致突变实验综合分析及评价..
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
正向突变
野生型细菌（ his+ ） （his-）
2018/10/6
突变型细菌
实验方案[2-5]
一、实验名称： 96%二氯吡啶酸原药的鼠伤寒沙门氏菌回 复突变试验 二、实验目的：观察95％二氯吡啶酸原药对鼠伤寒沙门菌 回复突变试验 (Ams 试验)菌株基因突变，初步探讨其致突 变性的强弱。为该农药的毒理学安全性评价提供基础数据。 三、实验原理：鼠伤寒沙门菌突变型菌株为组氨基酸缺 陷型(his-),不能自行合成组氨酸,在无组氨酸的选择性培 养基上不能正常生长，而在含组氨酸的培养基上则可正常 生长，当受到致突变物诱变后突变型回复突变为野生型 （his+），表现为在无组氨酸的培养基上也能生长的菌落 数。根据试验菌株在无组氨酸的培养基上能否形成菌落以 2018/10/6 及形成菌落的多少，判定受试物是否具有致突变性及致突
实验方案
四、试验步骤 1、受试物[5]：95％二氯吡啶酸原药，白色絮状固体。 2、溶剂：二甲基亚砜(DMSO)，光谱纯，无菌。 3 、 Ames 菌株：鼠伤寒沙门菌标准突变株 TA97 、 TA98 、 TA100和TA102。 剂量：采用平板掺入法，在加S9(+S9)和不加S9(一S9)条 件下进行测试。在不加S9的条件下测试该药对 TA100菌株 产生的最小毒性的浓度作为剂量选择的依据。查阅相关文 献后（若没有相关文献则根据预实验结果）以每皿5 000ug为最高剂量，按5倍组距下设每皿1 000、200、40、 8ug4个剂量组。 4、对照组：设自发对照组、阴性对照组和阳性对照组。 阳性对照组不加 S9 的 TA97 、 TA98 和 TAl02 菌株用敌克松 (Dexon)，TAl00菌株用叠氮钠(NaN3)；阳性对照组加S9的 TA97、TA98和TAl00菌株用2-氨基芴(2-AF)，TAl02菌株用 1，8·二羟基蒽醌(1，8-HAQ)。37℃培养48 h后计数每皿 2018/10/6 回变菌落数，每个剂量作3个平行皿。
细菌回复突变试验（Ames试验）[1]
Ames 试验是利用突变体的测试菌株，观察受试物能否纠
正或补偿突变体所携带的突变改变，判断其突变性。
原理：采用鼠伤寒沙门菌组氨基酸缺陷突变株作为指示微
生物，检测受试物致突变的实验。鼠伤寒沙门菌突变型菌 株为组氨基酸缺陷型(his-),不能自行合成组氨酸,在无组 氨酸的选择性培养基上不能正常生长，而在含组氨酸的培 养基上则可正常生长，当受到致突变物诱变后突变型回复 突变为野生型（his+），表现为在无组氨酸的培养基上也 能生长的菌落数。如图示：
实验结果判断[4]
若96%二氯吡啶酸原药的回变菌落数超过自发回变菌落数
的两倍以上，且各剂量组间呈剂量一反应关系，则该药对
鼠伤寒沙门菌标准突变型菌株有诱发基因突变的作用，反 之，这无该作用。
2018/10/6
统计分析
2018/10/6
统计分析
对照组
单因素方 差分析
阴性
P>0.05，不拒绝 H0。
2018/10/6
参考文献
[1]王心如.毒理学基础[M].人民卫生出版社，2014,162.
[2]GB 15193.4-2014 食品安全国家标准 细菌回复突变试
验(S)
[3]GB15670-1995,农药登记毒理学试验方法 (S)
[4]张爱华，张华.公共卫生与预防医学实验教程 [M].科学
出版社，2012, 130-135.
[5]95%二氯吡啶酸原药 重庆双丰化工公司—盖德化工网.
2018/10/6
谢谢聆听
THANK YOU FOR YOBiblioteka BaiduR ATTENTION
欢迎提问答疑
阴性 Dunnet-t
不拒绝 H0
实验组
检验
阳性， 剂量反 应关系 阳性 P≤0.05 ，拒绝 H0，接受 H1. 拒绝 H0， 接受 H1。 阴性 不存在
阳性
存在
2018/10/6
结果评价
结果评价[4]：试验结果表明，受试物各剂量组对各测试菌 株在加或不加S9的条件下，其回变菌落数均未超过阴性对 照组回变菌落数的 2倍，亦无明显的剂量——反应关系， 而阳性对照组各测试菌株的回变菌落数均明显增加，并超 过阴性对照组回变菌落数的 2倍以上。因此可认为 95％二 氯吡啶酸原药无诱发菌株基因突变活性。
致突变实验综合分析及评价——第二部分
CONTENTS
01 细菌回复突变试验（Ames试验）
02
实验方案
03
结果判断依据
04
分析评价
2018/10/6
背景资料
某单位欲对农药——96%二氯吡啶酸原药，进行致
突变试验综合分析及评价，见相关资料。
现请根据所学知识，查阅资料和文献，思考并讨
论以下问题。
野生型细菌（ his+ ） （his-）
2018/10/6
突变型细菌
实验方案[2-5]
一、实验名称： 96%二氯吡啶酸原药的鼠伤寒沙门氏菌回 复突变试验 二、实验目的：观察95％二氯吡啶酸原药对鼠伤寒沙门菌 回复突变试验 (Ams 试验)菌株基因突变，初步探讨其致突 变性的强弱。为该农药的毒理学安全性评价提供基础数据。 三、实验原理：鼠伤寒沙门菌突变型菌株为组氨基酸缺 陷型(his-),不能自行合成组氨酸,在无组氨酸的选择性培 养基上不能正常生长，而在含组氨酸的培养基上则可正常 生长，当受到致突变物诱变后突变型回复突变为野生型 （his+），表现为在无组氨酸的培养基上也能生长的菌落 数。根据试验菌株在无组氨酸的培养基上能否形成菌落以 2018/10/6 及形成菌落的多少，判定受试物是否具有致突变性及致突
实验方案
四、试验步骤 1、受试物[5]：95％二氯吡啶酸原药，白色絮状固体。 2、溶剂：二甲基亚砜(DMSO)，光谱纯，无菌。 3 、 Ames 菌株：鼠伤寒沙门菌标准突变株 TA97 、 TA98 、 TA100和TA102。 剂量：采用平板掺入法，在加S9(+S9)和不加S9(一S9)条 件下进行测试。在不加S9的条件下测试该药对 TA100菌株 产生的最小毒性的浓度作为剂量选择的依据。查阅相关文 献后（若没有相关文献则根据预实验结果）以每皿5 000ug为最高剂量，按5倍组距下设每皿1 000、200、40、 8ug4个剂量组。 4、对照组：设自发对照组、阴性对照组和阳性对照组。 阳性对照组不加 S9 的 TA97 、 TA98 和 TAl02 菌株用敌克松 (Dexon)，TAl00菌株用叠氮钠(NaN3)；阳性对照组加S9的 TA97、TA98和TAl00菌株用2-氨基芴(2-AF)，TAl02菌株用 1，8·二羟基蒽醌(1，8-HAQ)。37℃培养48 h后计数每皿 2018/10/6 回变菌落数，每个剂量作3个平行皿。
细菌回复突变试验（Ames试验）[1]
Ames 试验是利用突变体的测试菌株，观察受试物能否纠
正或补偿突变体所携带的突变改变，判断其突变性。
原理：采用鼠伤寒沙门菌组氨基酸缺陷突变株作为指示微
生物，检测受试物致突变的实验。鼠伤寒沙门菌突变型菌 株为组氨基酸缺陷型(his-),不能自行合成组氨酸,在无组 氨酸的选择性培养基上不能正常生长，而在含组氨酸的培 养基上则可正常生长，当受到致突变物诱变后突变型回复 突变为野生型（his+），表现为在无组氨酸的培养基上也 能生长的菌落数。如图示：
实验结果判断[4]
若96%二氯吡啶酸原药的回变菌落数超过自发回变菌落数
的两倍以上，且各剂量组间呈剂量一反应关系，则该药对
鼠伤寒沙门菌标准突变型菌株有诱发基因突变的作用，反 之，这无该作用。
2018/10/6
统计分析
2018/10/6
统计分析
对照组
单因素方 差分析
阴性
P>0.05，不拒绝 H0。
2018/10/6
参考文献
[1]王心如.毒理学基础[M].人民卫生出版社，2014,162.
[2]GB 15193.4-2014 食品安全国家标准 细菌回复突变试
验(S)
[3]GB15670-1995,农药登记毒理学试验方法 (S)
[4]张爱华，张华.公共卫生与预防医学实验教程 [M].科学
出版社，2012, 130-135.
[5]95%二氯吡啶酸原药 重庆双丰化工公司—盖德化工网.
2018/10/6
谢谢聆听
THANK YOU FOR YOBiblioteka BaiduR ATTENTION
欢迎提问答疑
阴性 Dunnet-t
不拒绝 H0
实验组
检验
阳性， 剂量反 应关系 阳性 P≤0.05 ，拒绝 H0，接受 H1. 拒绝 H0， 接受 H1。 阴性 不存在
阳性
存在
2018/10/6
结果评价
结果评价[4]：试验结果表明，受试物各剂量组对各测试菌 株在加或不加S9的条件下，其回变菌落数均未超过阴性对 照组回变菌落数的 2倍，亦无明显的剂量——反应关系， 而阳性对照组各测试菌株的回变菌落数均明显增加，并超 过阴性对照组回变菌落数的 2倍以上。因此可认为 95％二 氯吡啶酸原药无诱发菌株基因突变活性。
致突变实验综合分析及评价——第二部分
CONTENTS
01 细菌回复突变试验（Ames试验）
02
实验方案
03
结果判断依据
04
分析评价
2018/10/6
背景资料
某单位欲对农药——96%二氯吡啶酸原药，进行致
突变试验综合分析及评价，见相关资料。
现请根据所学知识，查阅资料和文献，思考并讨
论以下问题。