中国药科大学药物代谢动力学实验考查知识点整理

中国药科大学药物代谢动力学实验考查知识点整理药物代谢动力学实验考查知识点整理第一部分：HPLC使用注意事项1、HPLC组成：泵、进样器、色谱柱、检测器、数据系统/积分仪2、反相色谱：分离机理：“反相色谱”固定相极性小于流动相极性常用流动相：乙腈、甲醇，水 3、色谱柱的分类：按填料：球形、无定形按含碳量：C18、C8按应用：分析柱、制备柱、预处理柱按粒径：150mm*,5μm等按填料类型：正相柱、反相柱、手性柱 4、键合相色谱柱的优缺点：优点：稳定不易流失；应用广泛，可使用多种溶剂；消除硅羟基的不良影响；缺点：pH得在3~8范围内5、C18柱的活化：90% 10% 90%的甲醇溶液1ml/min依次冲洗30min6、流动相：使用之前需超声脱气目的：色谱泵输液准确提高检测性能保护色谱柱流动相脱气的方法：加热，抽真空，超声，通惰性气体流动相组成：流动相配置：缓冲溶液现用现配，不要储存时间过长，避免pH值发生变化和成分分解，影响色谱分离的效果；有机溶液和缓冲液使用前均需经μm微孔滤膜过滤；流动相使用前脱气。

7、常用定量方法：外标法内标法内标物的要求：化学结构与待测品相似；样品中不存在；不与样品组分发生化学反应；保留值与待测值接近；浓度相当；与其他色谱峰分离好8、样品的预处理：目的：除杂质；浓缩微量成分；改善分离；保护色谱柱；提高检测灵敏度方法：高速离心，过滤，选择性沉淀，衍生反应；液固萃取、液液萃取沉淀蛋白的溶剂：有机溶剂：乙腈、甲醇强酸：三氯乙酸、过氯酸盐：50%硫酸铵、10%TCA 分析测定用试剂为色谱纯及以上，水为超纯水第二部分：实验设计1、考虑问题：动物种属、给药剂量、取血时间、采样量、血药浓度大概范围2、分析方法建立：色谱柱、流动相组成、柱温箱温度、样品处理方法、风量下限与标曲范围第三部分：实验相关条件与数据处理实验一：1、采血点设计一般原则为获得给药后的一个完整的血药浓度-时间曲线，采样时间点的设计应兼顾药物的吸收相、平衡相和消除相。

一般在吸收相至少需要2~3个采样点，对于吸收快的血管外给药的药物，应尽量避免第一个点是峰浓度；在Cmax附近至少需要3个采样点；消除相需要4~6个采样点。

整个采样时间至少应持续到3~5个半衰期，或持续到血药浓度为Cmax的1/10~1/20。

为保证最佳采样点，建议在正式试验前，选择2~3只动物进行预试验，然后根据预试验的结果，审核并修正原设计的采样点。

2、动物给药方式：股静脉注射3、麻醉：腹腔注射20%乌拉坦4、采血方式：眼眶静脉丛采血5、蛋白沉淀方式：10%高氯酸，涡旋，15000rpm 10min,取100ul上清二次离心6、非那西丁色谱条件流动相：50mM磷酸盐缓冲液中，并稀释到1L）：乙腈色谱柱：岛津 Shimadzu VP-ODS; 150×; 5μm 检测波长：254nm 柱温：40℃进样体积：20μL6、参数计算曲线线性判断为一房室模型，参数计算如下：参数 C0 T1/2 k Vd CL MRT AUC 公式 y = 令x=0得 y = 令y=得 T1/2=/k得 Vd=X(给药量)/C0 X=*2mg/ml= CL=k*Vd MRT=1/k AUC=X/CL 值μl/ml 480μ参数k AUC 非房室值μ-k/=- AUC0~100min= AUC100~∞=C100min/k= AUC0~100min+ AUC100~∞=+ AUMC0~100min=9030AUMC100~∞=t100minC100min/k+C100min/k2= AUMC=AUMC0~100min+ AUMC100~∞MRT=AUMC/AUC MRT=1/k C0=Div/VSS=/ Div/AUC=/μ AUMC MRT C0 T1/2 CL Vss 12171μg*min2/ml /40min μl/ml 无 VSS=/AUC2=*/实验二：1、肝微粒体的制备方法版本一：获取肝脏：大鼠禁食不禁水24小时后取肝脏，组织匀浆：称重剪成碎块后加入匀浆液制成匀浆。

差速离心：匀浆液4℃9000g离心15min，弃去沉淀和脂肪层取上清液于100000g离心管中离心20min,弃上清，沉淀用pbs轻轻冲洗。

重悬沉淀：用10ml匀浆液重悬，冻存管分装后置-80℃冰箱内保存蛋白定量：BCA法版本二：大鼠拉颈椎处死, 开腹取肝脏, 用滤纸吸干水分, 称质量。

立即放入冰冷的蔗糖溶液中清洗, 用剪刀剪成碎块, 反复清洗至无血色。

加 4 倍肝质量的蔗糖溶液, 在冰浴中用组织匀浆机制成匀浆,再超声分散 30 s, 4 C下 10 000 r/min -离心20 min。

上清液用四层纱布过滤除漂浮脂物,滤液在 4 C 下 50 000 r/min 离心 60 min, 弃上清液, 沉淀用焦磷酸钾缓冲液悬浮均匀, 在 4 C 下50 000 r/min 离心 60 min, 沉淀即为肝微粒体。

用Tris HCl 缓冲液悬浮均匀, 体积为原上清液的1/ 4 即可, 分装于塑料管中, 于- 80 C保存, 采用Lowry 法测定肝微粒体蛋白浓度版本三：2、NADPH体系:葡萄糖- 6- 磷酸(G- 6- P)葡萄糖－6 －磷酸脱氢酶(G- 6- P- OH) β-NADP+ 氯化镁 5Mm3、温孵实验步骤：肝微粒体，非那西丁溶液,37℃水浴预温孵5min,加入NADPH体系溶液，37℃水浴温孵，30min, 加入冰甲醇，终止温孵,涡旋1min，高速离心10min，转移上清液200μl 4、数据处理双倒数法1/V的截距为1/Vmax, 1/[S]的截距为-1/ Km 药物代谢动力学实验考查知识点整理第一部分：HPLC使用注意事项1、HPLC组成：泵、进样器、色谱柱、检测器、数据系统/积分仪2、反相色谱：分离机理：“反相色谱”固定相极性小于流动相极性常用流动相：乙腈、甲醇，水 3、色谱柱的分类：按填料：球形、无定形按含碳量：C18、C8按应用：分析柱、制备柱、预处理柱按粒径：150mm*,5μm等按填料类型：正相柱、反相柱、手性柱 4、键合相色谱柱的优缺点：优点：稳定不易流失；应用广泛，可使用多种溶剂；消除硅羟基的不良影响；缺点：pH得在3~8范围内5、C18柱的活化：90% 10% 90%的甲醇溶液1ml/min依次冲洗30min 6、流动相：使用之前需超声脱气目的：色谱泵输液准确提高检测性能保护色谱柱流动相脱气的方法：加热，抽真空，超声，通惰性气体流动相组成：流动相配置：缓冲溶液现用现配，不要储存时间过长，避免pH值发生变化和成分分解，影响色谱分离的效果；有机溶液和缓冲液使用前均需经μm微孔滤膜过滤；流动相使用前脱气。

7、常用定量方法：外标法内标法内标物的要求：化学结构与待测品相似；样品中不存在；不与样品组分发生化学反应；保留值与待测值接近；浓度相当；与其他色谱峰分离好8、样品的预处理：目的：除杂质；浓缩微量成分；改善分离；保护色谱柱；提高检测灵敏度方法：高速离心，过滤，选择性沉淀，衍生反应；液固萃取、液液萃取沉淀蛋白的溶剂：有机溶剂：乙腈、甲醇强酸：三氯乙酸、过氯酸盐：50%硫酸铵、10%TCA 分析测定用试剂为色谱纯及以上，水为超纯水第二部分：实验设计1、考虑问题：动物种属、给药剂量、取血时间、采样量、血药浓度大概范围2、分析方法建立：色谱柱、流动相组成、柱温箱温度、样品处理方法、风量下限与标曲范围第三部分：实验相关条件与数据处理实验一：1、采血点设计一般原则为获得给药后的一个完整的血药浓度-时间曲线，采样时间点的设计应兼顾药物的吸收相、平衡相和消除相。

一般在吸收相至少需要2~3个采样点，对于吸收快的血管外给药的药物，应尽量避免第一个点是峰浓度；在Cmax附近至少需要3个采样点；消除相需要4~6个采样点。

整个采样时间至少应持续到3~5个半衰期，或持续到血药浓度为Cmax的1/10~1/20。

为保证最佳采样点，建议在正式试验前，选择2~3只动物进行预试验，然后根据预试验的结果，审核并修正原设计的采样点。

2、动物给药方式：股静脉注射3、麻醉：腹腔注射20%乌拉坦4、采血方式：眼眶静脉丛采血5、蛋白沉淀方式：10%高氯酸，涡旋，15000rpm 10min,取100ul上清二次离心6、非那西丁色谱条件流动相：50mM磷酸盐缓冲液中，并稀释到1L）：乙腈色谱柱：岛津 Shimadzu VP-ODS; 150×; 5μm 检测波长：254nm 柱温：40℃进样体积：20μL6、参数计算曲线线性判断为一房室模型，参数计算如下：参数 C0 T1/2 k Vd CL MRT AUC 公式 y = 令x=0得 y = 令y=得 T1/2=/k得 Vd=X(给药量)/C0 X=*2mg/ml= CL=k*Vd MRT=1/k AUC=X/CL 值μl/ml 480μ参数k AUC 非房室值μ-k/=- AUC0~100min= AUC100~∞=C100min/k= AUC0~100min+ AUC100~∞=+ AUMC0~100min=9030AUMC100~∞=t100minC100min/k+C100min/k2= AUMC=AUMC0~100min+ AUMC100~∞MRT=AUMC/AUC MRT=1/k C0=Div/VSS=/ Div/AUC=/μ AUMC MRT C0 T1/2 CL Vss 12171μg*min2/ml/40min μl/ml 无 VSS=/AUC2=*/实验二：1、肝微粒体的制备方法版本一：获取肝脏：大鼠禁食不禁水24小时后取肝脏，组织匀浆：称重剪成碎块后加入匀浆液制成匀浆。

差速离心：匀浆液4℃9000g离心15min，弃去沉淀和脂肪层取上清液于100000g离心管中离心20min,弃上清，沉淀用pbs 轻轻冲洗。

重悬沉淀：用10ml匀浆液重悬，冻存管分装后置-80℃冰箱内保存蛋白定量：BCA法版本二：大鼠拉颈椎处死, 开腹取肝脏, 用滤纸吸干水分, 称质量。

立即。