动培养基使其均匀分布。
4. 将培养基和菌液充分混合后，用一次性注射器吸取混合液。
5. 打开一个菌种甘油管，将混合液缓慢注入管内。
注入过程中要确保无气泡形成。
6. 将注满混合液的菌种甘油管放入赛瓶中，倒入约1 cm深的无菌水。
7. 用无菌棉签擦拭赛瓶外壁湿润的部分，使其与周围环境隔离。
8. 将赛瓶盖盖严，放入冰箱中保存。
9. 定期检查保存的菌种甘油管，如果有菌落生长，可以取出菌种进行进一步培养。
注意事项：
- 操作时要保持无菌条件，避免污染。
- 注入混合液时要缓慢，避免气泡形成。
- 冰箱中的温度应保持在-20左右，避免冷冻过度。
- 定期检查保存的菌种甘油管，如发现有菌落生长异常，应及时更换。
菌种甘油保存
菌种甘油保存
1、配制30%甘油，121摄氏度高压灭菌20min，常温保存既可，一般都是现配现用
2、将要保存菌种接种于LB（或带相应抗性）液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
3、无菌条件下将菌液与30%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为15%
4、再次使用前置冰浴融化后接种到固体培养基上即可
5、一般零下20度一年左右，零下80度二年以上，时间太长就使用前活化下
甘油保菌原理
1、冷冻保存时菌液会被冻起来，内部产生的“冰晶”会使细胞破裂等，加入如甘油后可以防止对细胞的伤害。
2、简单来说就是抗冻，原理是甘油能够提高水体的粘稠度，使其冰点提高，防止细胞内部产生冰晶造成细胞的损害，一般使用甘油的终浓度在10%-20%，该范围外的浓度会对细胞产生毒性，质粒会很容易丢失
3、高浓度甘油保存菌种据说会影响菌种的表达活性如果该菌只用一次怎么化都没关系的甘油浓度太高，质粒就很容易丢失。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
菌种甘油保藏方法
菌种甘油保藏方法
菌种甘油保藏方法是将菌种进行冻存，用甘油作为保护剂。
具体步骤如下：
1.选取优良的菌株，进行预处理，将其生长到最佳状态。
2.将菌株分装到无菌冰盒中，添加等量的甘油，并彻底混合。
3.快速冷冻菌种冰盒，放入-80冰箱冻存。
4.定期检查冻存菌株的完整性和活性。
5.需要用菌种时，从冰箱取出冰盒，在无菌条件下迅速解冻，将菌株接种在合适培养基上。
注意事项：
1.菌种的密度要合适，冻存密度过高会影响菌株的生存率，过低会使冻存时间延长。
2.菌种的保存期限一般为半年至一年，应定期检查菌株的完整性和活性，如有损坏或无法生长，应及时更换菌株。
80甘油保存菌种步骤
80甘油保存菌种步骤
1. 准备甘油溶液：向无菌蒸馏水中加入一定量的高纯度甘油（通常浓度为20％或30％），并用适当的方法将其溶解均匀。
2. 收集细菌菌落：从培养基上收集细菌菌落，可以使用无菌耳棒、针筒、平板刮片等工具。
3. 将菌落转移到甘油溶液中：将菌落转移到含有甘油的试管或培养皿中，用无菌的工具将菌落均匀悬浮在甘油溶液中。
4. 混匀：用无菌铁环、耳棒或震荡器等方法将菌落和甘油溶液混合均匀。
5. 储存：将混合好的甘油菌种溶液分装到无菌的冰冻管中或其他合适的容器中，每管中约含有1-2毫升的溶液。
6. 冷冻：将制备好的菌种溶液迅速放入低温冷冻器中，以-
70°C或更低的温度冷冻保存。
7. 标签：在冰冻管或容器上标明菌株信息，如菌种名称、日期、菌株编号等。
8. 存放：将冷冻好的菌种溶液移至液氮罐或其他特定的冷冻设备中，存放在低温条件下保存。
注意事项：
- 所有步骤都需在无菌条件下进行，以防止细菌的污染。
- 储存的菌种溶液应尽快冷冻保存，以防止菌落中细菌的多余
增殖。
- 菌种的冷冻保存时间一般不宜超过6个月。
- 取用菌种时，应尽量避免反复冻融，以防止菌种活力的下降。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法
1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期肉眼见培养体系内浑浊即可
2 将甘油稀释至浓度为50%等体积蒸馏水加等体积甘油,甘油需要慢慢吸
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中,甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中,让后生长24-48h后,将菌液再次转接到新的液体培养基中;新的菌液就可以划线培养了;
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
甘油冷冻保藏法
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。
（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。
（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。
（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。
（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。
也可用没有球部的管状安瓿管。
塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。
（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。
细菌和HYPERLINK "/Search.asp?Field=Title&ClassID=&keyword=酵母" 酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。
一般，细菌要求24—48小时的培养物；HYPERLINK "/Search.asp?Field=Title&ClassID=&keyword=酵母" 酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。
（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。
甘油保菌
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。
（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。
（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。
（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。
（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
1. 20%甘油保存菌种是指甘油:菌液=20:80,800ul菌液加200u灭菌l甘油后的甘油后,充分混匀后,-70度保藏.(注意甘油要慢慢吸)2. 将一般细菌的菌种纯化后接种于普通肉汤管，4～6h增菌后，加入适量甘油一生理盐水保存液，-20℃冰箱保存；链球菌属和奈瑟氏菌属的菌株纯化后接种于血清肉汤管，在5％～10％CO2中经8～10h增菌后，加入适量保存液，80℃低温冰箱保存；真菌菌种纯化后直接取菌洗入肉汤，不做培养，加入保存液后，-20℃冰箱保存。
结果在连续3年实验期内，各菌种保存效果良好，且其形态结构、染色特性、生化反应等与标准株相符。
结论使用甘油生理盐水保存法来保存菌种，各菌种保存时间长，方法简便，特别是使链球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般实验室得以保存。
3. 常用的是终浓度10-30% 的甘油。
由于纯甘油十分粘稠，很难定量，一般配成终浓度50% 的水溶液，高压灭菌后室温保存即可。
使用时按50% 甘油:菌液= 1:1 混合均匀，然后迅速冻结。
A. 先把甘油稀释成50%，然后灭菌这样20%的终浓度用400微的菌体加600微的50%甘油混合不就可以啦纯的甘油太粘稠啦，用枪不好吸的B 终浓度15%。
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菌种甘油保存方法精编
W O R D版
IBM system office room 【A0816H-A0912AAAHH-GX8Q8-GNTHHJ8】
菌种甘油保存方法
1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。