抗氧化活性测定方法的比较

合集下载

抗氧化物活性测定方法总结

抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性测定方法是通过对样品中的抗氧化物质含量和抗氧化活性进行定量分析，评估其对自由基的清除能力和抗氧化能力。

随着抗氧化研究的不断深入，测定方法也逐渐完善。

以下是对常见的抗氧化物活性测定方法的总结。

1. ORAC法（氧化应激反应活性测定法）：该方法通过测定样品清除自由基的能力来评估其抗氧化活性。

实验中，将样品与荧光试剂（如2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile)）共同作用，观察其清除自由基的能力，并通过建立标准曲线计算样品的ORAC值。

2.DPPH法（1,1-二苯基-2-苦味基-苦味酸磷）：该方法是一种常用的快速测定抗氧化活性的方法。

实验中，将样品与DPPH稳定自由基共同作用，通过比色反应观察DPPH自由基被样品清除的程度，从而评估抗氧化活性。

3.ABTS法（2,2'-联氮双5-苯砜酸）：该方法通过ABTS离子自由基的生成和清除反应来测定样品的抗氧化活性。

实验中，ABTS与过氧化氢反应生成ABTS离子自由基，通过观察样品对其的清除能力来评估抗氧化活性。

4.FRAP法（亚铁离子还原能力）：该方法基于样品对人造抗坏血酸（Fe3+）的还原能力，通过测量还原后的Fe2+离子的生成量来评估抗氧化活性。

实验中，将样品与Fe3+离子反应生成Fe2+离子，通过比色反应来测定Fe2+的含量。

5. 碘标法（Iodine value）：该方法用于测定油脂、脂肪等样品的抗氧化活性。

实验中，将已知量的碘与样品中的不饱和化合物反应，在光反应下观察反应终点的颜色变化，并根据标准曲线计算样品的抗氧化活性。

6. 硝酸盐法（Nitrite method）：该方法用于测定样品中亚硝酸盐的含量，从而评估其抗氧化活性。

实验中，样品经过还原反应生成亚硝酸盐，然后与DANO（N-乙基-N-（2-苯基乙基）-对硝基苯胺）反应生成稳定的偶氮染料，通过比色测定反应终点的吸光度来计算样品中亚硝酸盐的含量。

抗氧化物活性测定方法总结

抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性 (antioxidant activity)描述了化学物质在抑制或减少氧化反应中所起的作用。

抗氧化物是一类具有亲电子的分子，它们容易被氧化，从而中和自由基。

抗氧化物具有重要的生物学和医学意义，因为氧化损害是许多疾病和老化的主要原因。

因此，抗氧化物活性测定方法是目前研究的热点之一，现将抗氧化物活性测定方法进行总结:1. DPPH法：该方法是一种常用的体外抗氧化测定方法。

含有DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）的溶液表现为紫色，DPPH自由基上的氢原子被抗氧化物夺取后，DPPH自由基变成无色，从而可以通过紫外可见光谱测定其吸光度的降低来表示抗氧化物活性。

2. ABTS法：该法通过测定2,2’-联氮双(3-乙基苯并咪唑啉硫酸铵) (ABTS)自由基的消除能力来测定抗氧化活性。

该法也是一种体外抗氧化测定方法，溶液发生颜色变化，从而通过紫外可见光谱测定其吸光度的降低来表示抗氧化物活性。

3. ORAC法：ORAC（氧化还原能力值）法对不同化学物质的体内抗氧化活性进行定量测定，其原理是将抗氧化剂加入与有氧气气氛接触的荧光染料溶液中，由于受到氧自由基的攻击，染料随着时间流逝会逐渐减少。

为了确定不同化学物质的抗氧化活性，十分重要的是应该不断输入氧自由基。

4. FRAP法：铁还原能力 (FRAP) 方法测量样品对Fe3+的还原能力，其原理是将含有Fe3+的试液与抗氧化剂反应后，Fe3+被还原为Fe2+，测试Fe2+的含量即可评估抗氧化剂的抗氧化性能。

5. TBARS法：该方法是用于评估脂质过氧化物含量，从而推断抗氧化剂的能力。

该评估方法是通过测定细胞膜上的脂质过氧化产物（丙二醛）来分析抗氧化剂活性。

6. Total Phenolic Content (TPC)法：该方法最初是用来测定葡萄酒和咖啡中酚类化合物含量的。

后来发现大多数植物成分含有大量的酚类化合物，故也用于测定植物中的酚类含量。

3种抗氧化活性测定方法

3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定是评估物质抗氧化能力的重要方法，常用于食品、药物和化妆品等领域。

下面将介绍三种常用的抗氧化活性测定方法。

一、DPPH自由基清除法DPPH(2,2-二苯基-1-苦味肼)是一种常用的抗氧化剂，它能采用紫色的自由基形式存在，并且在反应中会转变为无色的稳定形式。

DPPH自由基清除法是一种简单而直观的测定方法。

该方法的基本原理是将待测物添加到预先溶解的DPPH中，反应一段时间后，根据颜色变化程度来评估抗氧化活性。

通过测量样品溶液吸光度的降低来计算其清除率，清除率越高，抗氧化能力越强。

二、FRAP法FRAP(铁还原能力)法是一种评估抗氧化物质电子给予能力的方法。

抗氧化物质能够通过给予电子来中和自由基的电子，从而保护细胞免受氧化损伤。

FRAP法通过反应产生的铁（II）络合物的吸光度变化来评估样品的抗氧化能力。

具体操作中，将待测物加入到铁（III）试剂（通常为铁(III)氯化物）中，待反应一定时间后，读取吸光度。

样品的抗氧化能力可以通过吸光度的变化来计算。

三、TBARS法TBARS(硫代巴比妥酸反应物)法是一种评估脂质过氧化的方法。

脂质过氧化是一种自由基引起的反应，会导致脂质的氧化和脂质分解产生不稳定化合物。

TBARS法主要用于评估食品和药物等样品中脂质过氧化的程度。

该方法通过将待测样品与反应试剂（如硫代巴比妥酸）反应生成稳定的色素产物，然后测量这种产物的吸光度来评估脂质过氧化的程度。

吸光度越高，脂质过氧化程度越高。

综上所述，DPPH自由基清除法、FRAP法和TBARS法是常用的抗氧化活性测定方法。

每种方法都有其独特的原理和应用范围，选择适合的方法可以准确评估样品的抗氧化能力。

在实际应用中，可以根据实验需求选择合适的方法，或结合多种方法综合评估抗氧化活性。

抗氧化物活性测定方法总结

抗氧化物活性测定方法总结引言：抗氧化物活性测定在食品、医药、化妆品以及生命科学等领域具有重要应用。

目前，常用的抗氧化物活性测定方法主要包括化学法、生物法和物理法。

本文将对这几种方法进行总结。

一、化学法1.1.DPPH自由基法该方法是目前应用最广泛的抗氧化活性测定方法之一、通过DPPH自由基与抗氧化物发生反应，使DPPH自由基得以还原为无色溶液，测定溶液的吸光度来评估抗氧化活性。

1.2.ABTS自由基法该方法通过生成具有特定吸光度的ABTS自由基，评估抗氧化物对自由基的清除能力。

与DPPH自由基法相比，ABTS自由基法具有更高的灵敏度和稳定性。

1.3.羟自由基清除法该方法利用特定的化学反应，测定样品对羟自由基的清除能力，评估其抗氧化活性。

该方法适用于抗氧化物活性测定和体外抗氧化活性评价。

1.4.过氧化物清除法该方法测定样品对过氧化物的清除能力，通过测定生成的不稳定的自由基产物的分解速率，评估抗氧化活性。

该方法适用于测定生物样品的抗氧化活性。

二、生物法2.1.脂质过氧化抑制能力测定法该方法通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力，评估其抗氧化活性。

常用的指标包括丙二醛生成量、硫代巴比妥酸反应物（TBA）生成量等。

2.2.DNA损伤保护能力测定法该方法通过测定样品对DNA损伤的保护能力，评估其抗氧化活性。

常用的指标包括DNA链断裂率、碱基损伤率等。

2.3.超氧化物歧化酶（SOD）活性测定法该方法测定样品中SOD的活性，评估其清除超氧自由基的能力。

常用的指标包括抑制率、相对酶活等。

2.4.过氧化氢酶（CAT）活性测定法该方法测定样品中CAT的活性，评估其清除过氧化氢的能力。

常用的指标包括催化剂浓度、酶单位等。

三、物理法3.1.相对电子自旋共振法该方法通过测定样品中的自由基产物的电子自旋共振信号的强度，评估抗氧化物的活性。

常用的指标包括g值、线宽等。

3.2.高温氧化法该方法利用样品在高温条件下的氧化反应，评估其抗氧化活性。

抗氧化酶活性测定方法

抗氧化酶活性测定方法抗氧化酶是一类对抗氧化反应具有重要作用的酶。

其主要功能是清除体内的自由基，抑制过氧化物形成和脂质氧化反应，从而保护细胞免受氧化应激的伤害。

测定抗氧化酶活性有助于评估生物体内的氧化应激水平，为疾病的诊断和治疗提供重要的指导。

本文将介绍几种常见的抗氧化酶活性测定方法。

1.超氧化物歧化酶（SOD）活性测定方法：SOD能够催化超氧阴离子（O2-）的还原反应，将其转化为较为稳定的氧气和过氧化氢。

常见的SOD活性测定方法有：-标准醛缩法：根据SOD催化的还原反应，利用NBT（硝基蓝盐）和醛缩剂的变色反应来测定SOD活性。

-自动化测定法：利用包含其中一种还原物质和pH染料的较为稳定的底物，通过测定底物的氧化程度来确定SOD活性。

-XTT法和WST-1法：由于SOD具有还原型的性质，可以通过测定细胞培养基中的还原型琼脂糖（XTT）或水溶性四硝基噻唑盐（WST-1）的还原动力学来测定其活性。

2.过氧化氢酶（CAT）活性测定方法：CAT主要参与还原过氧化氢（H2O2），将其转化为氧和水。

常见的CAT活性测定方法有：-色素法：利用黄曲霉素作为还原剂，观察黄曲霉素的消费量来测定CAT活性。

-光度法：通过测定样品中H2O2浓度的下降程度来间接测定CAT活性。

-氧化还原电极法：通过测定样品中H2O2浓度的下降速度来测定CAT活性。

3.过氧化物酶（POD）活性测定方法：POD主要参与氧气与还原型供体之间的氧化还原反应，转化为过氧化物（ROO-）。

常见的POD活性测定方法有：-色谱法：利用酚类底物的氧化反应，测定产生的醌类产物的含量来测定POD活性。

-酶标法：POD催化氧化反应会形成有色产物，通过测定产物的吸光度来测定POD活性。

4.谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性测定方法：GPx主要参与还原过氧化物，将其转化为相对稳定的醇和水。

常见的GPx活性测定方法有：-碳酸盐法：根据GPx还原底物中的碳酸盐，观察样品溶液pH值的变化来测定GPx活性。

3种抗氧化活性测定方法

3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定方法是评估化合物或材料抗氧化性能的一种重要手段。

随着抗氧化活性的研究日益深入，目前已经发展出很多种测定方法。

以下将介绍三种常用的抗氧化活性测定方法：DPPH自由基清除法、Fe2+/Fe3+还原能力法和ABTS自由基清除法。

1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色的自由基，常用于评估化合物或材料的抗氧化活性。

该方法基于DPPH自由基与抗氧化物质发生反应后，颜色由紫色变为淡黄色或无色。

测定方法简单，操作方便。

其原理是待测样品与DPPH混合后，通过电子或氢的转移反应，DPPH自由基将被清除，溶液颜色由紫色转变为淡黄色。

根据吸光度变化可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。

2.Fe2+/Fe3+还原能力法：该方法基于还原能力测定抗氧化物质对Fe3+离子的还原能力。

常用的试剂是FeCl3溶液和TPTZ（2,4,6-三聚吡啶甲酸）、酸性pH缓冲液。

其原理是待测样品能够还原Fe3+离子为Fe2+离子，Fe2+离子与TPTZ反应生成有颜色的络合物，通过分光光度计测定络合物的吸光度变化，进而计算出还原能力。

较高的吸光度变化表示较高的抗氧化活性。

3.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6磺酸)）自由基是一种蓝绿色自由基，其浓度在紫外可见光区域有最大吸收。

该方法基于ABTS自由基清除率来评估抗氧化物质的抗氧化活性。

该方法较DPPH法和还原能力法更为灵敏。

其原理是待测样品与ABTS自由基反应后，ABTS自由基将被清除，溶液颜色由蓝绿色变为无色或浅黄色。

通过测定吸光度的变化，可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。

除了上述常用的抗氧化活性测定方法外，还有很多其它方法也被广泛应用于抗氧化活性的评估，如氧化还原测定法、Fenton反应法、还原剂抑制能力法等。

每一种测定方法都有其独特的原理和适用范围，研究人员可以根据具体的研究目的和样品性质选择合适的测定方法。

抗氧化物活性测定方法总结

抗氧化物活性测定方法（倾向于考虑DPPH法和ORAC法）1.FRAP法:铁离子还原抗氧化能力测定法[1]FRAP(ferric ion reducing antioxidant power)方法，在低pH值的溶液中，Fe3+-TPTz(Fe3+-三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成有色的Fe2+-TPTZ。

反应的结果常以Fe2+当量或标准物质的抗氧化能力表示。

该法快速简便、易于操作、重复性好，但FRAP反应属于电子转移(SET)反应，因此FRAP方法不能够测定氢转移反应(HAT)起作用的物质。

而且该法实际测定的是待测生物活性物质将Fe3+还原为Fe2+的能力，因此没有抗氧化能力的生物学相关性。

2.TEAC法(trolox equivalent antioxidant capacity)ABTS(2,2'-amino-di(2-ethyl-benzothiazoline sulphonic acid-6)ammonium salt,2,2'氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6)铵盐)与过氧化物酶和氢过氧化物在一起形成ABTS+阳离子自由基。

在抗氧化剂存在时，这种自由基混合物的光吸收值下降，下降程度取决于抗氧化剂的抗氧化能力，测得的结果以TEAC表示，即被测抗氧化剂清除ABTS·+的能力(吸光度大小的变化)与标准抗氧化剂trolox(VE的水溶性类似物)清除ABTS·+的能力的比值。

TEAC法十分简单，适用于大量样品的分析检测。

但是，ABTS·+并非生理自由基，缺乏生理相关性，而且与FRAP方法相似，ABTS·+与不同抗氧化剂问的氧化反应时间不同，因此，只能定性不能定量评价样品的抗氧化能力。

3.DPPH法[2，3](2，2-diphenyt-l-picrylhydrazyl radical scavenging capacity)DPPH·(二苯代苦味肼基自由基)法是较常用的方法之一。

抗氧化活性研究方法

抗氧化活性研究方法引言：氧化反应是指分子或原子失去电子，而还原反应是指分子或原子获得电子。

由于氧化反应产生的自由基具有高度活性，能够对细胞结构和功能造成损害，导致多种疾病的发生。

因此，研究抗氧化活性及其机制对于预防和治疗这些疾病具有重要意义。

本文将介绍几种常用的抗氧化活性研究方法。

一、DPPH自由基清除能力测定法DPPH自由基清除能力测定法是一种常用的抗氧化活性测定方法。

DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色自由基，其颜色随着氧化程度的增加而减弱。

在该方法中，将待测样品与DPPH溶液混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够清除DPPH自由基，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。

二、还原能力测定法还原能力测定法是通过测定待测样品对还原剂的还原能力来评估其抗氧化活性。

常用的还原剂包括铁离子、铜离子等。

在该方法中，将待测样品与还原剂混合，通过测定混合液的吸光度变化或还原剂浓度的变化来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够还原还原剂，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降或还原剂浓度的降低。

三、氧化脂质抑制能力测定法氧化脂质抑制能力测定法是通过测定待测样品对氧化脂质的抑制能力来评估其抗氧化活性。

常用的氧化脂质包括脂肪酸、脂肪油等。

在该方法中，将待测样品与氧化脂质混合，通过测定混合液中脂质的氧化程度来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够有效抑制氧化脂质的形成。

四、超氧阴离子清除能力测定法超氧阴离子是一种常见的自由基，具有较高的活性。

超氧阴离子清除能力测定法是通过测定待测样品对超氧阴离子的清除能力来评估其抗氧化活性。

常用的超氧阴离子产生体系包括NBT（硝基蓝盐）-NADH（尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）体系、XTT（二苯基四唑盐）体系等。

在该方法中，将待测样品与超氧阴离子产生体系混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够有效清除超氧阴离子，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。

3种抗氧化活性测定方法

3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性是指物质对氧化过程的抑制作用，能够减缓或阻断自由基对细胞和组织的损害。

目前，常用的抗氧化活性测定方法主要包括DPPH 自由基清除法、ABTS自由基清除法和铁还原能力测定法。

以下将对这三种方法进行详细介绍。

1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-若氧基-苯基-π-苦味噁唑）自由基清除法是一种常用的抗氧化活性测定方法。

该方法是通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。

DPPH自由基是一种紫色稳定的自由基，在接触到氢供体（抗氧化剂）后，会发生颜色变化从紫色转变为黄色。

可以通过测定样品溶液的吸光度来评估其抗氧化能力。

吸光度的降低表明样品对DPPH自由基的清除能力较强。

2.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双（3-乙基苯并噻唑））自由基清除法也是一种常用的抗氧化活性测定方法。

ABTS自由基是一种无色可溶性自由基，其生成主要通过氧化剂与ABTS反应而产生。

测定方法是将ABTS与过氧化氢反应，生成蓝色自由基溶液，然后将样品加入到溶液中，通过测定吸光度的变化来评估样品的抗氧化活性。

吸光度的降低表明样品对ABTS自由基的清除能力较强。

3.铁还原能力测定法：铁还原能力测定法是一种评估抗氧化活性的常用方法，通过测定样品对Fe3+还原为Fe2+的能力来评估其抗氧化能力。

在这个方法中，还原剂（如抗氧化剂）会与Fe3+反应，生成Fe2+，并且Fe2+的浓度可以通过测量其吸光度来确定。

浓度越高，吸光度越高，表明样品的抗氧化能力越强。

这三种抗氧化活性测定方法各有其优势和适用范围。

DPPH自由基清除法适用于评估样品对自由基的清除能力，但其结果受其他化合物的影响较大；ABTS自由基清除法对于水溶性和脂溶性样品均适用，但其结果也受其他化合物的影响；铁还原能力测定法适用于样品中还原型物质的测定，可评估样品对金属离子的还原能力。

因此，在实际应用中，可以根据需要选择适合的方法来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法抗氧化酶是生物体内重要的防御系统，它们通过清除自由基来保护细胞免受氧化损伤。

其中，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）是三种主要的抗氧化酶。

测定这些酶的活性对于评估生物体的抗氧化能力具有重要意义。

本文将介绍几种常用的抗氧化酶活性测定方法。

1. 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定方法SOD是一种能够催化超氧阴离子自由基（O2）歧化为氧气（O2）和过氧化氢（H2O2）的酶。

常用的SOD活性测定方法包括：氮蓝四唑（NBT）法：利用NBT在超氧阴离子自由基存在下被还原成蓝色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算SOD活性。

羟胺法：利用羟胺与超氧阴离子自由基反应硝酸盐，通过测定硝酸盐的量来计算SOD活性。

2. 过氧化物酶（POD）活性测定方法POD是一种能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气的酶。

常用的POD活性测定方法包括：愈创木酚法：利用愈创木酚在过氧化物酶存在下被氧化红色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算POD活性。

邻苯三酚法：利用邻苯三酚在过氧化物酶存在下被氧化紫色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算POD活性。

3. 过氧化氢酶（CAT）活性测定方法CAT是一种能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气的酶。

常用的CAT活性测定方法包括：紫外分光光度法：利用过氧化氢在紫外光下具有吸收的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算CAT活性。

酶偶联法：利用过氧化氢在过氧化物酶存在下被氧化水的特性，通过测定水的量来计算CAT活性。

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定的实验步骤与注意事项实验步骤1. 样品准备提取酶：根据实验目的，选择合适的组织或细胞提取酶。

常用的提取缓冲液包括磷酸盐缓冲液、TrisHCl缓冲液等。

离心：将提取液离心，分离上清液和沉淀物。

上清液中含有目标酶，沉淀物则含有杂质。

蛋白质定量：使用 Bradford 法或 Lowry 法等蛋白质定量方法测定上清液中的蛋白质浓度。

抗氧化物活性测定方法总结

抗氧化物活性测定方法总结引言：一、化学法1.DPPH自由基清除法该方法利用DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苦基）自由基的特性，通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。

该方法简便、快速，适用于各种样品的抗氧化活性测定。

但该方法无法反映样品在生理条件下的真实抗氧化活性。

2.ABTS自由基清除法该方法利用ABTS（2,2'-联氨基双(3-乙酸苯并咪唑-6-磺酸)）自由基的特性，通过测定样品对ABTS自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。

该方法操作简单、结果稳定，适用于各种样品的抗氧化活性测定。

但该方法在高浓度下可能存在偏差。

二、生物学法1.超氧化物歧化酶（SOD）活性测定法该方法通过测定样品对超氧自由基的抑制能力来评估其SOD活性。

该方法可以反映样品在生理条件下的真实抗氧化活性，适用于抗氧化物活性的研究。

但该方法操作复杂、耗时较长，且受到其他物质的干扰。

2.过氧化氢酶（CAT）活性测定法该方法通过测定样品对过氧化氢的分解能力来评估其CAT活性。

该方法操作简单、结果准确，适用于各种样品的抗氧化活性测定。

但该方法无法反映样品在生理条件下的真实抗氧化活性。

三、电化学法1.循环伏安法该方法通过测定样品在电极上的氧化还原行为，来评估其抗氧化活性。

该方法操作简单、结果准确，适用于各种样品的抗氧化活性测定。

但该方法需要特殊的电化学设备，且对于非水溶性样品不适用。

2.差示脉冲伏安法该方法通过测定样品在电极上的差示脉冲伏安曲线，来评估其抗氧化活性。

该方法操作简单、结果准确，适用于各种样品的抗氧化活性测定。

但该方法需要特殊的电化学设备。

结论：目前，抗氧化物活性测定方法多种多样，各有优缺点。

选择合适的测定方法应根据具体实验目的、样品性质、设备条件等综合考虑。

为了准确评估样品的抗氧化活性，可采用多种方法进行综合分析。

未来，随着科技的不断发展，抗氧化物活性测定方法将会更加精确、快速、简便，为抗氧化物活性的研究提供更多便利和准确的手段。

果蔬抗氧化活性测定方法的比较

２王元凤．酶技术在茶叶深加工中的应用研究［Ｊ］．饮料工业，２０００，（６）：１８～２１３杨安树．邓丹雯．郑功源．藜蒿中黄酮类物质抗氧化作用的研究［Ｊ］．食品科学．２００３，２４（７）：６７～７０
４
ＭｉｚｕｓａｗａＫ．ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｆｕｙＴｎｅｓ
ｔｏ
ｆｒｕｉｔ
ｊｕｉｃｅｓａｎｄ
ｔｅａ
ｄｒｉｎｋｓ［Ｊ］．Ｇｅｋａｎ
ＦｕｄｏＫｅｍ
Ｉｋａｒｕ，１９９４，１０（２）：３６～４１
５许申鸿，杭瑚．用ＤＰＰＨ分析法研究野生植物的抗氧化活性［Ｊ］．青岛大学学报，１９９９，１２（３）：７５～７８６田迪英，杨荣华．不同热处理对蔬菜抗氧化活性的影响口］．食品与发酵工业，２００５，３１（６）：３０～３２
２４
此采用一种体系评价试样抗氧化活性强弱会有一定的局限性，作者认为采用两种或两种以上方法评价果蔬的抗氧化性更为合适。由表２发现，西红柿、芹菜、小葱在３种不同测定方法中都表现出较强的抗氧化活性，因此可推测这３种试样抗氧化活性都较强。
３
小
结
本实验采用ＤＰＰＨ法、８－胡萝卜素一亚油酸乳化液法、硫氰酸铁（ＦＴＣ）法３种常用果蔬抗氧化活性测定方法，对浙江省杭州市常见的２０种果蔬进行了抗氧化活性测定、评价。结果表明：大部分果蔬在ＤＰ— ＰＨ・法和ＦＴＣ法中表现出的抗氧化活性大致相似，但用Ｂ一胡萝卜素一亚油酸乳化液法所测定的各果蔬的抗氧化活性大小与前两种有较大差异。综合三种测定方法，ＤＰＰＨ法测定果蔬抗氧化活性简便，重现性好；ＦＴＣ法测定结果与ＤＰＰＨ法较为接近，但操作复杂；而Ｂ一胡萝卜素一亚油酸乳化液法虽简捷方便，但测定结果，相对存在一定的差异。
结果与讨论
２．１三种方法测定果蔬的抗氧化活性本实验采用ＤＰＰＨ法、硫氰酸铁法（ＦＴＣ法）、Ｂ一胡萝卜素一亚油酸乳化液法３种近年使用较多的果蔬抗氧化活性测定方法，对浙江杭州市场上常见的２０种果蔬进行了抗氧化活性测定，结果见表１。由表１可知，各试样对ＤＰＰＨ均具有一定的抑制率，其中西红柿、芹菜、梨、香蕉、小葱、韭菜、尖椒的抑制率都很高，达到了８０％以上，表明这些果蔬抗氧化活性较强。而黄瓜、葫芦、南瓜的抗氧化活性相对较弱，抑制率都在３０％以下；用Ｂ一胡萝卜素一亚油酸乳化液法测定生姜、芦柑、葱、芹菜、苦瓜的抗氧化活性较强，尤其是生姜，１００９生姜样品中所含有的抗氧

抗氧化活性测定方法的比较

抗氧化活性测定方法的比较1.DPPH自由基清除法：DPPH是一种紫色自由基，具有很强的吸收特性。

该方法通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。

这种方法简单、快速，广泛用于抗氧化活性的初步筛选。

但是该方法只能反映样品对一种自由基的清除能力，不能全面评估其抗氧化性能。

2.ABTS自由基清除法：ABTS是一种蓝色自由基，其吸收波长与DPPH不同，具有更广的吸收范围。

该方法通过测定样品对ABTS自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。

与DPPH法相比，ABTS法可以更全面地评估样品的抗氧化性能。

但是该方法需要较长时间才能得到准确结果。

3.过氧化氢清除法：该方法通过测定样品对过氧化氢的清除能力来评估其抗氧化活性。

过氧化氢是一种常见的氧化剂，可以导致细胞损伤。

该方法简单、快速，适用于多种样品的抗氧化活性测定。

但是过氧化氢法只能评估样品对过氧化氢的清除能力，不能反映其对其他自由基的清除能力。

4.铁离子还原能力法：该方法通过测定样品对Fe3+的还原能力来评估其抗氧化活性。

Fe3+是一种常见的氧化剂，可以与还原剂发生反应，形成Fe2+。

该方法简单、快速，适用于多种样品的抗氧化活性测定。

但是铁离子还原能力法只能评估样品对Fe3+的还原能力，不能全面评估其抗氧化性能。

5.脂质过氧化抑制能力法：该方法通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力来评估其抗氧化活性。

脂质过氧化是一种常见的氧化反应，可以导致脂质的氧化损伤。

该方法能够全面评估样品的抗氧化性能，适用于多种样品的抗氧化活性测定。

但是该方法操作繁琐，需要较长时间才能得到准确结果。

总体来说，不同的抗氧化活性测定方法各有优劣。

在实际应用中，可以根据需要选择适合的方法进行测定。

此外，多种方法的综合比较可以更全面地评估样品的抗氧化性能。

抗氧化能力检测方法如何选择

抗氧化能力检测方法如何选择1.避免氧自由基法避免氧自由基法是一种常用的营养物质抗氧化能力检测方法，通过测定物质对人工合成的活性氧自由基的清除能力来反映其抗氧化能力。

常用的活性氧自由基包括DPPH自由基和ABTS自由基。

该方法简单易行，适用于大批量样品处理。

2.过氧化氢降解法过氧化氢降解法是一种定量测定物质抗氧化能力的方法，通过测定物质对过氧化氢的消耗程度来评估其抗氧化能力。

该方法操作简便，适用于多种样品类型。

3.金属离子螯合能力法金属离子螯合能力法是一种常用的抗氧化能力检测方法，通过测定物质对金属离子的螯合能力来评估其抗氧化性能。

常用的金属离子包括铁离子、铜离子等。

该方法适用于多种样品类型，尤其适用于检测多酚类化合物的抗氧化能力。

4.体外细胞模型法体外细胞模型法是一种模拟人体细胞环境，通过测定物质对细胞的氧化损伤程度来评估其抗氧化能力。

常用的细胞模型包括人类肝细胞HepG2、人类白血病细胞HL-60等。

该方法较为贴近真实的生理环境，但操作较为繁琐。

5.动物模型法动物模型法是一种模拟人体内环境，通过测定物质对动物体内氧化损伤程度来评估其抗氧化能力。

常用的动物模型包括小鼠、大鼠等。

该方法能够更好地反映物质的抗氧化能力，在药物研发领域较为常见，但需注意动物伦理和实验条件等问题。

在选择抗氧化能力检测方法时，需要综合考虑实验目的、被测物的特性、实验条件、预算等因素。

有时需要结合多种方法来评估物质的抗氧化能力，增加研究可靠性。

同时，还需注意选择已经被广泛验证和接受的方法，以确保实验结果的准确性和可重复性。

抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法

抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法抗氧化酶SOD（超氧化物歧化酶）、POD（过氧化物酶）和CAT（过氧化氢酶）是植物体内重要的抗氧化酶，在植物的抗逆境应对中起着重要的作用。

因此，对这些抗氧化酶的活性进行测定和分析是研究植物生理生化过程的重要方面之一测定抗氧化酶活性的方法一般分为两类：直接法和间接法。

直接法是通过测定一些特定底物的降解速率来反映酶的活性；间接法是通过测定酶催化底物形成的产物的生成速率来间接反映酶的活性。

下面将分别介绍抗氧化酶SOD、POD和CAT活性的测定方法。

1.SOD活性测定方法：SOD活性测定方法主要分为NBT法和EPX法两种。

（1）NBT法：这是一种直接法，其基本原理是SOD将还原型的NBT 还原成穆尔蓝染色形成具有最大吸收峰值的NBT离子。

实验步骤如下：a.首先准备SOD底物溶液，其组成为：50mM磷酸缓冲液（pH7.8）+13mML-甲硫氨酸+75μM硝基蓝硝酸盐（NBT）。

b.将样品加入上述的SOD底物溶液中，混匀。

c.加入适量的酶抑制剂，使停止酶的活性，并将其放在冰上。

d.使上述反应在37℃下进行10分钟。

e.加入已经冷却的硝酸亚铁和磷酸以停止反应，并将其放在冰上10分钟。

f. 测定变色液的吸收光谱在560 nm波长处的吸光度。

（2）EPX法：这也是一种直接法，其基本原理是SOD将乙酸型形成的4-无水乙烯甲基-3-硝基噻吩染色。

实验步骤如下：a. 首先在试管中加入1 ml乙酸型测定液。

b.分别加入适量的SOD样品。

c.在30分钟内使试管中乙酸型完全消除。

d. 测定出试管中产生的4-乙烯基-3-硝基-5-硝基噻吩的吸收光谱在260 nm波长处的吸光度。

2.POD活性测定方法：POD活性测定方法可分为直接法和间接法。

（1）直接法：这种方法基于过氧化反应的特点，利用dianisidine 与过氧化氢在催化剂POD作用下形成有色产物的现象来测定POD的活性。

实验步骤如下：a.在试管中加入0.1M磷酸盐缓冲液（pH6.0）。

抗氧化活性测定方法

抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定是指评估化合物或物质对抗自由基或其他氧化物种的能力。

氧化反应是生物体代谢过程中不可避免的一环，会产生各种有害氧化物，如自由基。

自由基对人体细胞和分子造成损害，导致各种疾病的发生。

因此，评估物质的抗氧化活性具有重要的生物学和医学意义。

目前有许多方法可用于测定抗氧化活性，常用的方法有自由基清除法、还原能力测定法和氧化物抑制法。

下面将对它们进行详细介绍。

1.自由基清除法：自由基清除法主要是通过测定物质对自由基的清除速率来评估其抗氧化能力。

常用的方法有DPPH自由基法、ABTS自由基法和超氧阴离子自由基法。

其中，DPPH自由基法是最常用的一种方法。

该法是将DPPH自由基与物质反应，通过测定DPPH自由基消失的程度来反映物质的抗氧化活性。

2.还原能力测定法：还原能力是物质抗氧化活性的重要指标之一、通常是通过测定物质还原过程中电子释放的程度来评估其抗氧化活性。

常用的方法有Fe3+/Fe2+离子还原法和Cu2+/Cu+离子还原法。

其中，Fe3+/Fe2+离子还原法是最常用的一种方法。

该法是将Fe3+还原为Fe2+的过程中，测定还原剂的浓度变化或颜色的变化。

3.氧化物抑制法：氧化物抑制法是通过测定物质对氧化物的生产和活性的抑制能力来评估其抗氧化活性。

常用的方法有脂质过氧化抑制能力法和DNA损伤抑制法。

其中，脂质过氧化抑制能力法是最常用的一种方法。

该法是通过测定物质对脂质过氧化的抑制作用来评估其抗氧化活性。

此外，还有其他一些辅助方法可用于评估物质的抗氧化活性，包括电子顺磁共振(EPR)、化学发光法和细胞抗氧化活性测定等。

这些方法可以提供更加准确和全面的抗氧化活性评估。

总之，抗氧化活性测定是评估物质对自由基和其他氧化物的抗氧化能力的重要手段。

不同的测定方法各有特点，可根据需要选择合适的方法进行评估。

抗氧化活性测定方法的发展将为药物研发、食品安全和环境保护等领域提供有力的支持。

抗氧化物活性测定方法总结

抗氧化物活性测定方法总结-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1抗氧化物活性测定方法（倾向于考虑DPPH法和ORAC法）1.FRAP法:铁离子还原抗氧化能力测定法[1]FRAP(ferric ion reducing antioxidant power)方法，在低pH值的溶液中，Fe3+-TPTz(Fe3+-三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成有色的Fe2+-TPTZ。

反应的结果常以Fe2+当量或标准物质的抗氧化能力表示。

该法快速简便、易于操作、重复性好，但FRAP反应属于电子转移(SET)反应，因此FRAP方法不能够测定氢转移反应(HAT)起作用的物质。

而且该法实际测定的是待测生物活性物质将Fe3+还原为Fe2+的能力，因此没有抗氧化能力的生物学相关性。

TEAC法十分简单，适用于大量样品的分析检测。

3.DPPH法[2，3](2，2-diphenyt-l-picrylhydrazyl radical scavenging capacity)DPPH·(二苯代苦味肼基自由基)法是较常用的方法之一。

3种抗氧化活性测定方法

一、抗氧化活性测定1．DPPH:a)样品溶液浓度初测定，（0~4℃）储藏。

b)称4mg，加无水甲醇溶解于烧杯，转移至100mL容量瓶定容。

浓度为0.04mg/mL。

避光（0~4℃）储藏。

i.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml无水甲醇）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。

以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。

平行测定2次。

A1ii.5ml离心管（2ml待测样+2mL无水甲醇）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。

以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。

A2iii.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml待测样）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。

以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。

A3清除率（Y）=[1-（A3-A2）/A1]∙100%。

平行测定3次，取平均值。

分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。

自由基清除能力，AE=1/IC50。

根据AE大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE越大清除能力越强。

2．·OHa)PBS制配：磷酸二氢钠31.2g 1000ml蒸馏水定容，磷酸氢二钠71.6g1000ml蒸馏水定容。

移液管移液磷酸二氢钠190ml、磷酸氢二钠810ml 于1000ml 烧杯，pH 计调7.4。

b) 邻二氮菲：148mg 蒸馏水定容100ml 。

c) 硫酸亚铁：208.5mg 蒸馏水定容100ml 。

d) 100ml30%双蒸馏水定容300ml 。

封口。

i. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 硫酸亚铁混匀后+0.5ml 22O H +双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm 。

A1ii. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 硫酸亚铁混匀后+双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm.A2 iii. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 待测样+0.5ml 硫酸亚铁混匀后+0.5ml 22O H +双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm.A3iv. 10ml 离心管（1mlPBS+双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm.A 空。

抗氧化活性测定方法的比较 ()

抗氧化活性测定方法的比较人体衰老和多种疾病均与自由基有关，寻找天然抗氧化剂具有重要意义。

黄酮、多糖、多肽、酚类等生物活性成分均具有抗氧化活性，抗氧化活性的筛选方法可分为体外和体内2种测试体系。

体外：抗氧化活性可以用在特定条件下，样品对检测体系中自由基的清除能力、抗油脂过氧化能力及样品的还原能力、总抗氧化能力等来衡量和表征。

常用的方法有羟基自由基（·OH）清除能力法、1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH法）、2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐（ABTS法）、超氧阴离子自由基法（O2-·）、邻苯三酚自氧化法、β-胡萝卜素漂白法、硫代巴比妥酸法、铁离子还原能力测定（FRAP法）、总酚测定法、ORAC法等方法。

体内：主要有DNA氧化损伤法、蛋白质氧化损伤法、线粒体氧化损伤法。

其中DPPH法和ABTS法操作较简单便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外分光光度测量值后计算其自由基清除率，缺点是不同物质具有组成和结构的差异，与 DPPH·、ABTS+·的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断，且DPPH自由基会和其他自由基发生反应。

邻苯三酚自氧化法缺点是检测波长、缓冲液的组成及ｐＨ值、邻苯三酚浓度等关键测定条件存在着较大差异。

β-胡萝卜素漂白法的缺点是β-胡萝卜素本身有抗氧化活性，对样品活性的测定结果有影响。

FRAP法主要用于食品业，优点是简单易操作、可以重复，缺点是无法测定硫醇化合物的还原能力。

ORAC法是国际上通用的评价食品氧化的标准方法，缺点是仪器成分较复杂，检测成本较高。

目前普遍使用的体外抗氧化活性指标一般都采用分光光度法，使用分光光度计测量各种颜色成分含量的变化。

分光光度法操作较简单、便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外-可见分光光度测量值后计算其活性大小，具有成本低、效率高、样品量少等优点。