中药化学实验指导

三、实验流程
防 己粗 粉 乙 醇提取 ， 回收溶 剂 糖浆 酸化 酸水液 过 滤， 以 水洗渣 ， 滤液 以浓氨 水碱化至pH9-10， 氯仿 萃取 碱水 层 正 丁醇 萃 取 回 收 溶剂 轮 环藤 酚 碱 氯仿 层 2％NaOH萃取 NaOH层 氯仿 层 氯化铵调 pH9-10 水 洗中性 ， 脱水 氯仿萃 取 回 收溶剂 ， 抽松 氯仿层 抽松物 （ 甲乙 素） 水洗 中性， 脱水 氧化 铝 柱层析分 离 回收 溶剂 环 己烷－丙酮 洗脱 小 檗胺 （ 亲脂 酚 性 碱） 甲 素 乙素 （亲 脂非酚 性碱 ） TLC 检识
总液
最后一次
萃取过程
Dragendorff显 色反应示意图
2．亲脂性生物碱中酚性与非酚性碱的分离 上述CHCl3液置分液漏斗中，用2%NaOH水溶液萃取1~2 次，每次50ml，此时碱水层色已很浅，示酚性脂溶性碱已
基本被萃取到 NaOH 层，合并NaOH萃取液，将NaOH 层与 CHCl3液分置2个分液漏斗中，可同时操作： NaOH层加固体NH4Cl至pH 9左右，然后CHCl3萃取2次 （80ml，50ml），第2次CHCl3层生物碱反应应极弱示 萃取基本完全，弃去水相，合并CHCl3层并用蒸馏水洗 至中性，加无水Na2SO4脱水24小时以上，过滤，回收 CHCl3，得粗酚性生物碱。 CHCl3层用蒸馏水洗至中性，加无水Na2SO4脱水24小时 以上，过滤，回收CHCl3，残留物抽松，得非酚性生物 碱的抽松物，称重，取出50mg作第4项。
第三步：倒入氧化铝。将上述拌好的氧化铝缓缓 沿着玻璃棒倒入色谱柱内，打开色谱柱活塞，缓 慢抽出玻璃棒，让其自然沉降。 第四步：敲色谱柱。用橡皮管轻敲色谱柱，让氧 化铝自然沉降，等到吸附剂不再下沉，柱顶留5ml 左右洗脱剂时，倒入拌好的样品，敲平（此时洗 脱剂不能被样品吸干，应有余量），即可开始洗 脱。
（Cyclanoline），本实验经提取、分离可得到这些化合物。
H3CO OCH3 OR1 O O OR2
HO
N CH3
H3C
N
H3CO
N
CH3 OH OCH3
R1=R2=CH3 粉防己碱（甲素） R1=H，R2=CH3 防己诺林碱（乙素） R1=CH3，R2=H 小檗胺
轮环藤酚碱
一、实验目的
掌握各种生物碱的分离纯化方法，包括亲脂性 碱与亲水性碱分离，亲脂性碱中酚性碱与非酚 性碱的分离，亲水性生物碱与非生物碱水溶性 成分的分离，亲脂性碱单体的分离 学习生物碱的各种鉴识方法，包括：色谱方法 （TLC及PC），沉淀反应， 学习各种实验技能 提取：回流提取 分离：萃取、柱色谱 精制：沉淀法、柱色谱法 鉴识：色谱法、化学法
四、实验方法
（一）总生物碱的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ取
称取粉防已粗粉200g，用95%EtOH回流提取二
次（500ml 1小时，400ml 45分钟），两次提取液
合并，减压回收乙醇至无醇味，得糖浆状物。
真空管 冷凝管
旋转马达 样品瓶
溶剂 收集瓶
旋转蒸发仪
（二）分离 1．亲脂性生物碱与亲水性生物碱的分离 糖浆状总提取物中加入 1% 的盐酸 200ml ，充分搅拌使生 物碱溶解，放置。 过 滤 ， 滤 渣 用 水 洗涤 2~3 次后 弃去 ，滤液合并后移至 500ml分液漏斗中加150ml CHCl3后，滴加浓氨水调pH 910，振摇萃取（再向水层滴加浓氨水至无沉淀析出）。 静置分层后，放出 CHCl3 层，碱水层以新 CHCl3 萃取 4 次， 每次 80ml ，最后一次萃取的 CHCl3 层中应基本没有生物 碱时认为CHCl3萃取基本完全（取CHCl3液滴在滤纸上， Dragendorff试剂显色不明显为止）。 合并 CHCl3 液即为亲脂性生物碱的提取液。碱水层则为 亲水性生物碱， CHCl3 提取液和碱水层分别在下述 2 、 3 项中处理。
3．季铵型生物碱的分离

碱水液用正丁醇萃取（50ml× 2），回收正丁
醇，得轮环藤酚碱粗品。
4．非酚性碱中汉防已甲素和乙素的分离纯化 根据二者的极性不同采用吸附柱色谱 柱色谱分离条件： 吸附剂：中性Al2O3 200-300目，Ⅱ-Ⅲ级，装柱 15cm。 装柱方法：湿法装柱 洗脱剂：环已烷-丙酮 （2:1）
天然药物化学实验指导
药化教研室
实验一 粉防已生物碱的提制和鉴识
粉防已是防已科千金藤属植物粉防已Stephania tetrandra S.Moore的干燥根。又名汉防已、倒地拱、 百木香，是一种解热镇痛药。性苦、寒。具有祛风 止痛、利水消肿功效，中医用于风湿痹通、利尿消 肿以及毒蛇咬伤等。
粉防已的有效成分是生物碱，其总碱含量为 1.2% 左右， 主 要 是 粉 防 已 碱 （ Tetrandrine ） 、 防 已 诺 林 碱 （ Fangchinoline ） 、 小 檗 胺 （ Berbamine ） 及 轮 环 藤 酚 碱

二、实验原理
根据生物碱中的季铵碱可溶于水，分离亲脂性碱和亲
水性碱 利用亲脂性碱中的酚性碱可与碱成盐溶于碱水，分离 酚性碱与非酚性碱 利用汉防已甲、乙素结构上的不同，极性不同，用吸 附柱色谱分离二者 利用季铵碱可溶于极性有机溶剂的性质与其它水溶性 成分分离。 本实验涉及的知识点有：溶剂提取法、两相溶剂萃取 法、色谱法等。

洗脱，收集流分 将样品加于柱顶，倒入洗脱剂，洗脱开始，流
速控制在5ml/分，收集各流份（10ml～15ml/
份），共收集10个流份，各流份回收溶剂，用
硅胶GTLC检查，合并相同流份，回收溶剂至
步骤

样品制备：拌样上样，取非酚性碱的抽松物
50mg，用少量三氯甲烷溶解后，于吸附剂中分
散均匀，边加热挥去丙酮。

湿法装柱
第一步：塞棉花。取一小块棉花铺平，做成和色 谱柱直径一样的圆形，放入色谱柱底部，用一根 较长的玻璃棒压着棉花，关闭色谱柱活塞，加少 量洗脱液浸润棉花，排除棉花中的空气。 第二步：拌氧化铝。称取吸附剂氧化铝25g左右 于烧杯中，加入适量洗脱液，用玻璃棒搅拌均匀 ，使吸附剂完全润湿，排除气泡。