流式细胞仪
流式细胞仪分选细胞的原理
流式细胞仪分选细胞的原理一、仪器原理流式细胞仪是一种利用流体动力学原理，结合光学和电子仪器技术，对细胞进行快速检测、分类和分选的仪器。
其主要原理是通过细胞在液体中的流动来实现对细胞的分选和分类。
二、流式细胞仪的组成流式细胞仪主要由液体系统、光学系统和电子系统三部分组成。
1.液体系统：液体系统包括进样系统、流动系统和废液系统。
进样系统负责将待检样品引入流动系统；流动系统则通过液体的流动将细胞送到光学系统进行检测；废液系统则负责将已经检测过的样品排出。
2.光学系统：光学系统由激光器、光学镜头、滤光片和光电倍增管等组成。
激光器产生的激光经过光学镜头聚焦后，照射到流动的细胞上，细胞反射、散射或荧光发射的光信号被光学镜头收集并通过滤光片进行过滤，最后由光电倍增管转化为电信号。
3.电子系统：电子系统主要由数据采集卡、计算机和控制软件组成。
数据采集卡负责将光电倍增管转换的电信号进行放大和数字化处理，然后传输给计算机；计算机通过控制软件对数据进行处理、分析和展示。
三、细胞的分选原理流式细胞仪的分选功能是通过细胞的特征参数来进行判断和分选的。
1.散射光信号分选：散射光信号是细胞受到激光照射后，由于细胞的大小、形状和内部结构的不同，产生的光信号。
通过检测散射光信号的强度和角度，可以判断细胞的大小和形态，从而实现对细胞的初步分选。
2.荧光信号分选：荧光信号是细胞在受到特定荧光染料激发后发射的光信号。
通过检测细胞的荧光强度和荧光颜色，可以判断细胞内特定荧光标记物的存在与否，从而实现对特定细胞类型的分选。
3.双参数联合分选：双参数联合分选是指根据细胞的两个或多个特征参数进行综合分析和判断。
比如可以根据细胞的大小和形状、荧光强度和颜色等参数进行综合判断，实现对多种细胞类型的准确分选。
四、应用领域流式细胞仪广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
1.生物医学研究：流式细胞仪可以对细胞的免疫表型、细胞周期、细胞凋亡等进行快速检测和分析，帮助科研人员深入了解细胞的生理和病理过程。
流式细胞仪
三）淋巴细胞分类
CD3(T细胞，CD4、CD8))、CD19 （B细胞）、CD16、CD56（NK细胞）， 原发性或继发性免疫缺陷病、自身免疫 性疾病、淋巴细胞增殖病、肿瘤疗效观 察与预后判断、移植免疫检测等。
R1 M1 M1
流式细胞术检测细胞表型
四）白血病的免疫分型
流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素 标记的单克隆抗体作分子探针，多参数 分析白血病细胞的免疫表型，了解被测 白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
流式细胞仪数据分析
点图分析
流式细胞仪数据分析
直方图分析
图中100～101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞
五、 流式细胞术的应用
细胞结构 细胞大小 细胞颗粒度 细胞表面积 核浆比例 DNA含量与细胞
周期 RNA含量 蛋白质含量
……
细胞功能
UL
254
2.40 37.47 461.36
UR 1067 10.08 816.86 468.89
LL 5291 49.98 19.57 4.41
LR 3975 37.55 418.80 9.87
图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死
Date acquired: 14-Jan-03 File: 7Gy 4hr.001 Source: dongbo DIPLOID: 100.00 % Dip G0-G1: 73.12 % at 48.16 Dip G2-M: 9.59 % at 96.33 Dip S: 17.29 % G2/G1: 2.00 Dip %CV: 6.04
FCM分析白血病免疫表型, 快速、特异、 准确，重复性好，能区分细胞起源、划 分其分化发育阶段等，对白血病的诊断 与分型、治疗方案选择与预后判断、发 病机理研究等有重要价值。
流式细胞仪常用的几种检测方法
流式细胞仪常用的几种检测方法1.细胞计数和生存率检测：流式细胞仪可以通过测定细胞的大小、形状和胞内染色物来实现细胞计数和生存率的检测。
通过自动聚焦和自动获取图像的功能，可以对大量的细胞进行计数和分析，并得出生存率数据。
2.表面标记检测：流式细胞仪可以利用荧光染料或荧光标记抗体对细胞表面的蛋白质、糖类或其他生物分子进行检测。
这种检测方法主要用于检测细胞表面标记的数量和分布情况，例如测定细胞表面特定抗原的表达水平。
3.细胞周期分析：流式细胞仪可以通过染色剂或荧光标记抗体对细胞进行染色，然后分析细胞在不同细胞周期阶段的比例。
这种检测方法可以用于研究细胞的增殖能力、细胞周期调控机制以及细胞周期与疾病发展的关系。
4.细胞凋亡检测：流式细胞仪可以利用染色剂或荧光标记抗体对细胞凋亡的标志物进行检测。
凋亡是细胞死亡的一种形式，通过测定凋亡细胞的数量和凋亡标志物的表达水平，可以研究细胞凋亡的调控机制以及细胞凋亡与疾病的关系。
5.细胞功能检测：流式细胞仪可以通过检测细胞内Ca2+浓度、ROS （活性氧物种）水平、蛋白质磷酸化等细胞功能指标来研究细胞的信号转导和功能活性。
例如，利用荧光染料可以测定细胞内钙离子的浓度变化，以研究细胞响应外界刺激的机制。
此外，流式细胞仪还可以进行细胞分选、多色细胞分析和细胞细胞间相互作用的研究。
细胞分选功能可以根据细胞标记物的表达水平将细胞分离出来，用于研究特定功能细胞的特性。
多色细胞分析可以用于同时检测多种标记物的表达水平，以揭示不同细胞类型的分子特征。
细胞间相互作用的研究可以通过检测细胞间的共聚或共表达标记物来研究细胞间的相互作用和相互影响。
总的来说，流式细胞仪是一种功能强大的实验室设备，常用于细胞生物学和疾病研究。
通过不同的检测方法，可以在细胞水平上研究细胞的数量、表面标记、周期、凋亡、功能以及细胞间相互作用等方面的特征。
流式细胞仪步骤
流式细胞仪步骤宝子们，今天来唠唠流式细胞仪的步骤呀。
那第一步呢，就是准备样本啦。
这个样本可不能马虎，得处理得妥妥当当的。
比如说细胞样本，要保证细胞是单个分散的状态，要是细胞都黏在一起，那流式细胞仪可就懵圈啦。
这就像咱们排队一样，得一个个排好，不能乱哄哄地挤成一团。
对于血液样本之类的，可能还需要进行一些特殊的处理，像裂解红细胞之类的操作，把那些会干扰检测的东西去掉。
接下来就是给样本标记啦。
这就像是给细胞穿上不同颜色的小衣服，让流式细胞仪能区分它们。
我们会用一些特异性的荧光抗体，这些抗体就像小侦探一样，能找到细胞上特定的蛋白或者标志物，然后紧紧地抱住它们。
不同的抗体带着不同颜色的荧光，这样细胞就被标记得花花绿绿的啦。
不过这一步可得小心哦，抗体的浓度要合适，就像做菜放盐一样，多了少了都不行。
浓度太高，可能会有非特异性结合，就像乱给人贴标签一样；浓度太低呢，又可能检测不到目标。
样本都准备好标记好之后呢，就可以把样本放到流式细胞仪里面啦。
这个时候就像是把精心打扮的小细胞们送上舞台一样。
流式细胞仪里面有个小管道，样本就沿着这个管道慢慢往前走。
在这个过程中呢，激光就会照射到这些细胞上。
激光就像舞台上的聚光灯一样，一照到细胞上，那些被标记的荧光就会发出亮光。
然后呢，仪器就开始检测这些荧光啦。
它会把每个细胞发出的荧光信号都收集起来，然后分析这些信号。
这个分析可厉害啦，它能知道每个细胞上有哪些标记，还能根据这些标记把细胞分成不同的群体。
就像把人群按照不同的特征分成不同的小组一样。
比如说按照细胞的大小、细胞表达的蛋白种类等等。
最后呢，我们就可以得到检测结果啦。
这个结果可以告诉我们好多信息呢，比如样本里不同类型细胞的比例是多少，细胞的状态是不是正常等等。
这就像是我们做了一次细胞世界的小普查，得到了很多有趣的情报。
宝子们，流式细胞仪的步骤大概就是这样啦，是不是还挺好玩的呢 。
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪工作原理流式细胞仪是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的仪器，它能够对细胞进行高速、高效、高灵敏度的检测和分析。
流式细胞仪通过激光照射和细胞的光散射、荧光发射等特性，实现对细胞的分类、计数、分离和分析。
工作原理如下：1. 激光照射：流式细胞仪使用一束激光束照射样品中的细胞。
激光可以是单色激光，也可以是多色激光。
激光的波长和功率可以根据实验需要进行选择和调节。
2. 细胞光散射：当激光照射到细胞上时，光会与细胞中的物质发生相互作用，产生散射。
流式细胞仪通过检测细胞的光散射特性，可以获得细胞的大小、形状和复杂度等信息。
3. 荧光检测：在流式细胞仪中，可以通过给细胞标记荧光染料来检测细胞中的特定分子或标记物。
这些染料可以与细胞的蛋白质、核酸或其他分子结合，并发出特定的荧光信号。
流式细胞仪通过检测荧光信号的强度和波长，可以对细胞中的不同分子进行定量和定位分析。
4. 光学系统：流式细胞仪包含一个复杂的光学系统，用于收集和分析细胞发出的光信号。
该系统由多个透镜、滤光片和光电倍增管组成，能够收集和分离不同波长的光信号。
5. 数据分析：流式细胞仪通过计算机系统将收集到的光信号转化为数字信号，并进行数据分析和图形显示。
计算机软件可以对细胞进行分类、计数、分离和分析，生成直方图、散点图和柱状图等结果。
流式细胞仪的工作原理基于光学原理和细胞的光散射、荧光特性。
它能够快速、准确地获得细胞的多个参数，并对细胞进行定量和定位分析。
流式细胞仪在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用，可以用于细胞免疫学、细胞生物学、肿瘤学等领域的研究和诊断。
血液科医生常说的“流式”,你知道是什么吗？
血液科医生常说的“流式”，你知道是什么吗？在血液科的诊断和治疗中，流式细胞仪是一种常见的检测工具。
在医生和患者的日常交流中，常会听到血液科医生提到“流式”，那么，究竟流式是什么，它在临床中有怎样的作用呢？接下来，让我们详细了解一下。
什么是流式细胞仪？流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种用于分析细胞数量、表面标记、细胞大小和形状等信息的仪器。
它利用细胞标记荧光染料与细胞中的不同成分结合，通过检测这些荧光标记或物理性质的差异来对不同类型的细胞进行鉴定和分类。
流式细胞仪的原理流式细胞仪的基本原理是使用激光器产生的激光束照射通过悬液中的细胞，激光光束照射到细胞上后，细胞中的荧光标记物会发出荧光信号，这些信号会被探测器捕获并转换为电信号。
根据细胞荧光信号的强度、颜色和形状，流式细胞仪可以对细胞进行定量和定性的分析。
流式细胞仪在临床中的应用流式细胞仪在临床诊断中有着广泛的应用，特别是在血液科领域。
以下是一些流式细胞仪在临床中的主要应用场景：1.白血病鉴定与分类：流式细胞仪可以通过检测白血病细胞表面的不同分子标记来帮助医生对白血病进行鉴定和分类，从而指导治疗方案的制定。
2.免疫功能评估：流式细胞仪可以帮助医生评估患者的免疫功能，检测免疫细胞的种类和数量，从而指导治疗和预后的评估。
3.感染性疾病诊断：流式细胞仪可以通过检测免疫细胞中的感染标记物来帮助诊断感染性疾病，如艾滋病、肝炎等。
4.骨髓移植前后监测：流式细胞仪可以在骨髓移植前后对患者的免疫系统进行监测，评估移植效果和患者的免疫排斥反应。
5.自身免疫性疾病诊断：流式细胞仪可以帮助诊断和监测自身免疫疾病，如风湿性关节炎、红斑狼疮等。
流式细胞仪的优势与传统的显微镜观察细胞相比，流式细胞仪具有以下一些明显的优势：•高通量性：流式细胞仪可以快速分析大批样本，提高检测效率。
•多参数性：流式细胞仪可以同时检测多个参数，如细胞大小、形状、表面标记等，提供更全面的信息。
流式细胞仪使用规范
流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。
流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。
为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。
1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。
b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。
c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。
2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。
可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。
b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。
c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。
3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。
b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。
c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。
d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。
4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。
b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。
如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。
c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。
5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。
b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。
流式细胞仪在生物学研究中的应用
流式细胞仪在生物学研究中的应用流式细胞仪（Flow cytometer）是一种广泛应用于生物学研究的仪器，通过对细胞的特性进行快速、准确地分析和分选，为科学家提供了重要的数据和信息。
本文将探讨流式细胞仪在生物学研究中的应用，并展示其在不同领域的重要性。
一、流式细胞仪的原理和技术流式细胞仪的工作原理基于细胞在液体流动状态下被传感、检测和反应的过程。
它通过将细胞悬浮液经过细胞仪仪器内的细长管道，并在细胞通过过程中激发和测量其特定性质，从而实现对细胞的多参数分析和评估。
流式细胞仪的技术包括激光激发、细胞传感和荧光信号检测等。
激光激发利用高能激光束对细胞进行激活并激发其内部或表面荧光标记物的发射。
细胞传感通过聚焦和引导细胞通过检测区域，确保单个细胞按顺序经过检测装置。
荧光信号检测则通过光学检测系统捕捉和记录细胞放射出的特定波长的荧光信号。
二、流式细胞仪在免疫学研究中的应用1. 免疫表型分析：流式细胞仪可以用于识别和分析多种免疫细胞，如T细胞、B细胞、巨噬细胞等，并评估它们的表型特征，如表面标记物的表达情况、活化状态等。
2. 免疫细胞功能研究：通过对细胞的功能进行评估，如蛋白质分泌、细胞增殖、细胞凋亡等，可以了解它们在免疫反应中的作用和调控机制。
3. 免疫细胞亚群分析：流式细胞仪可以将免疫细胞按照特定标志物进行分拣和分选，从而获得纯度较高的特定亚群细胞，以便进行进一步的研究。
三、流式细胞仪在细胞生物学研究中的应用1. 细胞周期分析：通过流式细胞仪的荧光探测系统，可以对细胞进行DNA含量的测定，从而确定其所处的细胞周期阶段和细胞增殖状态。
2. 細胞凋亡檢測：流式细胞仪可以通过检测特定标志物如磷脂翻转等，对凋亡细胞进行分析和鉴定，以了解细胞凋亡的机制和调控网络。
3. 细胞增殖和细胞死亡研究：通过荧光染料等方法，流式细胞仪可以评估细胞增殖和死亡相关的指标，如活细胞数量、细胞周期分布、凋亡率等。
四、流式细胞仪在癌症研究中的应用流式细胞仪在癌症研究中具有重要意义，可以用于：1. 癌细胞鉴定和分离：通过特定标志物的荧光检测，流式细胞仪可以将癌细胞与正常细胞进行区分，从而进行纯化和特异性分析。
流式细胞仪的概念及其发展历史
流式细胞仪的概念及其发展历史1. 引言在现代生物科学领域中，流式细胞仪是一个关键的实验工具，用于分析和研究细胞的性质和功能。
本文将介绍流式细胞仪的基本概念以及其发展历史。
2. 流式细胞仪的概念流式细胞仪是一种能够快速、高效地分析和计数细胞、获得关于细胞表面分子、形态和功能信息的仪器。
它通过流式细胞术的原理，将细胞悬浮液以单个细胞为单位通过仪器，然后利用激光照射、细胞的自然发荧光或特定荧光染料来探测细胞的特定性质。
3. 流式细胞仪的发展历史20世纪60年代末，Wallace H. Coulter发明了第一台流式细胞仪。
这台仪器基于Coulter原理，使用电阻装置实现细胞计数，开创了流式细胞仪的先河。
随后，人们开始尝试利用光散射性质来分析细胞。
1970年代，Mack Fulwyler发明了一种使用激光照射和散射光收集的流式细胞仪。
这种新型流式细胞仪能够准确地测量细胞的大小和形状。
1980年代，流式细胞仪开始应用于免疫学研究领域。
人们开始利用荧光染料标记细胞表面的抗原，然后使用流式细胞仪进行检测和分析。
这一革新使得研究人员能够更深入地研究免疫细胞的功能和相互作用。
进入21世纪以后，流式细胞仪的性能不断提高。
新的激光技术、荧光染料和信号检测方法的应用使得流式细胞仪在多个领域都得到了广泛的应用，如免疫学、细胞生物学、血液学等。
4. 流式细胞仪的应用流式细胞仪的广泛应用使得它成为了生命科学领域中不可或缺的工具。
它可以用于细胞计数、活细胞和死细胞的区分、细胞周期分析、细胞凋亡检测、细胞表面标志物的鉴定等。
在免疫学研究领域，流式细胞仪被用来研究免疫细胞的活性、表面标志物、分泌物等。
同时，流式细胞仪还可以用于肿瘤学研究中的肿瘤细胞的检测和分类。
在血液学领域，流式细胞仪可以用于检测和鉴定不同类型的血细胞，包括白细胞、红细胞和血小板等。
5. 结论流式细胞仪凭借其高效、准确、可靠的特点，在现代生物科学研究中扮演着重要的角色。
流式细胞仪工作原理(一)
流式细胞仪工作原理(一)流式细胞仪工作原理什么是流式细胞仪？流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够对细胞进行快速分析和分类的仪器，在医学、生物学等领域有着广泛应用。
流式细胞仪的组成流式细胞仪由主体仪器和计算机分析系统组成。
主要部分包括光源、检测器、激光、样品注射系统和流动细胞仓等部分。
流式细胞仪的原理流式细胞仪的工作原理基于细胞在流动状态下通过一束激光，同时检测细胞与光的交互作用，通过对细胞数量和物理特征的分析来实现细胞分类。
流式细胞仪的步骤流式细胞仪的操作步骤主要分为样本制备、仪器校准、样本注射、数据采集和数据分析。
样本制备将待检测的样本准备到合适的浓度和体积，通常需要使用细胞培养、荧光染色等方法。
仪器校准流式细胞仪需要进行仪器校准来保证数据质量，包括激光能量、电子学增益等方面的调整。
样本注射样本注射一般使用样本传送器或注射管来完成，注射后样品进入流动细胞仓进行分析。
数据采集流式细胞仪通过检测样品中的细胞和荧光信号来获得数据，数据将会被记录下来。
数据分析通过软件对数据进行分析和处理，比如进行细胞计数、细胞分类等。
流式细胞仪的应用流式细胞仪广泛应用于生物学、医学等领域，比如细胞学、免疫学、感染病学、药物研究等方面。
结语流式细胞仪是一种非常有用的仪器，在科学研究和医学诊断中都有着重要作用。
掌握流式细胞仪的工作原理和操作方法对于科研人员和医护人员来说是非常重要的。
流式细胞仪的优势流式细胞仪具有许多优势，例如高速度、快速获取结果、高精度、高通量、良好的灵敏度和特异性等。
流式细胞仪的缺点流式细胞仪也存在一些缺点，例如价格昂贵、需要较为复杂的校准和操作、需要专业的技术人员进行操作和分析等。
流式细胞仪技术的发展随着技术的进步，流式细胞仪也在不断发展和改进。
例如，现代化的流式细胞仪已经具备了多色激光、高通量、高精度、高速度、多参数检测等方面的特点。
流式细胞仪的未来未来，流式细胞仪具有广泛的应用前景。
流式细胞仪分类
流式细胞仪分类1. 简介流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的生物学实验仪器，用于对细胞进行分类和分析。
它通过将细胞悬浮液注入仪器中，利用激光束照射细胞，测量细胞在不同参数上的散射和荧光信号，从而对细胞进行分类和计数。
流式细胞仪广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
2. 流式细胞仪的分类方式根据不同的参数和功能，流式细胞仪可以分为以下几种类型：2.1. 基础型流式细胞仪基础型流式细胞仪是最常见的类型，它可以测量细胞在不同波长的激光照射下的散射和荧光信号。
基础型流式细胞仪通常具有多个激光器和多个探测器，可以同时测量多个参数。
常见的参数包括细胞大小、形态、颜色、荧光标记物等。
2.2. 高通量流式细胞仪高通量流式细胞仪是一种能够快速处理大量样本的流式细胞仪。
它通常具有多个样本载体和多个样本接口，可以同时处理多个样本，提高实验效率。
高通量流式细胞仪广泛应用于大规模细胞筛选、细胞库构建和高通量药物筛选等领域。
2.3. 分选型流式细胞仪分选型流式细胞仪是一种能够根据细胞的特定特征进行分选的流式细胞仪。
它通常具有一个或多个分选器，可以根据预设的分选条件将特定类型的细胞分选出来。
分选型流式细胞仪广泛应用于细胞克隆、单细胞测序和细胞治疗等领域。
2.4. 成像型流式细胞仪成像型流式细胞仪是一种能够对细胞进行高分辨率成像的流式细胞仪。
它通常具有高倍率物镜和高灵敏度的相机，可以对细胞进行三维成像和时间序列成像。
成像型流式细胞仪广泛应用于细胞动力学研究、细胞迁移和细胞内信号传导等领域。
3. 流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的工作原理包括激光照射、散射信号检测和荧光信号检测三个步骤。
3.1. 激光照射流式细胞仪通过激光器产生高能量的激光束，将激光束聚焦到细胞悬浮液中的单个细胞上。
激光束的波长和功率可以根据需要进行选择，常用的波长包括488nm、532nm和633nm等。
3.2. 散射信号检测当激光束照射到细胞上时，细胞会发生散射现象。
流式细胞仪操作流程
流式细胞仪操作流程流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种广泛应用于生物医学研究领域的仪器，它能够对单个细胞进行快速、准确的细胞分析和分类。
本文将详细介绍使用流式细胞仪的操作流程。
一、实验准备在进行流式细胞仪实验之前，需要做好以下准备工作：1. 准备样品：收集和准备待分析的细胞样品，确保样品质量符合要求。
处理样品时要注意细胞的保存和处理条件，以避免样品的污染或破坏。
2. 准备反应体系：根据实验的需要，按照标准操作规程制备所需的反应液和缓冲溶液。
3. 检查和校准仪器：在使用流式细胞仪前，需要对仪器进行检查和校准，确保仪器状态良好，获得准确的实验结果。
二、仪器开机和设置1. 打开流式细胞仪电源，并等待仪器启动完成。
2. 进行仪器的初始化设置，包括选择所需的参数和实验模式等。
3. 设置流式细胞仪的激发和检测通道，根据实验需要选择适当的滤光片和荧光探针。
调整激光功率和检测灵敏度，确保后续实验过程中的信号质量。
三、样品加载和检测1. 将样品转移到适当的离心管中，并进行样品标记。
根据实验需要可以使用荧光标记物、抗体等对细胞进行特异标记。
2. 打开流式细胞仪的样品载架，将样品离心管安置在载架上，并将载架插入流式细胞仪的样品槽中。
3. 启动数据采集软件，设置样品参数和实验条件。
选择合适的采集速度和事件数目，确保获得足够的数据。
4. 开始数据采集，点击软件上的“实时运行”按钮，流式细胞仪将开始读取样品中的细胞信息，并将其转化为电子信号。
5. 采集完成后，保存数据并关闭数据采集软件。
四、数据分析1. 导出数据文件：根据实验需要，将采集到的数据文件导出到数据分析软件中进行进一步处理。
2. 进行数据筛选和清洗，去除噪音污染和非特异信号。
3. 根据实验的目的和问题，选择合适的数据分析方法，对细胞数据进行统计学和生物学分析。
4. 生成结果图表：根据数据分析结果，生成合适的图表或图像，用于展示实验结果和研究发现。
5. 结论和讨论：根据数据分析结果，撰写实验结论和讨论，解释实验结果并提出相应的科学推论。
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪是一种用于细胞分析和分类的仪器。
它通过将细胞单个地以高速通过一个光束，并测量其多个特性，从而对细胞进行识别、计数和分析。
其基本工作原理如下：首先，细胞样品被制备成单细胞悬浮液，并通过细胞特异性的染色物质或标记物进行标记，以将目标细胞与其他细胞区分开来。
然后，样品被注入到流式细胞仪中，通过注射器控制样品的流速和流量。
在流式细胞仪内部，样品被推进到一个称为流动细胞室的地方。
在流动细胞室中，样品通过一个狭窄的玻璃管道，产生一个细细的流动。
该管道上方有一个光源，通常是一束激光。
这束激光被聚焦成一束光束，对通过的细胞进行照射。
当细胞通过激光束时，它们与激光发生相互作用。
细胞中的标记物会吸收激光的能量，并重新发射出来。
这些重新发射的光信号被称为荧光信号。
荧光信号与细胞的特征和标记物有关。
流出流动细胞室的细胞荧光信号被收集并分析。
收集荧光信号的方法是通过使用一组光学器件，如透镜和滤光器，将荧光信号定向到光电倍增管中进行光电转换。
光电倍增管会将光信号转化为电信号，并放大。
最后，通过分析仪器中的电子元件收集的荧光信号和流速的数据，可以得出关于细胞数量、大小和标记物强度等的信息。
这
些信息可被用于鉴定和分类细胞，分析细胞的功能和活性，以及研究细胞的生理和病理状态。
流式细胞仪操作步骤
流式细胞仪操作步骤一、样品准备1. 确认样品是否符合实验要求，如细胞浓度、荧光标记等。
2. 根据实验需求，选择合适的试管和细胞样品。
3. 确认样品中是否有杂质或污染物，必要时进行离心和洗涤。
4. 尽可能缩短样品处理时间，避免细胞活性受到影响。
二、样品上机1. 打开流式细胞仪，确认仪器正常工作。
2. 将样品加入到流式细胞仪的样品管中。
3. 根据实验需求，设置合适的流速和压力。
4. 开始采集数据，观察仪器工作状态，确保数据准确可靠。
三、参数设置1. 根据实验需求，选择合适的荧光标记和检测参数。
2. 根据细胞类型和特性，设置合适的门控和阈值。
3. 确认仪器校准和定标工作已完成。
4. 根据需要，设置多色分析，以便于进行细胞分群和定量分析。
四、数据采集1. 在采集数据时，观察仪器工作状态，确保数据准确可靠。
2. 根据实验需求，确定采集的数据量，确保数据具有代表性。
3. 记录采集数据的时间和条件，以便于后续数据分析。
4. 在采集数据时，注意观察细胞活性、浓度和分布情况，及时调整实验条件。
五、数据分析1. 使用专业软件对采集的数据进行处理和分析。
2. 根据实验需求，对数据进行去噪、归一化和定量分析。
3. 进行细胞分群、细胞周期和细胞凋亡等分析。
4. 对数据进行统计学分析和可视化展示。
六、结果输出1. 根据分析结果，输出相应的图表和数据表格。
2. 对结果进行解释和注释，以便于读者理解和应用。
3. 如果需要，可将结果整理成报告形式，提供给相关人员参考和使用。
七、质量控制八、实验室清理。
流式细胞仪的基本组成和工作原理
流式细胞仪是一种能够对细胞进行高效快速检测和分析的先进仪器，广泛应用于医学、生物学、药学等领域。
它通过对细胞进行单个分析，能够提供更加详细和精确的数据，对细胞的分类、计数、表面标记物分析等方面都有着重要的应用价值。
在进行流式细胞仪的选择和使用之前，了解其基本组成和工作原理是非常重要的。
一、流式细胞仪的基本组成流式细胞仪主要由激光器、光学系统、流动系统、检测系统和数据分析系统等组成。
1. 激光器激光器是流式细胞仪的激发光源，通常采用氩离子激光器、固体激光器或半导体激光器。
激光器能够提供高强度、单色、准直、相干的激发光源，用于激发待检测细胞中的荧光标记物。
2. 光学系统光学系统包括聚焦物镜、滤光镜、物镜和检测器等部分，用于将激发光源聚焦到待检测的细胞上，并收集样品发出的荧光信号。
光学系统的设计和性能对流式细胞仪的灵敏度和分辨率有着重要的影响。
3. 流动系统流动系统用于将样品中的细胞单个输送到激光束中进行检测。
它通常包括样品注射器、流动池和排液系统等部分，能够实现高速、稳定的细胞输送，保证检测过程的准确性和稳定性。
4. 检测系统检测系统用于对激发样品中的荧光信号进行检测和测量，通常包括多路光学检测器、光电倍增管、滤光片等部分，能够对不同波长的荧光信号进行高效、快速的检测。
5. 数据分析系统数据分析系统用于对检测到的荧光信号进行处理和分析，通常包括计算机、数据采集卡、数据处理软件等部分，能够提供多种数据处理和分析功能，帮助用户快速、准确地获取所需的数据信息。
二、流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的工作原理主要包括样品注射、激发和检测、数据采集和分析等步骤。
1. 样品注射待检测的样品中的细胞被注入到流式细胞仪的流动系统中，形成单个细胞在流动状态下通过检测区域。
2. 激发和检测当细胞通过激发光源时，标记在细胞表面或内部的荧光染料被激发产生荧光。
光学系统将产生的荧光信号收集并分离成不同波长的光信号，并送入多路光学检测器进行检测和测量。
流式细胞仪蛋白方法
流式细胞仪蛋白方法
流式细胞仪可以用于检测细胞表面的蛋白表达，其原理是利用荧光标记的抗体对目的细胞进行标记，然后通过流式细胞仪检测荧光信号，从而分析和判断待检测细胞表面蛋白的表达情况。
具体步骤如下：
1. 荧光标记抗体孵育细胞：将荧光标记的抗体与待检测细胞混合孵育，使抗体与细胞表面的目的蛋白结合。
2. 洗涤去除未结合抗体：洗涤细胞，去除未结合的抗体，减少背景干扰。
3. 流式细胞仪检测：将标记好的细胞通过流式细胞仪进行检测，记录荧光信号。
4. 结果分析和判断：通过对不同条件下细胞的荧光信号进行比较，可以分析和判断待检测细胞表面蛋白的表达差异。
流式细胞仪在蛋白检测方面具有高灵敏度、高特异性和高通量等优点，被广泛应用于生命科学、医学和药学等领域的研究。
流式细胞仪行标
流式细胞仪行标
流式细胞仪（Flow Cytometry, FCM）是一种用于分析和分离活细胞的实验室技术。
它可以用来测定细胞的大小、复杂性（颗粒度）、内部荧光强度以及细胞表面或内部的特定分子标记。
流式细胞仪的工作流程大致包括以下步骤：
1. 样本制备：首先需要将细胞样本制备成单细胞悬液，并加入荧光染料或抗体以标记目标分子。
2. 染色：细胞悬液与荧光标记的抗体或染料混合后，孵育一段时间以使标记物结合到目标细胞上。
3. 样本加载：经过染色的细胞样本通过流式细胞仪的样本输入系统，通常是一个细管，称为流道。
4. 液流形成：细胞样本被雾化成单个细胞的液滴，这些液滴通过流道以一定速度流动。
5. 激光照射：流动中的细胞逐个经过激光束的照射。
激光激发细胞内或表面的荧光标记，使其发出光信号。
6. 信号检测：流式细胞仪配备有光电探测器，用来检测细胞发出的光信号。
每个细胞产生的信号被转换为电信号，并记录下来。
7. 数据分析：收集到的信号被计算机系统分析，根据细胞的荧光强度和散射光特性，可以得到细胞的各种参
数，如细胞大小、颗粒度、细胞膜和胞内分子的表达水平等。
8. 数据呈现：分析结果通常以二维图表（如前向散射与侧向散射图、荧光强度直方图）或三维/四维图表的形式展现，便于研究者进行进一步的数据解读和实验设计。
流式细胞仪广泛应用于免疫学、肿瘤学、细胞生物学等领域，对于疾病诊断、细胞分选、功能性研究等方面有着重要作用。
通过精确地测量和分析细胞的物理和化学特性，流式细胞仪能够提供关于细胞状态和功能的丰富信息。
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪工作原理流式细胞仪是一种广泛应用于生物学和医学研究领域的仪器，它能够对细胞进行高效、快速、准确的分析。
流式细胞仪的工作原理是基于细胞在流动液体中通过激光束的照射，测量细胞的不同特征参数。
本文将详细介绍流式细胞仪的工作原理。
一、激光照射及细胞流动1.1 激光源：流式细胞仪使用激光器作为光源，通常是氩氖激光器或者固态激光器。
1.2 激光照射：激光束照射到细胞悬液中的细胞，使细胞发生荧光或者散射。
1.3 细胞流动：细胞悬液通过流动系统，以单个细胞的形式通过激光束。
二、荧光检测系统2.1 光学系统：包括透镜、滤光片和光电倍增管等，用于检测细胞发出的荧光信号。
2.2 荧光探测：根据细胞内染料的荧光特性，检测细胞的荧光信号。
2.3 数据采集：将荧光信号转化为电信号，并通过计算机进行数据采集和分析。
三、细胞参数分析3.1 细胞大小：通过散射信号测量细胞的大小。
3.2 细胞形态：根据细胞的散射光信号，分析细胞的形态特征。
3.3 细胞表面标记：通过荧光信号检测细胞表面的标记物，如抗体或者荧光染料。
四、多参数分析4.1 多色荧光：流式细胞仪可以同时检测多种荧光信号，实现多参数分析。
4.2 细胞周期分析：通过不同荧光探针标记细胞周期不同阶段，进行细胞周期分析。
4.3 蛋白表达分析：通过检测细胞内特定蛋白的荧光信号，分析蛋白的表达水平。
五、应用领域5.1 免疫学研究：流式细胞仪广泛应用于免疫学研究中，用于检测免疫细胞的表面标记物。
5.2 肿瘤学研究：流式细胞仪可用于检测肿瘤细胞的表面标记物，分析肿瘤细胞的特性。
5.3 细胞生物学研究：流式细胞仪可用于细胞分析、细胞计数和细胞分选等细胞生物学研究领域。
总之，流式细胞仪通过激光照射、荧光检测系统、细胞参数分析、多参数分析和应用领域等多个方面的工作原理，实现了对细胞的高效、快速、准确的分析，为生物学和医学研究提供了重要的技术支持。
流式细胞仪原理及应用
流式细胞仪原理及应用流式细胞仪是一种用于细胞计数和表征的仪器，它基于细胞在流体中流动并通过光源的原理。
以下是流式细胞仪的原理和一些常见应用。
原理：1. 细胞准备：样品中的细胞首先需要进行适当的处理，包括细胞分离、去除细胞团块和杂质等，以确保流经流式细胞仪时的均匀性和准确性。
2. 细胞传递：样品中的细胞通过封闭的通道流动，形成单个细胞的串行排列，以便每个细胞能够单独接收光信号。
3. 激光照射：流式细胞仪使用激光器产生高强度的单色光束，照射到细胞上。
4. 光散射和吸收：细胞与经过的激光光束相互作用，发生光散射和吸收现象。
这些现象提供了关于细胞大小、形状、复杂度和细胞表面分子的信息。
5. 光信号收集：流式细胞仪使用多个光学组件和探测器来收集光信号。
不同的检测器可以收集不同的光散射角度和波长的光信号。
6. 数据分析：收集到的光信号通过计算机进行处理和分析，可以获得细胞的数量、计数、分类和细胞表面分子的信息。
应用：1. 细胞计数：流式细胞仪可以快速准确地计数细胞数量，并提供关于细胞浓度和细胞增殖的信息。
这在生物学研究和临床实验室中非常常见。
2. 细胞表征：通过测量细胞的大小、形状和表面标记物等特征，流式细胞仪可以对细胞进行表征，并帮助研究人员了解细胞类型和状态的变化。
3. 免疫细胞分析：流式细胞仪可以用于免疫学研究，如分析免疫系统中的不同细胞亚群、检测细胞表面抗原、测量细胞分泌物和研究细胞凋亡等。
4. DNA和蛋白质分析：通过使用荧光染料或抗体标记，流式细胞仪可以实现对DNA含量、染色体多样性以及特定蛋白质的定量和定位分析。
总之，流式细胞仪是一种功能强大的实验室工具，广泛应用于生物学、医学和药物研发等领域，为研究人员提供了大量有关细胞的信息。
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Purdue University Cytometry Laboratories
流式细胞术的临床应用
45
临床常见应用
1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态 2.白血病/淋巴瘤免疫分型
3.HLA组织配型及HLA与某些疾病的关系
4.干祖细胞的定量及成分分析.
5.其它:血小板PAIg：粘附分子;TCR多态性检测;
• ②可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、
化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义；
• ③是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、
计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多 领域的知识和成果；
• ④既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。
5
• 概要说来，流式细胞术主要包括了样品的液流
22
• 目前的流式细胞仪大多采用氩离子激光器，因为
488nm的激光器能够激发一种以上的荧光。光
源的谱线愈接近被激发物质的激发光谱的峰值，
所产生的荧光信号愈强。FITC的激发光谱如图
3-3所示， 488nm非常接近FITC的激发光谱的
峰值，所以FITC被激发时会表现出最强荧光信
号，而当FITC被其波谱范围内的其它波长激发
的技术。从开始设想到第一台仪器的问世,科技工作者进行 了不懈的努力。随着各相关技术的迅速发展，FCM技术已 经成为日益完善的细胞分析和分选的工具。
2
• FCM仪器分为二大类：
• 一类为台式机，其特点为：仪器的光路调节系统固定，
自动化程度高，操作简便，易学易掌握。BD公司的临床 型 FACScan也是最早可用于临床诊断的仪器。
肿瘤癌基因及 抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶; 耐药蛋 白的分析等等。
46
• HLA-B27检测
外周血HLAB27的表达及其表达程度与强直性脊柱炎的发生 有很大程度的相关性.
• 循环血中活化血小板（CD62P、CD63）：
糖尿病伴微血管病变、冠心病、高血压病、高脂血症、脑 血栓形成、短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化患者活化血小板百 分率和绝对值显著高于正常人。而糖尿病无微血管病变、周围
（ CD19+/CD3+） 的 百 分 含 量 为 ： 296/2839=10.43%。
42
•
分 选
43
488 nm laser
FALS Sensor
Fluorescence detector
Charged Plates
-
+
Single cells sorted into test tubes
44
Laser
FALS Sensor
90LS Sensor
18
流式细胞仪产生的信号
• 非荧光信号
颗粒度
细胞大小
19
• 上述两种信号都是来自于激光原光束，目前采
用这两个参数组合，可区分不同种类的细胞亚 群，同时可获得细胞相关的重要信息，下图 （图 3-2 ）为 FSC 和 SSC 组成的二维散点图， 从图中可以很容易把全血样本中淋巴细胞、单
分含量。而且，还可以对感兴趣的细胞进行再
分选。
30
FALS Sensor
Freq
Fluorescence
Fluorescence detector
31
Example Channel Layout for Laser-based Flow Cytometry
PMT
4
Flow cell
Dichroic Filters
血管病变以及深静脉血栓形成患者活化血小板水平与正常人无
显著差异。PTCA后24小时发展成急性血管闭塞或高度再狭窄 的患者活化血小板CD62p、CD63增多，可以用于预测PTCA后 急性缺血再发作的危险性。
47
微转移肿瘤细胞
灵敏度:10-7
48
DNA含量及细胞周期分析
细胞周期分析:在细胞周期(G0，G1，S， G2 ，M)的各个时期，DNA的含量随各时相呈现 出周期性的变化。通过核酸染料标记DNA，并 由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时 期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。 了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可 利用细胞周期蛋白（CYCLIN）、Ki67、核增殖 抗原（PCNA）等，对细胞周期进行精确的分期： G0、G1、S、G2、M.
400 nm 500 nm 600 nm 700 nm
Excitation Emission
ity s n te eIn tiv la e R
Phycoerythrin (PE)
27
350
300 nm
457 488 514
400 nm 500 nm
610 632
600 nm 700 nm
PE-TR Conj.
核细胞及粒细胞区分开。
20
21
荧光信号
• 荧光物质吸收符合其波长范围的光能量，内部电
子受激上升到高能级。然后受激电子迅速衰落回
基态，释放过剩能量成为光子。这种能量的转换
称为荧光。
• 能够激发荧光物质的波长范围称为激发光谱。因
为更多的能量消耗在吸收转换而不是荧光转换中，
所以发射光波长要高于激发光波长。荧光物质的 发射波长范围叫做发射光谱。
Common Laser Lines
Texas Red
PI Ethidium PE FITC
cis-Parinaric acid
28
29
• 对单克隆抗体进行荧光染色，通过分析细胞表
面抗原标记
• 确认细胞类型。在细胞的混合群体中，我们使
用不同的荧光染料区分细胞亚群。每个亚群的 染色模式与FSC和SSC数据相结合，用于识别样 本中的细胞种类，并可以得到各细胞亚群的百
流式细胞术
胡嘉波 江苏大学基础医学与医学技术学院
1
•
流式细胞仪（Flow Cytometer 简称FCM）是一项集激光 技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术及细胞 荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。 概括来说，流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中
的细胞或生物颗粒进行多参数的、快速的定量分析和分选
• 统计结果表明，整个事件共记录了6000个细胞，门内
淋巴细胞2891个。其中M1（阴性）细胞619个，M2 （CD3阳性）细胞2272个细胞。淋巴细胞亚群CD3阳 性 百 分 含 量 的 统 计 结 果 为 ： M2： 2272/2891=78.59%。
40
• 二维点图以双参数显示结果，每个点表示一个或多个细胞。图为
15
Forward Angle Light Scatter 前向角
Laser
FALS Sensor
16
• 侧向角散射：侧向角散射（SSC）光与
被测细胞的颗粒密度和内部结构有关， 对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏
感。SSC收集与激光束正交90度方向的
散射光信号。
17
90 Degree Light Scatter 90度侧向角
技术、细胞的分选和计数技术，以及数据的采 集和分析技术等。FCM目前发展的水平凝聚了 半个世纪以来人们在这方面的心血和成果。
6
流式细胞仪发展的历史
• 起源: 1934年--- 细胞计数仪 • 雏形: 1949年--- Coulter 计数器 • 1959年--- B型Coulter计数器 • 1972年: BD(Becton-Dickinson) • 第一台流式细胞仪, 具有分选功能
7
•
流式细胞仪主要由三部分组成：流动室和液 流系统；光路系统以及电系统。其作用如下：
• 液流系统：依次传送待测样本中的细胞到激
光照射区。
• 光路系统：细胞由激光激发，通过光学滤片
产生光信号，并传送到相应的探测器。
• 电系统：把光信号转换为电信号。
8
• 在流式细胞仪中，细胞被传送到液流中的激光照射区。
阴性对照图，用于设定阴性对照边界，全图划分为四个象限，以 区分阴性细胞、单阳性细胞以及双阳性细胞。左下象限（LL）为 双阴性细胞，左上象限（UL）为Y轴阳性细胞（CD19 PE），右 下象限（LR）为X轴阳性细胞（CD3 FITC），右上象限 • （UR）为双阳性细胞（CD19+/CD3+）。
41
• 如图 5-7 所示，淋巴细胞亚群双阳性细胞
• 另一类为大型机，其特点为可快速将所感兴趣的细胞分
选出来，并且可将单个或指定个数的细胞分选到特定的 培养孔或板上，同时可选配多种波长和类型的激光器， 适用于更广泛更灵活的科学研究应用。
3
●
流式细胞仪实物
BD-Calibur
BD FACSVantage
4
• 其特点是： • ①测量速度快，最快可在1秒种内计测数万个细胞；
9
10
液流系统
液流系统的作用是依次传送待测样本中的细胞到激光照射区， 其理想状态是把细胞传送到激光束的中心。而且在特定时间 内，应该只有一个细胞或粒子通过激光束。
统的核心部件，台式机中流动室称为样品槽，大型机称之为 喷嘴。在流动室内细胞液柱聚焦于鞘液中心，细胞在此与激 光相交。
52
血小板计数新标准(双平台法)
(国际血液学标准化委员会(ICSH)/国际实验血液学协会(ISLH) 2001)
R = 红细胞数R3/血小板数R1(流式) 血小板数=红细胞数(血球仪)/R
灵敏度高(1- 400x109/L)， 重复性好，室内/室外变异系数均很小 尤其应用于血小板预输注病人的检测 (阈值:20x109/L)
800
1000
2N
4N
51
PI 荧光强度(DNA含量)
定量分析
1.检测细胞特异性标记物：FCM不但可以定性 分析标记物，而且可以进行定量。用标记 已知数量的荧光素分子的标准微球作参照， 可以计算出每个细胞抗原定簇的个数。 2.CD4绝对计数 3.CD34绝对计数 4.血小板绝对计数 5.可溶性物质(如细胞因子)的高通量定量检测