抗菌药物敏感性试
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抗菌药物敏感性试验规范化 卫生部北京医院 艾效曼
• 学习目标 1 、了解抗菌药物敏感性试验的意义、我国抗菌药物敏感性试验应遵循的规 则。 2 、掌握纸片扩散法和 E 试验原理，牢记试验的操作步骤及各步骤中的注意 事项，在日常工作中进行规范化的操作。
• 抗菌药物敏感性试验的意义是什么？我国抗菌药物敏感性试验应遵循哪些规 则？ 一、基本内容 （一） 药敏试验的意义：
• 培养基的制作过程中最重要的是厚度，即厚度 4mm 是最 重要的因素。（如图）
•
• 2. 接种物的制备 1). 直接菌落悬液法多用，广泛 2). 生长法少用，局限性 3). 注意事项：
• 嗜血杆菌、淋球菌配制菌悬液必须采用巧克力培养基上的菌落作直接 悬浮法。菌液浓度应严格要求 0.5 麦氏单位。选取新鲜的纯菌落，配 置 0.5 麦氏单位的菌悬液，：接种物浊度调整好后，最好在 15 分钟 内接种，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用 力挤压几次，挤出多余的接种菌液。用棉拭子在无菌的稍干燥的 M-H 琼脂表面划线接种，再重复操作两次，每次将平板转动约 60 度，保 证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹琼脂的边缘。在加含药的纸片 之前，可以将培养皿盖半开 3-5 分钟，但不超过 15 分钟，促使表面 过多的水分被吸收。
• 目前世界上通用的规则是德国和欧洲标准，而我国主要以临床试验室标准化 委员会（ CLSI ），即美国国家实验室标准委员会 (NCCLS) 的规则为标准， 这个标准主要包括 CLSI 纸片扩散法（ M2 ）和需氧菌稀释法（ M7 ）。
• （三）、抗菌药物敏感性试验结果参照标准 • 1.标准的正确使用 • M100 – 即新表 M100-S17 ，每年更新 1 次；包括 M2 和 M7 文件， M2 – 即
• 1.查出耐药，减少治疗错误，便于医生选择个体化疗方案、节省费用。 • 2. 进行 耐药监测 ，为医院感染控制部门提供防治依据，为经验用药提供可靠
依据。 • 3.利用耐药监测结果控制抗菌药物应用，减少耐药菌株的出现，延长新药使
用寿命。 • 4. 为新药的研究和评估提供有价值的信息。 • （二）、药物敏感试验规则
续发生株的测试原则；不适于尿中分离菌的药物，大环内酯类的说明；革兰 阴性菌及阳性菌的更新部分；质量评估和质量控制方面的更新。 • （五）、试验与报告中抗菌药物的选择 • M-100 表将抗菌药物分成 A.B.C.U.O 组 • 1 、 表 1 和表 1A 中所列 A 组药物被认为对特定菌群的常规的首选试验组合 以及常规结果报告中应该出现的药物。 • 2 、 B 组包含一些临床上重要的，特别是针对医院内感染的药物，也可以用 于首选试验。但是，它们只是被选择性地报告，例如当细菌对 A 组同类药物 耐药时，可以选用。其他报告指征可包括以下几点：特定的标本来源 ( 如对 脑脊液中的肠道杆菌用三代头孢菌素或者对泌尿道的分离菌株用 TMP/SMZ) ； 多种细菌感染；多部位感染；对 A 组药物过敏、耐受或无效的病例；为流行 病学调查目的向感染控制组报告。 • 3 、 C 组包括替代性或补充性抗菌药物，可在以下情况进行试验：某些单位 隐匿局部或广泛流行的对数种基本药物耐药的菌株；治疗对基本药物过敏的 患者；治疗少见菌的感染 ( 如氯霉素对沙门菌属或某些假单胞菌属 ) ；为流 行病学目的向感染控制组报告。
纸片扩散法 (DD) 文件 M2-A9 ， M7 – 即 MIC 文件 M7-A7 。 M2 、 M7 文 件每 3 年更新一次 ；使用文件时应注意文件是否已更新，避免使用旧文件造 成判断结果失误。
• 2.获得文件的方法 • 如果购买厂家的纸片可向厂家索取标准，每年国际化会议也会颁发此文件的
中心内容。
• 1.培养基制备及种类 • 操作流程图
• 注意事项： 1.全程无菌操作 2. 湿度控制 3. 胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶的影响 4. 培养基用水
• 培养基种类 1.Mueller-Hinton 琼脂培养基（非苛氧菌） 2. HTM 培养基：其组成成分如下： M-H 琼脂粉； 15μ ɡ /ml 牛羟基血红素； PH7.2-7.4 ； NCCLS 不推荐用 M-H 巧克力培养基作嗜血杆菌药敏试验。（嗜血杆菌） 3.GC 琼脂 . 此补充品 ( 1 升 水中加入 1.1g L- 胱氨酸， 0.03g 盐酸鸟嘌呤， 3mg 盐酸硫胺， 13mg 对鞍基苯甲 酸， 0.01g 维生素 B12 ， 0.1g 辅羧酶， 0.25gNAD ， 1.0g 腺嘌呤， 10gL- 谷氨酰胺， 100g 葡萄糖，和 0.2g 硝酸铁 ) 是在 GC 琼脂高压灭菌后加入的 . （淋病奈瑟菌） 4. 5 － 7% 脱纤维羊血的 M-H 琼脂（链球菌）
• （四）、 CLSIM-100 表内容： • CLSIM-100 表主要包括版本中的更新要点、各版本抗菌药物分组、 M2 纸片
扩散法用的表、 M7 MIC 用的表、 M7 MIC 用的表及词汇表等内容。
• 2007 年主要更新内容 • 有关“或”的章节 ，即同类抗生素能否相互替代的问题；耐药性的增长及连
• （六）、试验操作的基本原则 • 1. 临床标本不能直接做药敏试验，目的以准确结果回报临
床。 • 2. 不应在同一平板做混合菌药敏试验。 • 3. 与感染无关菌株（定植菌）不做药敏试验。 • 4. 判断标准：一菌一药一规则。
• 二、方法分类简介及标准化操作流程
• 药敏试验分为以下实验方法：纸片扩散法 、 Etest 法 、 琼脂对倍稀释法 、肉汤对倍稀释法 、仪器法。
• （一wenku.baidu.com纸片扩散法
• 主要介绍内容包括：纸片扩散法的原理、培养基的制备、 接种物的制备及接种、贴药敏纸片、孵育与判读。
• 1 、 KB 法原理 ：将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸 片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上。经培养后， 可在纸片周围出现无细菌生长区，称抑菌环。测量抑菌环 的大小，根据判读标准即可判定该细菌对某种药物的敏感 程度。
• 4 、 U 组 (“ 泌尿道” ) 列出了某些仅用于治疗泌尿道感染 的抗微生物药 ( 如呋喃妥因和某些喹诺酮类药物 ) 。除泌 尿道，其它感染部位分离的病原菌不用此组药物进行试验。
• 5 、 O 组 (“ 其它” ) 对该组细菌有临床适应症但一般不允 许常规试验与报告的药物。
• 6 、 Inv 组 (“ 研究性” ) 对该菌群作研究用且尚未经 FDA 批准的药物。
• 学习目标 1 、了解抗菌药物敏感性试验的意义、我国抗菌药物敏感性试验应遵循的规 则。 2 、掌握纸片扩散法和 E 试验原理，牢记试验的操作步骤及各步骤中的注意 事项，在日常工作中进行规范化的操作。
• 抗菌药物敏感性试验的意义是什么？我国抗菌药物敏感性试验应遵循哪些规 则？ 一、基本内容 （一） 药敏试验的意义：
• 培养基的制作过程中最重要的是厚度，即厚度 4mm 是最 重要的因素。（如图）
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• 2. 接种物的制备 1). 直接菌落悬液法多用，广泛 2). 生长法少用，局限性 3). 注意事项：
• 嗜血杆菌、淋球菌配制菌悬液必须采用巧克力培养基上的菌落作直接 悬浮法。菌液浓度应严格要求 0.5 麦氏单位。选取新鲜的纯菌落，配 置 0.5 麦氏单位的菌悬液，：接种物浊度调整好后，最好在 15 分钟 内接种，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用 力挤压几次，挤出多余的接种菌液。用棉拭子在无菌的稍干燥的 M-H 琼脂表面划线接种，再重复操作两次，每次将平板转动约 60 度，保 证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹琼脂的边缘。在加含药的纸片 之前，可以将培养皿盖半开 3-5 分钟，但不超过 15 分钟，促使表面 过多的水分被吸收。
• 目前世界上通用的规则是德国和欧洲标准，而我国主要以临床试验室标准化 委员会（ CLSI ），即美国国家实验室标准委员会 (NCCLS) 的规则为标准， 这个标准主要包括 CLSI 纸片扩散法（ M2 ）和需氧菌稀释法（ M7 ）。
• （三）、抗菌药物敏感性试验结果参照标准 • 1.标准的正确使用 • M100 – 即新表 M100-S17 ，每年更新 1 次；包括 M2 和 M7 文件， M2 – 即
• 1.查出耐药，减少治疗错误，便于医生选择个体化疗方案、节省费用。 • 2. 进行 耐药监测 ，为医院感染控制部门提供防治依据，为经验用药提供可靠
依据。 • 3.利用耐药监测结果控制抗菌药物应用，减少耐药菌株的出现，延长新药使
用寿命。 • 4. 为新药的研究和评估提供有价值的信息。 • （二）、药物敏感试验规则
续发生株的测试原则；不适于尿中分离菌的药物，大环内酯类的说明；革兰 阴性菌及阳性菌的更新部分；质量评估和质量控制方面的更新。 • （五）、试验与报告中抗菌药物的选择 • M-100 表将抗菌药物分成 A.B.C.U.O 组 • 1 、 表 1 和表 1A 中所列 A 组药物被认为对特定菌群的常规的首选试验组合 以及常规结果报告中应该出现的药物。 • 2 、 B 组包含一些临床上重要的，特别是针对医院内感染的药物，也可以用 于首选试验。但是，它们只是被选择性地报告，例如当细菌对 A 组同类药物 耐药时，可以选用。其他报告指征可包括以下几点：特定的标本来源 ( 如对 脑脊液中的肠道杆菌用三代头孢菌素或者对泌尿道的分离菌株用 TMP/SMZ) ； 多种细菌感染；多部位感染；对 A 组药物过敏、耐受或无效的病例；为流行 病学调查目的向感染控制组报告。 • 3 、 C 组包括替代性或补充性抗菌药物，可在以下情况进行试验：某些单位 隐匿局部或广泛流行的对数种基本药物耐药的菌株；治疗对基本药物过敏的 患者；治疗少见菌的感染 ( 如氯霉素对沙门菌属或某些假单胞菌属 ) ；为流 行病学目的向感染控制组报告。
纸片扩散法 (DD) 文件 M2-A9 ， M7 – 即 MIC 文件 M7-A7 。 M2 、 M7 文 件每 3 年更新一次 ；使用文件时应注意文件是否已更新，避免使用旧文件造 成判断结果失误。
• 2.获得文件的方法 • 如果购买厂家的纸片可向厂家索取标准，每年国际化会议也会颁发此文件的
中心内容。
• 1.培养基制备及种类 • 操作流程图
• 注意事项： 1.全程无菌操作 2. 湿度控制 3. 胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶的影响 4. 培养基用水
• 培养基种类 1.Mueller-Hinton 琼脂培养基（非苛氧菌） 2. HTM 培养基：其组成成分如下： M-H 琼脂粉； 15μ ɡ /ml 牛羟基血红素； PH7.2-7.4 ； NCCLS 不推荐用 M-H 巧克力培养基作嗜血杆菌药敏试验。（嗜血杆菌） 3.GC 琼脂 . 此补充品 ( 1 升 水中加入 1.1g L- 胱氨酸， 0.03g 盐酸鸟嘌呤， 3mg 盐酸硫胺， 13mg 对鞍基苯甲 酸， 0.01g 维生素 B12 ， 0.1g 辅羧酶， 0.25gNAD ， 1.0g 腺嘌呤， 10gL- 谷氨酰胺， 100g 葡萄糖，和 0.2g 硝酸铁 ) 是在 GC 琼脂高压灭菌后加入的 . （淋病奈瑟菌） 4. 5 － 7% 脱纤维羊血的 M-H 琼脂（链球菌）
• （四）、 CLSIM-100 表内容： • CLSIM-100 表主要包括版本中的更新要点、各版本抗菌药物分组、 M2 纸片
扩散法用的表、 M7 MIC 用的表、 M7 MIC 用的表及词汇表等内容。
• 2007 年主要更新内容 • 有关“或”的章节 ，即同类抗生素能否相互替代的问题；耐药性的增长及连
• （六）、试验操作的基本原则 • 1. 临床标本不能直接做药敏试验，目的以准确结果回报临
床。 • 2. 不应在同一平板做混合菌药敏试验。 • 3. 与感染无关菌株（定植菌）不做药敏试验。 • 4. 判断标准：一菌一药一规则。
• 二、方法分类简介及标准化操作流程
• 药敏试验分为以下实验方法：纸片扩散法 、 Etest 法 、 琼脂对倍稀释法 、肉汤对倍稀释法 、仪器法。
• （一wenku.baidu.com纸片扩散法
• 主要介绍内容包括：纸片扩散法的原理、培养基的制备、 接种物的制备及接种、贴药敏纸片、孵育与判读。
• 1 、 KB 法原理 ：将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸 片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上。经培养后， 可在纸片周围出现无细菌生长区，称抑菌环。测量抑菌环 的大小，根据判读标准即可判定该细菌对某种药物的敏感 程度。
• 4 、 U 组 (“ 泌尿道” ) 列出了某些仅用于治疗泌尿道感染 的抗微生物药 ( 如呋喃妥因和某些喹诺酮类药物 ) 。除泌 尿道，其它感染部位分离的病原菌不用此组药物进行试验。
• 5 、 O 组 (“ 其它” ) 对该组细菌有临床适应症但一般不允 许常规试验与报告的药物。
• 6 、 Inv 组 (“ 研究性” ) 对该菌群作研究用且尚未经 FDA 批准的药物。