水中大肠菌群的检测

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水中总大肠菌群检测方法

水中总大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测一般采用以下方法：
1. 高级培养基方法：将取样的水样加入适当的营养培养基中，培养出细菌，并计数大肠菌群的数量。

常用的培养基有大肠杆菌培养基、MacConkey培养基等。

2. 荧光定量PCR方法：通过PCR技术检测水中大肠菌群的DNA，使用荧光探针结构标记大肠杆菌特异性基因，通过测定荧光信号进行定量分析。

3. 流式细胞仪方法：将水样进行染色，然后通过流式细胞仪分析计数大肠菌群的数量。

常用的染色方法有DAPI染色法、荧光活菌染色法等。

4. 基于微生物生物传感器的方法：利用微生物细胞对特定细菌的识别和响应能力，设计合成生物传感器来监测水中大肠菌群的存在和数量。

以上方法可根据实际需要选择使用，各自具有不同的优缺点。

在进行水环境监测时，可以结合多种方法进行检测，以获得准确和可靠的结果。

多管发酵法测定水中大肠菌群

多管发酵法测定水中大肠菌群
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2）平皿分离（证实试验）
水中除大肠菌群外, 还有其它细菌可能引发糖类发酵, 所以需要深入证实。
将初发酵管中已发酵菌液接种于伊红美兰培养基, 37 ºC培养24 h, 依据菌落特征（带关键、有金属光泽深紫色菌落）, 挑取可能为大肠菌群菌落制片, 经革兰氏染色, 深入证实是否为大肠菌群。
划线接种于伊红美蓝琼脂平板上, 再于37 ℃培养 18～24 h, 将符合以下特征菌落进行染色镜检。
深紫黑色, 有金属光泽；紫黑色, 不带或略带金属光泽；淡紫红色, 中心颜色较深。
多管发酵法测定水中大肠菌群
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（3）复发酵试验将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌菌株重复初
步发酵试验。并依据初发酵管试验阳性管查表, 即得大肠菌群数。
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二、试验原理
发酵法: 又称多管发酵法或三步发酵法
1) 初发酵（推测试验）:
将不一样稀释度水样，分别接种于含有乳糖等糖类培养液中（3倍或1倍乳糖液），经37 ºC培养24 h，观察产酸产气情况，培养基内加有溴甲酚紫作为 PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来紫色变为黄色，以初步判断是否有大肠管发酵法测定水中大肠菌群
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多管发酵法测定水中大肠菌群
一、试验目标二、试验原理三、试验材料四、试验步骤五、试验汇报
多管发酵法测定水中大肠菌群
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一、试验目标
1、学习测定水中大肠菌群数量多管发酵法。 2.了解大肠菌群数量在饮水中主要性。
多管发酵法测定水中大肠菌群
多管发酵法测定水中大肠菌群
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10ml×100 1ml×100 1ml×10-1 1ml×10-2
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水中大肠菌群的测定

水肠菌群的测定报告题目水肠菌群的测定作者班级生科1104班指导教师完成时间2013年6月生物学实验教学中心目录引言 (2)1 实验材料22 实验步骤22.1 (3)2.2 (4)2.352.4 (5)2.5数据分析与结果处理.................... 错误!未定义书签。

3 结果与分析 (6)3.1图片错误!未定义书签。

3.2...................................... 错误!未定义书签。

总结. (7)参考文献 (11)水肠菌群的测定〔指导教师：〕〔师学院生命科学学院生物技术1104班435002〕摘要：测定青山湖水中的大肠菌群的含量。

将待测水分别稀释10倍、100倍、1000倍3种梯度在三倍浓缩培养基 37℃培养24h后挑选出产酸或产气的菌画线接种到伊红美蓝平板中37℃培养24h，将培养基中表现为阳性的菌落做革兰氏染色镜检为阴性的菌种接种到乳糖蛋白胨培养基中37℃培养24h,挑选大肠杆菌阳性菌。

结果稀释10倍的水有3管大肠杆菌阳性菌，稀释100倍的水有3管，稀释1000倍的有2管，即青山湖水肠杆菌的含量为MPN=11000.关键词：大肠杆菌、多管发酵法青山湖水水肠菌群的测定〔指导教师：〕〔师学院生命科学学院生物技术1104班 435002〕引言水对我们的生命起着重要的作用，它是生命的源泉，是人类赖以生存与开展的不可缺少的最重要的物质资源之一。

人的生命一刻也离不开水，水是人生命需要最主要的物质。

水也是大肠菌群的天然环境，一般地面水比地下水含菌数量多，并易被病原菌污染。

人饮用后引发疾病。

水质细菌学检验是培水与污水水质分析工作中的一项重要指标。

水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水平安和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。

国家饮用水标准规定，饮用水肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。

1实验材料药品：蛋白胨，牛肉膏，乳糖，蒸馏水，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，2%伊红〔曙红〕水溶液，0.5%美蓝〔亚甲蓝〕水溶液，氢氧化钠水溶液。

水中大肠菌群的检测

水中大肠菌群的检测法——（多管发酵法）一、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。

大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。

我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。

多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。

发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。

乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。

本实验为精简实验，所以省略了平板分离和复发酵试验后两部分，直接通过第一部分初发酵试验的颜色变化进行判断是否存在大肠菌群。

初发酵试验水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。

48小时后仍不产气的为阴性结果。

二、实验器材1.水样中心湖的湖水2．试剂三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管3．仪器及其它用品移液枪，16支试管（16支德汉氏小套管）三、实验步骤初发酵试验取16支发酵管，其中10支用移液管加入10ml一倍的乳酸蛋白胨培养液，5支加入5ml三倍乳糖蛋白胨培养液，1支加入9ml自然水。

然后往16支试管各倒置一支汉氏小套管。

完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min左右。

将取回来的中心湖水样稀释20倍。

待试管冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样，向装有一倍的乳酸蛋白胨培养液的另5支试管中加入1ml 10-1水样。

将各试管充分混均，置于37℃恒温箱中培养24h。

四、实验结果同时观察其他两组也是用中心湖水样的，其结果全都是显示为黄色。

初步得出，取回来的水样的大肠菌群严重超标，比检测表的上限还要高，已经失去检测的意义了。

水中耐热大肠菌群检测方法

水中耐热大肠菌群检测方法水中耐热大肠菌群检测是一种用于评估水质和判断水域环境卫生安全的重要方法。

下面是关于水中耐热大肠菌群检测的10条基本信息以及详细描述：1. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过将水样中的细菌标记并通过流式细胞仪进行检测和计数的方法。

适用于快速分析水样中的大肠菌群含量。

2. 膜过滤法：膜过滤法通过将水样通过膜滤器，筛选并集落大肠菌群，并在适当的培养基上进行培养，可用于定量检测水样中的大肠杆菌。

3. PCR技术：PCR技术通过引物对大肠菌群的DNA进行扩增，从而快速检测水样中的大肠菌群的数量和种类。

可以利用PCR技术进行快速筛选和检测水质。

4. 培养方法：传统的培养方法通过将水样中的细菌在适当的培养基上进行培养，进行形态和生理特性的观察，并通过计数菌落形成单位(CFU)来评估水样中大肠菌群的含量。

5. 颜色指示法：这种方法通过将水样与专门的指示剂配合使用，观察颜色变化以识别大肠菌群污染。

可以通过比较颜色的深浅程度来估计水样中大肠菌群的含量。

6. 微生物生化方法：利用大肠菌群的特定生化反应，如气体产生、酶反应等来判断水样中是否存在大肠菌群污染。

适合用于水样中大肠菌群含量的快速筛查。

7. 荧光显微镜技术：荧光显微镜技术利用特定的荧光探针标记细菌，通过显微镜观察细菌的形态和分布情况，可以用来定性检测大肠菌群。

8. 免疫学检测方法：免疫学检测方法通过检测水样中的大肠菌群特异性抗原或抗体来判断细菌的存在与否。

可以利用快速免疫层析法或ELISA法进行大肠菌群的快速检测。

9. 流动细胞技术：流动细胞技术将水样通过流动细胞仪，利用荧光标记的细胞特异性探针检测水中的大肠菌群。

可用于快速检测水质中大肠菌群的含量和分布。

10. 分子生物学方法：分子生物学方法可以通过分析水样中的DNA或RNA序列，利用特定的引物对大肠菌群进行特异性检测。

使用16S rRNA基因扩增子测序技术可以鉴定水样中的大肠菌群种类和丰度。

水中大肠菌群的测定

实验水中大肠菌群的测定及结果分析一、目的要求1、学习测定水中大肠菌群检测程序、方法.2、掌握大肠菌群检测结果的报告方式.二、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标,也是反映水体被生活无水污染的一项重要监测项目。

大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,在37℃生长时，能在48小时发酵乳糖并产酸才产气。

食品中大肠菌群数是以每100mL（g)检样内大肠菌群最近似数(The most probable number，简称MPN）表示。

据此含义，所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群均以100mL(g）食品内允许含有大肠菌群的实际数值为报告标准。

检查大肠菌群数,一方面能表明食品中有无粪便污染，另一方面还可以根据数量的多少，判定食品受污染的程度。

我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过3个。

多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。

发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管.乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。

三、实验器材1、培养基：乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂、乳糖发酵管2、器皿：1ml吸管、10ml吸管、试管（15×150）、三角锥瓶500ml、三角锥瓶500ml（内装蒸馏水250ml）3、其他：酒精灯，牛皮纸或报纸,棉花，高压蒸汽菌锅，水浴锅，显微镜，香柏油，二甲苯等四、操作方法1、水样的采取池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞，水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存.2、检样稀释（1)以无菌操作，将检样25mL放于含有225mL灭菌蒸馏水水的三角锥瓶中，摇匀,做成1：10的均匀稀释液。

(2）取一支lmL吸管插入吸取1∶10稀释液1mL注入含有9mL灭菌水的试管内，振摇试管,混合均匀，做成1∶100稀释液。

水中大肠菌群的测定

实验三（设计性）：九龙江水大肠菌群的测定XXX（学校系别班级学号）摘要：所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称。

水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。

水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。

多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。

滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。

关键词：大肠肝菌群、江水、测定THE DETERMINATION OF COLIFORM BACTERIA IN JIULONG RIVERXXX(09food science in Biology Department, ZhangZhou Normal University 091304103) Abstract:Coliform bacteria, the generic terms of amphimicrobian, Gram-negative and non-spore-bearing bacillus which can ferment lactose to produce acid and gas at 37℃ in 24 hours. Coliform bacteria in water is the actual numerical value of escherichia coli in 100mL tested water , is showed by the most approximate number(MPN) of coliform bacteria. The method of inspection of coliform bacteria in water ,always to be multibarrel fermentation and filtrer membrance. The method of multibarrel fermentation can use in the test of all kinds of water, but it is verbose and needs much time. The method of filtrer membrance just applicables to tap water and deep well water,it is easy and fast to operate, but it is not suitable for the water which has much impurity and is easy to block filtration pore.Key word:coliform bacteria、water in river、determination水中的病原菌多数来源于病人与病畜的粪便。

水中大肠菌群的检测

（1）操作于2个双倍管（100ml）或2个三倍管（50ml）的三角瓶中加样液100ml，10支双倍管中加样液10ml。
（2）于37℃恒温培养箱中培养24小时。
4.2.2乳糖复发酵：
（1）取上述经培养24小时后产气之发酵管，用接种环接种于乳糖复发酵管中。
（2）于37℃恒温培养箱中培养24小时，产酸产气者表明该管有大肠菌群存在。
1.原理：定义或目的
大肠菌群系指能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100ml（g）检样内大肠群最可能数（MPN）表示。
2.仪器设备与器具：
2.1干热灭菌器：玻璃用具等之来菌用，其内部之中心温度须达170℃以上，及维持1小时以上者或160℃内2小时以上；
2.7显微镜：
2.8天平；
2.9稀释瓶：(A)250ml三角瓶；
(B)15×150mm试管；
2.10玻璃培养皿或一次性无菌培养皿；
2.11广口瓶：250ml,体附盖，灭菌后作为取样用。
2.12玻璃吸管：1ml及10ml之刻度吸管，应有0.1ml之刻度，或定量移液器（1~5ml）及（1~10ml）；
2.13三角瓶：250ml，500ml，1000配制培养基用；
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水的大肠菌群检测方法

水的大肠菌群检测方法水是生命的重要组成部分，也是人类日常生活中不可或缺的资源。

然而，水源的安全性和水质的卫生问题一直备受关注。

其中，水中的大肠菌群含量是衡量水质卫生程度的重要指标之一、大肠菌群是指肠道中的一类细菌，其中的分支肠杆菌是最常见的一种。

高含量的大肠菌群在水中存在，可能表明水源受到了粪便或下水道污染。

因此，检测水的大肠菌群含量对评估水源卫生问题至关重要。

以下是一些常见的水的大肠菌群检测方法：1. 集菌法（Most Probable Number Method，MPN）：这是一种传统的大肠菌群检测方法，常用于饮用水和游泳池水的监测。

该方法通过在不同稀释度的水样中进行培养，并观察菌落形成的情况来估算大肠菌群的含量。

这种方法的优点是简单易行，可以适用于一定量的水样，但需要较长的培养时间和专业实验室。

2. 膜过滤法（Membrane Filtration Method）：这是一种常用的水质检测方法，也常用于大肠菌群的检测。

该方法通过过滤水样，将其中的微生物捕捉在膜上，然后将膜转移到含有营养物质的培养基上进行培养。

通过计数培养基上的菌落数量，可估算出水样中的大肠菌群含量。

这种方法的优点是可以对大体积的水样进行检测，并且具有较高的准确性和灵敏度。

3. PCR法（Polymerase Chain Reaction）：PCR法是一种基于DNA分子的检测方法，可以快速检测和测定大肠菌群的含量。

该方法通过提取水样中的DNA，然后使用特定的引物和DNA聚合酶，在反应管中进行一系列温度变化的循环，扩增目标DNA片段。

最后通过凝胶电泳等技术，可以直接观察到扩增产物，从而判断水样中的大肠菌群含量。

PCR法具有高效快速、高灵敏度和高特异性等优点。

同时，PCR法还可以结合实时荧光定量PCR技术，通过测量荧光强度来定量水样中的大肠菌群含量。

4. 流式细胞仪法（Flow Cytometry Method）：流式细胞仪是一种高效、灵敏的细胞计数和分类技术。

实验十水中大肠菌群含量测定

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复发酵实验结果----产酸、产气
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五、实验报告
（1）自来水 100ml水样的阳性管数是多少？ 10ml水样的阳性管数是多少？查表ⅪⅤ-2得每升水样中大肠菌群数是多少？（2）池水、河水或湖水阳性结果记“+”；阴性结果记“-”。查表ⅪⅤ-3得每升水样中大肠菌群数是多少？查表ⅪⅤ-4得每升水样中大肠菌群数是多少？
2、仪器或其他用具载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。
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四、操作步骤
1．水样的采取 1)自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。 2）池水、河水或湖水应取距水面10～15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出。最好立即检查，否则需放入冰箱充分冷却。
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六、思考题
（1）大肠菌群的定义是什么？（2）为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌？（3）EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？（4）经检查，水样是否合乎饮用标准？
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（a）深紫黑色、有金属光泽。
（b）紫黑色、不带或略带金属光泽。
（c）淡紫红色、中心颜色较深。
（3）复发酵试验经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1～3个， 37℃培养24小时，结果若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。

水中大肠菌群的检测

水中大肠菌群的检测一、实验目的1、了解大肠菌群数量与水质状况的关系。

2、了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义。

3、掌握大肠菌群对人体健康的影响以及作为水体评价的指标和对象。

4、学习检测水中大肠菌群的方法。

二、实验原理1、大肠菌群大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。

主要生活在大肠内。

在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。

大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。

所以在平常外界环境中不能正常存活很长。

在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。

若在水和食品中检出此菌，可认为是被粪便污染的指标，从而可能有肠道病原菌的存在。

因此，大肠菌群数（或大肠菌值）常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准。

（国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个）2、初发酵试验发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置杜氏小套管。

乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。

为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色。

溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽孢菌生长的作用。

水样接种于发酵管内，37℃下培养：（1）24h内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠杆菌，疑为阳性结果；（2）在量少的情况下，也可能延迟48h后才产酸产气，此时应视为可疑结果。

以上两种结果均需继续做下面两部分实验，才能确定是否是大肠菌群。

（3）48h后仍不产气的为阴性结果。

3、MPN - 概述最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。

其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。

本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。

水中大肠菌群的测定

水中大肠菌群的测定水中大肠菌群的测定一、实验目的1、了解和学习大肠菌群落的测定原理和测定意义2、学习和掌握大肠菌群数量与饮水卫生质量的关系和检测方法二、实验原理大肠菌群是一群能在37℃培养、48h内发酵乳糖产酸、产气的需氧或兼氧格兰氏染色阴性无芽孢杆菌。

在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群等多种细菌，这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源。

一些水中的肠道病原菌如沙门氏菌，也存在于人的粪便中，它们的致病能力强，存活能力差，数量有限，而且培养的条件苛刻，分离和鉴别比较困难，样品监测即使为阴性，也不能保证没有病原微生物的存在。

而大肠菌群存活能力强，数量庞大，检测方法比较简易。

此外，大肠菌群细菌在水中的存活时间、对消毒剂和水体中不良因素的抵抗力与病原菌相似，可以作为人畜粪便污染的指示菌。

目前，国际上已经公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。

因而对饮用水必须进行大肠菌群落的检查。

《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）规定：生活饮用水总大肠菌群数规定为MPN/100mL或CFU/100mL不得检出。

MPN 为最大可能适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。

MPN是水的标准分析法，适用于各种水样，包括初发酵、平板分离和复发酵三部分。

三、实验材料1、水样：400mL2、培养基：乳糖蛋白胨半固体培养基、3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液、EMB培养基。

3、灭菌水：作阴性对照用。

4、接种大肠埃希菌的水样：做阳性对照用。

5、试剂和染色剂：草酸铵结晶紫染液，碘液，泛红染液，脱色液。

6、仪器设备：超净工作台，恒温培养箱，显微镜等。

7、其他：无菌移液管、无菌锥形瓶、发酵用试管、杜氏小管、培养皿、移液枪、酒精灯等。

四、操作步骤1、初发酵在3倍浓缩乳糖培养基中加入稀释度为10^-1、10^-2、10^-3的被检样品10mL，每个稀释度5个重复，混合均匀置于37℃培养24h。

2、平板分离培养24h后如果不产酸(乳糖发酵液变黄色)，产气（小指管底部有气泡）和不变浑浊者为阴性反应，产酸、产气或者仅产酸的乳糖发酵管为阳性反应，将阳性反应划线接种在伊红美兰平板上并且进行划线接种，37℃培养24h。

水中大肠菌群的检测

水中大肠菌群的检测法（多管发酵法）一、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。

大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽泡杆菌，在37°C生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。

我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。

多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。

发酵管内装有乳糖蛋口豚液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。

乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。

本实验为精简实验，所以省略了平板分离和复发酵试验后两部分，直接通过第一部分初发酵试验的颜色变化进行判断是否存在大肠菌群。

初发酵试验水样接种于发酵管内，37°C下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。

48小时后仍不产气的为阴性结果。

二、实验器材1•水样中心湖的湖水2.试剂三倍浓缩乳糖蛋口腺发酵管3.仪器及其它用品移液枪，16支试管（16支德汉氏小套管）三、实验步骤初发酵试验取16支发酵管，其中10支用移液管加入10ml 一倍的乳酸蛋口腺培养液，5支加入5ml三倍乳糖蛋白腺培养液，1支加入9ml自然水。

然后往16支试管各倒置一支汉氏小套管。

完成后包装好，于121°C高压灭菌锅中灭菌30min左右。

将取回来的中心湖水样稀释20倍。

待试管冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白腺培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白腺培养液的5支试管中加入lml水样，向装有一倍的乳酸蛋白豚培养液的另5支试管中加入lml IO"水样。

将各试管充分混均，置于37°C恒温箱中水样体积10mL lmL变黄数555产气数555培养24ho四、实验结果同时观察其他两组也是用中心湖水样的，其结果全都是显示为黄色。

水中大肠菌群的测定

• ②平板分离
• 经24h培养后，将产酸产气及只产酸的发酵管(瓶)，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板(EMB培养基)上，37℃培养18-24h。将符合下列特征菌落：菌落呈紫黑色，具有或略带有或不带有金属光泽，呈淡紫红色，仅中心颜色较深，其中的一小部分，挑取符合上述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。
四、实验步骤
1）自来水样的检测 ①初步发酵试验： • 在2个各装有50mL的3倍浓缩乳糖胆盐蛋白胨培养液的大使管中(内有倒置杜氏小管), 各加入100mL自来水样；在10支装有5mL 三倍乳糖蛋白胨发酵试管中(内有倒置小管)，以无菌操作各加入水样10mL.摇匀后， 37℃培养24h,23h未产生气体的积蓄培养至48h。
水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每mL不超过100个。
所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
六、成功关键：
• 实验过程中所用玻璃器皿均要求无菌。 • 检查开始前要充分振摇混合水样，这样可以确保细菌在水样中均匀分布，以保证大肠菌群数量的准确性，这对检验结果是十分重要的。 • 对于污染严重的水样，为了保证在接种后得到一个合适范围的阳性结果，需要设置四个以上的连续稀释度；当四个连续稀释度的最低管或全部呈现阳性，应加大稀释度。 • 若复发酵试验阳性结果明显，平板分离试验可以省略。
五、实验报告
1.大肠菌群的定义是什么？ 2．经检验，水样是否合乎饮用标准？为什么？ 3.EMB培养基含有哪几种主要成分？再检查大肠菌群时，各起什么作用？

实验6 水中大肠菌群

实验六水中大肠菌群(Coliform group)细菌的检测一、实验目的1.采用多管发酵法，以最近似数的方式测定水中大肠菌群数。

2. 掌握微生物实验中无菌操作技术方法。

二、实验原理如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原苗污染而引起肠道传染病。

由于肠道病原菌在水中数量较少，故从水中特别是自来水中分离病原菌常常非常困难。

大肠菌群细菌是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一类细菌，所以常常将其作为粪便污染的指示菌。

即根据水中大肠菌群细菌的数目来判断水源是否受粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。

一般规定每1000ml自来水中大肠菌群细菌不得超过3个．大肠菌群细菌是指一类好氧或兼性厌氧，革兰氏阴性，无芽孢的杆菌，包括四种细菌：大肠埃希氏杆菌、枸椽酸盐杆菌、产气杆菌及副大肠杆菌。

它们有相似的生化反应，能发酵葡萄糖，产酸产气，但发酵乳糖的能力不同。

当将它们接种到含乳糖的远滕氏培养基上生长时，四种菌的反应不一样，大肠埃希氏杆菌的菌落呈紫红色带金属光泽；枸椽酸盐杆菌的菌落呈紫红或深红色；产气杆菌的菌落呈淡红色，中心色深；副大肠杆菌的菌落无色透明(因不利用乳糖所致)。

本试验采用多管发酵法，以最近似数的方式来记载，这一数字是根据概率公式来估算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减少偏差。

本法除了用于检测水样(淡水或海水)外，尚可用于泥浆、沉积物、污泥等的检测。

测定时先将这类固体或半固体样品预先称重，再加水稀释，可取50g 样品，置于盛有450ml灭菌磷酸盐缓冲液并装有玻璃珠、石英砂的锥形瓶中，振荡l~2min，便成10-1稀释，以用于检验。

三、实验材料1.培养基；1.1乳糖胆汁液体培养基：蛋白胨：20.0g， 1.6％溴甲酚紫乙醇溶液：l ml，乳糖：5.0g，胆酸钠：5.0g将蛋白胨、乳糖、胆盐加热溶解于1000m1蒸馏水中，调pH值至7.2～7.4，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液l ml，充分混匀，分装于有倒置杜汉氏小管的试管中，注意小管中不得有气泡，115ºC灭菌20min。

水质大肠菌群检测标准和检测方法

水质大肠菌群检测标准和检测方法一、水质大肠菌群检测标准。

1.1 首先啊，咱得知道，在不同的用水场景下，大肠菌群的检测标准是不一样的。

比如说，咱们日常生活里的饮用水，那对大肠菌群的要求就非常严格。

按照国家标准啊，饮用水里的大肠菌群数那得是每100毫升不得检出。

这就好比是在一个干干净净的房间里，连一粒灰尘都不允许有，就是这么严格。

为啥呢？因为大肠菌群要是出现在饮用水里，那可就意味着这水可能被粪便污染了，这喝到肚子里，那还了得，简直就是“病从口入”的典型啊。

1.2 再看一些用于灌溉农作物的水，虽然要求没有饮用水那么严苛，但也有明确的标准。

一般来说，允许有一定数量的大肠菌群存在，但这个数量也是被严格限制的。

就像是在农田里，虽然不是像饮用水那样要求一尘不染，但也不能太“乌烟瘴气”，毕竟这水要是大肠菌群太多，也可能影响农作物的生长，甚至会让农作物带上病菌，这可就是“城门失火，殃及池鱼”了。

二、水质大肠菌群检测方法。

2.1 多管发酵法是一种很常用的方法。

这就像是一场细菌的“大排查”。

首先呢，把水样接种到含有乳糖的培养基里。

这乳糖啊，就像是给大肠菌群准备的“美食”。

然后呢，把接种后的培养基放在合适的温度下培养，一般是37摄氏度左右，这个温度就像是大肠菌群最爱的“安乐窝”温度。

如果水样里有大肠菌群，它们就会在这个培养基里大量繁殖，分解乳糖，产生气体和酸。

这个过程就像是大肠菌群在培养基里“开派对”一样，它们产生的气体就会让小导管里出现气泡，这时候我们就可以初步判断有大肠菌群存在了。

2.2 还有滤膜法。

这个方法有点像“筛沙子”。

把水样通过特制的滤膜，大肠菌群就会被截留在滤膜上。

然后把滤膜放到含有营养成分的培养基上培养。

经过一段时间的培养，大肠菌群就会在滤膜上形成一个个的小菌落。

这就好比是在一片空旷的土地上，大肠菌群建立起了自己的一个个“小部落”。

我们通过观察这些小菌落的数量和特征，就能知道水样里大肠菌群的情况了。

2.3 酶底物法也是一种比较新颖的检测方法。

水中大肠菌群的测定

▪ 革兰氏染色及镜检：于上述平板上长出的菌落中挑取1~2 个大肠菌群可疑菌落进行镜检和革兰氏染色。
▪ 复发酵试验：将上述镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌的，挑取该菌落的另一部分重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管，置于37C培养24土2h，观察产气情况。
▪ 结果：凡是在乳糖胆盐发酵管产酸、产气，在指示性培养基上能生长的，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，在复发酵管中产酸、产气的，即说明有大肠菌群的细菌存在—大肠菌群阳性；有一项不符的，即说明无大肠菌群的细菌存在—大肠菌群阴性。
▪ 大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的杆状细菌，并能在乳糖培养基中，经37℃24~48h培养能产酸产气。我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种，其中稀释培养法是标准分析法，为我国大多数卫生单位和水厂所使用。它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
实验十一水中大肠菌群的测定
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
一、实验目的
▪ 学习检测水中大肠菌群的原理和方法 ▪ 了解大肠菌群数量与水质状况的关系 ▪ 了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、实验材料
▪ 实验主要仪器与试剂 ▪ 样品：水样 ▪ 2. 培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料)，
伊红美兰琼脂(EMB)平板，乳糖发酵管。 ▪ 3. 其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管
▪ 根据有大肠杆菌细菌存在的初发酵管的管数，查相应的大肠杆菌检索表，报告每100毫升待检样品中大肠菌群细菌的最近似数。
五、实验结果
▪ 将自来水中总大肠菌群数量计算出来
六、问题与讨论
▪ P212：（4）①②
四、实验内容和步骤
▪ 采样：取100ml磨口带塞玻璃瓶，包扎后，干热灭菌备用。 ▪ 取自来水样时，至少应先放水5min，以冲去龙头口所带的