酵母菌的死活细胞鉴定
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定_百替生物
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。
芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。
本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。
（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。
2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
亚甲基蓝染色鉴别死活酵母的原理
亚甲基蓝染色鉴别死活酵母的原理
亚甲基蓝染色鉴别死活酵母的原理是利用亚甲基蓝是一种胞内氧化还原指示剂，可以通过与活细胞内还原态NADH反应，形成蓝色的亚甲基蓝离子。
死细胞或凋亡细胞中的NADH含量较低，无法与亚甲基蓝形成蓝色产物。
具体原理如下：
1. 活细胞内的还原态NADH与亚甲基蓝发生反应，生成蓝色的亚甲基蓝离子。
这是因为还原态NADH可以将亚甲基蓝的氧化态还原为还原态，形成蓝色产物。
2. 死细胞或凋亡细胞中的NADH含量较低，无法提供足够的还原电子与亚甲基蓝发生反应，因此无法产生蓝色产物。
通过观察染色后细胞的颜色变化，可以判断细胞的活力状态。
活细胞呈现蓝色，因为其内部含有还原态NADH；而死细胞或凋亡细胞则无色或呈现浅蓝色，因为其NADH含量较低。
这样可以通过亚甲基蓝染色来快速鉴别细胞的生存状态。
03-03-012实训报告-酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数
子情境：活性干酵母发酵过程检验-酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数
实训报告书
专业:生物技术及应用
班级:生物
姓名：
学号:
谷氨酸发酵过程控制控制
实训报告
姓名：
同组人员：
实验日期：
实地点：
指导教师：
成绩：
1.酵母死活细胞鉴别？
（1）菌悬液制备
取原始菌液10ml吸入90ml无菌水中，稀释度为10-1
（2）美兰染色
载玻片中央加一小滴0.1%美蓝染色液，然后再加一小滴预先稀释至适宜浓度的酵母发酵液，混匀后从侧面盖上盖玻片，并吸去多余的水分和染色液
（3）死活细胞鉴别
制好的染色片置于显微镜的载物台上，放置约3min后进行镜检，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，以下为电子照片
2.镜检计数
（1）加样品
将血细胞计数板盖上盖玻片，再用滴管将刚混匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室。
（2）计数
取计数室内四角及中心五个中方格细胞进行计数，计数结果为168个
（3）计算
1ml菌液中的总菌数=50000*168*10=8.4*107
教师评语：
报告条理清晰，内容鲜明，数据真实可靠。在实训操作过程能够严格按照步骤进行，存在疑问以及问题及时跟老师沟通，跟同组同学进行讨论。实训报告规范写作。但未对酵母成活率进行计算，数据分析的内容还应更加完善。
实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的：1.了解放线菌和酵母菌的形态特征。
2.学习区分细胞的死活状态。
二、实验原理：1.放线菌的形态特征：放线菌属于细菌的一种，具有很大的细胞大小差异，通常为革兰氏阳性菌。
放线菌的形态特征包括菌落形态、细胞形态、颜色、菌丝特征等。
放线菌的菌落形态多呈现出有规则的褶皱或丝状结构。
2.酵母菌的形态特征：酵母菌属于真菌的一种，单细胞有丝分裂生殖的真菌。
酵母菌的形态特征包括细胞形态、菌落形态、颜色等。
酵母菌的细胞呈球形或卵圆形，常以单细胞或成链形式存在。
3.死活细胞鉴别：通过酵母菌培养基中的亚甲基蓝染色来判断细胞的存活状态，活细胞吸收染料颜色比较浅，死细胞吸收染料颜色比较深。
三、实验材料与方法：1.材料：-放线菌菌种：已提前分离培养好的放线菌-放线菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-培养皿、显微镜、镰刀、牛津杯、显微镜载玻片-无菌移液器、无菌吸管、火焰灭菌器-酵母菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-亚甲基蓝染液：浓度为1%2.方法：a.取一小块放线菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的放线菌菌落。
b.用无菌吸管将放线菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。
c.让菌液干燥后，用显微镜在高倍镜下观察放线菌的细胞形态和菌落特征。
d.取一小块酵母菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的酵母菌菌落。
e.用无菌吸管将酵母菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。
f.将带有酵母菌菌液的显微镜载玻片倾斜，滴入一滴亚甲基蓝染液，静置5分钟。
g.用显微镜在高倍镜下观察染色后的酵母菌细胞，根据染色程度判断细胞的存活状态。
四、实验结果与分析：通过观察放线菌的细胞形态和菌落特征，可以发现放线菌的形态特征是不规则的菌落结构，内部有菌丝状结构。
放线菌的细胞形态多样，有圆形或椭圆形细胞。
真菌营养体观察与酵母菌死活细胞鉴别(实验死)
实验四真菌营养体观察与酵母菌死活细胞鉴别一、实验目的1.掌握对真菌个体形态结构的观察方法；初步认识真菌的形态特征，巩固课堂知识，增强感性认识。
2.掌握对酵母菌的形态结构及出芽生殖方式的观察方法，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；认识酵母菌的基本形态特征。
二、实验原理1.真菌个体形态结构的观察霉菌是由复杂的菌丝体组成。
它分为基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌的繁殖菌丝及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3～10微米)，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
2.酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别⑴形态观察：酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。
因此用高倍镜观察即可。
酵母细胞一般呈卵圆形。
其繁殖方式比较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖（仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖），有些酵母可形成假菌丝；有性繁殖通过接合形成子囊及子囊孢子。
⑵死活细胞鉴定：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。
因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。
三、实验步骤1.霉菌个体形态结构的观察⑴霉菌直接制片观察法：在载玻片上加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的霉菌菌丝；再放在载玻片上的染液中，用解剖针小心地将菌丝分散开。
盖上盖玻片，置低倍镜下观察，必要时换高倍镜观察。
挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。
2.酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别：在载玻片中央滴加1滴0.1%美蓝染色液→无菌挑取一环酵母菌与美蓝染色液均匀→盖上盖玻片（制成水封片）→放置3分钟→高倍镜（×40）下观察酵母形态和出芽情况→30分钟后再观察四、实验结果1.绘图说明所观察的根霉菌、曲属菌、青霉属的形态特征图。
酵母菌形态观察及死活细胞鉴定2
一、目的要求:
1、显微镜下观察细菌个体的形态。
2、学习环境中微生物的检查方法，并加 深对微生物分布广泛性的认识。
二、基本原理:
形态观察主要包括群体的形态和个体的形态观察。
细菌的基本形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近 年还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养 基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。
死活细胞鉴定原理
美蓝是一种无毒性的染料。 美蓝有氧化型和还原型两种状态。 氧化型为蓝色，还原型无色。 酵母活细胞由于体内的新陈代谢作用，细胞内
具有较强的还原能力，能使美蓝由氧化型变为 还原型。 酵母死细胞或者代谢作用微弱的细胞，还原能 力弱，不能使美蓝由氧化型转变为还原型。
实验步骤
在载玻片中央加一滴0.1％美蓝染色液，染色 液过多会溢出，过少会在盖玻片下出现大量气 泡。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色。 细菌在中性、碱性或弱酸性溶液环境中通 常带负电荷，碱性染料（解离时分子的染 色部分带正电荷）如美兰、结晶紫等易与 细菌结合使其着色。
操作方法
1、涂片—枯草芽孢杆菌 2、干燥：室温自然干燥 3、固定：有菌膜的一面向上，通过火焰2－3次，
细 胞质凝固
4、染色：滴加染液(美蓝或者番红或者结晶 紫）染色时间为两分钟
细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质 地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的 细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。
细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个 体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、 鉴别染色、特殊染色。
简单染色法原理:
吸取少量酵母菌液，稀释后滴半滴在载玻片的 美篮染色液中，混合均匀；
微生物实验思考题参考答案及知识要点
微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。
因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
美蓝浓度高了，代谢不太活跃的活细胞也会被染色，从而使观察到的死细胞较多，活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。
二. 细菌的简单染色和革兰氏染色1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。
如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。
2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。
固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。
在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
4. 涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b 增加其对染料的亲和力。
固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察1. 镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。
酵母菌形态观察及死活鉴别
酵母菌形态观察及死活鉴别
一、实验目的
1.认识并观察酵母菌的形态特征，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理
1、酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
2、本实验是通过美蓝染液浸片和碘液浸片来观察酵母的形态
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞
三、实验器材
酵母悬液、美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液、显微镜、载玻片、盖玻片
四、实训步骤
1、水-碘浸片观察
在载玻片中央滴一滴碘液，取一滴酵母悬液放在碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
2、美蓝浸片观察
（1）在载玻片中央加一滴美蓝染色液，滴加一滴酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
（2）将制片放置约3min 后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
五、实验报告
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征
六、注意事项
1、染色液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量的气泡，影响观察。
2、盖片时斜着放不易产生气泡。
1。
实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数法
通过血球计数板对酵母菌进行计数，我们得到了每毫升菌 液中酵母菌的数量。结果显示，菌液中酵母菌的数量在合 理范围内，计数结果准确可靠。
对实验过程的反思与总结
实验操作方面
在实验过程中，我们需要注意无菌操作 ，避免杂菌污染。同时，需要准确配制 试剂，保证实验结果的准确性。
VS
实验设计方面
在实验设计时，需要考虑实验的可行性和 可重复性。本实验中，血球计数法的操作 较为简便，且结果准确可靠，是一种有效 的计数方法。
死活细胞鉴定结果分析
死活细胞鉴定结果
通过染色法和荧光染色法，我们成功地对酵母菌的死活细胞进行了鉴定。活细胞能够吸 收染料并发出荧光，而死细胞则不能。在显微镜下观察，活细胞呈现明显的荧光，而死
细胞则无荧光。
分析
死活细胞鉴定结果表明，大部分酵母菌为活细胞，仅有少量酵母菌为死细胞。这说明在 实验过程中，酵母菌的生长条件较为适宜，且培养基的营养成分能够满足酵母菌生长的
实验七酵母菌的形 态观察、死活细胞 鉴定及血球计数法
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论
01
CATALOGUE
实验目的
掌握酵母菌的形态观察方法
了解酵母菌的形态特征
通过显微镜观察，了解酵母菌的单细 胞形态，包括其形状、大小、细胞壁 、细胞膜等结构特点。
学习染色法
THANKS
感谢观看
酵母菌是单细胞真菌，通常呈卵圆形或圆柱形，具有细胞壁、细胞膜、细胞质和 细胞核等基本结构。通过显微镜观察酵母菌的形态，可以了解其生长状态和繁殖 方式。
酵母菌在生长过程中，会经历由单倍体到二倍体的过程，通过观察其形态变化， 可以了解其生长周期和繁殖特点。
酵母菌死活细胞的鉴定
细
菌菌液放入染液里，混合均匀；
胞
鉴
（2）用镊子取一块盖玻片，先将
定
一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻
片放下。
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• 酵母菌死活细胞鉴定的基本程序
酵
母
2.镜检
菌 死 活
（1）将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态 根据颜色区别死活细胞；
细
（2）染色30min后再次观察，注意死活细胞数量的变化。
细
细胞较少；染色时间长，活细胞数量也会减少。
胞 鉴 定
（2）浓度低老龄细胞与活细胞不易区分，代谢微弱的细胞也能还原 美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多；染色时 间短，活细胞还没从蓝变无色，观察到的活细胞数量会比预计的少。
— 1—
• 酵母菌死活细胞鉴定关键控制点
酵
母
菌
2.酵母菌死活细胞鉴定注意事项
死
（1）加染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会
活 细 胞
溢出或出现大量气泡而影响观察； （2）盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。
鉴
定
— 1—
食品微生物检验技术
胞
鉴
定
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酵母菌死活细胞鉴定的关键控制点
1.酵母菌死活细胞鉴定的成败关键 2.酵母菌死活细胞鉴定的注意事项
— 2—
• 酵母菌死活细胞鉴定关键控制点
酵
母 菌 死
1.酵母菌死活细胞鉴定成败关键 （1）美蓝浓度高和染色时间过长都会增加酵母菌的死亡。美兰有氧
活
化性，浓度太高会使活菌很快致死，从而使视察到的死细胞较多，活
食品微生物检验技术
目录页
酵母菌死活细胞鉴定的原理、意义 酵母菌死活细胞鉴定的基本程序 酵母菌死活细胞鉴定关键控制点
实验五 酵母菌的形态观察、死活细胞的鉴别及显微镜直接计数法
五、实验报告
1、绘图说明你所观察的酵母菌的形态特征 填表： 2、填表：
各中格中菌数 1 2 3 4 5 二次平均值 菌数/mlAຫໍສະໝຸດ B 5二、实验原理
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见 细菌大几倍甚至十几倍。大多酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 细菌大几倍甚至十几倍。大多酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 有的分裂繁殖，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 有的分裂繁殖，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验是通 过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。 过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。
菌种： 1、菌种：酿酒酵母 仪器或其他用品：血细胞计数板，显微镜， 2、仪器或其他用品：血细胞计数板，显微镜，盖玻 片，载玻片等 0.1%美蓝染色液等 3、0.1%美蓝染色液等
四、实验内容： 实验内容：
1、美蓝浸片观察 在载玻片中央加一滴0.1%的美蓝染色液， 在载玻片中央加一滴0.1%的美蓝染色液，然后用 0.1%的美蓝染色液 接种环取少量酵母菌于染液中，混合均匀； 接种环取少量酵母菌于染液中，混合均匀； 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触， 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然 后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。 后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。将玻片放置 约三分钟后，用显微镜观察酵母的形态和出芽情况， 约三分钟后，用显微镜观察酵母的形态和出芽情况， 并判断细胞的死活。 并判断细胞的死活。
利用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生 物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片， 物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半， 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边 的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为几个大方格， 的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为几个大方格， 中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图1 中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图1，计数室的 刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而 刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格， 25个中方格 每个中方格又分成16个小方格，另一种是一个大方格分成16 16个小方格 16个 每个中方格又分成16个小方格，另一种是一个大方格分成16个 中方格，而每个中方格又分成25个小方格， 25个小方格 中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规 格的计数板，每一个大方格中的小方格400 400个 格的计数板，每一个大方格中的小方格400个，每一个大方格 边长为1毫米，则每一个大方格的面积为1mm 盖上盖玻片后， 边长为1毫米，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后， 盖玻片与载玻片之间的高度为0.1毫米， 0.1毫米 盖玻片与载玻片之间的高度为0.1毫米，所以计数室的容积为 万分之一毫升）。 0.1mm3（万分之一毫升）。
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。
芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。
本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、试剂与器材1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验内容1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2.水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。
2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。
六、思考题1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。
2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
用美蓝溶液鉴定酵母菌的死活
酵母菌细胞较大,不必染色就能用显微镜观察其形态. 用美蓝染色液可以对酵母菌细胞进行死活染色鉴别.美蓝是一种弱氧化剂,氧化态呈蓝色,还原态呈无色.活的酵母因为新陈代谢不断进行,具有一定的还原能力,能将进入细胞的美蓝还原,而细胞不染色.因此,用美蓝对酵母细胞染色一定时间后,无色的为活细胞,蓝色的为死细胞. 需要注意的是:一个活细胞的还原能力是有限的必须严格控制染色的时间和染料的浓度. 方法:取0.1%美蓝液一滴,滴在玻片中央,加一滴酵母菌悬液,混匀.染色3~5分钟后加盖片制成水浸标本片,镜检.酵母菌细胞较大,不必染色就能用显微镜观察其形态. 用美蓝染色液可以对酵母菌细胞进行死活染色鉴别.美蓝是一种弱氧化剂,氧化态呈蓝色,还原态呈无色.活的酵母因为新陈代谢不断进行,具有一定的还原能力,能将进入细胞的美蓝还原,而细胞不染色.因此,用美蓝对酵母细胞染色一定时间后,无色的为活细胞,蓝色的为死细胞. 需要注意的是:一个活细胞的还原能力是有限的必须严格控制染色的时间和染料的浓度. 方法:取0.1%美蓝液一滴,滴在玻片中央,加一滴酵母菌悬液,混匀.染色3~5分钟后加盖片制成水浸标本片,镜检.7.1 酵母菌的形态结构观察目的要求观察并掌握酵母菌的菌落特征、个体形态、生长及繁殖方式。
基本原理酵母菌细胞一般成圆形、卵圆形、圆柱形或柠檬形。
每种酵母细胞有其一定的形态大小。
大多数酵母菌在平板培养基上形成的菌落较大而厚，湿润、较光滑，颜色较单调（多为乳白色，少有红色，偶有黑色）。
酵母菌细胞核与细胞质有明显的分化，个体直径比细菌大几倍到十几倍。
繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖。
实验材料酿酒酵母（红酵母），无菌水，0.1%美蓝液，中性红染液，苏丹黑,二甲苯，0.5%蕃红，无菌水，显微镜，载玻片及盖玻片。
实验内容(一)菌落特征的观察取少量酿酒酵母、红酵母划线接种在平板培养基上，28—300C培养3d。
观察菌落表面湿润或干燥，有无光泽、隆起形状，边缘的整齐度、大小、颜色等。
实验八酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
实验八酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；2. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；3.掌握酵母子囊孢子的观察方法。
二、实验原理1. 酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。
但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。
大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。
本实验通过美蓝染液水浸片法来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。
2. 美蓝染液美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝溶液对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、实验材料1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)培养1天的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2. 溶液或试剂0.1%吕氏碱性美蓝溶液、5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、95%乙醇，等。
3．器材显微镜，擦镜纸，吸水纸，载玻片、盖玻片、酒精灯、接种环、镊子等等。
四、实验步骤1、酵母菌出出芽方式的观察及死活鉴定（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种蘸取取少量液体酵母放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。
（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
注：盖玻片不宜平放，以免产生气泡。
（3）将制片立即放在显微镜下镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
酵母菌死活细胞鉴别
四、操作步骤
1、滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央，无 滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央 吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央， 菌操作用接种环由酵母菌培养斜面上挑取少许菌体置于染液 混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞） ；（不要过于剧烈 中，混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞） 2、用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢 用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触， 将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡） ；（不要产生气泡 将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡） 3、将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形 将制片放置3min后 态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞； 态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞； 4、染色30min后再次观察，注意死活细胞比例是否发生变 染色30min后再次观察 后再次观察， 化； 5、用0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验 吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 建议做，用等量生理盐水稀释染液即可） （建议做，用等量生理盐水稀释染液即可）
酵母出芽
三、器材
1、菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿； 的培养斜面或平皿； 菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿 2、溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液； 溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液； 3、仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片， 仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片， 显微镜，接种环，滴管等。 显微镜，接种环，滴管等。
酵母菌细胞的形态观察、 酵母菌细胞的形态观察、 死活细胞的鉴别
一、目的和要求
1、观察酵母菌细胞的形态结构； 观察酵母菌细胞的形态结构； 2、掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色原理和 方法； 方法；
酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定
实验六酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定一、目的要求1. 通过观察了解酵母细胞的形态结构及出芽繁殖。
2. 掌握鉴别酵母细胞死活的染色技术。
二、基本原理酵母菌细胞较大，不必染色即可用显微镜观察其形态。
用美蓝染色液可对酵母细胞进行死活染色鉴别。
美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。
活的酵母细胞，因新陈代谢的不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美蓝还原，而细胞呈无色；而死细胞已失去还原能力，则被染料染成蓝色。
需要注意的是，一个活酵母菌的还原能力是有限的，必须严格控制染料的浓度和染色时间。
三、材料及器材1. 菌种：酵母菌。
2. 溶液和试剂：0.05%和0.1%吕氏美蓝染色液。
3. 仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，试管，蒸馏水等。
四、方法与步骤1. 在干净载玻片上加一滴吕氏美蓝染色液，以无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在美蓝液中，混合均匀。
2. 取一块盖玻片，先将一边与染液接触，然后慢慢将盖玻片放下，避免产生气泡，将多余染液用吸水纸吸干。
3. 将载玻片置于载物台上，先用低倍镜，然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
4. 染色约0.5h后再进行观察，注意死细胞数量是否增加。
5. 用0.05%吕氏美蓝染色液重复上述操作。
五、实验作业及实验报告1. 绘图说明你所观察到的酵母形态特征。
2. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌?3. 酵母水浸片制作时应注意什么?4. 吕氏美蓝染色液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。
六、实验结束、检查试验仪器破损情况，清理实验室。
酵母菌的死活细胞鉴定
酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数一、实验目的1.掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方法。
2.了解血球计数板的构造，掌握利用它进行酵母菌计数的方法。
二、实验步骤1.酵母菌血球计数板镜检计数1)取一块盖玻片，加盖在血球计数板中央计数室上方。
2)用滴管吸取菌悬液滴于盖玻片的边缘，通过毛细作用渗入计数室，注意不能有气泡产生，然后放置于载物台，静止5min，使细胞全部沉降到其表面。
3)高倍镜镜检，数对角线上5个中方格中细胞的总数，再计算出菌悬液浓度。
为了减少误差，应注意对样品适当稀释，以每个小方格中平均4~6个细胞为佳；另外，也可对同一样品重复计数，取其平均值。
附:计数板的结构及测定原理利用血球技术板镜检技术是一种常用的计数方法。
血球计数板是一块比普通载玻片厚的特质玻片，其上有四条凹槽，构成三个平台，中间比较宽，其中央又被一短横槽隔成两半，每半边各有一个计数区，其上有9个大方格，只有中央的一个大方格为计数室供计数用。
这一大方格的长宽各为1mm。
加盖盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的距离为0.1mm，因此计数室的容积为0.1mm³。
目前血球计数板常用的是25格×16格型，其计数室被分成25个中格，其中每个中格又分为16个小格，故计数室共有400 小格。
计数时，首先把适当浓度的菌悬液注入计数室，然后在显微镜下计数，一般数对角线上5个中方格（共80个小方格）中细胞总数再根据下式求得菌悬液的浓度细胞个数=5000A×B式中A---5个中方格中细胞总数B---菌悬液的稀释倍数三、实验结果个数:30 37 11 25 21 24 17 27 28 25。
实验四 微生物大小的测定和酵母菌死活细胞鉴定
放台尺→调焦→低倍镜下，使目尺与台尺零点对齐， 并在某一刻度上完全重合（准焦）→低倍、高倍、油镜 下分别计算目尺每格所代表的长度。
2. 制作酵母的美蓝水浸片 在载片上加一滴美蓝染液，挑取酵母与之混匀。用
镊子取盖片，注意避免产生气泡
3. 菌体大小测定 校正完毕，移走台尺，换上制好的面包酵母的水浸
片，先低倍后高倍。面包酵母几乎圆形，测其直径占目 尺多少格，将格数乘上目尺每格代表的长度，即为面包 酵母的实际大小
4. 计算菌体大小 将目尺取出放入盒内保存
五 实验结果1 目尺校正结果Fra bibliotek接物镜
放大倍数
低倍镜 高倍镜
目尺格数
台尺格数 目尺每格代表 的长度（μm）
2 面包酵母的大小：￠ ＝ ？μm
六 注意事项：
1.使用镜台测微尺进行校正时，若一时无法直接找到测微 尺，可先对刻尺外的圆圈线进行准焦后再通过移动标本 推进器进行寻找。
2.细菌的个体微小，在进行细胞大小测定时一般应选用油 镜，以减小误差。
3.进行显微镜计数时应先在低倍镜下寻找大方格的位置， 找到计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察和计 数。
4.酵母菌计数加样品前，一定将菌液摇匀。
七、思考题：
1.更换不同放大倍数的目镜和物镜时，为什么必须用 台尺重新校正目尺？
2.目镜和目尺不变，改用不同放大倍数的物镜来测同 一细菌时，其测定结果是否相同？为什么？
• 美蓝作为无毒性染料，其氧化型呈蓝色，还原型呈无色。 活的酵母细胞具有新陈代谢活性，能使美蓝由氧化型（蓝） 变为还原型（无色），染约3 min，死的酵母或衰老的细 胞代谢能力弱，菌体呈蓝色或浅蓝色。据此区分死活酵母。
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酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数
一、实验目的
1.掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方法。
2.了解血球计数板的构造，掌握利用它进行酵母菌计数的方法。
二、实验步骤
1.酵母菌血球计数板镜检计数
1)取一块盖玻片，加盖在血球计数板中央计数室上方。
2)用滴管吸取菌悬液滴于盖玻片的边缘，通过毛细作用渗入计数室，注意不能有
气泡产生，然后放置于载物台，静止5min，使细胞全部沉降到其表面。
3)高倍镜镜检，数对角线上5个中方格中细胞的总数，再计算出菌悬液浓度。
为
了减少误差，应注意对样品适当稀释，以每个小方格中平均4~6个细胞为佳；
另外，也可对同一样品重复计数，取其平均值。
附:计数板的结构及测定原理
利用血球技术板镜检技术是一种常用的计数方法。
血球计数板是一块比普通载玻片厚的特质玻片，其上有四条凹槽，构成三个平台，中间比较宽，其中央又被一短横槽隔成两半，每半边各有一个计数区，其上有9个大方格，只有中央的一个大方格为计数室供计数用。
这一大方格的长宽各为1mm。
加盖盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的距离为0.1mm，因此计数室的容积为0.1mm³。
目前血球计数板常用的是25格×16格型，其计数室被分成25个中格，其中每个中格又分为16个小格，故计数室共有400 小格。
计数时，首先把适当浓度的菌悬液注入计数室，然后在显微镜下计数，一般数对角线上5个中方格（共80个小方格）中细胞总数再根据下式求得菌悬液的浓度
细胞个数=5000A×B
式中A---5个中方格中细胞总数
B---菌悬液的稀释倍数
三、实验结果
个数:30 37 11 25 21 24 17 27 28 25。