第十三章双水相萃取

双水相萃取时，盐对带电大分子的分配影响很大。 生物大分子的分配主要决定于离子的种类和各种 离子间的比例。 应用：PEG-Dextran双水相系统中，离子组分的 变化可使不同核酸从一相转移到另一相。 应用：从细胞匀浆中除去核酸和细胞碎片。 系统中加入0.1mol/L氯化钠可使核酸和细胞碎片 转移到下相，产物酶位于上相，分配系数0.1~1.0. 如氯化钠浓度增大到2~5mol/L，几乎所以蛋白质、 酶都转移到下相，上相富含核酸。

2、成相高聚物的分子量
一般原则：同种高聚物分子量减小，将有利于萃 取物在低分子高聚物一侧的分配。 当高聚物浓度、盐浓度、温度等其他条件保持不变时， 被分配的蛋白质易为相系统中低分子量高聚物所吸引， 而易被高分子量高聚物所排斥。
选择相系统时，可改变成相高聚物的分子 量以获得所需的分配系数。
3、电化学分配－盐类的影响：
Ct、Cb：被萃取物 质在上下相的浓度。
分配系数（K）：溶质在两水相间分 配能力的大小。
K=Ct/Cb

K与溶质的浓度和相体积比无关，主要取决于相 系统的性质，被萃取物的表面性质和温度。 分配系统由多种因素决定：粒子大小、疏水性、 表面电荷、粒子或大分子构象等。
三、相图p259
两相区
均相区
系线长度是衡量两相差别的尺度
一、水溶性高聚物相系统
当两种高聚物水溶液相互混合时，按其相 互作用可分为三类： 互不相溶：形成两个水相，两种高聚物分 别富集于上下两相。 复合凝聚：形成两个水相，但两种高聚物 都分配于一相，另一项几乎全部为溶剂水。 完全互溶：形成均相高聚物水溶液。
1.பைடு நூலகம்
2.
3.
二、双水相萃取的基本概念

溶质在两水相间的分配主要由其表面性质决定， 通过在两相间的选择性分配得以分离。
4、生物亲和分配：
成相高聚物偶联生物亲和配基后，对生物大分子的 分配系数影响很显著。
5、疏水效应
一般情况下，蛋白质的表面存在疏水区，疏水区所 占比表面越大，其疏水性越强，不同组分由于其 表面疏水性的差异使得其各自在上下相中产生相 应的分配平衡。
6、温度及其他（通气、搅拌）
作业
名词解释：双水相萃取技术、 影响双水相萃取的因素有哪些？
第十三章 双水相萃取
第一节 概述
传统萃取法：有机溶剂萃取；蛋白质易失活；部 分蛋白质具较强亲水性，不溶于有机溶剂。 双水相萃取法：利用物质在互不相溶的两水相间 分配系数的差异来进行萃取的方法。 主要有两大类： 1、聚合物—聚合物—水系统：聚合物分子在空间 阻碍作用使相互间无法渗透，从而在一定条件下 特点：能保留产物活性，操作可连续化，在去除细胞 分为两相。 碎片方面比过滤、离心方法优越得多。 2、聚合物—无机盐——水系统：主要是由于盐析 应用：酶的中间规模分离，小分子生物活性物质分离。 作用，只要浓度达到一定值之后，也会产生两相。
第三节 影响双水相萃取的因素
形成相系统的高聚物分子量和化学性质、被分配物质的大小 和化学性质对双水相萃取都有直接影响。
1、成相高聚物浓度－界面张力

位于临界点附近的相系统，细胞粒子可完全分 配于上相或下相，此时不存在界面吸附。 一般：高聚物浓度增大，系统组成偏离临界点， K>1或<1。 高聚物浓度增大，界面吸附增强。细胞粒子向 界面转移，可能完全转移至另一相，主要依赖 于它们的表面性质。