紫外分光光度法测定蛋白质含量实验报告
实验9 紫外吸收法测定蛋白质含量
实验9 紫外吸收法测定蛋白质含量（一）原理蛋白质分子中含有酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸等残基，它们的结构中具有共轭双键，对紫外光有吸收作用，其最大值在280nm波长处。
在此波长附近，蛋白质溶液的光吸收值与其含量（范围是0.1~1.0mg/ml）成正比，因此，280nm的吸光度可用作蛋白质的定量测定。
若将已知不同浓度的蛋白质标准溶液在280nm处测定，并作标准曲线，即可求得未知溶液的蛋白质浓度。
此法测定迅速，用量较少，而且不消耗样品和试剂。
但若样品中含有其他在280nm吸收的物质，如嘌呤嘧啶等化合物时，就有干扰作用。
（二）试剂及器材（1）标准蛋白质溶液：准确称取经凯氏定氮法校正的结晶牛血清白蛋白，配制成浓度为1mg/ml的溶液。
（2）待测蛋白质溶液：浓度为1mg/ml左右的蛋白质溶液。
（三）操作1. 280nm的光吸收法（1）标准曲线的绘制：取8支试管，编号后按下表加入试剂。
混匀，选用光程为1cm的石英比色杯，在紫外分光光度计280nm波长处以0号管调“零”分别测定各管溶液的光密度（OD280）。
以纵坐标为光密度值，横坐标为蛋白质浓度绘出标准曲线。
（2）样品测定：取待测蛋白质溶液1ml，加入蒸馏水3ml，混匀，按上述方法测定280nm波长处的光密度值，并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。
2．280nm和260nm的吸收差法将待测的蛋白质溶液稀释到光密度在0.2~2.0之间，在波长280nm和260nm处以相应的溶液作空白对照，分别测得待测样品的光密度值（OD280和OD260）。
应用280nm和260nm的吸收差法经验公式直接计算出蛋白质浓度。
公式：蛋白质浓度（mg/ml）=1.45 OD280—0.74 OD260。
紫外吸收法实验报告
一、实验目的1. 掌握紫外吸收法的基本原理和操作步骤。
2. 学习使用紫外-可见分光光度计进行蛋白质浓度的测定。
3. 通过实验验证紫外吸收法测定蛋白质含量的准确性。
二、实验原理紫外吸收法是一种基于物质分子对紫外光的吸收特性进行定量分析的方法。
蛋白质分子中含有酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸，这些氨基酸的苯环结构中含有共轭双键，使其在280nm波长处具有特征性吸收峰。
在一定浓度范围内，蛋白质溶液的吸光度与其浓度呈线性关系。
因此，通过测定蛋白质溶液在280nm波长处的吸光度，可以计算出蛋白质的浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液器、试管、石英比色皿等。
2. 试剂：蛋白质标准品、不同浓度的蛋白质溶液、空白溶液（通常为溶剂）、缓冲液等。
四、实验步骤1. 标准曲线的制作：1.1 取7支试管，编号后按下表依次加入标准蛋白溶液和氢氧化钠溶液。
1.2 加毕，搅匀，选用石英比色皿，用紫外分光光度计测定A280。
1.3 以每管标准蛋白毫克数为横坐标，对应的吸光度A280为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：2.1 取一支试管，加入一定量的待测蛋白质溶液，加入氢氧化钠溶液，混匀。
2.2 选用石英比色皿，用紫外分光光度计测定A280。
2.3 根据标准曲线，从横坐标上找到对应的吸光度A280，计算出待测蛋白质的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线：绘制标准曲线后，发现蛋白质浓度与吸光度A280呈线性关系，相关系数R²大于0.99，说明该方法具有较高的准确性。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算出待测蛋白质的浓度为x mg/mL。
六、实验讨论1. 实验过程中，要注意溶液的pH值，最好与标准曲线制定时的pH值一致，以减少pH对紫外吸收的影响。
2. 实验过程中，要注意避免样品中嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质对蛋白质浓度测定的干扰。
可以通过查校正表，再进行计算的方法，加以适当的校正。
3. 实验结果表明，紫外吸收法测定蛋白质含量的方法简便、灵敏、快速，不消耗样品，适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。
实验3 紫外分光光度法测定蛋白质含量
【实验步骤】 实验步骤】 1、标准曲线法 标准曲线的制作： 只试管按表2 加入试剂， （1）标准曲线的制作：取8只试管按表2-5加入试剂，摇 选择光程1cm 石英比色皿， 280nm波长测定A280， 波长测定A280 匀。选择光程1cm 石英比色皿，在280nm波长测定A280， A280值为纵坐标 蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。 值为纵坐标， 以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
6 2.5 1.5 0.62 5
7 3.0 1.0
8 4.0 0
0.75 1.0
（2）样品测定： 样品测定： 配制待测蛋白质溶液1ml 加入蒸馏水3ml 1ml， 3ml， 配制待测蛋白质溶液1ml，加入蒸馏水3ml，摇 匀，测定A280，从标准曲线中查出蛋白质浓度。 测定A280，从标准曲线中查出蛋白质浓度。 A280 2. 直接测定法 在紫外分光光度计上， 在紫外分光光度计上，将待测蛋白质溶液加入 比色皿，以生理盐水为对照，测定280nm 280nm和 比色皿，以生理盐水为对照，测定280nm和260nm 波长吸光度。按一下公式计算蛋白质浓度： 波长吸光度。按一下公式计算蛋白质浓度： 蛋白质浓度（mg/mL）=1.45A280蛋白质浓度（mg/mL）=1.45A280-0.74A260 (C为蛋白质浓度，mg/ml,A280和A260分别为 (C为蛋白质浓度，mg/ml,A280和A260分别为 为蛋白质浓度 蛋白质溶液在280nm 260nm处测得的吸光度值 280nm和 处测得的吸光度值) 蛋白质溶液在280nm和260nm处测得的吸光度值)。
表1-2 紫外分光光度法测定蛋白质浓度---标准曲线的绘制 紫外分光光度法测定蛋白质浓度 标准曲线的绘制
项目 标准蛋白液/ml 蒸馏水/ml 蛋白质浓度/ml A280
实验6紫外测定蛋白质的浓度吸收法
实验6 紫外测定蛋白质的浓度吸收法一、目的1、了解紫外线吸收法测定蛋白质含量的原理。
2、了解紫外分光光度计的构造原理，掌握它的使用方法。
二、原理由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280nm波长处。
在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值（A280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。
利用紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速、简便、不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。
因此，在蛋白质和酶的生化制备中（特别是在柱层析分离中）广泛应用。
此法的缺点是：（1）对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定的误差；（2）若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。
不同的蛋白质和核酸的紫外线吸收是不相同的，即使经过校正，测定结果也还存在一定的误差。
但可作为初步定量的依据。
三、材料、试剂与器具（一）试剂1、标准蛋白溶液准确称取经微量凯氏定氮法校正的标准蛋白质，配制成浓度为1mg/mL的溶液。
2、待测蛋白溶液配制成浓度约为1mg/mL的溶液。
（二）器具1、紫外分光光度计。
2、试管和试管架。
3、吸量管。
四、操作步骤（一）标准曲线法1、标准曲线的绘制按下表分别向每支试管加入各种试剂，摇匀。
选用光程为1cm的石英比色杯，在280nm 波长处分别测定各管溶液的A280值。
以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2、样品测定取待测蛋白质溶液1mL ，加入蒸馏水3mL ，摇匀，按上述方法在280nm 波长处测定光吸收值，并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。
（二）其他方法（1）将待测蛋白质溶液适当稀释，在波长260nm 和280nm 处分别测出A 值，然后利用280nm 及260nm 下的吸收差求出蛋白质的浓度。
计算蛋白质浓度（mg/mL ）=1.45A 280-0.74A 260式中A 280和A 260 分别是蛋白质溶液在280nm 和260nm 波长下测得的光吸收值。
紫外分光光度法测定蛋白质含量_百度文库(精)
教材1 紫外分光光度法测定蛋白质含量一、实验目的学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理;掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术;掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理紫外-可见吸收光谱法又称紫外-可见分光光度法, 它是研究分子吸收190nm ～750nm 波长范围内的吸收光谱，是以溶液中物质分子对光的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。
紫外-可见吸收光谱的产生是由于分子的外层价电子跃迁的结果，其吸收光谱为分子光谱，是带光谱。
进行定性:利用紫外-可见吸收光谱法进行定性分析一般采用光谱比较法。
即将未知纯化合物的吸收光谱特征，如吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状与已知纯化合物的吸收光谱进行比较。
定量分析: 紫外-可见吸收光谱法进行定量分析的依据是朗伯-比尔定律：A=lgI0/I=εbc ，当入射光波长λ及光程b 一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A 与该物质的浓度c 成正比，即物质在一定波长处的吸光度与它的浓度成线形关系。
因此，通过测定溶液对一定波长入射光的吸光度，就可求出溶液中物质浓度和含量。
由于最大吸收波长λmax 处的摩尔吸收系数最大，通常都是测量λmax 的吸光度，以获得最大灵敏度。
光度分析时，分别将空白溶液和待测溶液装入厚度为b 的两个吸收池中，让一束一定波长的平行单色光非别照射空白和待测溶液，以通过空白溶液的透光强度为I 0，通过待测溶液的透光强度为I ，根据上式，由仪器直接给出I 0与I 之比的对数值即吸光度。
紫外-可见分光光度计:紫外-可见吸收光谱法所采用的仪器称为分光光度计，它的主要部件有五个部分组成，即由光源发出的复合光经过单色器分光后即可获得任一所需波长的平行单色光, 该单色光通过样品池静样品溶液吸收后，通过光照到光电管或光电倍增管等检测器上产生光电流，产生的光电流由信号显示器直接读出吸光度A 。
可见光区采用钨灯光源、玻璃吸收池; 紫外光区采用氘灯光源、石英吸收池。
蛋白质含量测定实验报告
蛋白质含量测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定食物中蛋白质含量的方法，掌握蛋白质的测定原理和操作技能，加深对蛋白质的认识，为日常饮食提供科学依据。
二、实验原理。
本实验采用了比色法测定蛋白质含量。
比色法是根据蛋白质与双酚类物质在碱性条件下生成紫色化合物的原理，利用紫外可见光谱法测定其吸光度，从而计算出蛋白质的含量。
三、实验步骤。
1. 样品制备，将食物样品研磨成粉末状。
2. 蛋白质提取，取适量样品加入提取液，振荡离心，收集上清液。
3. 比色反应，将提取液与试剂混合，待反应完成后进行测定。
4. 吸光度测定，用紫外可见光谱仪测定吸光度。
5. 计算蛋白质含量，根据吸光度值计算出样品中蛋白质的含量。
四、实验结果。
经过实验测定，得出食物样品中蛋白质含量为Xg/100g。
五、实验分析。
通过本次实验，我们了解了蛋白质含量测定的原理和方法，掌握了比色法测定蛋白质含量的操作技能。
同时，也发现不同食物样品中蛋白质含量的差异，为我们科学合理地进行日常饮食提供了参考。
六、实验总结。
蛋白质是人体生命活动的重要组成部分，合理摄入足够的蛋白质对维持身体健康至关重要。
通过本次实验，我们不仅学会了测定蛋白质含量的方法，也增加了对蛋白质的认识，为我们的健康饮食提供了科学依据。
七、实验感想。
本次实验让我深刻认识到蛋白质在日常饮食中的重要性，也让我对科学实验有了更深的理解和体会。
希望通过今后的学习和实践，能够更好地运用所学知识，为自己和他人的健康提供帮助。
八、参考文献。
1. 《食品分析实验指导》，XXX，XXX出版社，XXXX年。
2. 《食品化学与分析》，XXX，XXX出版社，XXXX年。
以上就是本次蛋白质含量测定实验的报告内容，希望对大家有所帮助。
分光法测蛋白质实验报告
紫外分光光度法测定蛋白质含量一、实验目的1.学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。
2.掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。
3.掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理1.紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。
紫外光：10-400 nm可见光：400-780 nm（可被人们的眼睛所感觉）特点：带光谱、分子光谱应用：定性分析-最大吸收波长；定量分析-朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）a.定性分析原理：吸收曲线：吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状.b.定量分析原理：根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c 成正比。
定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
c.仪器组成部件:各种类型的紫外-可见分光光度计，如下图所示，从总体上来说是由五个部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装置。
2.本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理：（1）蛋白质可作定量分析的原因：蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在275--280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。
在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。
该法测定蛋白质的浓度范围为0.1—1.0mg/mL。
（2）此种方法测量的准确度差一点的原因：由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，所处的微环境也不同，所以不同蛋白质溶液在280nm的光吸收职也不同。
据初步统计，浓度为1.0 mg/mL的1800种蛋白质及蛋白质亚基在280nm的吸光度在0.3—3.0之间，平均值为1.25+/-0.51。
紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理
紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理一、前言蛋白质是生物体内重要的有机分子，其浓度的准确测定对于生物学、医学等领域研究具有重要意义。
紫外分光光度法是一种常用的测定蛋白质浓度的方法，本文将详细介绍紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理。
二、概述紫外分光光度法是利用物质吸收紫外线的特性来测定其浓度的方法。
在波长范围为190~400 nm内，蛋白质中含有若干种氨基酸，其中色氨酸和酪氨酸对紫外线具有较强吸收。
因此，可以通过在这个波长范围内测量蛋白质溶液吸收光强度来计算出其浓度。
三、实验步骤1. 制备标准曲线首先需要制备一系列不同浓度的蛋白质标准溶液，并在190~400 nm 范围内分别记录它们的吸收值。
然后将这些数据绘制成标准曲线。
2. 测定待测样品的吸光度将待测样品溶液放入紫外分光光度计中，记录在190~400 nm范围内的吸收值。
3. 计算浓度根据标准曲线和待测样品的吸收值，可以计算出待测样品的蛋白质浓度。
四、原理解析1. 色氨酸和酪氨酸的吸收特性在紫外分光光度法中，色氨酸和酪氨酸是蛋白质中两种主要的吸收物质。
它们在190~280 nm范围内具有较强的吸收能力，其中色氨酸最大吸收波长为280 nm，而酪氨酸则在270 nm左右有一个较强的吸收峰。
这些特性使得紫外分光光度法能够对蛋白质进行准确的浓度测定。
2. 比尔-朗伯定律比尔-朗伯定律是紫外分光光度法能够准确测定物质浓度的基础。
该定律指出，在单色光照射下，物质对于该波长的吸收与其浓度成正比。
具体公式为：A = εcl其中，A表示吸光度，ε表示摩尔吸光系数，c表示物质浓度，l表示光程长度。
3. 摩尔吸光系数的计算摩尔吸光系数是紫外分光光度法中的一个重要参数，它反映了单位浓度的物质对于特定波长的光线的吸收能力。
对于蛋白质来说，摩尔吸光系数可以通过氨基酸组成和序列确定。
一般情况下，可以使用文献中已知的摩尔吸光系数进行计算。
4. 标准曲线和浓度计算通过制备一系列不同浓度的蛋白质标准溶液，并在190~400 nm范围内分别记录它们的吸收值，可以绘制出标准曲线。
紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理
紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理介绍紫外分光光度法是常用的一种测定蛋白质浓度的方法。
本文将详细介绍紫外分光光度法的原理以及其在蛋白质浓度测定中的应用。
紫外分光光度法原理紫外分光光度法利用蛋白质溶液对紫外光的吸收特性进行测量，从而确定蛋白质的浓度。
蛋白质分子中的色氨酸（Trp）、苯丙氨酸（Phe）和酪氨酸（Tyr）等芳香族氨基酸在紫外光区域具有吸收峰，通过测量吸光度可以间接测定蛋白质的浓度。
实验步骤以下是使用紫外分光光度法测定蛋白质浓度的一般实验步骤：1. 制备蛋白质样品制备含有待测蛋白质的溶液样品。
确保溶液浓度适中，避免过高或过低浓度对测定结果产生影响。
2. 预热紫外分光光度计打开紫外分光光度计并进行预热，使其达到稳定的工作温度。
3. 校准光程使用标准样品校准紫外分光光度计的光程，确保准确测量待测样品的吸光度。
4. 测定吸光度将待测样品倒入光度池，使用紫外分光光度计测量样品溶液在特定波长下的吸光度。
常用波长为280nm，其对色氨酸具有最大吸收峰。
5. 绘制标准曲线制备一系列已知浓度的蛋白质标准溶液，分别测定它们的吸光度。
利用这些测定值绘制标准曲线，用于计算待测样品的蛋白质浓度。
6. 计算蛋白质浓度根据标准曲线，计算出待测样品的蛋白质浓度。
根据不同的光吸收系数和波长，可以得出不同氨基酸的摩尔吸光系数，再根据摩尔吸光系数进行计算。
紫外分光光度法的优势紫外分光光度法具有以下优势：1.灵敏度高：对浓度较低的蛋白质样品也能够进行准确测量。
2.快速便捷：测量过程简单，不需要复杂操作。
3.非破坏性：样品在测量过程中不受损伤，可以进行进一步的分析。
紫外分光光度法的局限性紫外分光光度法也存在一定的局限性：1.干扰物质：一些样品中可能含有其他吸收波长与蛋白质相近的物质，会对测定结果产生干扰。
2.重复性：在批量测定时，光度池的装填和清洗对结果的重复性有一定影响。
3.波长选择：根据不同蛋白质的吸收特性，选择适当的波长进行测量，否则会导致测定结果不准确。
实验4+紫外吸收法测定蛋白质含量
• 本法操作简便迅速，且不消耗样品(可以回收)，低
浓度的盐类不干扰测定，在蛋白质和酶的生化制备 及其它研究中应用广泛，多用于纯化之蛋白质的微 量测定，尤其是适合于柱层析分离中蛋白质洗脱情 况的检测。 • 核酸在280nm波长下也有一定吸收能力，可能发生 干扰。混有核酸时必须分别测定280nm和260nm两
误差。
• (4) 比色皿内盛液应为其容量的2/3～3/4，过少会 影响实验结果，过多易在测量过程中外溢，污染 仪器。 • (5) 拿放比色皿时，应持其“毛面”，杜绝接触 光路通过的“光面”。如比色皿外表面有液体， 应用滤纸吸干，以保证光路通过时不受影响。 • (6) 若待测液浓度过大，应适当稀释，一般应使 吸光度读数处于0.1～0.8范围内为宜。
实验七 紫外吸收法测定蛋白质含量
一、 实验目的：
• 学习紫外分光光度法测定蛋 白质含量的原理； • 熟练掌握紫外分光光度计测 定原理及使用方法。
二、 实验原理：
• 由于蛋白质中存在着酪氨酸、色氨酸及苯 丙氨酸残基，它们的结构中具有共轭双键， 对紫外光有吸收作用，其吸收高峰在 280nm波长处，且在此波长内吸收峰的光 密度值OD280nm与其浓度（范围是 0.1~1.0mg/ml）成正比关系，280nm的吸 光度故可作为蛋白质定量测定的依据。
?由于蛋白质中存在着酪氨酸色氨酸及苯丙氨酸残基它们的结构中具有共轭双键对紫外光有吸收作用其吸收高峰在对紫外光有吸收作用其吸收高峰在280nm波长处且在此波长内吸收峰的光密度值波长处且在此波长内吸收峰的光密度值od280nm与其浓度范围是0110mgml成正比关系280nm的吸光度故可作为蛋白质定量测定的依据
四、操作步骤
• 1．标准曲线制作
• 按表1分别向每支试管内加入各种试剂，混 匀。以光程为1cm的石英比色杯，在 280nm波长处测定各管溶液的光密度值 OD280nm。 • 以蛋白质浓度为横坐标，光密度值为纵坐 标，绘出标准曲线。
紫外分光光度法测定蛋白质含量实验报告
紫外分光光度法测定蛋白质含量一、实验目的1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理；2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。
二、实验原理L测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩胭法、FOlin一酚试剂法等。
本实验采用紫外分光光度法。
2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共挽双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于28Onm附近（不同蛋白质略有不同）。
在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯一比尔定律。
利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的噂吟、嗒咤等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。
三、仪器与试剂TU-1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液3.00mg∙mLL 0.9%NaCl 溶液、试样蛋白质溶液。
IomL比色管、ICm石英比色皿、吸量管。
四、实验步骤L绘制吸收曲线用吸量管吸取2mL3.00mg∙mL^,标准蛋白质溶液于1 OmL比色管中，用0.9%NaCI 溶液稀释至刻度，摇匀。
用ICm石英比色皿，以0.9%NaCI溶液作参比溶液，在190〜40Onm间每隔5nm测一次吸光度Abs,记录数据并作图。
3.绘制标准曲线用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL3.00mg∙mL-ι标准蛋白质溶液于IomL 比色管中，用0.9%NaCI溶液稀释至刻度，摇匀。
用ICm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在波长28Onm处分别测其吸光度，记录数据并作图。
4.样品测定取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长28Onm处测其吸光度，重复三次。
在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度（1.363）,估算浓度为2.0960 mg∙mL∙,,再将原试液稀释至5倍（即取2mL试液，用0.9%NaCI溶液稀释至刻度，摇匀），估算浓度为0.4192 mg∙mLL测吸光度，重复三次五、数据处理与结果分析图1吸收曲线在上图吸收曲线中可以看到有两处吸收峰，且在波长225nm 处的吸收峰远大 于28Onm 处，这是由于在波长25Onm 以下时，溶剂吸收较为严重，干扰较大， 所以，蛋白的最大吸收波长应为280nm.O 50 IOO 150 200 250 300 350 400 450—系列］Iλ ∕nm图2标准曲线将试样所测得吸光度带入标准曲线中求蛋白质含量：稀释以后的蛋白质的浓度 CX=(AbS-0.0202)/0.6407原试样中蛋白质浓度 c=(c x * 10)/2所测蛋白质试样的浓度约为2.126mg∙mL . 单次测定的标准偏差：=0.12相对标准偏差：s r =-×100% =-^-×100% =5.5%2.126浓度c∕mo] ■「I→-系列I—线性(系列1)。
紫外分光光度法测蛋白质的含量
紫外分光光度法测蛋白质的含量一、实验目的1、学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。
2、掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。
3、掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。
蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同的蛋白质吸收波长略有差别）。
在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。
该测定方法简单、灵敏、快速，不消耗样品，低浓度的盐类不干扰测定。
1.紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。
紫外光：10-400 nm可见光：400-780 nm特点：带光谱、分子光谱应用：定性分析-最大吸收波长；定量分析-朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）a.定性分析原理：吸收曲线：吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状.b.定量分析原理：根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
c.仪器组成部件:各种类型的紫外-可见分光光度计，如下图所示，从总体上来说是由五个部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装置。
2.本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理：（1）蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在275--280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。
在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。
该法测定蛋白质的浓度范围为0.1—1.0mg/mL。
山大生化实验报告 实验七 紫外吸收法测蛋白质浓度
实验七紫外吸收法测蛋白质浓度姓名：周超同组者：刘炳煜班级：11级生命基地学号：201100140067【实验目的】1、了解紫外吸收法测蛋白质浓度的原理2、熟悉紫外分光光度计的使用【实验原理】蛋白质组成中常含有酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸，在紫外光280nm波长处有最大吸收峰，一定浓度范围内其浓度与吸光度成正比，故可用紫外分光光度计通过比色来测定蛋白质的含量。
由于核酸在280nm波长处也有光吸收，对蛋白质的测定有一定的干扰作用，但核酸的最大吸收峰在260nm处。
如同时测定260nm的光吸收，通过计算可以消除其对蛋白质测定的影响。
因此如溶液中存在核算时必须同时测定280nm及260nm的吸光值，方可通过计算测得溶液中的蛋白质弄浓度。
【实验材料】一、器材UV-9100型紫外分光光度计试管7个移液管摇匀器洗瓶二、试剂标准酪蛋白1mg/ml样品血清（稀释100倍）蒸馏水【实验步骤】一、直接测定法1、在紫外分光光度计上，将样品血清溶液小心盛于石英比色皿中，以水为对照，测得280nm和260nm两种波长的吸光度（A280nm及A260nm）2、当A280nm/A260n m﹤1.5时，将280nm及260nm波长处测得的吸光度按下列公式计算蛋白质浓度：C=1.45A280nm-0.74A260nm式中C：蛋白质质量浓度（mg/ml）3、当A280nm/A260n m﹥1.5时，将280nm及260nm波长处测得的吸光度按下列公式计算蛋白质浓度：血清蛋白质量浓度（mg/ml）=（A280nm/6.3）×10二、标准曲线法取7支试管，按下表加入试剂。
加毕，混匀，用紫外分光光度计测A280nm，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，对1-7号作图，测样品管的A280nm，对照标准曲线求得蛋白质浓度。
【实验结果】一、直接测定法1、C=（1.45A280nm-0.74A260nm）*2*100=72.4mg/ml2、C=[（A280nm/6.3）*10]*2*100=128.0 mg/ml二、标准曲线法C=0.403/0.8424*2*100=95.6mg/ml【结果分析】三种计算测定和计算方法得出三个数值：使用公式C=（A280nm/6.3）*10计算得到的数值准确性最差，因为实验数据不满足该公式的使用条件A280nm/ A260nm〉1.5。
紫外分光光度计——蛋白质含量测定
紫外分光光度计——蛋白质含量测定紫外可见分光光度法是在190～760nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。
当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。
因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。
从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。
物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。
因此，可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。
用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。
紫外分光光度法测量光谱法（spectrometry）是基于物质与电磁辐射作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。
光谱法可分为发射光谱法、吸收光谱法、散射光谱法；或分为原子光谱法和分子光谱法；或分为能级谱，电子、振动、转动光谱，电子自旋及核自旋谱等。
分光光度法是光谱法的重要组成部分，是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。
常用的技术包括紫外-可见分光光度法、红外分光光度法、荧光分光光度法和原子吸收分光光度法等。
物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。
在一定条件下，物质的吸收系数是恒定的，且与入射光的强度、吸收池厚度及样品浓度无关。
当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后，可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸光度，即可由上式计算出供试品中该物质的含量。
在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收，但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定，故又称之为比色分析。
蛋白质与生命的起源、存在和进化都密切相关,蛋白质测定涉及到生产和利研的众多领域。
紫外分光光度法测定蛋白质的含量
紫外分光光度法测定蛋白质的含量一、实验目的：（1）学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理；（2）掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术；二、实验原理：蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近。
最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液浓度的关系服从朗伯尔比尔定律：A=abc“A”为溶液的吸光度值，“b”为石英比色池的厚度，“c”为蛋白质溶液的浓度。
紫外-可见吸收光谱法又称紫外-可见分光光度法,它是研究分子吸收190nm～750nm波长范围内的吸收光谱，是以溶液中物质分子对光的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。
紫外-可见吸收光谱的产生是由于分子的外层价电子跃迁的结果，其吸收光谱为分子光谱，是带光谱。
紫外-可见分光光度法所采用的仪器称为分光光度计，它的主要部件有五个部分组成，如下所示：由光源发出的复合光经过单色器分光后即可获得任一所需波长的平行单色光,该单色光通过样品池对样品溶液吸收后，通过光照到光电管或光电倍增管等检测器上产生光电流，产生的光电流由信号显示器直接读出吸光度A。
可见光区采用钨灯光源、玻璃吸收池;紫外光区采用氘灯光源、石英吸收池。
本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。
三、仪器与试剂：TU-1901双光束紫外可见分光光度计、比色管、吸量管标准蛋白质溶液（5.00mg/mL）、0.9%NaCl溶液、待测蛋白质溶液四、实验步骤：1.准备工作：⑴启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。
⑵在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光度测量，设置测量条件（测量波长等）。
⑶将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。
⑷标准曲线的制作。
2.测量工作：⑴.吸收曲线的绘制：用吸量管吸取2mL5.00mg/mL标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9% NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。
用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液为参比，在190 nm～400nm区间，测量吸光度。
紫外吸收法测定蛋白质含量
1
0
4
2
0.5
3.5
3
1.0
3.0
4
1.5
2.5
5
2.0
2.0
6
2.5
1.5
7
3.0
1.0
8
4.0
0
பைடு நூலகம்蛋白质浓度 （mg/mL）
OD280nm
0
表1 蛋白质标准曲线制作
0.125
0.25
0.375
0.50
0.625
0.75
1.0
紫外吸收法测定蛋白质含量
一、实验目的
学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原 理；
熟练掌握紫外分光光度计测定原理及使用 方法。
二、实验原理
由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨 酸和色氨酸，因此蛋白质具有吸收紫外光 的性质，最大吸收峰在280nm波长处。在此 波长范围内，蛋白质溶液的光密度OD280nm 与其浓度呈正比关系，可作定量测定。
核酸%
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50
OD280nm /OD260nm
0.846 0.822 0.804 0.784 0.767 0.753 0.730 0.705 0.671 0.644 0.615
校正因子 核酸%
0.656 0.632 0.607 0.585 0.565 0.545 0.508 0.478 0.422 0.377 0.322
蛋白质浓度（mg/mL）= F×OD280nm×D 式中：OD280nm为被测溶液在280nm紫外波长
下的光密度，D为溶液的稀释倍数。
OD280nm /OD260nm
紫外分光光度法测蛋白含量
紫外-可见分光光度法测蛋白质的含量一、实验目的1.了解紫外-可见分光光度计的基本结构。
2.掌握紫外-可见分光光度法测量蛋白质含量的基本原理。
3.熟悉紫外分光光度计的实验技术。
二、实验原理蛋白质分子结构中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环所含的共轭双键，具有吸收紫外光的性质，其最大吸收波长为280nm左右。
在一定实验条件下，蛋白质溶液的吸光度与其浓度符合Lambert-Beer定律，据此可对蛋白质进行定量分析。
三、实验试剂与仪器1.紫外可见分光光度计2.石英比色皿、胶头吸管、比色管、烧杯、容量瓶3.生理盐水、蛋白质标准溶液、未知蛋白质溶液四、实验步骤1.配制标准溶液及样品溶液：准确移取5.00mg/ml牛血清白蛋白标准应用液0.00ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml及0.1ml未知蛋白质溶液分别置于10ml比色管中，用生理盐水稀释至10ml刻度，摇匀。
2.吸收光谱曲线的绘制：以生理盐水作参比，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，从200nm-400nm扫描牛血清白蛋白的吸收曲线并找出最大吸收波长λ。
max3.标准曲线绘制：以生理盐水作参比，在λ波长下测定吸光度，以max溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
4.测定未知蛋白溶液。
五、实验结果1.数据记录与标准曲线绘制：表1 不同浓度蛋白溶液及其吸光度值标准1 标准2 标准3 标准4 标准5 样品浓度c(mg/ml) 0.000 0.250 0.500 0.750 1.000 待测c 吸光度值A 0.007 0.321 0.666 1.049 1.368 0.7402.数据处理：根据线性方程，可求得吸光度值A=0.740的得测c=0.542mg/ml,由于未知蛋白质溶液被稀释了100倍，故原未知蛋白质溶液浓度为54.2mg/ml。
紫外分光光度计测蛋白质含量
紫外分光光度法测定蛋白质含量1仪器与试剂TU-1 9 01紫外一可见分光光度计，比色管,吸量管标准蛋白质溶液：5、00 mg、mL-l溶液0、9% NaCl洛液，待测蛋白质溶液2实验方法与原理本实验采用紫外分光光度法测定蛋口质含量。
紫外一可见吸收光谱法乂称紫外一可见分光光度法,它就是研究分子吸收19 0 nm〜750nm波长范围内得吸收光谱，就是以溶液中物质分子对光得选择性吸收为基础而建立起来得一类分析方法.紫外-可见吸收光谱得产生就是山于分子得外层价电子跃迁得结果，其吸收光谱为分子光谱，就是带光谱。
蛋口质中酪氨酸与色氨酸残基得苯环含有共轨双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光得性质，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同得蛋白质吸收波长略有差别）•在最大吸收波长处，吸光度与蛋口质溶液得浓度得关系服从朗伯一比耳定律。
该测定法具有简单灵敬快速高选择性,且稳定性好，干扰易消除不消耗样品，低浓度得盐类不干扰测定等优点。
3实验步骤3、1准备工作3、3、1启动计•算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。
3、3、2在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光度测量,设置测量条件（测量波长等）。
3、3、3将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。
3、3、4标准曲线得制作。
3、2测量工作3、2、1吸收曲线得绘制用吸量管吸取2mL5、00m g/mL标准蛋白质溶液于1 0 mL比色管中，用 0、9% NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。
用1 cm石英比色皿，以0、9% N&C1溶液为参比，在190 nm〜40 0 nm区间，q全波段扫描。
3、2、2标准曲线得制作用吸量管分别吸取 0、5、1、0、1、5、2、0 、2、5m L 5、00 mg、niL—l标准蛋白质溶液于5只1 0 mL比色管中，用0、9% N&C1溶液稀释至刻度，摇匀•用1 cm石英比色皿，以0、9%NaC 1溶液为参比，在280 nm处分别测定各标准溶液得吸光度A決记录所得读数.3、2、3样品测定取适量浓度得待测蛋口质溶液3mL,按上述方法测定2 78 n m处得吸光度。
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紫外分光光度法测定蛋白质含量
一、实验目的
1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理；
2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。
二、实验原理
1.测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin―酚试剂法等。
本实验采用紫外分光光度法。
2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同蛋白质略有不同）。
在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。
利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。
三、仪器与试剂
TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液3.00mg·mL-1、0.9%NaCl 溶液、试样蛋白质溶液。
10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。
四、实验步骤
1.绘制吸收曲线
用吸量管吸取2mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。
用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。
2.绘制标准曲线
用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。
用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。
3.样品测定
取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。
在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度（1.363），估算浓度为2.0960 mg·mL-1，再将原试液稀释至5倍（即取2mL试液，用0.9%NaCl 溶液稀释至刻度，摇匀），估算浓度为0.4192 mg·mL-1，测吸光度，重复三次五、数据处理与结果分析
图1吸收曲线
在上图吸收曲线中可以看到有两处吸收峰，且在波长225nm处的吸收峰远大于280nm处，这是由于在波长250nm以下时，溶剂吸收较为严重，干扰较大，所以，蛋白的最大吸收波长应为280nm。
图2标准曲线
将试样所测得吸光度带入标准曲线中求蛋白质含量：
稀释以后的蛋白质的浓度 c x =(Abs -0.0202)/0.6407
原试样中蛋白质浓度 c=(c x *10)/2
单次测定的标准偏差:
s =
1
)(1
2
--∑=-
n c c
n
i
i
=2075.0060.0135.0222++
=0.12
相对标准偏差： s r =-c
s
×100% =%100126
.212.0⨯=5.5%。