Octet生物分子相互作用仪
Fortebio生物分子相互作用检测平台-中文版
ForteBio Inc.—艾瑞生物技术（上海）有限公司
• 公司的历史：
• 2004年成立，在美国加州Menlo Park, 英国London, 和中国 • 上海建有生产和技术中心
• 独到的技术：
• 新一代的label-free technology • 生物膜干涉技术BioLayer Interferometry Technology（ BLI ）
两个反射表面间距的改变对干涉光强度的影响
Relative Intensity
Internal Reference (reflection surface 1)
100%
Distance between the two reflecting
ℓ surfaces =
Interface with Liquid (reflection surface 2)
Minimum Sample Volume Dynamic Range Direct Q动态 范围浓度 (At high and low flow rates) Affinity range (approximate) 亲和力分析浓度 RMS System Noise系统方差 Read Capabilities使用范围 Sample Usage样品使用 Temperature Control控温 21 CFR Part 11 Compliance
ForteBio Octet的应用
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• Binding KD亲和力检测 • On and off rates
• 结合解离速率
• Rank order
• 比较亲和力和结合解离速率的高低
Specificity of binding 结合特异性 • Yes / No kinetic screening动力学筛选 • Epitope binning（竞争）/ mapping（定位）
Fortebio Octet BLI 实验设计及数据获取-小分子动力学
Small Molecule Kinetics Assay:概述：Octet可检测分子量为150 Da~1000 Da的小分子与蛋白间相互作用。
该SOP的目的在于为小分子动力学检测提供通用标准化流程，针对具体分子及特殊情况，可能需要进一步考虑更多细节及优化。
此外，该SOP假定所有使用者已经过ForteBio应用科学家上机培训，如若不然，请在培训完成后参考该SOP。
考量及建议：1.检测小分子时，应当使用SSA sensor（Cat# 18-0008 and 18-0009），该sensor是ForteBio公司目前唯一具备检测小分子灵敏度的传感器。
2.用于与小分子结合的蛋白或抗体必须先进行生物素化。
请参阅ForteBio技术说明书。
3.建议assay buffer为PBS+0.1%BSA+0.02%TW20+5%DMSO（如果为水溶性小分子，则无需加DMSO等有机溶剂）；4.设置protocol时，须设置两组SSA sensor，运行中第1组为实际检测用sensor，第2组为生物胞素（biocytin）封闭后、用作阴性对照的sensor。
5.检测sensor与对照sensor间运行步骤数以及各步运行时间必须一致——任何偏差将导致数据无法分析。
6.用于loding的生物素化蛋白浓度建议采用50ug/ml。
如蛋白很小或容易产生空间位阻，可能需要进行定量。
如蛋白较宝贵，其用量可以更低，但随后的结合效率可能会有所折扣（17kDa的蛋白在推荐浓度下3min后可产生2nm的shift）。
蛋白生物素化7.如果需要有机溶剂溶解小分子，稀释样品时DMSO最终浓度建议保持在5%以内（例如：溶于100%DMSO中20mM的样品，按照1:20溶于PBS后其浓度为1mM，DMSO为5%）。
8.建议对样品进行两轮筛选。
例如，第1轮宽泛筛选，浓度为100,10,1,0.1uM，确定样品大概Kd范围；第2轮更精细筛选：30,10,3.3,1.1uM（或者2被剃度稀释）获取高度可信的Kd。
分子相互作用仪
分子相互作用仪
分子相互作用仪是紫外可见光谱仪的一种，它可以用应用于各种化学及物理研究，用
以测定分子间的氢键，疏水轨道，硫键，氮键和静电力等分子间的相互作用。
它基于可变
温度光谱学和可变温度极化光谱学来看到被测物质特征衍射或粒子衍射光谱，以帮助研究
人员分析汽液平衡，形成气液混合状态，及聚合物的形成过程以及阻塞物质的反应速率等。
分子相互作用仪的操作原理是通过变温度的极化光谱学来将分子间的相互作用测定出来。
在常温情况下，研究人员可以检测到分子相互作用或物理相互作用，比如氢键，疏水
轨道等；在高温和低温情况下可以检测到分子相互作用，比如硫键和氮键等；而且还可以
检测不同温度下分子间的氢键与另一种类型的分子间相互作用的变化情况，可以用于研究
分子间的力学。
分子相互作用仪主要由操作部分和检测部分组成。
主要的操作部件包括光源，探测器，操纵玻璃，滤波器，红外探测器，显示和控制电路等。
检测部分除了主要的探测仪器系统外，还配备有微型温度控制模块，以控制测定温度的变化情况。
分子相互作用仪能够检测分子与分子间的相互作用，以及分子间的结构和力学效果，
这对于合成新材料、研究汽液分子平衡、分析生物分子以及聚合物及分子在气液界面凝聚、利用有机分子衍射研究物质结构、研究气体析出及冷凝机理等方面有很重要的作用。
它还
可以更新分子间的旋转及振动信息，用以研究性质的变化和参数的化学动力学模型的获取。
Fortebio Octet 生物膜干涉技术(BLI)常见问题解答-第二版
生物膜干涉技术(BLI) 常见问题解答（第二版）目录缩写说明 (2)动力学相关术语 (2)传感器和仪器相关术语 (2)生化相关术语 (3)1 实验基本常识 (3)1.1如何自学 (3)1.2关于动力学 (3)1.3关于耗材与样品要求 (5)1.4关于生物膜干涉技术 (7)1.5软件与硬件性能参数 (8)1.6关于应用 (11)1.7关于基本操作 (11)2 动力学实验设计与操作 (15)2.1 关于固化和传感器的选择 (15)2.2 关于结合和解离 (19)2.3 关于传感器再生 (20)2.4 小分子检测 (21)2.5 动力学实验操作 (23)2.6 动力学实验数据处理 (29)2.7实验常见问题（动力学部分） (39)3 定量实验设计与操作 (44)3.1定量实验设计 (44)3.2 定量实验操作 (46)3.3定量实验数据处理 (48)3.4实验常见问题（定量部分） (51)4 仪器维护与硬件问题 (51)5 联系我们 (55)缩写说明动力学相关术语k on或k a：结合速率常数，单位M-1s-1k off或者k d：解离速率常数，单位s-1K D：亲和力常数（解离平衡常数），单位Mk obs：表观结合常数[C]：分析物浓度Ligand：配体，即固化在传感器上的物质Analyte：分析物，即与固化物质结合的物质R max：理论上分析物结合信号的最大值，即所有ligand均被analyte结合后所获得的信号Req：分析物结合达到平衡时的信号值Initial slope：起始斜率BLI：生物膜干涉技术Baseline：平衡步骤Association：结合步骤Dissociation：解离步骤Loading：固化步骤传感器和仪器相关术语SA：链霉亲和素传感器SSA：超级链霉亲和素传感器APS：氨基丙基硅烷传感器AR2G：氨基偶联传感器AHC：抗人免疫球蛋白Fc段传感器AHQ：人免疫球蛋白定量传感器AMQ：鼠免疫球蛋白定量传感器AMC：抗鼠免疫球蛋白Fc段传感器NTA：镍离子传感器anti-His：抗组氨酸标签传感器anti-GST：抗GST标签传感器Capture类传感器：除去SA，SAX，SSA，AR2G，APS外的传感器Octet：Octet家族仪器，包含Octet RED，RED96，QK，QKe，QK384，RED384，HTX，K2RED系列仪器：RED，RED96，RED384，K2QK系列仪器：QK，QKe，QK384生化相关术语EDC：1-(3-二甲基氨丙基) -3-乙基-碳化二亚胺NHS：N-羟基琥珀酰亚胺HRP：辣根过氧化物酶DAB：二氨基联苯胺，一种HRP的底物，在HRP催化后可以生成金属沉淀EMSA：电泳迁移率实验，用来研究DNA和蛋白的结合Epitope binning：表位分析His-tag：组氨酸标签Co-IP：免疫共沉淀PBS：磷酸盐缓冲液BSA：牛血清白蛋白hIgG：人免疫球蛋白mIgG：鼠免疫球蛋白1:1反应：一份的ligand与一份的analyte形成一份的产物，即两者只有一个结合位点2:1反应：Ligand上有2个可以和analyte的结合位点，并且两者独立1:2反应：Analyte上有2个可以和ligand结合的位点，并且两者独立1 实验基本常识1.2关于动力学1.2.1 k on, k off, K D值各代表什么意义？生物分子间的相互作用一般视为可逆反应。
oct检测原理
Oct检测，全称为Octet Multiplexing Technology，是一种先进的生物分子相互作用分析技术。
它通过测量生物分子之间相互作用的强度和频率，来获取关于这些分子的信息。
这种技术在生物科学、药物研发、环境监测等领域有着广泛的应用。
Oct检测的基本原理是利用生物分子之间的特异性相互作用，通过改变溶液中的条件（如温度、pH值、离子浓度等），使得这些相互作用发生变化，从而影响到生物分子的运动状态。
然后，通过测量这些变化，就可以得到关于生物分子的信息。
Oct检测的具体步骤如下：1. 首先，将待测的生物分子固定在一个微小的颗粒上，这个颗粒被称为“Octet”。
2. 然后，将这个Octet放入到一个充满溶液的容器中。
在这个容器中，生物分子可以自由地运动。
3. 接着，通过改变溶液中的条件，使得生物分子与Octet之间的相互作用发生变化。
这种变化可以通过测量Octet在水中的沉降速度来反映。
4. 最后，通过对这些数据的分析，就可以得到关于生物分子的信息。
例如，如果生物分子与Octet之间的相互作用增强，那么Octet的沉降速度就会变慢；反之，如果这种相互作用减弱，那么Octet的沉降速度就会变快。
Oct检测的优点主要有以下几点：1. 高灵敏度：Oct检测可以检测到非常微弱的生物分子相互作用，这使得它在研究一些难以检测的生物过程时具有很大的优势。
2. 高分辨率：Oct检测可以区分出不同的生物分子，这使得它在研究复杂的生物系统时具有很大的优势。
3. 实时性：Oct检测可以在非常短的时间内得到结果，这使得它在需要快速反应的应用中具有很大的优势。
4. 无标记：Oct检测不需要对生物分子进行任何化学修饰，这使得它在研究活体细胞时具有很大的优势。
总的来说，Oct检测是一种非常强大的生物分子相互作用分析技术，它的出现极大地推动了生物科学的发展。
最新的分子间相互作用分析仪MST
蛋白来发光(NT.115 系统)，也可以用色氨酸自发荧光来检测(belFree 系统)。 荧光分子或颗粒最初是自由均匀分布的。在红外激光照射下，分子收到热泳动的作用力，而移出加热区域，最后分
子在热泳动作用力和质量扩散作用力下达到平衡，形成稳定态。在关闭激光后，分子扩散重建均匀分布状态。下图显示 了该过程。
您可以测量 sub-nM 到 mM 间的亲和力 belFree: 测量内在荧光 您不需要经过标记步骤，因而能测量一些对标记过程敏感的蛋白，如跨膜受体 该系统非常敏感，甚至能检测靶标分子微小的基团的修饰 该系统能精确测量各种结合物，包括极弱甚至无内在荧光的分子，如核酸、糖、多数小分子和很多蛋白 您可以测量 10nM 到 mM 间的亲和力
主要特点： NanoTemper 独特的 MST 技术，可应用于： ☆ 直接在生物溶液环境中测量任何（生物）分子间亲和力(KD, 解离常数) ☆ 研究血清、细胞裂解液或其它生物溶液对生物分子的作用，并且能够分离出真正的结合过 ☆ 直接在细胞膜上研究膜结合蛋白 ☆ 研究溶液中酶活性、复合物形成、定向组装过程的多组分反应或者生化成分 ☆ 使用荧光标记竞争物以无标记的方式获得更大的筛选项目 (“竞争性 MST” ) ☆ 一个靶标上不同结合位点的区分 ☆ 研究酶动力学(vmax, kcat) ☆ 研究化学计量学并确定生物分子结合位点的数目 ☆ 研究结合能量学 ΔG (自由能 ), ΔH (焓) and ΔS (熵) ☆ 直接测量或是在竞争性实验中研究抑制物亲和力 Ki ☆ 这个方向是 MST 最常用的应用，一个结合物浓度固定，另一个梯度变化…不同于直接相互作用，这写实验中 的荧光信号是被竞争物挤下来的分子发出的，用于研究竞争性结合物的结合能力…该研究使用与确定靶分子上的配体结 合位点…该研究用于测定反应中的热力学参数，包括焓和熵… 应用说明： ☆ 直接相互作用 ☆ 竞争性相互作用
PLEXERA生物分子相互作用仪操作规程
PLEXERA生物分子相互作用仪（SPR-i）操作规程开机，先开电脑，再开SPRi，关机相反。
测试前准备：检查regenerant(甘胺酸,PH=2,10mM), buffer（PBS-T 0.05%T），封闭液Blocking(乙醇胺)样品制作在制样品中完成，压5-10分钟左右，完成后检查是否有气泡，检查两个小洞是否被堵。
上样前要进行3次Initial Prime, 2次regenerant Prime, 1次Initial Prime.上样时，先把芯片背面用丙酮擦拭干净，后要把芯片往里推到位，装进后要反扣下来。
加折射油：折射率匹配油要滴在正中央，在接触折射油的瞬间压下去。
正式测试及参数设置：1.启动PLEXERA INSTRUMENT CONTROL SOFTW ARE在INSTRUMENT SETUP中设置FLOW CELL（25）度和96孔板温度，打开H2O/BUFFER DEGASSER=ON WATER SENSOR=OFF(已经坏了)；确认重生，缓冲，及废液正常。
2.点LOAD INSTRUMENT1》如果有旧芯片，可以用它来做维护。
PRIME是对系统进行冲洗并保证系统缓冲溶液均一性，并扣除可能气泡。
一般重复3次。
2》load reagents,查检输液管对应试剂瓶溶液，PRIME 2次3》用酒精轻轻擦拭棱镜和实验芯片背面。
加折射油，装芯片。
4》load＆ｐｒｉｍｅｆｌｏｗｃｅｌｌ，ｆｌｏｗｒａｔｅ设为30 ul, Duration 60sec, 使CELL中冲满溶液。
3.运行PRIME SYSTEM一次，准备完毕。
实验方案设计：(一)WIZARD 2ml(PE)是BIG1-BIG6; 1ml管是SMALL1-SMALL2, 96孔板是A1-H12.(二)根据样品量，一般为700ml左右，设置流速与时间，一般REEAGENT,选择3X300，后把时间设定到当前。
(三)改变LOCATION 一般把A12改为BIG6. FLOW RATE 改为2，ASSOCIATION/DISSOCIATION DURATION都改为300，再依次改INITIAL BASELINE…; BASELINESTABILIZATION BEFORE..,再改REGENERATAFTER …,选择FIRST REGEN SOLUTION=REG.1.POST-RUN 过夜时候使用，让系统慢慢流动。
Fortebio Octet BLI 蛋白生物素标记应用指南
蛋白的生物素标记操作指南（Octet分子互作仪器测定专用）概述链霉亲和素与生物素之间的相互作用是目前已知强度最高的非共价作用，并且二者的结合稳定性好，专一性强，不受试剂浓度，pH环境，抑或蛋白变性剂等有机溶剂影响。
因此，链霉亲和素与生物素快速，稳定和不可逆非共价的结合被广泛应用于研究生物分子间的相互作用。
Octet平台的链霉亲和素（SA/SAX/SSA）生物传感器已被开发用于蛋白定量和动力学，结合在SA//SAX/SSA传感器上的第一个蛋白质必须进行生物素化标记。
为方便利用Octet平台上的SA/SAX/SSA传感器进行动力学和定量分析，特制订本指南为利用生物素化试剂标记目标蛋白提供指导。
生物素试剂的选择Biotin为例。
生物素化试剂建议购买小包装，使用DMSO溶解配制成10 mM母液保存于-20℃备用。
产品货号：21312的NHS-PEG12-Biotin为例：10 mM母液的配制案例=（生物素化试剂质量1mg）÷（生物素分子量941 Da）×100=0.106 mL，1 mg生物素化试剂溶于0.106 mL DMSO中即为10 mM母液。
氨基偶联生物素化试剂反应示意图实验试剂和耗材1)缓冲液：DMSO，1×PBS，PBST（PBS+0.02% tween20）2)掌上离心机，一台3)生物素标记试剂EZ-Link NHS-PEG12-Biotin (Thermo，货号：21312) 1 mg，加入0.106 mL的DMSO配置成10 mM母液4)PD Min iTrap™ G-25 Desalting Column用于脱盐，蛋白样品体积0.1-0.5 mL，(GE, 货号：28-9180-07 )。
5)Zeba desalting spin columns脱盐柱：a)蛋白样品体积30-130 uL,使用0.5 mL脱盐柱(Thermo, 货号：89882)b)蛋白样品体积200-700 uL,使用2 mL脱盐柱(Thermo, 货号：89889)c)蛋白样品体积600-2000 uL,使用5 mL脱盐柱(Thermo, 货号：89891)6)透析装置：Slide-A-Lyzer™ Dialysis Cassettes（Thermo，具体型号根据目标蛋白样品体积以及目标蛋白的分子量进行选择。
sartorius_octet-r8原理_概述及解释说明
sartorius octet-r8原理概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在对Sartorius Octet-R8原理进行概述和解释说明。
该仪器是一种高精度生物分析设备，广泛应用于生物制药领域和蛋白质研究领域等。
通过深入了解Octet-R8的技术背景、原理概述、功能和特点，以及其在不同领域中的应用，读者将更全面地了解这一先进仪器。
1.2 文章结构本文将按以下结构进行组织：引言部分首先对文章进行概述，介绍Octet-R8的背景信息，并阐明文章目的；随后，“Sartorius Octet-R8原理”部分将详细探讨其技术背景、原理概述以及功能和特点；接下来，“Octet-R8的应用领域”部分将列举生物制药领域、蛋白质研究领域和其他应用领域中该仪器的具体应用；而“Octet-R8的操作和实验步骤”部分则将重点介绍仪器设置与准备工作、样品处理与靶标免疫分析设置以及数据分析与结果解释等内容；最后，在“结论”部分，本文将对研究进行总结，并对进一步展望进行讨论。
1.3 目的本文的目的是系统介绍和解释Sartorius Octet-R8仪器的原理。
通过对该仪器的技术背景和原理进行概述，在描述其功能和特点后，将进一步探讨其在生物制药领域、蛋白质研究领域以及其他应用领域中的具体应用。
同时，文章还将提供详细的操作和实验步骤，以帮助读者更好地了解如何正确操作Octet-R8，并进行数据分析与结果解释。
最终，通过对研究结果进行总结并展望未来发展趋势，旨在为读者提供全面深入的Octet-R8相关知识。
2. Sartorius Octet-R8原理：2.1 技术背景：Sartorius Octet-R8是一种生物分析仪器，专门用于实时监测和分析生物分子间相互作用的强度和亲和性。
它基于光学技术和磁珠传感器，能够进行高通量的生物相互作用实验。
2.2 原理概述：Sartorius Octet-R8使用一种称为光学全息身份验证（ForteBio）的技术来检测生物分子间的相互作用。
蛋白的生物素标记操作指南
蛋白的生物素标记操作指南（Octet分子互作仪器测定专用）概述链霉亲和素与生物素之间的相互作用是目前已知强度最高的非共价作用，并且二者的结合稳定性好，专一性强，不受试剂浓度，pH环境，抑或蛋白变性剂等有机溶剂影响。
因此，链霉亲和素与生物素快速，稳定和不可逆非共价的结合被广泛应用于研究生物分子间的相互作用。
Octet平台的链霉亲和素（SA/SAX/SSA）生物传感器已被开发用于蛋白定量和动力学，结合在SA//SAX/SSA传感器上的第一个蛋白质必须进行生物素化标记。
为方便利用Octet平台上的SA/SAX/SSA传感器进行动力学和定量分析，特制订本指南为利用生物素化试剂标记目标蛋白提供指导。
生物素试剂的选择Biotin为例。
生物素化试剂建议购买小包装，使用DMSO溶解配制成10 mM母液保存于-20℃备用。
产品货号：21312的NHS-PEG12-Biotin为例：10 mM母液的配制案例=（生物素化试剂质量1mg）÷（生物素分子量941 Da）×100=0.106 mL，1 mg生物素化试剂溶于0.106 mL DMSO中即为10 mM母液。
氨基偶联生物素化试剂反应示意图实验试剂和耗材1)缓冲液：DMSO，1×PBS，PBST（PBS+0.02% tween20）2)掌上离心机，一台3)生物素标记试剂EZ-Link NHS-PEG12-Biotin (Thermo，货号：21312) 1 mg，加入0.106 mL的DMSO配置成10 mM母液4)PD Min iTrap™ G-25 Desalting Column用于脱盐，蛋白样品体积0.1-0.5 mL，(GE, 货号：28-9180-07 )。
5)Zeba desalting spin columns脱盐柱：a)蛋白样品体积30-130 uL,使用0.5 mL脱盐柱(Thermo, 货号：89882)b)蛋白样品体积200-700 uL,使用2 mL脱盐柱(Thermo, 货号：89889)c)蛋白样品体积600-2000 uL,使用5 mL脱盐柱(Thermo, 货号：89891)6)透析装置：Slide-A-Lyzer™ Dialysis Cassettes（Thermo，具体型号根据目标蛋白样品体积以及目标蛋白的分子量进行选择。
生物分子相互作用仪主要功能用途
生物分子相互作用仪主要功能用途生物分子相互作用仪，听起来好像很高大上的样子，其实就是一种用来研究生物分子之间相互作用的仪器。
它的功能可大了，今天我就来给大家讲讲它的主要功能用途。
我们来说说生物分子相互作用仪的第一个功能：分析生物分子的结构和性质。
这个功能很重要，因为只有了解了生物分子的结构和性质，才能更好地研究它们之间的相互作用。
比如说，我们想知道某种药物对某种病毒的抑制作用，就需要先知道这种药物和病毒的结构和性质，才能设计出合适的实验来研究它们之间的相互作用。
接下来，我们来说说生物分子相互作用仪的第二个功能：研究生物大分子之间的相互作用。
生物大分子包括蛋白质、核酸、多糖等等，它们之间的相互作用对于生命活动非常重要。
比如说，我们想知道某种蛋白质是如何与另一种蛋白质结合的，就需要用到生物分子相互作用仪来进行研究。
除此之外，生物分子相互作用仪还有一个重要的功能：模拟生物体内的环境条件。
这个功能很重要，因为很多生物分子之间的相互作用是在特定的环境下才会发生的。
比如说，我们想知道某种药物在人体内是如何发挥作用的，就需要先在一个模拟人体内环境的条件下进行实验。
我们来说说生物分子相互作用仪的第三个功能：探索未知的生物分子相互作用。
这个功能很有趣，因为有时候我们并不知道某些生物分子之间会发生什么样的相互作用。
但是通过使用生物分子相互作用仪，我们可以预测出这些相互作用可能会是什么样子的。
这样一来，我们就可以更好地理解生命活动的机制了。
生物分子相互作用仪是一种非常重要的仪器，它可以帮助我们研究生物分子之间的相互作用，从而更好地理解生命活动的机制。
虽然它看起来有点儿高大上，但是只要用心去学习它的作用和用途，相信大家都能理解它的价值所在。
生物大分子相互作用仪
生物大分子相互作用仪生物大分子相互作用仪是一种用于研究蛋白质与其他生物大分子相互作用的仪器，也称为生物大分子相互作用分析仪。
这种仪器可以帮助科研人员深入研究生物大分子之间的相互作用，如蛋白质与DNA、RNA、小分子等。
对于开发新药物、生物工程、医学诊断等领域有着不可替代的作用。
生物大分子相互作用仪的原理主要是利用生物大分子之间的相互作用所带来的光学、物理、化学等性质来进行探究。
最常见的原理是利用生物大分子之间的亲和力或斥力，从而实现生物大分子之间的识别、绑定或分离。
相互作用的测量可以通过各种方法进行，如光学方法、质谱法、电化学法等。
生物大分子相互作用仪的组成主要包括以下三个部分：1. 光学系统：该系统可以通过吸光度、荧光、表面等离子共振等各种方法来探究生物大分子之间的相互作用，并对生物大分子的浓度、结构变化等进行分析。
2. 流动系统：这是一个用于装载生物大分子样品的系统，其主要作用是将样品引入检测仪器中进行分析。
流动系统通常包括样品载体、反应背景、供液装置等。
3. 数据分析系统：该系统包含多个算法和软件，可以根据测量结果生成生物大分子之间的相互作用曲线和热力学参数等，从而使得生物大分子之间的相互作用更清晰地呈现出来。
生物大分子相互作用仪的应用范围很广泛，下面简要介绍一下几个重点领域的应用。
1. 新药研发：在新药研发领域，生物大分子相互作用仪可以用于筛选药品与蛋白质的相互作用，优化药品的剂量、制剂等参数，评价药品的稳定性，验证药品的竞争性等等。
2. 生物工程：生物大分子相互作用仪可以用于研制新型蛋白质，开发生物技术制品，提高工艺效率，优化工艺流程等等。
3. 分子诊断：生物大分子相互作用仪可以利用分子亲和力高度选择性的特性较快地检测有特定蛋白质、糖蛋白、抗体等的样品，从而在分子诊断领域有着广泛的应用。
生物大分子相互作用仪的使用有一定的技术要求，需要了解物理、化学等相关知识，并了解仪器的使用方法。
因此，在现代生物学、生物技术、医学等领域，生物大分子相互作用仪有着广泛的应用价值，对于研究生物大分子结构与功能具有重要影响。
octetred96简明实验操作流程
octetred96简明实验操作流程Octet Red96是一款高通量生物分析仪器，被广泛应用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-配体、蛋白质-细胞之间的相互作用研究。
其操作流程基本相似，下面是Octet Red96简明实验操作流程（动力学）。
1.准备实验样品：根据实验要求，制备并稀释样品，通常是蛋白质溶液。
注意需要留出阴性对照和阳性对照，以及荧光标记的配体或细胞。
2. 运行分析软件：打开Octet Analysis软件，并选择“动力学分析”。
3.设置实验参数：在新建的动力学分析实验页面上，选择运行时间、速度、温度、读取间隔等实验参数。
根据要求选择激光波长和检测模式。
4.图像定点设置：根据阴性对照设置起始基线，以便对后续实验结果进行相对定量分析。
5.样品载板准备：将样品分别加载到不同的96孔板中。
一般使用黑色玻璃底的板，以减少背景信号。
6. 启动实验：将96孔板插入Octet Red96仪器中，点击“Run”按钮开始实验。
仪器首先会进行基线读取，然后开始检测样品与配体/细胞的相互作用。
7.数据分析：实验进行过程中，软件会实时显示传感器偶耦结果。
实验完成后，软件会自动生成动力学曲线，并提供相关数据的定量分析，如关联常数(Kd)、速率常数等。
8.结果解读：根据实验的目的和问题，对实验结果进行解读和分析。
可以根据Kd值来判断样品与配体/细胞之间的亲和性。
9.结果报告：根据实验结果，撰写实验报告或进行数据汇总，附上相应的图表和图像。
10.仪器清洗：实验结束后，将96孔板取出，将仪器内部的传感器进行清洗。
以上是Octet Red96简明实验操作流程（动力学）的详细步骤。
操作前需要充分了解实验原理和仪器操作指南，严格遵守仪器使用规定，并根据具体实验要求进行调整。
实验人员应该具备实验基础知识和技能，以保证实验结果的准确性和可靠性。
抗人白介素-17RA单克隆抗体的制备及活性检测
抗人白介素-17RA单克隆抗体的制备及活性检测徐真真;孙春昀;谢良志【摘要】目的制备具有中和人白介素-17RA (hIL-17RA)免疫活性的单克隆抗体,并探讨其生物学活性.方法通过基因工程技术制备抗hIL-17RA的单克隆抗体.采用OctetRED系统检测其亲和力,ELISA、Western blot和流式细胞术分析抗体的结合作用和种属交叉反应,人包皮成纤维细胞-1上细胞因子分泌实验检测抗体的中和活性.结果抗hIL-17RA单克隆抗体亲和力常数KD＜1.0×10-12mol/L,并与其他物种有一定的交叉结合反应,它能结合白介素(IL)-17RA并有效阻断其与配体的结合,抑制下游相关细胞因子IL-6、IL-8和人CXC趋化因子配体1的分泌.结论成功制备1株抗hIL-17 RA的中和抗体,为IL-17 RA相关疾病通路的研究提供了工具,也为IL-17RA靶点药物的开发奠定了一定的基础.【期刊名称】《中国医学科学院学报》【年(卷),期】2016(038)004【总页数】6页(P428-433)【关键词】白介素-17RA;白介素-17A;白介素-17F;抗体;人包皮成纤维细胞-1【作者】徐真真;孙春昀;谢良志【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院细胞工程中心,北京100005;神州细胞工程有限公司新药研发部,北京100176;中国医学科学院北京协和医学院细胞工程中心,北京100005【正文语种】中文【中图分类】R915目前，白介素(interleukin，IL)- 17超家族包括6个配体(IL- 17A～IL- 17F)和5个受体(IL- 17RA～IL17 RE)。
IL- 17A最早在1993年发现，当时命名为CTLA8。
其受体IL- 17RA于两年后确认，且与以往发现的细胞因子受体家族无同源性[1]。
IL- 17受体家族成员都是一型单次跨膜蛋白，具有保守结构基序，包括胞外的类纤维结合素Ⅲ结构域、跨膜结构域和一个胞内的SEF/IL- 17R (SEFIR)结构域。
生物分子相互作用仪主要功能用途
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octet分子互作技术指标
octet分子互作技术指标Octet分子互作技术是一种在生物分子相互作用研究中广泛使用的技术。
它是指通过使用以Biacore Octet为代表的光学生物传感技术，实时监测和分析生物分子相互作用的强度、动力学和稳定性。
以下是一些常见的Octet分子互作技术指标：1. 亲和力（Affinity）：指的是生物分子之间结合的强度。
通常用亲和常数（Kd）来表示，Kd值越小，表示亲和力越强。
2. 动力学参数（Kinetics Parameters）：包括关联速率常数（kon）和解离速率常数（koff），用于描述分子结合和解离的速度。
在互作研究中，这些参数可用于了解结合的速度和稳定性。
3. 评估稳定性（Stability Assessment）：Octet技术可以测量分子互作的稳定性，包括热稳定性和力学稳定性。
通过测量互作物的结合强度和解离速率，可以评估其在不同条件下的稳定性。
4. 互作动力学（Binding Kinetics）：Octet技术可提供实时监测互作动力学的能力。
通过在不同时间点测量相互作用的强度，可以确定结合和解离的速率，并对互作动力学进行分析。
5. 检测灵敏度（Detection Sensitivity）：Octet技术具有高灵敏度，可用于检测低浓度的生物分子。
其灵敏度取决于传感器表面的生物分子密度和互作物的浓度。
6. 多参数分析（Multi-parameter Analysis）：Octet技术可同时测量多个参数，如亲和力、动力学参数和稳定性等，提供更全面的分子互作分析。
以上是Octet分子互作技术常见的指标。
这些指标可用于了解分子间的相互作用特性，从而促进药物研发、蛋白质研究和分子诊断等领域的发展。
octetred96简明实验操作流程
octetred96简明实验操作流程Octet RED96是一种动力学生物传感器，用于实时监测细胞生长和代谢过程中的生物分子相互作用。
本文将简要介绍Octet RED96的操作流程。
1.准备工作在进行实验之前，需要准备好以下物品：Octet RED96仪器、传感器微量板、细胞培养物、试剂、PBS缓冲液、显微镜、计算机等。
2.传感器批准与校准进入Octet RED96软件界面，并选择相应的生物传感器（例如抗体、蛋白质等）。
使用校准丝，调整传感器的摆动方向和速度，确保传感器工作正常。
3.玻璃微量板的处理用PBS缓冲液清洗玻璃微量板，确保其干净且无污染物。
将清洗后的玻璃微量板放置在传感器扫描区。
4.细胞培养与处理将需要研究的细胞培养物加入细胞培养瓶中，用培养基进行稀释至适当浓度。
将培养瓶放入恒温恒湿的细胞培养箱中培养细胞。
5.细胞接种和传感器载体的准备从细胞培养物中取出所需细胞，根据实验需要进行稀释。
将准备好的细胞悬液转移到传感器载体中。
使用注射器将细胞悬液加入传感器载体孔中。
6.实验设计与操作在Octet RED96软件界面上，选择实验类型和参数。
根据实验需要，选择合适的探针（例如抗体、蛋白质等）。
在相应的探针上涂覆适当浓度的反应物。
7.实验开始将装有细胞的传感器载体插入Octet RED96仪器中，并开始实验。
传感器会开始不断扫描反应物与探针之间的相互作用。
实验过程中可以通过软件界面监测实时数据。
8.数据分析与结果实验结束后，可以通过Octet RED96软件对数据进行分析。
根据实验设计的参数和目的，可以得出相应的结果和结论。
9.清洗与维护实验结束后，将传感器载体从Octet RED96仪器中取出，将其与传感器分开，并用洗涤液彻底清洗传感器载体和传感器，以防止交叉污染。
将清洗后的传感器片放回传感器扫描区，进行存储或下一次实验。
总结：Octet RED96是一种先进的动力学生物传感器，用于实时监测细胞生长和代谢过程中的生物分子相互作用。
Octet生物分子相互作用仪
96 HA 384 TW 96 well microplate with half-area well size ForteBio 384 tilted-well microplate
1 mM to 10 pM
Octet 384 系统的优点
Octet System Specifications
Octet QK
Molecular Weight Range Data Acquisition Rate # Spectrometers # Channels per Read Microplate Positions Biosensor Reracking Robot Compatible Microplate Formats Minimum Sample Volume > 10,000 D 0.6 Hz 1 1-8 1 No No 96, 96 HA 80 µL per well 0.1 mM to 0.1 nM
Dip and Read Immunogenicity Kit Dip and Read Residual Protein A Detection Kit
Yes Yes Yes Yes Yes
No No
Kits
可以根据用户的应用设计传感器
为目前种类最多的供应商
传感器可再生使用
ADA ID Mab #2 Cycle # 1 nm Shift 0.7049
实时检测，非标记的 生物分子互作检测平台
Octet 可分析多种生物分子间的相互作用
Size
1000 nm 200 nm 75 nm
MW
Cells Bacteria Virus IgM IgA
octet仪器原理
octet仪器原理Octet仪器原理是一种生物分子相互作用研究的新方法，被广泛用于生命科学和药物研究领域。
本文将介绍Octet仪器的原理和使用步骤。
一、Octet仪器原理Octet仪器基于生物传感技术，能够实时监测生物分子的相互作用，如蛋白质与药物的结合。
Octet仪器的核心技术是生物传感芯片，这些芯片表面覆盖有特定的生物分子，如蛋白质、抗体、核酸等。
当待测物与这些生物分子相互作用时，会导致芯片上生物分子表面的层厚发生变化，利用光学传感技术可以准确地检测到这些变化。
二、Octet仪器使用步骤1.生物传感芯片准备：首先，需要选择适当的传感芯片和表面覆盖的生物分子，如蛋白质、抗体、核酸等。
根据需要调整表面覆盖密度和待测物的浓度范围。
2.仪器调试：在使用仪器之前，需要对仪器进行调试和校准。
这包括检查仪器光学系统的灵敏度、信噪比和波长校准等。
3.实验操作：将传感芯片装载到仪器的检测槽中，将待测物加入槽中，与生物分子进行反应，记录实时的层厚变化曲线。
4.数据分析：利用仪器自带的软件或其他数据分析工具对层厚变化曲线进行处理和分析，包括判断反应动力学特征、计算反应亲和力和生物学参数等。
三、应用领域Octet仪器被广泛应用于生命科学和药物研究领域。
其中，蛋白质-蛋白质相互作用研究是其主要应用之一，可以用于筛选抗体、酶、激素等分子的相互作用，并对生物分子的结构和功能进行分析。
此外，Octet仪器还可以应用于药物筛选和药物设计，如检测小分子药物与靶点蛋白的亲和力、筛选化合物的结合特异性和优选药物配伍方案。
总之，Octet仪器是一种快速、灵敏、可靠的生物分子相互作用研究工具，为生命科学和药物研究领域提供了新的分析手段和突破口。
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根据实验步骤设定将传感器在样品板的 不同位置移动
生物膜光干涉技术Bio-Layer Interferometry (BLI)
当生物分子结合到传感器表面就形成了一层生物膜 生物膜对透过传感器的光的波形造成干涉现象 干涉现象以相位移动的方式被检测，从而可以检测结合 到传感器分子数量的变化
生物分子结合动力学
Affinity range (approximate) Sample Usage Temperature Control 21 CFR Part 11 Compliance
0.1 mM to 0.1 mM to 1 mM to 0.1 nM 0.1 nM 10 pM Non-destructive and recoverable 4°C above ambient to 40°C
Octet系统可提供的数据
亲和力测定
• Binding KD • On and off rates • Rank order
结合特异性
• Yes / No kinetic screening • Epitope binning / mapping
蛋白质浓度定量（混合物）
• Picogram to milligram dynamic range • Contaminant testing
Dip and Read Immunogenicity Kit Dip and Read Residual Protein A Detection Kit
Yes Yes Yes Yes Yes
No No
Kits
可以根据用户的应用设计传感器
为目前种类最多的供应商
传感器可再生使用
ADA ID Mab #2 Cycle # 1 nm Shift 0.7049
Mab #2
2
3 4 5 6 7 8 9 10
0.7435
0.7431 0.7822 0.7702 0.6712 0.7221 0.7654 0.7515 0.7729
Regeneration solution = 1mM HCl
Avg. nm Shift StDev %CV 0.7427 0.0346 4.7%
Test Samples
Time (sec)
120
•
• • •
利用标准品在不同浓度时结合速率的 差异来定量样品的浓度 15-30分钟可以分析各样品 标准曲线可以重复使用 病毒颗粒等其他样品也可定量
Binding Rate
Concentration
Octet 软件
• 可灵活输出各种格式， Excel表，JEPG格式等 • 动力学分析直接得到ka, kd and KD 结果 • 浓度分析直接得到，ug/ml, ng/ml等浓度计算 结果
Octet 产品简介
Octet Instruments • 5种型号 - Octet QK, Octet Qke, Octet RED, Octet QK384, Octet RED 384 • 使用通用的样品板(96 and 384 well) • 没有流路系统 • 样品经过检测后，仍然留在原处，可以回收再使用 Biosensors • 浸入样品即检测，1至16个样品可以同时检测 • 10种传感器可供选择，分析不同种类的样品 • 传感器为抛弃式设计，既可以检测共价键结合的样品 也可以再生使用 Software and computer • 常用实验方法已经预制在模板中 • 不需要单独购买软件 Validation options • 经过验证, 提供IQOQ服务, 符合美国FDA CFR Part 11 标准
Binding (nm)
Association
Dissociation
Time
• • • •
8-16 个样品可以被同时平行检测 检测数据被事实记录 实验方法可根据用户的要求来设计 动力学和亲和力由软件分析得到
Octet RED进行蛋白质浓度测定的工作流程
Octet Biosensors Standards Binding (nm)
Octet RED96
> 150 D 2, 5, or 10 Hz 8 1-8 1 Yes No 96 180 µL per well
Octet RED384
> 150 D 2, 5, or 10 Hz 16 1 - 16 2 Yes Yes 96 / 96HA 384 / 384TW 40 µL per well
兼容96孔板和384孔板 • 更高的通量,更少的样品消耗 • 最小体积只要40ul 16通道同时检测，让所需 实验时间更短 两个样品板位置 • 更多的实验方案 • 一次连续分析更多样品 全自动化解决方案 • 可与多种液体工作站连接
Octet 全自动功能
• Automated door and plate stage • Works with articulated arm and track-style robotic systems • Plate stage presents the biosensor tray, sample and reagent plates for robot • Octet software has automation hooks enabled to interact with robot software
• 更宽的应用范围
• • • • 直接检测粗制的样品，甚至是样品中存在不溶解的成分 耐受各种溶液环境，只有结合到传感器表面的分子才会被检测 病毒颗粒等大分子样品也能得到动力学结果 检测共价键结合的样品
• 更低使用和维护的成本
• 相对其他的非标记检测系统，耗材的成本低 • 系统稳定，未来的使用和维护成本也低
Octet QKe
> 5000 D 0.3 Hz or 0.6 Hz 1 1-8 1 Yes No 96, 96 HA 80 µL per well
Octet QK384
> 5000 D 0.3 Hz or 0.6 Hz 2 1 - 16 2 Yes Yes 96 / 96HA 384 / 384TW 40 µL per well
Available as option for all systems
96 HA 384 TW 96 well microplate with half-area well size ForteBio 384 tilted-well microplate
1 mM to 10 pM
Octet 384 系统的优点
For simple 1:1 binding: Ab + Ag
ka
kd
Complex
ka = rate of association or “on-rate”
kd = rate of disassociation or “off-rate”
Non-linear curve fit of data
军事医学科学院 2台 Novo Nordisc中国研发中心 中国生物制品药品检定所 神州细胞工程有限公司 中科院武汉病毒所 厦门大学 天津商业大学 上海药明康德新药开发有限公司 GSK中国研发中心 Novartis中国研发中心 上海旭华生物科技有限公司 江苏太平洋美诺克生物药业有限公司 江苏泰康生物医药有限公司
Y = Y0 + A (1 - e-kobs*t) KD =
Y=Y0+Ae-kd*t kd ka
ka=
kobs – kd
[Conc Ag (M)]
Octet 系统测定动力学的工作流程
Baseline Baseline Loading
Octet Biosensors
Buffer Ligand-Biotin Protein of Interest
Octet 系统和特点
Octet 系统的优点
• 更高的通量, 更快的实验流程
• 8-16个样品同时检测，是非标记技术中通量最高的 • 15-30分钟可以完成96个样品的分析
• 没有溶液控制系统，不需要清洗和维护流路，直接开始读取数据
• 操作简单
• 适应多用户的情况，经过半天的培训就可以操作和使用 • 不需要特别优化实验条件，传感器是抛弃式的
– SDi 2010 Market Report survey – 成长最快速的非标记技术公司
• 公司发展的远景：成为每个实验室都能拥有的分子互作 系统
专业的服务
•在中国有2名硬件工程师，3名应用工程师 •除了提供批量生产的生物传感器以外， 还可以为用户定制传感器 •提供实验方法开发和优化服务
国内用户名单
实时检测，非标记的 生物分子互作检测平台
Octet 可分析多种生物分子间的相互作用
Size
1000 nm 200 nm 75 nm
MW
Cells Bacteria Virus IgM IgA
1,000,000
Bacteria Virus Antibody - Antigen Receptor - Ligand DNA - DNA
Octet System Specifications
Octet QK
Molecular Weight Range Data Acquisition Rate # Spectrometers # Channels per Read Microplate Positions Biosensor Reracking Robot Compatible Microplate Formats Minimum Sample Volume > 10,000 D 0.6 Hz 1 1-8 1 No No 96, 96 HA 80 µL per well 0.1 mM to 0.1 nM
Mab #2 Mab #2 Mab #2 Mab #2 Mab #2 Mab #2 Mab #2 Mab #2