植物基因组DNA提取

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实验一 植物基因组DNA提取

实验一  植物基因组DNA提取

三、材料
玉米叶片
四、设备
移液器,冷冻高速心机,台式高速离
心机,水浴锅,陶瓷研钵,1.5 mL 离心管。
五、试剂
1. 提取缓冲液: 100mmol/L Tris· Cl,20mmol/L
EDTA,500mmol/L NaCl,1.5% SDS。
2. 氯仿:异戊醇:乙醇(80:4:16)。
3. TE缓冲液:10mmol/L Tris· Cl(pH8.0),
DNA的紫外分光光度计检测
原理:核酸在260nm处有最大吸收峰 蛋白质在280nm处有最大吸收峰 盐和小分子在230nm处有最大吸收峰
OD260/OD280>1.7 OD260/OD230>2.0 1OD260=50 μ g/mL DNA
思考题: 1. 如何检测和保证DNA的质量?
2. 基因组提取过程中注意事项有哪些?
植物基因组DNA的提取
一、实验目的: 1. 了解真核生物基因组DNA提取的一般 原理。 2. 掌握DNA提取的方法和步骤。
二、一般原理
提取DNA的一般原理,是将分散好
的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K
的溶液中消化分解蛋白质,再用酚:氯仿:
异戊醇抽提的方法去除蛋白质,得到的
DNA经乙醇沉淀方法进一步纯化。
1mmol/L EDTA(pH8.0)。 4. 其他试剂:液氮,异丙醇,无水乙醇,70%乙醇, 3mol/L NaAc(pH5.2)。
六、操作步骤
1. 在1.5ml离心管中加入1ml提取缓冲液,60℃水浴预热。
2. 取玉米幼叶0.1g,在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入 预热的离心管中,摇动混匀,60℃水浴保温3min,每隔 一分钟摇动一次。 3. 12000rpm 离心1min。 4. 吸取900ul上清液到一个新的1.5ml离心管中,加入600ul 的氯仿:异戊醇:乙醇(80: 4 :16)溶液,颠倒混匀 室温下静置1 min,使水相和有机相分层。 5. 室温下12000rpm离心5 min。

植物基因组DNA的提取及分析

植物基因组DNA的提取及分析

植物基因组DNA的提取及分析一、植物基因组DNA提取的步骤:1.样本的准备:从植物中选择健康和新鲜的组织样本,如叶片、茎、根等。

样本选择要避免含有大量的绒毛、叶色不正常等因素的部位。

2.细胞破碎:将样本放入液氮中迅速冷冻,然后用研钵和研钉对样本进行研磨,直至样本完全破碎。

3.细胞裂解:将研磨的样本加入裂解缓冲液,边振荡边研磨使样本均匀混合。

4.蛋白质去除:使用酚/氯仿提取法去除蛋白质。

加入等体积的酚/氯仿/异丙醇混合液,轻轻混合,然后离心离心管以分离上清和下层。

5.DNA沉淀:将上清转移至新的离心管中,加入等体积的冷乙醇进行DNA沉淀。

静置一段时间后,离心离心管以沉淀DNA。

6.DNA洗涤:将DNA沉淀物用70%乙醇洗涤一至两次,去除残留的盐和其他杂质。

7.DNA溶解:用适量的稳定缓冲液溶解DNA,使其达到一定浓度并避免降解。

二、植物基因组DNA分析的方法:1.PCR扩增:PCR技术可以通过放大DNA片段来研究特定基因或DNA 序列。

首先选择适当的引物,然后将DNA样本与引物、核酸酶、dNTPs等反应液混合,进行多次循环的变温扩增反应。

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳:将PCR扩增的产物与DNA分子量标记物置于聚丙烯酰胺凝胶中,然后进行电泳。

电泳结束后,通过紫外线照射或染色剂染色,观察电泳图谱,可以得到DNA片段的大小和数量。

3.酶切电泳:使用限制性内切酶切割DNA片段,然后将切割后的DNA 片段进行电泳分析。

根据DNA片段的大小和相对迁移速度,可以进行DNA 的分析和比较。

4.南方杂交:将DNA样本与标记了放射性同位素或荧光染料的DNA探针进行杂交反应。

通过探针与目标DNA片段的互补配对,可以检测目标DNA的存在和数量。

5.DNA测序:通过测序技术获得DNA序列信息,可以揭示基因组的结构和功能。

通过以上方法,我们可以提取和分析植物基因组DNA,更好地了解植物基因组的组成和功能,为植物的遗传改良和研究提供重要的信息。

植物基因组DNA的提取及分析

植物基因组DNA的提取及分析

CTAB法提取植物基因组DNA原理这种方法是由Murray 和Thompson(1980)修改而成的简便方法。

CTAB是一种去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中((0.7 mol/L NaCl)是可溶的,当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)时,从溶液中沉淀,通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白、多糖类物质分开。

最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA,而CTAB 溶于乙醇或异丙醇而除去。

(1) 2×CTAB溶液CTAB(W/V)2%Tris-HCl 100mmol/L(pH8.0)EDTA 20mmol/L (pH8.0)NaCl 1.4mol/LPVP 1%灭菌备用。

没灭菌前呈粘稠状,CTAB灭菌后变成清亮的溶液。

(2) 氯仿/异戊醇(24:1)(3) RNaseA 10mg/ml(不用)(4)乙醇或异丙醇(5)β-巯基乙醇(6) 70%乙醇操作程序⏹1.在2mL离心管中,加入500μl的2×CTAB, 65℃预热,用前加入20 μl β-巯基乙醇。

⏹2.嫩的组织材料1-2g,用蒸馏水冲洗干净,再用灭菌ddH2O冲洗2次,放入经液氮预冷的研钵中,加入液氮研磨至粉末状,用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到预热的离心管中,总体积达到1mL混匀后置65℃水浴中保温45-60min,并不时轻轻转动试管。

⏹注:冻存材料直接研磨,绝对不能化冻。

而且粉末应在化冻前转移,否则内源性DNase有可能降解基因组DNA。

⏹3.加等体积的氯仿/异戊醇,轻轻地颠倒混匀,室温下10 000rpm离心10 min,移上清至另一新管中。

4.加入2倍体积的100%乙醇或0.7倍体积异丙醇,会出现絮状沉淀,-20℃放置30 min 或-80℃放置10min ,12 000rpm 离心10-15min 回收DNA 沉淀。

⏹ 5.用70%乙醇清洗沉淀两次,吹干后溶于适量的灭菌ddH2O 或TE 缓冲液中⏹ 6.0.8%琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA 的完整性。

植物基因组DNA的提取与检测

植物基因组DNA的提取与检测

生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日题目:植物基因组DNA的提取与检测一.实验目的:1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理;2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。

二.实验原理1.液氮研磨:液氮能迅速将植物组织温度降到零度以下,使组织细胞变得脆而易碎,此时对植物组织进行研磨,能大大提高研磨的效率,植物组织迅速变为粉末状,增大表面积,提高提取植物DNA的效率。

2.SDS等离子型表面活性剂处理:SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜,使核蛋白解聚,从而使DNA游离出来,且使DNA保持溶解溶液状态,易于分离3.苯酚和氯仿处理:苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质;4.异丙醇处理:上清液中加入异丙醇使DNA沉淀,离心后DNA沉淀于离心管底部,便于移去提取液。

而后将沉淀DNA溶于TE缓冲液中,即得植物基因组DNA溶液;5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定:带电荷的物质,在电场中的趋向运动称为电泳。

DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。

DNA的迁移率(U)的对数与凝胶浓度(T)之间存在反平行线性关系。

因此,要有效地分离不同大小的DNA片生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日段,选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。

三.实验材料及设备1.实验材料:新鲜的植物幼嫩叶片2.实验仪器:(1)研磨皿,10、100、1000μL取液器各一支,台式高速离心机,漩涡器;(2)电泳仪,电泳槽,样品槽模板(梳子),有机玻璃内槽,水平仪,取液器,微波炉,凝胶成像系统。

3.实验试剂:(1)植物DNA提取a.细胞提取液:100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl, 1.25% SDS,1%β-巯基乙醇(去除酚类);b.氯仿:异戊醇(24:1);c.其它试剂:液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液;作用:氯仿可使蛋白质变性,有助于液相与有机相的分离。

试验一植物基因组DNA提取

试验一植物基因组DNA提取

实验一植物基因组DNA提取目的:了解植物细胞的特点,掌握植物基因组DNA分离、纯化的原理。

原理:用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品,提取液中的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)能螯合金属离子,以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA 的降解作用,而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质,从而减少了蛋白质对DNA的污染。

然后用CTAB处理,在特定的盐浓度下,CTAB 使基因组DNA处于溶解状态,而蛋白质仍为沉淀。

经细胞破碎液获得的DNA 粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理,其中酚是高效的蛋白变性剂,可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉,然后用氯仿、异戊醇处理,一方面可达到去蛋白的目的,另一方面还可去除残留的酚。

一、材料植物的根、茎、叶。

二、设备移液管,高速冷冻离心机,台式离心机,水浴锅。

三、试剂1、CTAB或Nacl溶液:4.1克NaCl溶解于80ml水,缓慢加入10克CTAB,加水至100ml。

2、其它试剂:氯仿、异戊醇(24:1),酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),异丙醇,TE,10%SDS,蛋白酶K(20mg/ml),5mol/LNaCl。

四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干,用蒸馏水洗两次,然后用超纯水洗一遍,吸干,剪碎称0.5-0.25克。

2、将所取材料放入预冷的研钵(研钵提前要灭菌),研成粉末后置于7ml离心管内(可以换为将样品放置到7ml离心管中800ulCTAB后用玻棒捣碎)。

3、加入2.4ml 65℃预热的CTAB,充分混合后65℃水浴90min以上,冷却到室温,加入等体积氯仿异戊醇(24:1),轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min,取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀,-20℃度放置20min,4℃离心5000g×5min,去上清。

4、再沉淀中加入0.6ml的65℃CTAB温育30min,待沉淀充分溶解,加入等体积氯仿异戊醇充分混匀,4℃离心6000g×5min,去上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇,轻轻混匀-20℃放置20min。

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。

植物基因组DNA的提取是分子生物学实验中的一项重要步骤,对于研究植物的遗传特性和基因表达具有重要意义。

本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA,为后续分子生物学实验提供基础支持。

在本次实验中,我们选择了小麦叶片作为实验材料,采用CTAB法提取植物基因组DNA,并对提取的DNA进行质量评估。

首先,我们收集了新鲜的小麦叶片样品,并将其置于液氮中迅速冷冻保存,以保持DNA的完整性。

接着,将叶片样品磨成细末状,并加入预冷的CTAB提取液中,进行细胞破裂和DNA的溶解。

随后,通过酚/氯仿提取法分离DNA与蛋白质,最终得到DNA的沉淀物。

在实验过程中,我们注意到了一些关键的操作细节。

首先,样品的冷冻保存和研磨过程需要迅速进行,以防止DNA的降解。

其次,在加入CTAB提取液后,充分混合样品并保持恒温,有助于细胞破裂和DNA的溶解。

最后,在进行DNA的沉淀时,需要注意避免将上清液一同转移,以保证提取得到的DNA纯度。

提取得到的DNA样品经过紫外分光光度计检测,结果显示其纯度较高,吸光比值(A260/A280)约为1.8,符合DNA的纯度要求。

随后,我们进行了琼脂糖凝胶电泳实验,观察到明显的DNA条带,并通过对照DNA分子量标准品的迁移情况,初步评估了提取得到的DNA片段大小。

通过本次实验,我们成功地提取到了小麦叶片样品中的基因组DNA,并对其质量进行了评估。

下一步,我们将利用提取得到的DNA样品,开展进一步的分子生物学实验,包括PCR扩增、基因克隆等,以深入研究小麦的遗传特性和基因表达。

本次实验为我们提供了可靠的DNA样品,为后续实验奠定了坚实的基础。

总之,植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤,本次实验通过CTAB法成功提取了小麦叶片样品中的DNA,并对其进行了质量评估。

提取得到的DNA样品具有较高的纯度和完整性,为后续实验提供了可靠的基础支持。

植物基因组DNA的提取

植物基因组DNA的提取
8、微波炉; 9、电泳仪及电泳槽;
10、紫外检测仪。
五、实验操作方法和步骤 (一) 植物基因组DNA的提取
称取植物幼嫩叶子0.5g 65℃水浴保温1hr, 其间经常轻柔摇动 离心5,000g×5min 置于预热到65℃的研体中, 加少许石英砂;加入预热到 65℃的核酸提取缓冲液3ml 迅速研成匀浆 转移到7ml带盖离心管中
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题: (1)DNA的二级结构和双链易受多种因素(如强酸、强碱、加热、低盐浓度、 有机溶剂、酰胺类、尿素等)的影响引起双链解开,即“变性”,因此抽提时 避免使用变性的条件。 (2)抑制内外源DNase的活力。DNase就象一把刀,它能把大分子的DNA切成碎 片,所以要加以杜绝,现可以通过多种途径来做到这一点:a、低温操作;b、 调节pH,使偏碱(pH8.0);c、抽提液中加表面活性剂;d、加螯合剂(EDTA) 除去酶的铺助因子(Mg2+),使酶活性丧失。 (3)防止化学降解。如过酸或过碱以及其它化学因素,会使DNA降解,一般综 合考虑,取pH8.0左右为宜。 (4)防止物理因素降解。如温度太高或机械张力剪切等,DNA分子特别大,极 易被机械张力拉断,甚至在细管中稍急一些的流动也会使DNA断裂,所以在抽 提过程中要特别注意这一点,操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数,也 不要剧烈摇动。 (5)植物的次生代谢物(主要是胞质内的多酚类或色素类化合物)对核酸提 取有干扰作用。因此,一般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取 DNA的材料,这是因幼嫩的新生组织次生代谢物较少,DNA含量高,且易于破碎, 植物材料最好是新鲜的。
三、实验材料与试剂
1、实验材料 植物基因组DNA样品
2、实验试剂
⑴ ddH2O; ⑵ TE缓冲液(pH 8.0)。 四、实验器材与仪器 1、离心机、离心管(5ml)及离心管架; 2、微量移液器10ul、200ul、1000ul及枪头; 3、紫外分光光度计; 4、石英比色皿(0.5cm光径)或1cm光径的微量石英比色皿(50ul、100ul)。

植物基因组dna提取的原理 -回复

植物基因组dna提取的原理 -回复

植物基因组dna提取的原理-回复植物基因组DNA提取的原理DNA提取是从永久性细胞中分离DNA的过程。

植物基因组DNA提取是分离植物细胞的DNA,以便进行后续的分子生物学实验和研究。

这个过程涉及到多个步骤,包括细胞破碎、DNA的溶解和纯化等。

本文将一步一步回答关于植物基因组DNA提取的原理。

1. 选择植物样本首先,需要选择一个适合的植物样本。

优选的植物样本是新鲜的,健康的细胞组织。

对于不同种类的植物,比如叶片、茎、果实等,DNA的含量和纯度可能有所不同。

因此,在选择样本时应根据具体实验的目的和需求。

2. 组织破碎一旦有了植物样本,接下来的步骤是将细胞破碎,以释放细胞内的DNA。

这可以通过物理或化学方法来实现。

对于植物细胞壁较坚固的样本,比如木材或坚果,可以通过机械磨碎或高速搅拌器来破碎。

而对于柔软的植物组织,如叶片或幼苗,可以使用方法如液氮冷冻和粉碎,或者用热溶液破坏细胞壁。

3. 分离DNA细胞破碎后,需要将DNA与其他组织和细胞碎片分离。

这个步骤通常通过离心和滤液来实现。

首先,使用离心将悬浮在混合物中的固体细胞碎片与溶液分开。

然后,将上清液通过滤纸或滤芯,去除细胞残渣。

得到的上清液中包含了DNA。

4. DNA溶解离心和滤液后,得到的上清液通常含有DNA、RNA、蛋白质和其他杂质。

为了进一步纯化DNA,需要将DNA溶解在合适的缓冲溶液中。

缓冲溶液可以帮助维持DNA的稳定性和活性。

此外,缓冲溶液中还可以加入特定的酶来降解RNA和蛋白质。

5. DNA纯化溶解DNA后,可以使用不同的纯化技术来从溶液中去除RNA、蛋白质和其他杂质。

最常用的方法是酚/氯仿提取法和硅酸盐柱纯化法。

酚/氯仿提取法是通过酚和氯仿的组合来分离DNA、RNA和蛋白质。

而硅酸盐柱纯化法则是通过DNA与硅酸盐在酒精溶液中的亲和性来纯化DNA。

6. DNA质量测定提取的DNA需要进行质量测定,以确定其浓度和纯度。

可以使用光谱法或比色法对DNA进行测定。

植物基因组DNA快速提取方法

植物基因组DNA快速提取方法

植物基因组DNA快速提取方法
步骤:
1.向无菌的1.5ml的EP管中加入400ul 的DNA提取液;
2.用小剪刀剪取少许(肉眼可见即可)拟南芥幼嫩叶片于上述1.5ml
的EP管中(为了防止DNA交叉污染,剪取一片拟南芥组织后需将剪刀用卫生纸擦干净);
3.用无菌的研磨棒将1.5ml的EP管中的叶片研磨至无可见叶片颗粒;
4.12000 RPM室温离心5分钟后取上清液于新的1.5ml的EP管中;
5.向上述EP管中加入400ul的异丙醇轻轻混匀后,室温静止10分
钟;
6.12000 RPM室温离心10分钟后弃上清,并加入400ul的70%的乙
醇;
7.混匀后12000 RPM室温离心5分钟后弃上清,将EP管置于37度
培养箱大约10分钟(晾干酒精);
8.晾干后加入50ul的无菌水溶解基因组DNA;
9.去上述提取好的基因组DNA大约2ul作为模板即可进行后续的
PCR反应;
所需仪器:离心机,1ml和200ul移液枪,无菌研磨棒,无菌的1.5ml 的EP管;卫生纸;
溶液配制:
DNA提取液(500ml)(可长期室温保存)
200mM的Tris盐酸加入100ml 1M 的Tris盐酸存储液(PH:8.0)250mM的NaCl 加入25ml 5M的NaCl存储液
25mM的EDTA 加入25ml 的0.5M的EDTA存储液
0.5%的SDS 加入12.5ml的20%的SDS存储液
选择是难,更何况是心灵选择。

高渐离为了荆轲,他选择了死;马本斋母亲为了革命,她选择了牺牲;祝英台为了真挚爱情,她选择了化蝶。

在这友情、亲情与爱情之间选择,他们是这样做。

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告引言:DNA提取是生物学研究中的基础实验之一,它可以帮助我们了解植物的遗传信息和基因组结构。

本实验旨在通过提取植物基因组DNA,探索DNA的提取方法以及其在植物基因研究中的应用。

材料与方法:1. 实验材料:新鲜植物叶片、细碎器、提取液(含有细胞裂解酶、蛋白酶K和盐酸)、离心管、离心机、冰浴装置、乙醇、磷酸盐缓冲液等。

2. 实验步骤:- 步骤一:取一片新鲜植物叶片,用细碎器将其细碎成细小颗粒。

- 步骤二:将细碎的植物组织转移到离心管中,并加入适量的提取液。

- 步骤三:将离心管放入冰浴装置中,在4℃下反应30分钟。

- 步骤四:离心管中的混合液离心10分钟,将上清液转移到新的离心管中。

- 步骤五:加入等体积的冷乙醇,轻轻摇晃离心管,使DNA沉淀。

- 步骤六:用微量移液器将DNA沉淀转移到新的离心管中。

- 步骤七:加入适量的磷酸盐缓冲液溶解DNA。

结果与讨论:通过上述实验步骤,我们成功地从新鲜植物叶片中提取到了DNA。

下面将对实验结果进行讨论。

首先,实验中使用的提取液含有细胞裂解酶和蛋白酶K。

细胞裂解酶可以破坏细胞膜,使细胞内容物释放出来,而蛋白酶K则能降解蛋白质,避免其对DNA的影响。

这两种酶的作用协同进行,为DNA的提取提供了基础。

其次,实验中的冰浴装置和离心机的使用是为了维持低温和分离混合液中的固体和液体。

低温可以减缓酶的活性,防止DNA的降解。

离心则可以将细胞碎片和其他杂质沉淀下来,使上清液中富含DNA。

最后,实验中的乙醇是用来沉淀DNA的。

加入乙醇后,DNA会与乙醇结合形成白色沉淀物。

通过轻轻摇晃离心管,可以帮助DNA更好地沉淀。

而且,乙醇的加入还能帮助去除杂质,使得提取到的DNA更纯净。

DNA的提取是植物基因研究的重要步骤之一。

通过提取到的DNA,我们可以进行一系列的遗传学研究,如PCR扩增、DNA测序等。

此外,DNA的提取还可以用于植物种质资源的鉴定和保护,以及基因工程的应用等领域。

植物基因组dna的提取、扩增及电泳鉴定

植物基因组dna的提取、扩增及电泳鉴定

从植物DNA中找到奥妙:提取、扩增与电泳鉴定植物基因组的研究是揭示植物遗传特性以及开展植物基础科学研究的重要手段。

在开展植物DNA研究前,需要实施植物基因组DNA的提取、扩增及电泳鉴定等步骤。

以下是生物科技领域的一些灵活和有趣的技巧,可以助您成功进行植物基因组研究。

一、提取植物基因组DNA1. 细胞破碎法植物组织通常蕴含大量的细胞壁,因此破碎细胞壁是提取植物基因组DNA的一个重要步骤。

通过粉碎植物组织,然后用试剂将细胞排出来即可提取发现植物DNA,从而用于后续步骤。

2. CTAB法这是一种常用的植物基因组DNA提取方法,包括使用CTAB(己基三甲基溴化铵)试剂破解细胞壁。

CTAB法需前期准备,但提取到的DNA质量均很高。

二、扩增植物基因组DNAPCR(聚合酶链反应)是一个非常有用的技术,可使选定DNA序列扩增成百万甚至更多的分子,使它们可用于植物基因组研究。

FBP(前向单一引物PCR)可以用于检测植物基因组单个位点的多态性,这可以用于检测种内个体之间的遗传差异。

三、植物基因组DNA电泳鉴定分子量相似的DNA分子可以通过电泳鉴定分离,因此,DNA电泳成为提纯DNA的主要方式,促进扩大研究样本大小范围的同时又允许研究DNA随时间变化的结果。

电泳是植物DNA研究中必不可少的步骤。

考虑到复杂的操作流程和数据分析过程,实施植物基因组研究的关键是建立一个可重复和可靠的实验流程。

尽管一些方法已经得到确定,但基础技术并没有发展完全需要依靠科研者们的努力和实践。

让我们一起研究植物DNA的提取、扩增及电泳鉴定,加深紧密的交流与学习,与令我们感到兴奋的植物DNA世界同在!。

植物基因组 DNA 提取

植物基因组 DNA 提取

植物基因组D NA 提取2ml 离心管提取取新鲜叶片采用C TAB 法,按M urry 等{Murray, 1980 #9}的方法,略加改进,具体操作过程如下:1. 2.0 ml 离心管加入离心管盖大小新鲜叶片2片;2. 液氮充分研磨成粉末,加入900 µL CTAB 缓冲液;3. 65 ℃水浴1小时,期间摇匀3次;4. 置于4℃冰箱冷却至15 ℃以下;5. 加入900 µL25: 24:1 酚/氯仿/异戊醇,上下混匀2-5 分钟,保证样品与氯仿充分混合;6. 12,000 rpm 离心20-30 分钟;7. 取上清液约800 µL,加入预先加好的700 µL 异丙醇的1.5 ml 离心管中,轻轻上下颠倒混匀;8. -20℃冰箱静止30 分钟以上;9. 12,000 rpm 离心15-20 分钟,弃上清夜;10. 75%酒精洗涤沉淀,弃上清液,12,000 rpm 离心15-20 分钟;11. 风干D NA,让酒精挥发干净(4 小时以上或过夜);12. 加入100 µL 的纯水(含终浓度为1%RNase)溶解D NA;13. 放入37 ℃环境中,约60 分钟消化R NA;14. 取2 µL DNA 进行检测。

50ml 离心管提取取新鲜叶片采用C TAB 法,按M urry 等{Murray, 1980 #9}的方法,略加改进,具体操作过程如下:1. 取新鲜叶片在研钵用液氮研磨成粉末;2. 向50ml 离心管里加入叶片粉末,至刚好覆盖住管圆底部,加入20mlCTAB 缓冲液充分混匀;3. 65 ℃水浴1小时,期间摇匀3次;4. 取出,冷却至15 ℃以下;5. 加入20ml 的25: 24:1 酚/氯仿/异戊醇,上下混匀2-5min,保证样品与氯仿充分混合;6. 4500rpm 离心40 分钟;(如不需要抽提第2次,可直接到9步骤)7. 小心吸取上清液至新的50ml 离心管中,加入20ml 的氯仿溶液,混匀2-5min左右8. 4500rpm 离心40 分钟;9. 取上清液于50ml 离心管中,加入等体积的异丙醇,轻轻上下颠倒混匀,此时会看到絮状沉淀;10. -20℃冰箱静止30min 以上;11. 4500rpm 离心40min,弃上清夜;12. 加入5ml 的75%酒精洗涤沉淀,4500 rpm 离心30min,弃上清液;13. 风干D NA,让酒精挥发干净(4 小时以上或过夜);14. 加入约300 µL 的纯水(含终浓度为1%RNase)溶解D NA;15. 放入37 ℃环境中,约60min 消化R NA;16. 取2 µL DNA 进行检测。

7植物基因组DNA提取-CTAB法

7植物基因组DNA提取-CTAB法

1. 2% CTAB抽提缓冲液
CTAB 2g, NaCl 8.18g , EDTA-Na2-2H2O 0.74g, 10ml 1mol/L Tris-HCl(pH8.0), 先用 70ml ddH2O溶解, 再定容至100ml,灭菌, 冷却后 加入0.2% β-巯基乙醇0.2ml。
终浓度: CTAB 2%, NaCl 1.4mol/L(生理平衡 作用), EDTA20mmol/L(螯合离子作用),β-巯基 乙醇 100 mmol/L或PVP(聚乙烯吡咯烷酮 )(降 低氧化酶类的活性,防止酚氧化成醌,有效去除 多酚。)
复习题(判断)
将DNA提取液65度温育20分钟,可以灭活DNase。 ()
在抽提过程中如果水相和有机层的界面不太清楚, 说明其中蛋白质含量较高,可增加氯仿/异戊醇 抽提的次数或适当延长离心的时间。( )
(二)获取程序及原理
1. 破壁破膜,释放染色体
利用液氮对植物组织进行研磨,破碎细胞;然后 加入CTAB缓冲液。
有效制备DNA时要考虑两个原则: 防止和抑制内源 DNase 对 DNA的降解; 尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏。
在液氮冷冻条件下研磨破碎,保证材料在此过程 中DNase无法活动。
高等植物总DNA提取
—— CTAB法AB法
实验类型:验证型
一、实验目的与要求
掌握CTAB法抽提植物DNA的基本原理。 学习并掌握CTAB法抽提植物DNA的技术和方法。
二、实验原理
(一)植物细胞中DNA在哪里?怎样获得?
➢ 植物细胞中的DNA主要存在于细胞核内,称为 核DNA、染色体DNA、核基因组DNA,细胞质中 也有少量DNA,主要分布在线粒体、叶绿体内,称 为核外DNA。 ➢ 细胞内的各种DNA称为总DNA。 ➢ 程序:破壁破膜→去蛋白质→沉淀DNA

植物基因组DNA提取

植物基因组DNA提取

实验一植物基因组DNA提取一、目的与原理DNA是绝大多数生物(除少数RNA病毒外)储存、传递信息的生物大分子。

为了进行DNA 分子的体外重组,必须提取具有天然结构并具有一定长度的DNA大分子。

提取分离DNA大分子,有酚法,氯仿一异丙醇法、酶法、SDS法、CTAB法等方法。

主要操作都是围绕如何尽可能除尽结合蛋白质和多糖等杂质,本实验的目的是介绍CTAB法。

CTAB 法提取基因组DNA 原理:CTAB 是一种非离子去污剂。

CTAB 与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7mM)浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0.1-0.5 mM NaCl)下CTAB-核酸复合物就因浓度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。

经离心弃上清后,CTAB-核酸复合物再用75%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。

二、实验材料、仪器和试剂(一) 实验材料:新鲜的植物叶片(水稻叶子),适量液氮(二) 试剂:(1)EDTA溶液(0.5M、pH=8.0、500 mL)(2)Tris·HCl溶液(1.0 M、pH=8.0、500 mL)(3)2%CTAB抽提液(pH=8.0、500 mL)①称取CTAB粉末10.000 g,NaCl粉末40.908 g,PVP 405.000 g;②0.5M EDTA溶液20 mL;1.0M Tris·Cl溶液50 mL;③定溶至500 mL,121℃高压灭菌后,常温放置,待用。

(4)1×TE缓冲液(pH=8.0、200 mL)(5)RNase(10 mg/mL)1.5 mL离心管(121℃高压灭菌),加入0.015 g RNase,15μL 1M Tris·Cl溶0.001305 gNaCl(几小粒),无菌ddH2O(重蒸水)定容至1.5 mL,100℃煮15min;低温放置,待用。

(RNaseA,Sigma,M=487.5)。

(三)仪器通风橱、天平、离心机、摇床、微量移液器、水浴锅、研钵三、植物组DNA提取步骤1.准备工作。

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告
实验报告:
实验目的:
本实验旨在从植物样品中提取基因组DNA,为后续的分子生物学研究打下基础。

实验原理:
基因组DNA提取是利用化学或物理方法将细胞壁和细胞膜溶解,使基因组DNA裸露并获得。

提取过程包括浸泡、分离、洗涤、溶解等步骤。

具体步骤如下:
取所需植物材料,洗净、切碎样品;
加入提取缓冲液(Tris-HCl pH 8.0,EDTA,SDS,NaCl),使样品充分混合,破坏细胞膜和核膜;
加入蛋白酶K,分解蛋白质,避免DNA被酶水解;
加入异丙醇或氯仿使蛋白质、核酸等组分分层,去除上层杂质;
加入70%乙醇将DNA沉淀,并进行清洗和干燥;
加入TE缓冲液(Tris-HCl pH 8.0, EDTA)溶解DNA。

实验步骤:
取植物样品(番茄、酸枣等)粉碎,加入4ml提取缓冲液,放入离心管中;
加入1μl蛋白酶K,轻轻颠倒离心管使样品混合均匀;
培养30分钟于65°C恒温器内;
加入1ml氯仿并振荡10次后,离心5分钟,将上层液体转移至新的离心管中;
加入1ml异丙醇,并离心5分钟,将上层液体转移至新的离心管中;
加入1ml70%乙醇,并离心5分钟,将上层液体倒掉,留下沉淀;
加入1ml去离子水,将沉淀溶解,得到DNA提取液。

实验结果:
经过以上步骤,成功从植物样品中提取到基因组DNA。

通过分光光度法检测DNA浓度为200 ng/μl,纯度可达到A260/A280=1.8。

结论:
本实验成功从植物样品中提取到基因组DNA,提取效果良好,为后续的分子生物学实验打下基础。

分子实验-植物DNA提取

分子实验-植物DNA提取

0 1 实验原理
1、破壁:在液氮中对植物组织进行研磨,破碎细胞。并减少 研磨过程中各种酶类的作用。
2、溶解:CTAB离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜, 使核蛋白解聚,从而使DNA游离出来。
3、分离:苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性,并使抽提 液分相,因核酸水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去 细胞碎片和大部分蛋白质。
三、主要仪器及耗材: 研钵及研钵棒、水浴锅、移液枪及配套枪头、2.0ml离心管、 离心机、 电子天平、通风橱、冰箱、电泳仪、 凝胶成像系统、超微量核酸蛋白测 定仪系统。
04
PART FORE
操作步骤
0 4 操作步骤
1.配置试剂: (1)10 ml 4% CTAB提取缓冲液
CTAB NaCl 1 M Tris- HCl(pH 8.0) 0.5 mol/L EDTA(pH 8. 0) ddH2O
(二)琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA:
1、将溶液加入样品槽时,勿划破或戳破加样孔,勿带入气泡; 2、使用干净的电泳溶液。
THANKS
心管,使之充分作用15 min。
0 4 操作步骤
10.重复第7步骤。 11.在上清液中,加入2倍体积预冷的无水乙醇,轻柔颠倒,充分混匀,
室温放置 10min。 12.12 000 r/min 离心 5 min,弃上清,用70%的乙醇洗涤沉淀2次。 13.室温挥发乙醇5-10min,加入适量的ddH2O溶解。 14.电泳检测。取3 μL提取的植物总DNA,加入 1μL 6x Loading buffer,
0.4g 1.64g 20ml 0.8ml 7.2ml
(2)10ml 70%乙醇
无水乙醇
7ml

3ml
0 4 操作步骤
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植物基因组DNA提取
一、实验目的
1、掌握植物基因组总DNA的抽提方法和基本原理。

2、学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。

二、实验原理
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。

在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。

十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide,简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)等离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,从而使DNA得以游离出来。

加入苯酚和氯仿等有机溶剂,能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。

上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,即得植物总DNA溶液。

三、实验仪器及试剂
实验仪器:高速离心机;烘箱;冰箱;水浴锅;高压灭菌锅;Nanodrop。

实验试剂:玻璃珠,十二烷基磺酸钠(SDS);三羟甲基氨基甲烷(Tris);乙二胺四乙酸(EDTA);氯化钠;苯酚;氯仿;无水乙醇等。

四、实验步骤
1.SDS提取缓冲液在65℃水浴中预热。

2.将叶片置于1.5ml离心管中,液氮速冻,组织研磨器打样。

3.加入700 l的SDS提取缓冲液,涡旋摇匀。

4.置于65℃的水浴中,每隔10 min轻轻摇动,30 min后取出。

5.加入200 μl KAc溶液,摇匀,放入-20℃冰箱30 min。

6.10000 rpm离心5 min,上清移至新离心管中,12000 rpm离心5 min。

7.上清移至新离心管中,加入700 μl异丙醇,-20℃冰箱30 min。

8.10000 rpm离心5 min,弃上清,加入500 μl 70%乙醇漂洗。

9.弃液体,晾干。

10. DNA纯度与浓度测定(使用nanodrop)。

(1)DNA纯度:DNA的OD260/OD280一般为1.8左右。

OD260/OD280 ≈ 1.8:说明较纯;
OD260/OD280 > 1.8:说明可能有RNA污染;
OD260/OD280 < 1.8:说明可能有蛋白质污染。

五、注意事项
1. 叶片磨得越细越好。

2. 注意移液器的正确使用。

3. 由于植物细胞中含有大量的DNA酶,因此,除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外,第一步的操作应迅速,以免组织解冻,导致细胞裂解,释放出DNA酶,使DNA降解。

六、结果与分析
1.植物DNA提取所用试剂的作用?
2.植物DNA提取的关键步骤有哪些?
3.植物DNA提取后的用途有哪些?
4.从化学结构、化学性质、存在场所以及功能等方面比较DNA和RNA的异同。

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