酵母菌的死活细胞鉴定

酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数

一、实验目的

1.掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方法。

2.了解血球计数板的构造，掌握利用它进行酵母菌计数的方法。

二、实验步骤

1.酵母菌血球计数板镜检计数

1)取一块盖玻片，加盖在血球计数板中央计数室上方。

2)用滴管吸取菌悬液滴于盖玻片的边缘，通过毛细作用渗入计数室，注意不能有

气泡产生，然后放置于载物台，静止5min，使细胞全部沉降到其表面。

3)高倍镜镜检，数对角线上5个中方格中细胞的总数，再计算出菌悬液浓度。为

了减少误差，应注意对样品适当稀释，以每个小方格中平均4~6个细胞为佳；

另外，也可对同一样品重复计数，取其平均值。

附:计数板的结构及测定原理

利用血球技术板镜检技术是一种常用的计数方法。血球计数板是一块比普通载玻片厚的特质玻片，其上有四条凹槽，构成三个平台，中间比较宽，其中央又被一短横槽隔成两半，每半边各有一个计数区，其上有9个大方格，只有中央的一个大方格为计数室供计数用。这一大方格的长宽各为1mm。加盖盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的距离为0.1mm，因此计数室的容积为0.1mm³。

目前血球计数板常用的是25格×16格型，其计数室被分成25个中格，其中每个中格又分为16个小格，故计数室共有400 小格。

计数时，首先把适当浓度的菌悬液注入计数室，然后在显微镜下计数，一般数对角线上5个中方格（共80个小方格）中细胞总数再根据下式求得菌悬液的浓度

细胞个数=5000A×B

式中A---5个中方格中细胞总数

B---菌悬液的稀释倍数

三、实验结果

个数:30 37 11 25 21 24 17 27 28 25