化妆品中颜料橙(CI 12075)等五种禁用着色剂的检测方法
高效液相色谱-串联质谱法同时检测化妆品中6种禁用着色剂
高效液相色谱-串联质谱法同时检测化妆品中6种禁用着色剂林维宣;孙兴权;赵雪蓉;徐伟;郭桂媛【摘要】A method of high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) has been established for the simultaneous determination of six forbidden colorants including Sudan IV, Acid Violet 49, Sudan Blue 2, Solvent Red 49, Basic Violet 1 and Pigment Orange 5 in cream and powdery matrix cosmetics. The samples were extracted with ethanol-acetonitrile (3:2, v/v) solution by ultrasonic technique for 20 min, then centrifuged for purification and enriched by nitrogen blowing sequentially. The analytes were isolated on a Luna C18 column (150 mm x2. 1 mm, 5μm) by gradient elution with methanol and 10 mmol/L ammonium acetate as the mobile phases, and detected by MS/MS in the multiple reaction monitoring (MRM) mode. The qualitative analysis was based on the retention time and the relative abundance ratio of the characteristic ions, and the quantitative analysis on calibration curve method. The results showed that the limits of quantification (LOQ, S/N = 10) of the six colorants ranged from 0. 1 to 10μg/kg and the average recoveries were from 86. 67% to 98. 22% with the relative standard deviations (RSDs) from 4. 01% to 7. 01%. The method is simple and rapid with high sensitivity and good reproducibility, and suitable for the determination of the six forbidden colorants in cosmetics.%建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时测定膏状和粉状化妆品中苏丹红Ⅳ、酸性紫49、苏丹蓝2、溶剂红49、碱性紫l和颜料橙5等6种禁用着色剂的检测方法.样品经乙醇-乙腈(3:2,v/v)超声振荡提取20min、离心净化及氮吹浓缩后,在LunaC18色谱柱(150mm×2.1mm,5μm)上进行反相液相色谱分离,以甲醇和10 mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱采用多反应监测(MRM)模式进行质谱测定.根据保留时间及质谱图上特征离子的相对丰度比进行定性,外标法定量.结果表明:6种着色剂的定量限(信噪比为10计)为0.1～10μg/kg,回收率为86.67％～98.22％,相对标准偏差(RSD)为4.01％～7.01％.该方法简便、快速、灵敏度高且重现性好,适合于化妆品中禁用着色剂的定性与定量.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2012(030)005【总页数】6页(P527-532)【关键词】高效液相色谱-串联质谱;禁用着色剂;化妆品【作者】林维宣;孙兴权;赵雪蓉;徐伟;郭桂媛【作者单位】辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连 116001;辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连 116001;辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连116001;辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连 116001;大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连 116034【正文语种】中文【中图分类】O658着色剂在化妆品中的作用主要是从美容色彩学和心理学的角度评价，除此之外，尚未发现对人体有任何其他的好处。
化妆品中禁限用成分检测方法
化妆品中禁限用成分检测方法化妆品中含有的某些化学物质可以对人体健康产生严重的危害，尤其是有些生产商在化妆品中添加了禁限用物质。
下面咱们看一看近年来在化妆品禁限用物质检测方面的研究进展。
1、激素检测在化妆品生产过程中，一些厂商未来追求快速的特定的功效，在化妆品添加了一些禁限用成分。
我国《化妆品卫生规范》(2007年版)明令禁止化妆品添加性激素类成分。
采用高效液相色谱-质谱法测定化妆品中的激素类成分，包括定性与定量。
适用于膏霜乳液类、液态水基类、液态油基类、凝胶类、面膜类等化妆品中激素类成分的定性与定量。
方法提要：样品以乙腈为溶剂提取，采用高效液相色谱仪分离，质谱检测器检测，根据保留时间和特征离子对的相对丰度比定性、定量离子对峰面积定量，以标准曲线法计算含量。
2、防腐剂检测化妆品中使用防腐剂的目的是为了保护产品，使之免受微生物污染，延长产品的货架寿命，确保产品的安全性，防止消费者因使用受微生物污染的产品而引起可能的感染。
防腐剂可以笼统地分为化学防腐剂、安全性无毒防腐剂和天然有机防腐剂。
化妆品的抑菌能力与防腐剂的种类、含量以及体系酸碱性有密切的关系，所以在如今化妆品种类多样化和原料不断变化和增加的局面下，多种防腐剂复配而成的复合型防腐剂成为了必然的选择，最大的优点是实现了广谱抗菌并且可以立体抗菌。
因此，化妆品中多种防腐剂的正确测定就显得非常重要，这也是为化妆品安全性提供了重要的保障。
目前，关于化妆品中的防腐剂检测以液相色谱和气相色谱串联质谱法，液相色谱法仍是主流的防腐剂检测方法。
液相色谱法中前处理的方法主要是采用有机溶剂超声提取后以有机膜过滤或离心，取上清液直接检测。
3、防晒剂检测近年来，有关防晒剂成分引发的过敏性、刺激性、光毒性反应等事件的报道屡见不鲜。
我国《化妆品卫生规范》(2007年版)规定，允许限量添加的防晒剂有28种，但只对其中15种防晒剂的检测方法做了规定。
4、抗菌类药物检测去痘化妆品中，部分厂商为追求产品短期功效，非法添加各种抗生素，如克林霉素、甲硝唑等均为我国《化妆品卫生规范》(2007年版)规定的禁用成分，长期使用会诱发菌群失调，引起接触性皮炎，甚至会导致严重的内脏损伤，危及生命。
化妆品32种禁限用染成分的检测方法和编制说明
化妆品32种禁限用染成分的检测方法和编制说明化妆品 32 种禁限用染料成分的检测方法和编制说明附件 2: 化妆品中 32种禁限用染料成分的检测方法 1 范围本方法规定了测定染发类化妆品中 32 种禁限用染料成分(见附录 A)的高效液相色谱法。
本方法适用于染发类化妆品中 32 种禁限用染料成分的含量测定。
本方法无法区分所涉及染料成分的游离态、硫酸盐和盐酸盐，化妆品中各种形态同时存在时，应换算成一种形态，以总量表示。
2 原理用无水乙醇水11 的混合溶液提取染发类化妆品中的 32 中禁限用染料成分，用高效液相色谱仪进行分析，以保留时间和紫外吸收光谱定性，峰面积定量。
本方法中 32 种禁限用染料成分的检出限、定量下限及取 0.5g 样品时的检出浓度及最低定量浓度见表 1。
表 1 32 种禁限用染料成分的检出限、检出浓度、定量下限、最低定量浓度 - 1 - - 2 - 3 试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。
3.1 无水乙醇。
3.2 甲醇，色谱纯。
3.3 乙腈，色谱纯。
3.4 亚硫酸氢钠。
3.5 磷酸溶液(19):吸取磷酸(ρ201.69g/mL)10mL，加水 90mL。
3.6 磷酸盐混合溶液:称取十二水合磷酸氢二钠 1.8g、磷酸二氢钾 2.8g 和庚烷磺酸钠(C7H15SO3Na)1.0g，用水稀释至 1L，混匀，配制成含庚烷磺酸钠(1g/L)的磷酸盐缓冲液，加入磷酸溶液(3.5)，调节 pH 至 6.0 左右，0.45m 微孔滤膜过滤。
3.7 染料类化合物标准储备溶液(ρ(染料成分)10g/L):称取染料对照品约 100mg(精确至 0.1mg)于 10mL 容量瓶中，以 2g/L 亚硫酸氢钠水溶液无水乙醇(3.1)11的混合溶液定容至 10mL，配成约 10g/L 的单标溶液。
以下几种物质在上述溶剂中的溶解性较差，分别采取如下措施:甲苯-25-二胺硫酸盐和 2-氯-p-苯二胺硫酸盐 2 种物质直接用2g/L 亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容;甲苯-34-二胺直接用无水乙醇(3.1)定容;2-硝基-p-苯二胺和 4-硝基-o-苯二胺需将称样量减至 25mg，再用无水乙醇(3.1)定容，配成约2.5g/L 的单标溶液。
化妆品中禁用物质检验流程与限量要求
化妆品中禁用物质检验流程与限量要求化妆品是日常生活中经常使用的产品之一，因此对于化妆品中禁用物质的检验流程和限量要求非常重要。
禁用物质是指那些在化妆品中使用可能对人体健康产生危害的化学物质。
化妆品生产企业应该对其产品进行严格的禁用物质检验以确保产品的安全性。
首先，化妆品生产企业应该了解国家和地区对禁用物质的法律法规。
不同的国家和地区有不同的禁用物质清单和限量要求。
企业需要确保其产品符合当地法律法规的要求。
这涉及到对禁用物质清单进行了解，并将其列入企业内部的禁用物质管理系统中。
接下来，企业需要从供应商处获取原材料的相关信息。
企业应该要求供应商提供化妆品原材料的安全数据表和相关检测报告。
安全数据表应该包含原材料的成分、来源和生产过程，并明确说明是否包含禁用物质。
检测报告应该包括对禁用物质的定量分析结果。
企业应该仔细审查这些文件，并与供应商进行沟通以确保原材料的安全性。
在化妆品的生产过程中，企业需要建立禁用物质的检测流程。
这包括选择合适的检测方法和设备，并确保检测人员具备相应的专业知识和技能。
化妆品企业可以选择自主检测或委托第三方实验室进行检测。
如果选择自主检测，企业应该建立内部的禁用物质检测实验室，并获得相关资质和认证。
对于禁用物质的检测，企业可以采用多种方法，如高效液相色谱（HPLC）、气相色谱-质谱联用（GC-MS）等。
这些方法可以对禁用物质进行定量分析，以确定产品中的禁用物质是否超出限量要求。
企业可以根据不同的禁用物质制定相应的检测方案，并确定严格的限量要求。
化妆品企业应该建立禁用物质检测的记录和档案。
记录应该包括产品的检测结果、检测方法、检测日期和检测人员等信息。
记录和档案应该妥善保存，以备相关部门或监管机构的检查和审核。
最后，化妆品企业应该定期回顾和更新禁用物质清单和限量要求。
由于科学技术的不断发展，一些原本被认为安全的物质可能会被重新评估为禁用物质。
因此，企业需要跟踪最新的科学研究和法律法规，并及时更新其禁用物质管理系统。
化妆品中10种着色剂的检测方法模板
附件3化妆品中10种着色剂的检测方法1 适用范围本方法规定了化妆品中CI16185、CI16255、CI16035、CI14700、CI45380、CI15510、CI59040、橙黄Ⅰ、CI15985、CI10316着色剂含量的高效液相色谱测定方法和橙黄Ⅰ的阳性结果确证方法。
本方法适用于胭脂、口红、粉底、指甲油、睫毛膏、眼影等修饰类化妆品中CI16185、CI16255、CI16035、CI14700、CI45380、CI15510、CI59040、橙黄Ⅰ、CI15985、CI10316含量的测定。
2 方法提要试样经甲醇超声提取后, 过0.45 μm滤膜, 采用高效液相色谱系统分离, 二极管阵列检测器进行检测, 外标法定量。
本方法的检出限、定量下限和取样品5.0 g时的检出浓度、定量浓度见表1。
表1 各种着色剂的检出限和检出浓度着色剂索引号着色剂索引通用中文名CAS号检出限( μg)定量下限( μg)检出浓度( μg/g)定量浓度( μg/g)CI 16185 食品红9 915-67-3 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 16255 食品红7 1390-65-4 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 16035 食品红17 25956-17-6 0.3 1.0 0.06 0.20CI 14700 食品红1 4548-53-2 0.3 1.0 0.06 0.20CI 45380 酸性红87 548-26-5 0.3 1.0 0.06 0.20CI 15510 酸性橙7 633-96-5 0.3 1.0 0.06 0.20CI 59040 溶剂绿7 6358-69-6 5.0 16.5 1.0 3.3——橙黄Ⅰ523-44-4 5.0 16.5 1.0 3.3CI 15985 食品黄3 2783-94-0 15.0 50.0 3.0 10.0CI 10316 酸性黄1 846-70-8 15.0 50.0 3.0 10.03试剂和材料除另有规定外, 所用试剂均为色谱纯, 水为一级水。
高效液相色谱法同时测定化妆品中14种禁用着色剂
高效液相色谱法同时测定化妆品中14种禁用着色剂毛希琴;任国杰;李春玲【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2014(000)009【摘要】采用高效液相色谱建立了同时测定化妆品中14种禁用着色剂（吖啶黄、溶剂蓝35、溶剂红49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、颜料橙5、颜料红53、氯化五甲基副玫瑰苯胺、苏丹红Ⅱ、氯化六甲基副玫瑰苯胺、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、分散黄3、苏丹红Ⅰ）的分析方法。
待测化妆品样品经四氢呋喃分散，并对目标物进行提取后，用含有醋酸铵的甲醇-水混合溶液将基质析出，提取液经离心过滤后，以10 mmol/L的醋酸铵溶液-乙腈作为流动相在Agilent poroshell 120 EC-C18（2.7μm，3.0 mm×100 mm）色谱柱上梯度洗脱进行分离，检测波长为416，514，590 nm。
以目标物的色谱保留时间和紫外光谱图进行定性，以色谱峰的峰面积用标准曲线外标法进行定量。
在优化条件下，各目标物的线性范围为0.2~20μg/mL，相关系数均大于0.999。
14种禁用着色剂的定量下限为3~10μg/g。
在低、中、高3个加标水平下，各目标物的回收率为91.3％~110.9％，相对标准偏差（RSD）均低于10％。
方法准确、简便、灵敏、可靠，可用于化妆品中此14种禁用着色剂的定量测定。
【总页数】6页(P1083-1088)【作者】毛希琴;任国杰;李春玲【作者单位】大连市产品质量监督检验所，辽宁大连 116630;大连市产品质量监督检验所，辽宁大连 116630;大连市产品质量监督检验所，辽宁大连 116630【正文语种】中文【中图分类】O657.72;TQ047.2【相关文献】1.高效液相色谱法同时检测化妆品中7种禁用着色剂 [J], 赵雪蓉;于一茫;徐伟;林维宣;李晓岚;郭桂媛2.高效液相色谱-串联质谱法同时测定化妆品中14种禁用着色剂 [J], 姜子波;任国杰;毛希琴;李春玲;张国翠;王灵芝3.高效液相色谱法同时测定化妆品中的4种禁用着色剂 [J], 郭桂媛;林维宣;金红利;于一茫;侯红漫4.高效液相色谱法测定化妆品中3种禁用着色剂的不确定度评定 [J], 李易晓; 许菲菲; 羊洁芳; 沈明驹; 马苏珍; 楼美娟; 蒋英华5.高效液相色谱法同时测定化妆品中9种着色剂 [J], 李静;周智明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
限用着色剂(化妆品安全技术规范)
化妆品安全技术规范限用着色剂
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注(1)：a 所列着色剂与未被包括在禁用组分表中的物质形成的盐和色淀也同样被允许使用。
b 着色剂如有多个盐类用冒号后数字表示, 如15850:1, 15850:2。
如没有特别注明, 则通用中文名取其无冒号主名称。
如有多个通用中文名, 则取含“食品”名称。
注(2)：这些着色剂的不溶性钡、锶、锆色淀、盐和颜料也被允许使用, 它们必须通过不溶性测定。
注(3)：这些着色剂作为防晒剂时, 具体要求见防晒剂表。
注(4)：五倍子为盐肤木、青麸杨或红麸杨叶上的虫瘿。
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化妆品中10种着色剂的检测方法
附件3化妆品中10种着色剂的检测方法1 适用范围本方法规定了化妆品中CI16185、CI16255、CI16035、CI14700、CI45380、CI15510、CI59040、橙黄Ⅰ、CI15985、CI10316着色剂含量的高效液相色谱测定方法和橙黄Ⅰ的阳性结果确证方法。
本方法适用于胭脂、口红、粉底、指甲油、睫毛膏、眼影等修饰类化妆品中CI16185、CI16255、CI16035、CI14700、CI45380、CI15510、CI59040、橙黄Ⅰ、CI15985、CI10316含量的测定。
2 方法提要试样经甲醇超声提取后，过0.45 μm滤膜，采用高效液相色谱系统分离，二极管阵列检测器进行检测，外标法定量。
本方法的检出限、定量下限和取样品5.0 g时的检出浓度、定量浓度见表1。
表1 各种着色剂的检出限和检出浓度着色剂索引号着色剂索引通用中文名CAS号检出限（μg）定量下限（μg）检出浓度（μg/g）定量浓度（μg/g）CI 16185 食品红9 915-67-3 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 16255 食品红7 1390-65-4 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 16035 食品红17 25956-17-6 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 14700 食品红1 4548-53-2 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 45380 酸性红87 548-26-5 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 15510 酸性橙7 633-96-5 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 59040 溶剂绿7 6358-69-6 5.0 16.5 1.0 3.3 ——橙黄Ⅰ523-44-4 5.0 16.5 1.0 3.3 CI 15985 食品黄3 2783-94-0 15.0 50.0 3.0 10.0 CI 10316 酸性黄1 846-70-8 15.0 50.0 3.0 10.0 3试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为色谱纯，水为一级水。
化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范
化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范为加强对化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究工作的技术指导，规范化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究和验证工作，明确检测方法验证内容和评价标准，有效保证研究制定的检测方法具备先进性和可行性，特制定本规范。
1 适用范围本规范规定了化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究和建立过程中检测方法验证内容、技术要求和评价指标。
本规范适用于化妆品中禁用物质和限用物质检测方法的验证与评价。
2 依据《化妆品卫生规范》3 释义3.1 本规范中所指化妆品中禁用物质是指《化妆品卫生规范》中规定的化妆品禁用组分。
3.2 本规范中所指化妆品中限用物质是指《化妆品卫生规范》中规定的化妆品组分中限用物质、限用防晒剂、限用防腐剂、限用着色剂、暂时允许使用的染发剂等。
4 定义与术语4.1 被测物质是指本规范第3 项规定的禁用物质和限用物质。
4.2 特异性在确定的分析条件下，检测方法所具备的检测和区分共存组分中被测物能力的特性。
4.3 线性及线性范围4.3.1 线性是指在设计范围内检测响应值与样品中被测物质浓度或量成比例关系的程度。
4.3.2 线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的检测结果，而且呈线性的被测物质浓度或量的变化范围。
4.4 检出限和定量下限4.4.1 检出限：被测物质能被检测出的最低量。
4.4.2 定量下限：能够对被测物质准确定量的最低浓度或质量。
4.5 检出浓度和最低定量浓度4.5.1 检出浓度：按照检测方法操作，方法检出限对应的被测物质浓度。
4.5.2 最低定量浓度：按照检测方法操作，定量下限对应的被测物质浓度。
4.6 精密度在确定的分析条件下，相同浓度被测物质的一系列独立测量结果的一致程度，包括日内精密度和日间精密度。
日内精密度：同一天测定的精密度。
日间精密度：不同天测定的精密度。
4.7 回收率提取回收率：是指在确定的分析条件下，回收到物质的实际浓度的百分比，以样品提取和处理过程前后被测物质含量百分比表示。
化妆品中颜料橙(CI 12075)等五种禁用着色剂的检测方法
附件15：化妆品中颜料橙5等5种禁用着色剂的检测方法1 适用范围本方法规定了唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸性黄36（CI 13065）、颜料橙5（CI 12075）、颜料红53:1（CI 15585:1）、苏丹红Ⅱ（CI 12140）和苏丹红Ⅳ（CI 26105）的高效液相色谱测定方法。
本方法适用于唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸性黄36、颜料橙5、颜料红53:1、苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ的测定。
2 方法提要样品经溶剂提取后，用高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，以保留时间和紫外-可见光谱图定性，峰面积外标法定量。
必要时，采用液相色谱-质谱联用法进行确证。
本方法对酸性黄36、颜料橙5、颜料红53:1、苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度见表1。
表1 5种着色剂的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度3 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。
3.1 乙腈，色谱纯。
3.2 甲醇，色谱纯。
3.3 四氢呋喃，色谱纯。
3.4 二甲基亚砜。
3.5 乙醇，色谱纯。
3.6 四丁基氢氧化铵，浓度为55%。
3.7 柠檬酸。
3.8 氨水，浓度为25～28%。
3.9 酸性黄36，纯度≥99%。
3.10 苏丹红Ⅳ，纯度≥94%。
3.11 苏丹红Ⅱ，纯度≥90%。
3.12 颜料橙5，纯度≥97%。
3.13 颜料红53:1，纯度≥95%。
3.14 酸性黄36标准储备溶液（ρ=500 μg/mL）：称取酸性黄36（3.9）对照品50 mg（精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用甲醇（3.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 μg/ mL的标准储备溶液。
3.15 苏丹红Ⅳ标准储备溶液（ρ=500 μg/mL）：称取苏丹红Ⅳ（3.10）对照品50 mg（按实际含量折算，精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用四氢呋喃（3.3）和乙腈（3.1）混合液（体积比1:9）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 μg/ mL的标准储备溶液。
化妆品中7种禁用物质检测方法
化妆品中7种禁用物质检测方法附件1：化妆品中氢化可的松等7种禁用物质的检测方法（征求意见稿）1适用范围本方法规定了采用液相色谱-串联质谱法测定化妆品中7种禁用物质：米诺地尔（CAS：38304-91-5），氢化可的松（CAS：50-23-7），螺内酯（CAS：52-01-7），雌酮（CAS：53-16-7），坎利酮（CAS：976-71-6），醋酸曲安奈德（CAS：3870-07-3），黄体酮（CAS：57-83-0）的方法。
本方法适用化妆品中禁用物质：米诺地尔，氢化可的松，螺内酯，雌酮，坎利酮，醋酸曲安奈德，黄体酮含量的测定。
2方法提要样品经过提取后，用液相色谱-串联质谱法测定，以多反应离子监测模式进行监测，采用特征离子丰度比进行定性，待测化合物峰面积定量，以标准曲线法计算含量。
本方法的检出限、定量限和取样品1g时的检出浓度、定量浓度见表1.表1各违禁成分的检出限和检出浓度化合物米诺地尔氢化可的松螺内酯雌酮坎利酮醋酸曲安奈德黄体酮3试剂和材料检出限（ng）0.510.5500.50.10.2定量限（ng）12110010.20.5检出浓度(ng/g)10252550010510定量浓度(ng/g)2550501000251025除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。
3.1乙腈，色谱纯。
3.2甲醇，色谱纯。
3.3乙腈溶液[φ（乙腈）=90%]：量取10mL水于100mL量瓶中，加乙腈（3.1）稀释至刻度，混匀。
3.4混合标准储备溶液[（待测成分）=1mg/mL]：精密称取米诺地尔，氢化可的松，螺内酯，雌酮，坎利酮，醋酸曲安奈德，黄体酮标准品10mg（精确到0.01mg）置于同一10mL量瓶中，加甲醇（3.2）使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为1mg/mL的混合标准储备溶液。
3.5系列浓度标准溶液：用90%乙腈（3.4）稀释混合标准储备溶液，精密配制得质量浓度为10，20，50，100，200，500，1000，1500ng/mL的系列浓度标准溶液。
高效液相色谱法测定化妆品中3种禁用着色剂的不确定度评定
1.1 仪器与试剂 Agilent 1200 型高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器；分析
天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；分散黄 3、苏丹Ⅰ、颜料橙 5 标 准品(德国 Dr.Ehrenstorfer 公司)。甲醇、乙腈、四氢呋喃为色谱纯， 醋酸铵为分析纯，所用水为超纯水。
1.2 色谱条件 色谱 柱：Agilent poroshell 120 EC-C18(2.7 μm，3.0 mm×100
黄 3，0.0397/0.0794 mg/kg；苏丹Ⅰ，0.0178/0.0356 mg/kg，颜料橙 5，0.0362/0.0724 mg/kg。
[关键词]高效液相色谱法；着色剂；不确定度；化妆品
[中图分类号]O65
[文献标识码]A
[文章编号]1007-1865(2019)17-0166-03
Uncertainty Evaluation for Determination of 3 Kind of Prohibited Colorants in Cosmetics by High Performance Liquid Chromatography
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广东化工 w 第 46 卷总第 403 期
高效液相色谱法测定化妆品中 3 种禁用着色剂的不 确定度评定
李易晓 1*，许菲菲 2，羊洁芳 1，沈明驹 1，马苏珍 2，楼美娟 2，蒋英华 2
(1．义乌市检验检疫科学技术研究院，浙江 义乌 322000；2．义乌海关，浙江 义乌 322000)
Li Yixiao1*, Xu Feifei2, Yang Jiefang1, Shen Mingju1, Ma Suzhen2, Lou Meijuan2, Jiang Yinghua2 (1. Yiwu Academy of Science & Technology for Inspection & Quarantine, Yiwu 322000；2. Yiwu Customs, Yiwu 322000, China)
化妆品着色剂（色素）的检验方法及注解
着色剂（色素）测验着色剂亦称色素。
化妆品添加着色剂主要是使产品着色，通过消费者的视觉提高产品的吸引力；还可以用来调整原料对产品色调的影响；或者用以区分产品品种等。
着色剂按来源和性质分以下几类：着色剂分为染料和颜料，染料包括天然染料和合成染料，颜料包括无机颜料和有机颜料。
染料一般可溶于水或有机溶剂，具有一定染色能力。
按用途分为酸性染料、碱性染料、氧化染料和油溶性染料等；颜料一般是不溶于水或有机溶剂。
化妆品中使用染料多数是合成染料，其中大部分是以煤干馏的副产品如苯、蒽等为原料，所以称其为焦油色素。
合成染料从结构上可分为下列几种：（1）硝基染料：以硝基为发色团。
随着硝基的增加，颜色加深，一般为黄色。
（2）偶氮染料：以偶氮基为发色团，以偶氮苯为色原体的染料。
占合成染料二分之一左右。
其中构造简单的苯化合物呈黄色、橙色或褐色。
随其含有助色团的不同，又分为以下五类：①含有羟基或羰基，但不含磺酸基的颜料。
②不含羧基、磺酸基的染料。
③含羟基或（和）羧基、磺酸基的不溶性颜料。
④含羟基或（和）磺酸基的染料。
⑤吡唑啉酮型。
（3）亚硝基染料：具有亚硝基的发色团染料，几乎全为绿色。
（4）三苯甲烷染料：甲烷结构的四个氢有三个被苯取代，一般为绿色。
（5）氧杂蒽染料：根据所含功能团分为：①醌型，②酚型，③氨型。
（6）喹啉染料：以喹啉为母体，呈黄色。
（7）蒽醌染料：以蒽醌核为原体，又分为：①含磺酸基，②不含磺酸基。
（8）靛蓝染料。
（9）芘类染料。
（10）酞蓝染料。
化妆品中使用的颜料一般是无机颜料。
无机颜料分有色颜料、白色颜料和体质颜料。
化妆品中常用的有：铁氰化合物、氧化物、硅酸盐、磷酸盐，炭黑和珠光颜料等。
大多数的合成着色剂对动物是有危害的。
有的着色剂会引起人的光敏反应，尤其是某些焦油色素甚至可以诱发癌症。
为了安全起见，世界上有些国家对化妆品用着色剂作了法律性规定。
我国化妆品卫生标准对化妆品用着色剂品种、使用范围和限制条件都作了明确的规定。
化妆品中多种禁用着色剂的高效液相色谱测定方法研究
化妆品中多种禁用着色剂的高效液相色谱测定方法研究
赵星
【期刊名称】《化纤与纺织技术》
【年(卷),期】2024(53)3
【摘要】化妆品市场的快速增长带来了对产品质量与安全的更高要求,其中禁用着色剂的合规性成为制约因素。
禁用着色剂种类繁多,法规要求不断更新,因此建立一种高效而可靠的检测方法对确保产品合规性至关重要。
文章旨在开发一种高效液相色谱测定方法,用于检测化妆品中的多种禁用着色剂。
先全面分析禁用着色剂的种类和法规要求,然后基于高效液相色谱原理进行了系统研究,重点优化了色谱柱选择和流动相配制。
在建立与优化测定方法的过程中,注重样品前处理和色谱条件的优化,确保了方法的高灵敏度和稳定性。
通过详细的方法验证和实际应用效果分析,证明了该方法在禁用着色剂检测中的可靠性和实用性。
研究结果为确保化妆品合规性提供了一种高效、准确的检测手段。
【总页数】3页(P80-82)
【作者】赵星
【作者单位】雅诗兰黛上海商贸有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】O657.7;TQ658
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附件15：化妆品中颜料橙5等5种禁用着色剂的检测方法1 适用范围本方法规定了唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸性黄36（CI 13065）、颜料橙5（CI 12075）、颜料红53:1（CI 15585:1）、苏丹红Ⅱ（CI 12140）和苏丹红Ⅳ（CI 26105）的高效液相色谱测定方法。
本方法适用于唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸性黄36、颜料橙5、颜料红53:1、苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ的测定。
2 方法提要样品经溶剂提取后，用高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，以保留时间和紫外-可见光谱图定性，峰面积外标法定量。
必要时，采用液相色谱-质谱联用法进行确证。
本方法对酸性黄36、颜料橙5、颜料红53:1、苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度见表1。
表1 5种着色剂的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度3 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。
3.1 乙腈，色谱纯。
3.2 甲醇，色谱纯。
3.3 四氢呋喃，色谱纯。
3.4 二甲基亚砜。
3.5 乙醇，色谱纯。
3.6 四丁基氢氧化铵，浓度为55%。
3.7 柠檬酸。
3.8 氨水，浓度为25～28%。
3.9 酸性黄36，纯度≥99%。
3.10 苏丹红Ⅳ，纯度≥94%。
3.11 苏丹红Ⅱ，纯度≥90%。
3.12 颜料橙5，纯度≥97%。
3.13 颜料红53:1，纯度≥95%。
3.14 酸性黄36标准储备溶液（ρ=500 μg/mL）：称取酸性黄36（3.9）对照品50 mg（精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用甲醇（3.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 μg/ mL的标准储备溶液。
3.15 苏丹红Ⅳ标准储备溶液（ρ=500 μg/mL）：称取苏丹红Ⅳ（3.10）对照品50 mg（按实际含量折算，精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用四氢呋喃（3.3）和乙腈（3.1）混合液（体积比1:9）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 μg/ mL的标准储备溶液。
3.16 苏丹红Ⅱ标准储备溶液（ρ=500 μg/mL）：称取苏丹红Ⅱ（3.11）对照品50 mg（按实际含量折算，精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用乙腈（3.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 μg/ mL的标准储备溶液。
3.17 颜料橙5标准储备溶液（ρ=250 μg/mL）：称取颜料橙5（3.12）对照品25 mg（按实际含量折算，精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用四氢呋喃（3.3）、二甲基亚砜（3.4）和乙腈（3.1）的混合溶液（体积比5:1:4）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得250 μg/ mL的标准储备溶液。
3.18 颜料红53:1标准储备溶液（ρ=250 μg/mL）：称取颜料红53:1（3.13）对照品25 mg（按实际含量折算，精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用二甲基亚砜（3.4）和乙醇（3.5）的混合溶液（体积比2:3）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得250 μg/ mL的标准储备溶液。
3.19 着色剂混合标准储备溶液（ =50 μg/mL）：分别称取酸性黄36标准储备液（3.14）、苏丹红Ⅳ标准储备溶液（3.15）和苏丹红Ⅱ标准储备溶液（3.16）各5 mL，取颜料橙5标准储备溶液（3.17）和颜料红53:1标准储备溶液各10 mL，置于50 mL容量瓶中，用乙腈（3.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度各为50 μg/mL的标准溶液。
3.20 5种禁用着色剂系列标准溶液：精密量取一定体积的混合标准储备溶液（3.20），置10 mL容量瓶中，加乙腈（3.1）稀释至刻度，使得着色剂各成分的浓度分别为0.2 μg/ mL、0.5 μg/ mL、2.0 μg/ mL、10.0 μg/ mL、50.0 μg/ mL。
4 仪器4.1 高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器。
4.2 液相色谱-串联四极杆质谱联用仪。
4.3 分析天平：感量为0.0001 g。
4.4 分析天平：感量为0.00001 g。
4.5 精密移液器。
4.6 涡旋振荡器。
4.7 超声波清洗仪。
4.8 高速离心机：转速不小于10000 rmp。
5 分析步骤5.1 样品预处理唇膏类：称取0.5 g（精确至0.001 g）样品，置10 mL具塞比色管中，加四氢呋喃（3.3）与乙腈（3.1）混合液（体积比1:9）至刻度，摇匀，涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取30 min，放至室温，必要时，转移至10 mL 具塞塑料离心管中，以10000 rpm离心5 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
散粉类：称取0.5 g（精确至0.001 g）样品，置10 mL具塞比色管中，加四氢呋喃（3.3）、二甲基亚砜（3.4）和乙腈（3.1）混合液（体积比1:1:8）至刻度，混匀，超声提取30 min，放至室温，上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
指甲油类：称取0.5 g（精确至0.001 g）样品，置10 mL具塞比色管中，加5~6 mL乙腈（3.1），混匀，超声提取30 min，放至室温，加乙腈（3.1）稀释至刻度，摇匀，静置，必要时，转移至10 mL具塞塑料离心管中，以10000 rpm离心5 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
若样品中被测成分的浓度超过了线性范围的上限，需对试样溶液进行适当稀释处理。
5.2 高效液相色谱参考条件色谱柱：C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。
流动相：A：乙腈B：缓冲溶液（10 mmol/L四丁基氢氧化胺（3.6），10 mmol/L 柠檬酸（3.7），用氨水（3.8）调节至pH 8.2)梯度洗脱，洗脱程序见表1。
表1 梯度洗脱程序时间（min）流动相A（%）流动相B（%）流速（mL/min）0.00 30 70 1.05.00 80 20 1.010.00 100 0 1.015.00 100 0 1.020.00 30 70 1.022.00 30 70 1.0流速：1.0 mL/min。
检测波长：416 nm（酸性黄36）；484 nm（颜料橙5、颜料红53:1、苏丹红Ⅱ）；514 nm（苏丹红Ⅳ）。
柱温：30℃。
进样量：10 µL。
5.3 样品测定按设定的色谱条件（5.2），取着色剂系列标准溶液（3.20）分别进样，进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。
取试样溶液（5.1）进样10 μL分析，色谱图检出的成分，经与该成分的保留时间和紫外-可见光谱图比较确证后，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算各着色剂的浓度。
按“6”项下计算公式计算化妆品样品中着色剂的含量。
5.4 平行试验按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定，获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算数平均值的10%。
5.5 阳性结果确证测定过程中若有阳性结果，可采用液相色谱-质谱联用法进一步确证。
在相同的实验条件下，如果检出的色谱峰的保留时间和紫外-可见光谱图与对照品一致，所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子对相对丰度比的偏差不超过表2规定范围，则可判定样品中存在对应的待测成分。
表2 阳性结果确证时相对离子丰度比的最大允许偏差液相色谱-质谱联用法参考条件：色谱参考条件：色谱柱：C18（2.1 mm×150 mm, 3.5 μm）；流动相：乙腈-0.1%甲酸水溶液系统梯度洗脱，梯度洗脱条件见表3；柱温：30 ℃；流速：0.3 mL/min；进样量：5 µL。
表3 梯度洗脱条件时间（min）乙腈（%）0.1%甲酸溶液（%）流速（mL/min）0.00 78 22 0.33.00 78 22 0.35.00 95 5 0.37.00 95 5 0.38.00 78 22 0.3质谱参考条件：毛细管电压：3.5 kV；二级锥孔电压：5 V；射频透镜电压：0.5 V；离子源温度：150 ℃；脱溶剂气温度：500 ℃；脱溶剂气流量：1000 L/hr；锥孔气流量：50 L/hr；碰撞室压力：3.2×10-3 mbar；低质量端1分辨率：13.0；高质量端1分辨率：13.0；离子能量1：0.5 V；碰撞室入口电压：-2 eV；碰撞室出口电压：1 eV；低质量端2分辨率：13.0；高质量端2分辨率：13.0；离子能量2：0.5 V；光电倍增器电压：650 V；碰撞气体：氩气；数据采集模式：多反应监测。
在以上色谱、质谱条件下，5种禁用着色剂的定性离子对和保留时间见表4。
表4 5种禁用着色剂的定性离子对和保留时间6 计算w=ρV/m式中：w——样品中着色剂的质量分数，μg/g；——从标准曲线中得出的测试溶液中着色剂的质量浓度，μg/mL；V ——样品定容体积，mL；m——样品取样量，g。
7 回收率和精密度两个浓度水平中，低浓度的平均提取回收率和平均方法回收率在80%~120%之间，并且RSD小于10%（n=6）；高浓度的平均提取回收率和平均方法回收率在85%~115%之间，并且RSD小于5%（n=6）。
8 色谱图图1 5种禁用着色剂混合标准溶液（5 μg/mL）色谱图1. 酸性黄36；2. 颜料红53:1；3. 颜料橙5；4. 苏丹红Ⅱ；5. 苏丹红Ⅳ。