RT-PCR名解

三种PCR技术

《反义PCR在肿瘤检测中的应用》肿瘤患者总是存在转移灶而加速病情的恶化，转移灶的检测对肿瘤患者的诊断分期、治疗、复发、预后判断、术后综合治疗的选择都有极大的意义。反义PCR是是近年来发展的一种在亚显微水平检测隐匿性肿瘤转移的方法,具有高特异性、高敏感性、操作简便的特点。在临床检测中，从早期的IE染色到现在常用的免疫组织化染色，都存在低估转移数目的局限性，如：免疫组织化方法可以从2xl05个骨髓细胞中检出1个McF-7细胞。而反义PCR法可从106个淋巴细胞中检出1个McF--7细胞。此外，反义PCR采用mRNA为标志物,反义PCR法有效地解决了从多个正常等位基因中分离突变基因的问题。
易错PCR存在的问题碱基的变异具有倾向性：种碱基比例不平衡的情况下，A.T--CG的变异比率通常高于CG--AT,的变异比率易错 PCR 产量和变异水平偏低模板的要求较高，最好是只含目的基因的DNA片段解决方法寻找新的影响酶功能、同时又不带来碱基变异偏好的因素，开发更多的易错 PCR方法易错 PCR多种诱变条件的简化《定向进化-易错PCR方法提高华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶的活力》
《反向PCR法扩增花粉特异表达基因PSG076启动子》在植物的有性生殖过程中，花粉的正常发育受阻将会产生雄性不育，这是杂种优势利用中的关键材料。因此可利用花粉特异性启动子驱动破坏花粉生长的基因表达，促使花粉败育，从而获得雄性不育转基因材料。 PSG076是小麦花粉特异性表达基因，本研究对其上游启动子序列进行分离，并选择了已知序列上有切点的酶进行切割，获得了1.4Kb的上游启动子序列。
RNA提取：Trizol试剂方法提总RNA EV71和Cox.A16的鉴别诊断 RT-PCR

PCR及RT-PCR概述

PCR及RT-PCR概述一、目的掌握聚合酶链式反应(PCR) 及逆转录－聚合酶链式反应(RT-PCR)的基本方法二、原理PCR用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。

在由Taq DNA聚合酶催化的一系列合成反应中，使用两段寡核苷酸作为反应的引物。

一般情况下，这两段寡核苷酸引物的序列互不相同，并分别与模板DNA 两条链上的各一段序列互补，而这两段模板序列又分别位于待扩增的两侧。

反应时它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA 片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;(3) 延伸(Extension):在Taq DNA 聚合酶合成DNA 的最适温度下,以目的DNA 为模板进行合成.由这三个基本步骤组成一轮循环,理论上每一轮循环将使目的DNA 扩增一倍（图4）,这些经合成产生的DNA 又可作为下一轮循环的模板,所以经25-35 轮循环就可使DNA 扩增达106倍。

RNA的多聚酶链式反应（RT-PCR）是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcrip－tion, RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的特异DNA，为RNA病毒检测提供了方便；并为获得与扩增特定的RNA互补的cDNA提供了一条极为有利和有效的途径。

RNA扩增包括两个步骤：①在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补链cDNA；②加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引物退火，并由DNA聚合酶催化引物延伸生成双链靶DNA，最后扩增靶DNA。

在RT-PCR中关键步骤是RNA的逆转录，cDNA的PCR与一般PCR条件一样。

由于引物的高度选择性，细胞总RNA无需进行分级分离，即可直接用于RNA的PCR。

但RT-PCR对RNA制品的要求极为严格，作为模板的RNA分子必须是完整的，并且不含DNA、蛋白质和其它杂质。

______________________________________________________________________________________________________________逆转录PCR，或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。

在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。

实时PCR(real-time PCR)，属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。

real time PCR 的定量使用荧光色素，目前有二种方法。

一种是在ds DNA中插入特异的荧光色素，例如SYBR Green荧光染料；另一种使用一种能与增幅DNA序列中特定寡核酸序列相结合的一种荧光探针（probe），如Taqman探针。

两种方法原理不同。

SYBR Green荧光染料游离时不发光，当反应体系中存在双链DNA时，SYBR Green与双链DNA结合，此时才发光。

Taqman探针带有一个荧光基团和一个淬灭基团，荧光基团连接在探针的5’末端，而淬灭基团则在3’末端。

PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，此时荧光基团发出的荧光信号可以被检测到。

real time PCR 与 reverse transcription PCR 相结合，能用微量的RNA来找出特定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。

这两种RT PCR的组合又被称之为“定量RT-PCR （quantitative RT-PCR）”精品资料。

rt pcr原理

rt pcr原理RT-PCR原理RT-PCR是一种广泛应用于分子生物学和医学诊断领域的实验技术，其全称为反转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）。

本文将详细介绍RT-PCR的原理。

一、反转录（Reverse Transcription）1. 反转录的概念反转录是指将RNA模板上的信息逆向转录成为DNA序列。

在RT-PCR中，反转录是制备cDNA（complementary DNA）模板的关键步骤。

cDNA是由RNA模板逆向合成的双链DNA，它可以作为PCR 扩增的模板。

2. 反转录过程反转录过程由三个主要部分组成：RNA逆向转录、RNA降解、cDNA 合成。

首先，需要使用反转录酶将RNA模板逆向转录为单链cDNA；然后通过碱基切除和填充，将单链cDNA变为双链cDNA；最后使用RNase H或其他酶降解RNA模板，得到纯净的cDNA。

二、聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）1. PCR的概念聚合酶链式反应是一种体外扩增核酸序列的技术。

它可以在短时间内从微量样品中扩增出大量特定的DNA序列。

2. PCR过程PCR过程由三个主要步骤组成：变性、退火、延伸。

首先，将DNA 双链分离为两条单链，即变性；然后引入引物（primers），使其与目标序列的两端互相补合，形成一个模板-引物复合体；最后，使用DNA聚合酶在引物的作用下延伸新链。

三、RT-PCR原理1. RT-PCR的概念RT-PCR是一种结合反转录和聚合酶链式反应技术的方法，用于从RNA模板中扩增特定的DNA序列。

它可以将RNA转录为cDNA，并通过PCR扩增cDNA。

2. RT-PCR过程RT-PCR过程由四个主要步骤组成：反转录、初步扩增、二次扩增、检测。

首先进行反转录反应，将RNA逆向转录为cDNA；然后进行初步扩增，使用特定引物扩增目标序列；接着进行二次扩增，使用内部引物对初步扩增产物进行进一步扩增；最后进行检测，确定是否存在目标序列。

简述RT-PCR的原理及应用

简述RT-PCR的原理及应用1. RT-PCR的原理RT-PCR（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）是一种将RNA转录成DNA并通过聚合酶链式反应（PCR）扩增的技术。

它结合了逆转录反应（RT）和PCR技术，能够从RNA分子中扩增出目标序列的DNA片段。

RT-PCR的原理可以分为以下几个步骤： - 逆转录反应：在逆转录酶（RT酶）的作用下，将RNA模板反转录成单链cDNA（互补DNA）。

- 第一链合成：通过加入一条适配器序列，形成一条新的DNA链，并使其保持单链状态。

- 第二链合成：加入第二个引物，依靠DNA聚合酶进行DNA链的合成。

此时，所得到的双链cDNA与原始RNA分子完全互补。

这样，通过逆转录和扩增两个步骤，我们可以从RNA模板中获得目标序列的DNA片断。

接下来，这些DNA片段可以通过PCR技术进一步扩增，以获取更多目标DNA。

2. RT-PCR的应用RT-PCR技术具有广泛的应用范围，包括以下几个方面：2.1 基因表达分析RT-PCR广泛应用于基因表达分析领域，其敏感性、特异性和快速性使其成为研究基因表达的重要工具。

通过从细胞中提取RNA，然后经过逆转录反应合成cDNA，最后通过扩增PCR得到目标基因的片段，可以定量分析目标基因在不同条件或组织中的表达水平。

2.2 病毒检测与诊断RT-PCR技术在病毒检测和诊断方面具有重要的应用价值。

病毒RNA是RT-PCR的理想模板，通过逆转录和扩增，可以检测病毒的存在和数量。

例如，在COVID-19大流行期间，RT-PCR被广泛用于检测冠状病毒的RNA，以诊断感染者和筛查潜在的传播者。

2.3 遗传疾病筛查RT-PCR也被广泛用于遗传疾病的筛查，特别是单基因遗传病的检测。

通过RT-PCR扩增目标基因的DNA片段，可以鉴定致病基因的突变。

这对于帮助家族中可能患有遗传病的个体进行早期诊断和咨询是非常重要的。

real-time pcr名词解释

real-time pcr名词解释
外文名【Real-time Quantitative polymerase chain reaction】
中文名【实时荧光定量多聚核苷酸链式反应】
中文简称【实时荧光定量PCR】
外文简称【RT PCR】
【实时荧光定量PCR技术】，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。

通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

·
Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。

由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。

【技术原理】
将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman 探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。

rtpcr的原理实验步骤及应用

RTPCR的原理实验步骤及应用概述逆转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction，简称RT-PCR），是一种常用的分子生物学实验技术，用于检测和定量分析RNA分子在细胞中的表达水平。

本文将介绍RT-PCR的原理、实验步骤及应用。

原理RTPCR利用逆转录酶（Reverse Transcriptase，简称RT）将RNA模板逆转录为cDNA（complementary DNA），然后通过聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）对cDNA进行扩增，最终得到大量的目标DNA片段。

RT-PCR的基本原理如下：1.逆转录：反转录酶RT利用RNA模板合成与之互补的cDNA。

在逆转录过程中，需要引入一条逆转录引物（反向互补RNA链）作为反转录的起始点。

2.PCR扩增：将逆转录合成的cDNA作为模板，引入一对特异性引物，通过PCR反应进行DNA扩增。

PCR反应分为三个步骤：变性、退火和扩增。

3.变性：将反应温度升高至95°C，使DNA双链变性为两条单链。

4.退火：将反应温度降低至特异性引物的退火温度，使引物与模板序列互相结合。

5.扩增：将反应温度升高至适合DNA聚合酶的活性温度，使DNA聚合酶逆反应合成DNA。

通过多轮的PCR反应，可以扩增出大量的目标DNA片段，其数量呈指数级增长。

实验步骤1. 样品处理首先需要从待检测的样品中提取总RNA，常用的提取方法有酚氯仿法和柱式纯化法。

提取得到的总RNA需要通过比色法或者用分光光度计进行测量，确保样品的质量和浓度。

2. 逆转录反应逆转录反应是将RNA模板转录为cDNA的过程。

需要准备逆转录试剂盒，主要包括逆转录酶、随机引物、dNTPs（脱氧核苷酸三磷酸盐）和逆转录缓冲液。

按照试剂盒说明书的配方，将总RNA与逆转录试剂混合，进行逆转录反应。

反应结束后，需要进行热灭活，以停止反应。

逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)

1．随机六聚体引物：当特定 mRNA 由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一丌特异的引物来拷贝全长 mRNA。用此种方法时，体系中所有 RNA 分子全部充当了 cDNA 第一链模板，PCR 引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的 cDNA 中 96%来源于 rRNA。 2． Oligo(dT)：是一种对 mRNA 特异的方法。因绝大多数真核细胞 mRNA 具有 3’端 Poly(A+)尾，此引物不其配对，仅 mRNA 可被转录。由于 Poly(A+)RNA 仅占总 RNA 的 1-4%，故此种引物合成的 cDNA 比随机六聚体作为引物和得到的 cDNA 在数量和复杂性方面均要小。 3．特异性引物：最特异的引发方法是用含目标 RNA 的互补序列的寡核苷酸作为引物，若 PCR 反应用二种特异性引物，第一条链的合成可由不 mRNA 3’端最靠近的配对引物起始。用此类引物仅产生所需要的 cDNA，导致更为特异的 PCR 扩增。三、试剂准备 1．RMA 提取试剂 2．第一链 cDNA 合成试剂盒 3．dNTPmix：含 dATP、dCTP、dGTP、dTTP 各 2mM 4．Taq DNA 聚合酶四、操作步骤 1. 总 RNA 的提取：见相关内容。 2. cDNA 第一链的合成：目前试剂公司有多种 cDNA 第一链试剂盒出售，其原理基本相同，但操作步骤丌一。现以 GIBICOL 公司提供的 SuperScriptTM Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 试剂盒为例。
详细实验方法
逆转录-聚合酶链反应实验方法实验材料
组织或细胞样品试剂、试剂盒

rt-pcr公式

rt-pcr公式哎呀，说起“RT-PCR 公式”，这可真是个有点复杂但又超级重要的东西呢！咱们先来说说 RT-PCR 到底是啥。

RT-PCR 啊，全名叫逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction），这名字听着是不是就感觉挺高大上的？其实呢，它就是一种把 RNA 变成cDNA，然后再放大检测的技术。

那 RT-PCR 公式是怎么来的呢？这就得从它的原理说起啦。

简单来讲，它就像是一场接力比赛。

首先呢，RNA 要经过逆转录酶的作用，变成互补的 DNA ，这一步就像是给运动员开了个好头。

然后呢，聚合酶就上场啦，像接力棒一样，把这个 DNA 不断复制、放大。

我记得之前在实验室里，为了搞清楚这个 RT-PCR 公式，我可是费了不少劲。

那时候，我和同事们天天都泡在实验室里，对着一堆仪器和数据发愁。

有一次，为了验证一个公式里的参数，我们连续做了好几组实验。

从准备样本，到设置反应条件，每一个步骤都不敢马虎。

特别是在计算的时候，那一个个数字就像是调皮的小精灵，总是跟我们捉迷藏。

咱们再深入讲讲这个公式里的那些参数。

比如说，引物的浓度、镁离子的浓度，还有反应的温度和时间，每一个都能影响最后的结果。

就拿引物浓度来说吧，如果浓度太低，反应可能就启动不起来；要是浓度太高呢，又可能会出现非特异性的扩增。

这就好比做饭的时候，盐放少了没味道，放多了又齁得慌。

还有啊，在实际应用中，RT-PCR 公式可帮了大忙。

比如说在检测病毒的时候，通过这个公式计算出来的结果，就能告诉我们病毒的含量是多少，从而判断病情的严重程度。

这就像是给医生配了一双超级厉害的“透视眼”，能一下子看到身体里的秘密。

总之呢，RT-PCR 公式虽然看起来有点复杂，但是只要我们认真去研究，去实践，就能发现它其实也没那么可怕。

就像我们在生活中遇到的很多难题一样，只要有耐心，有方法，总能找到解决的办法。

希望大家以后在遇到 RT-PCR 公式的时候，不要被它吓到，勇敢地去探索其中的奥秘！。

RT-PCR常见问题

RT-PCR常见问题什么是RT-PCR？RT-PCR全称为反转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction），是一种常用的分子生物学技术。

它通过先将RNA转录成cDNA，再进行聚合酶链式反应来扩增目标DNA序列，从而便于对目标基因的定性和定量分析。

RT-PCR的原理是什么？RT-PCR的基本原理是先通过逆转录酶（Reverse Transcriptase）将RNA转录成互补的cDNA，然后利用聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）对cDNA进行扩增。

逆转录酶根据RNA模板合成cDNA，聚合酶负责在不断升高的温度下合成新的DNA链。

RT-PCR常见的应用有哪些？RT-PCR技术在许多领域得到广泛应用，主要用于以下方面：1.基因表达分析：通过检测转录产物的浓度，了解特定基因在不同生理状态下的表达水平。

2.病原微生物检测：对病原微生物的核酸进行扩增和检测，用于诊断和监测传染病。

3.肿瘤检测和诊断：检测癌细胞中特定基因的表达水平，以辅助肿瘤的早期诊断和治疗选择。

4.病毒感染检测：通过检测病毒基因组的存在和复制水平，帮助诊断病毒感染。

5.遗传病诊断：通过检测患者DNA中的突变位点，早期发现和预防遗传病。

RT-PCR实验中常见的问题有哪些？在进行RT-PCR实验时，常见的问题包括：1.污染：实验室环境和试剂可能导致样品污染，影响实验结果。

因此，严格控制实验条件和采取相应的质量控制措施非常重要。

2.物质稀释和浓度计算：正确计算样品和试剂的稀释倍数以及逆转录反应液和扩增反应液的浓度对于得到准确结果至关重要。

3.阴性对照：包括模板对照和水对照，用于检测反应物的特异性和检测污染。

如果阴性对照出现阳性结果，可能是污染导致的。

4.温度控制：在逆转录和扩增过程中，保持恒定的温度是非常重要的。

温度的变化可能导致逆转录或扩增效率低下或产生非特异性产物。

(完整版)名词解释(分子生物学)

名词解释1.操纵子（operon）：是真核生物基因的一个基本转录单位，由编码序列及上游的调控序列组成。

编码序列通常包括几个功能相关的结构基因，调控序列由启动序列（启动子），操纵序列（操纵基因）及其他调节序列构成。

2.顺式作用元件（cis-acting element）：是真核基因表达是调控转录过程的特殊DNA序列，以转录因子结合而起作用，通常包括启动子，增强子，沉默子等。

3.反式作用因子（trans-acting factor）：与其他基因的顺式作用元件结合，调节基因转录活性的蛋白质因子，根据其功能不同可分为基本转录因子和特异性转录因子。

4.启动子（promoter）：位于结构基因上游，与RNA聚合酶识别，结合的特异DNA 序列，与基因转录起始有关。

5.增强子（enhancer）：指决定基因的时间，空间特异性表达，增强启动子的转录活性的特殊DNA序列，作用特点是无方向性，位置或距离不固定。

6.沉默子（silencer）：某些基因含有负性调节原件，当其结合特异蛋白因子时，对基因转录起阻遏作用。

7.基因表达调控（regulation of gene expression）：指细胞或生物体在接受环境信号刺激时或适应环境变化的过程中在基因表达水平上做出应答的分子机制。

8.基因重组（gene recombination）：DNA片段在细胞内、细胞间、甚至是在不同物种之间进行交换，重组后具有复制和表达功能。

9.基因工程：按照人为预愿获得目的基因，与载体拼接形成重组体，重组体转入宿主细胞，筛选和鉴定出含阳性重组体宿主细胞，经大量增殖，最总获得该目的基因决定的大量表达产物的过程。

10.同源重组（homologous recombination）：发生在同源序列间的重组，它通过链的断裂和再连接，在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换，又称基因重组。

11.DNA克隆：在体内对DNA分子按照既定目的和方案进行人工重组，将重组分子导入适当细胞内，使其在细胞内扩增和繁殖，从而获得该DNA分子大量拷贝的过程，又叫基因克隆或重组DNA技术。

TR-PCR

逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。

再以cDNA为模板进行PCR 扩增，而获得目的基因或检测基因表达。

RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。

该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。

一、反转录酶的选择1． Money 鼠白血病病毒（MMLV）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活性相对较弱。

最适作用温度为37℃。

2．禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。

最适作用温度为42℃。

3．Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在Mn2 存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。

4．MMLV反转录酶的RNase H-突变体：商品名为SuperScript 和SuperScriptⅡ。

此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。

二、合成cDNA引物的选择1．随机六聚体引物：当特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。

用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。

通常用此引物合成的cDNA中96%来源于rRNA。

2． Oligo(dT)：是一种对mRNA特异的方法。

因绝大多数真核细胞mRNA具有3’端Poly(A )尾，此引物与其配对，仅mRNA可被转录。

由于Poly(A )RNA 仅占总RNA的1-4%，故此种引物合成的cDNA比随机六聚体作为引物和得到的cDNA在数量和复杂性方面均要小。

RT-PCR与realtime pcr

Real-time PCR中文译作“实时聚合酶链反应”，是一种最新发展的定量PCR技术。

该技术借助于荧光信号来检测PCR产物，一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定CT值，从而根据CT值确定起始DNA拷贝数，做到了真正意义上的DNA定量，较以往常用的终点定量的方法更加准确。

根据所使用的技术不同，荧光定量PCR 又可以分为TaqMan探针和SYBR Green I荧光染料两种方法。

Real-time PCR 所采用的专用PCR仪能够自动在每个循环的特定阶段对反应体系的荧光强度进行检测，实时的记录荧光强度的改变，从而对样品的浓度进行精确的定量。

RT-PCR是Reverse transcription PCR的简称，中文译作“逆转录聚合酶链反应”，是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。

首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。

RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。

无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。

用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异性引物中的一种。

对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可。

Real time RT-PCR是将Real time-PCR的方法用于RT-PCR中，目的也是为了对样品浓度进行精确控制。

RT-PCR和Real time-PCR是没有必然联系的，两种技术可以一起使用，就是Real time RT-PCR；也可以单独使用。

就是名称有点绕，逆转录PCR先出现，所以占用了RT-PCR这个简写，等Real time-PCR技术出现后，本来按照惯例，简写也是RT-PCR，但为了与逆转录PCR相区别，还是写成Real time-PCR。

rt_qpcr与rt_pcr的区别

rt qpcr与rt pcr的区别1. 引言随着科技的不断发展，PCR技术已成为生物学研究中不可或缺的工具之一。

在PCR 技术的基础上，有很多不同的变种被开发出来以满足不同的研究需求。

其中，rt qpcr和rt pcr是两种常用于RNA分析的技术。

2. rt pcrrt pcr全称为逆转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction），是一种利用暴露在细胞质中的RNA作为模板，经由逆转录酶（Reverse Transcriptase）将RNA逆转录合成cDNA，然后再进行聚合酶链式反应扩增的技术。

rt pcr的主要步骤包括：1.RNA逆转录：利用逆转录酶将RNA转录为cDNA，通常使用寡聚核苷酸引物（oligo(dT)）作为逆转录引物。

2.cDNA扩增：将逆转录得到的cDNA通过PCR技术进行扩增，需要设计特异性引物来扩增感兴趣的目标序列。

3.产品检测：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、实时荧光PCR等方法检测PCR产物。

rt pcr适用于研究RNA的表达水平，例如研究基因转录水平的变化、检测细胞裂解液中的病毒RNA等。

在研究环节中，需要逆转录酶和dna聚合酶。

3. rt qpcrrt qpcr全称为逆转录实时定量聚合酶链式反应（Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction），是在rt pcr的基础上结合了实时荧光技术的一种技术。

rt qpcr主要步骤包括：1.RNA逆转录：同rt pcr一样，利用逆转录酶将RNA转录为cDNA。

2.实时检测：在PCR反应过程中，通过荧光探针的结合与释放来检测产物的实时累积情况，常见的探针有TaqMan探针、SYBR Green探针等。

3.数据分析：根据PCR反应的实时荧光信号，可以通过标准曲线法或比较Ct法来定量分析目标序列的表达水平。

qPCR与RT-PCR

虽然Real-time PCR（实时荧光定量PCR）和Reverse transcription PCR（反转录PCR）看起来都可以缩写为RT-PCR，但是，国际上的约定俗成的是：RT-PCR特指反转录PCR，而Real-time PCR一般缩写为qPCR（quantitative real-time PCR）。

更正楼主的观点：qPCR不一定与反转录相关，除了可以用cDNA作为模板，也可以用基因组DNA等作为模板。

而反转录PCR也不一定非要与荧光定量相关，从mRNA中反转录得到cDNA，然后PCR扩增出目的基因，这也是反转录PCR。

综上，那RT-qPCR（也有人写成qRT-PCR）就很好理解了，就是结合了荧光定量技术的反转录PCR：先从RNA反转录得到cDNA（RT），然后用Real-time PCR进行定量分析（qPCR）。

有兴趣的话可以看看维基百科：/wiki/Reverse_transcription_polymerase_chain_reactionReverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) is a variant of polymerase chain reaction (PCR), a laboratory technique commonly used in molecular biology to generate many copies of a DNA sequence, a process termed "amplification". In RT-PCR, however, an RNA strand is first reverse transcribed into its DNA complement (complementary DNA, or cDNA) using the enzyme reverse transcriptase, and the resulting cDNA is amplified using traditional PCR or real-time PCR. Reverse transcription PCR is not to be confused with real-time polymerase chain reaction (Q-PCR/qRT-PCR), which is also sometimes。

逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)

1．随机六聚体引物：当特定 mRNA 由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一丌特异的引物来拷贝全长 mRNA。用此种方法时，体系中所有 RNA 分子全部充当了 cDNA 第一链模板，PCR 引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的 cDNA 中 96%来源于 rRNA。 2． Oligo(dT)：是一种对 mRNA 特异的方法。因绝大多数真核细胞 mRNA 具有 3’端 Poly(A+)尾，此引物不其配对，仅 mRNA 可被转录。由于 Poly(A+)RNA 仅占总 RNA 的 1-4%，故此种引物合成的 cDNA 比随机六聚体作为引物和得到的 cDNA 在数量和复杂性方面均要小。 3．特异性引物：最特异的引发方法是用含目标 RNA 的互补序列的寡核苷酸作为引物，若 PCR 反应用二种特异性引物，第一条链的合成可由不 mRNA 3’端最靠近的配对引物起始。用此类引物仅产生所需要的 cDNA，导致更为特异的 PCR 扩增。三、试剂准备 1．RMA 提取试剂 2．第一链 cDNA 合成试剂盒 3．dNTPmix：含 dATP、dCTP、dGTP、dTTP 各 2mM 4．Taq DNA 聚合酶四、操作步骤 1. 总 RNA 的提取：见相关内容。 2. cDNA 第一链的合成：目前试剂公司有多种 cDNA 第一链试剂盒出售，其原理基本相同，但操作步骤丌一。现以 GIBICOL 公司提供的 SuperScriptTM Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 试剂盒为例。
分子生物学实验技术共 6 个视频，包括:DNA 甲基化检测、分子克隆技术、高分辨溶解曲线分析技术（HRM）、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、荧光定量 PCR（real time QPCR）、原位杂交（ISH）。

rt-pcr生物化学名词解释

rt-pcr生物化学名词解释
RT-PCR是实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time Polymerase Chain Reaction）的缩写，是一种用于检测和定量DNA
或RNA的技术。

这种技术结合了PCR和荧光探针技术，能够在PCR
反应进行的同时实时监测DNA或RNA的扩增过程。

RT-PCR的原理是
利用DNA聚合酶酶在适当的温度下复制DNA或RNA片段，然后通过
荧光信号的累积来实时监测扩增过程。

这种技术可以用于检测病原体、基因表达分析、疾病诊断等领域，具有高灵敏度、高特异性和
高准确性的特点。

RT-PCR的步骤包括，提取RNA或DNA样本、反转录（RT）将RNA转化为cDNA（如果是RT-PCR）、PCR扩增、实时荧光信号监测
和数据分析。

这些步骤需要精确的实验操作和严格的质量控制，以
确保结果的准确性和可靠性。

RT-PCR在医学、生物学、遗传学和疾病研究等领域具有广泛的
应用。

例如，在病毒性疾病的诊断中，RT-PCR可以检测病毒的RNA，帮助医生确认病毒感染。

在基因表达分析中，科研人员可以利用
RT-PCR来定量特定基因的表达水平，从而研究基因调控和信号通路。

总之，RT-PCR作为一种重要的分子生物学技术，对于科学研究和临床诊断具有重要意义。

分析 Rt-PCR

分析 Rt-PCRPCR 全称聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），指利用 Taq 和/或 Pfu 核酸酶惊醒的体外特异性扩增某特定核算序列Rt-PCR 一般指反转录 PCR （Reverse Transcription PCR）其实就是将 PCR 与反转录结合，这样就可以获得多克隆的某一特异的RNA 片段（通常是 mRNA）。

首先将提取的 RNA 逆转录为 cDNA ，之后与常规 PCR 全都。

引物与常规 PCR 没有太大不同（序列特异性引物或随机引物）有时候会用 mRNA 的特异性引物 Oligo dT（针对 mRNA 的标志性 poly - A 尾）。

通常Rt-PCR 是为了分析细胞中蛋白质表达状况，会以细胞中自然表达的 beta-actin 作为内参分析蛋白质表达状况（beta-actin 认为是管家基因，在同种细胞中表达恒定）qPCR 指荧光实时定量 PCR （Quantitative real-time PCR），有时也会被称作实时/定量 PCR （Rt-PCR）。

qPCR 使用一种特别的探针—— Taqman 探针，其结构为一个 RNA 探针，两端分别加上一个发光基团 R 和一个吸光基团 Q 。

而且 qPCR 不使用 Taq 聚合酶，由于 Taq 缺乏其他 DNA 聚合酶拥有的 5 - 3 外切酶结构域及其即时矫正机制。

简洁说，就是rt和q都是常规PCR的变种。

此时R与Q同在探针上，距离较近，R产生的荧光被Q汲取，所以不显出荧光；当互补链DNA合成时，DNA聚合酶向下游移动，其5 - 3外切酶结构域就会切割探针，依次释放出R和Q。

自由的R与Q距离较远，相互之间没有互作，所以不会影响R的荧光。

定义新参数Ct值（Cycle threshold，循环阈值）：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经受的循环数。

阈值通常设定为3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍（为什么这么设定？可能只是商定俗成吧我不了解）。

名词解释(分子生物学)