VT1000_震荡切片机
膜片钳系统
仪器功能介绍:膜片钳技术广泛应用于神经(脑)科学、心血管科学、药理学、细胞生物学、病理生理学、中医药学、植物细胞生理学、运动生理等多学科领域研究。
中心的膜片钳系统包括:Molelcular DevicesMultiClamp700B电阻反馈式膜片钳和高速电流钳放大器、显微镜、钙离子成像系统、Leica VT1200S全自动振动切片机、灌流给药系统和Sutter公司MP285微操作系统。
仪器主要技术参数:电压钳模式下提供4种反馈电阻(50MΩ、500MΩ、5GΩ、50GΩ),可以测定0.2pA~200nA范围的电流。
电流钳模式下提供3种反馈电阻(50MΩ、500MΩ、5GΩ),可以测定2nA~200nA范围的电流。
双电极膜片钳放大器的探头设计可满足在电化学测量(电流测定法, 伏安法)时输出大的电压(±2V)全细胞膜电容补偿范围:Rf=500M时,Cm1-100pF/Rs400k-1000MRf=50M时,Cm2.5-1000pF/Rs100k-100M串联电阻补偿范围:带宽:0.32-16kHz;校正值:0.4-1000M(500M时),0.1-100M(50M时)电击破膜功能Zap施加到电极的幅度为+1V,时程为0.1-50ms主输出滤波频率范围:4-极Bessel低通滤波(Hz):2Hz-30kHz4-极Butterworth低通滤波(Hz):3Hz-45kHz单极Bessel高通滤波(Hz):DC-300Hz噪声:8-极Bessel滤波(10kHz):0.28-3.0pArms4-极Butterworth滤波(5kHz):0.15-2.0pArms仪器使用注意事项:1.本台仪器需要预约,使用者请与平台相关人员联系,请不要擅自使用仪器。
2.定期清洗holder,用去离子水或者乙醇浸泡并超声,之后自然风干。
3.定期电镀参比电极和记录电极的银丝,但是记录电极的尾端与金属接触,不应该氯化。
Leica Biosystems 振动切片机产品说明书
研究解决方案振动切片机 (VIBRATOMES)无与伦比的切片精振动切片机用于在生理环境下制作无需冷冻或包埋的固定处理组织或新鲜组织的单层或厚切片。
用Leica Biosystems 的VT 系列切片机制作的新鲜组织切片能够保持组织形态、酶活性和细胞活力。
它们的使用也最大限度地减少了伪影、压缩失真、细胞破坏和切片时其它固有的有害影响因素。
这些仪器的应用包括免疫组织化学、不同器官的细胞培养、膜片钳技术的切片、电生理学检测、自由浮动切片和许多其它神经科学应用,无需重复切片,即可获得高质量切片。
为了在新鲜组织切片时保持生理条件,通常使用冷缓冲液,并最大限度地减少刀片的垂直偏差。
在操作期间,刀片横向振动并经标本前移。
影响切片质量的其他参数包括振幅、频率、刀片行进速度和刀片角度。
徕卡VT系列切片机提供了一个完整的产品系列,可提供部分或全部性能参数。
振动切片机VT1200/S 可选配测量装置:VIBROCHECK可通过 Vibrocheck 测量装置测量刀片的垂直偏差。
刀片的调整可将垂直偏差最大限度降至低在 1 μm 内,从而显著增加存活细胞的数量。
研究解决方案SLEICA BIOSYSTEMS 振动切片机参数规格Leica VT1000 S Leica VT1200Leica VT1200 SVibrocheck(对于刀片垂线偏差的测量设备)••全自动切片模式••样本回缩 ••可调节振幅5步可调:0.2;0.4;0.6;0.8;1 mm从 0 至 3 mm ,以 0.05 mm递增从 0 至 3 mm ,以 0.05 mm 递增频率可调:0 至 100 Hz 固定:85 Hz (± 10 %)固定:85 Hz (± 10 %)刀片行进速度0.025 至 2.5 mm/s0.01 至 1.5 mm/s0.01 至 1.5 mm/s 可调切割窗口电子可单独编程的前后位置最大标本尺寸33 x 40 x 15 mm33 x 50 x 20 mm33 x 50 x 20 mm总垂直样本行程15 mm 20 mm 20 mm 缓冲托盘的选择•••冷却选项碎冰或冷冻机碎冰或冷冻机碎冰或冷冻机多种用户设置8 种不同的用户设置LEICA VT1000 S LEICA VT1200LEICA VT1200 SLeica Biosystems 提供多种振动式切片机,这些切片机已与世界各地的知名科学家合作开发。
石蜡包埋机(paraffin embedding station)Leica EG1150H
石蜡包埋机(paraffin embedding station)Leica EG1150H操作方法1打开电源开关,按ON/OFF键后,石蜡包埋机开始进入工作状态。
其中,机器各部分温度均设为60℃。
待蜡箱中的石蜡融化后,开始包埋。
2取出预热好的石蜡包埋框,使蜡箱中的熔蜡流入其中,用加热的镊子将浸蜡后的组织块置于包埋框中,正确定位后,盖好包埋框盖子。
这些工作均在包埋框内石蜡未凝结前完成。
3然后加满熔蜡至包埋框的上边缘,最后把包有组织块的包埋框放置于冷冻台上,使石蜡凝固。
在包埋框上做好标记。
石蜡切片机(rotary microtome)Leica RM2235操作方法1将蜡块按组织大小进行修整,使蜡块的上下两边平行,避免切片时蜡带弯曲。
2将修整好的蜡块固定到切片机的标本夹上,把刀片固定到刀架上并固定刀架。
3调整蜡块的切面,使其与刀口垂直平行。
调整刀架与标本夹头上蜡块的距离,使蜡块平面与刀口靠拢,调整修片厚度为8-10μm,然后右手握转轮手柄,力量均匀地顺时针方向转动,修整蜡块的切面,待组织块完全暴露时停机。
4调整切片厚度。
切片厚度一般为4-10μm。
5正式切片时,左手平握毛笔,右手力量均匀地顺时针转动手柄,蜡带切出来后,用毛笔轻轻拖起,待蜡带有一定长度后暂停。
6右手用镊子轻托蜡带近刀端,左手用毛笔将蜡带轻轻顺刀口挑下,将其正面朝上,平整地摆放好。
7将切好的蜡带分段轻轻放入37℃水浴中,待蜡带完全平展,左手拿经过处理的载玻片呈一定角度入水,右手持镊子轻拖蜡带于载玻片的1/3处,并及时将其拨正后,置于37℃烤片台上,烘烤过夜,使切片贴牢在载玻片上。
8使用完毕后,取下蜡块和刀片,把摇轮盘手柄及时锁住。
振动切片机(vibrating sectioning)Leica VT1000S操作方法1开机打开振动切片机的电源开关。
2上样用配套的螺丝刀将样品台卸下,根据样品大小在样品台中间均匀地涂一层502胶,注意502胶不要涂太多,否则影响粘合效果。
基于电特性的红茶发酵中茶多酚含量快速检测方法
茶叶科学 2021,41(2):251~260Journal of Tea Science 基于电特性的红茶发酵中茶多酚含量快速检测方法王盛琳1,2,杨崇山2,刘中原2,柳善建1*,董春旺2*1. 山东理工大学农业工程与食品科学学院,山东淄博 255000;2. 中国农业科学院茶叶研究所,浙江杭州 310008摘要:茶多酚是红茶品质的重要评价指标。
以工夫红茶发酵在制品为研究对象,利用电特性检测技术与化学计量学方法相结合,构建发酵中茶多酚含量的预测模型。
探讨了发酵中电参数的变化规律,以及不同标准化预处理和变量筛选算法对模型的影响。
结果表明,对茶多酚最敏感的电参数为并联等效电容(Cp)、损耗因子(D)和电抗(X),且集中在低频范围(0.05~0.10 kHz)。
在茶多酚预测模型构建中,Z标准化(Center and zero mean normalization,Zscore)预处理、迭代空间收缩算法混合迭代保留信息变量算法(Variables combination population analysis and iterative retained information variable algorithm,VCPA-IRIV)能有效提升模型性能。
VCPA-IRIV算法将引入变量数由162降低到31,压缩率达80.86%;VCPA-IRIV模型的最低交互验证均方根误差(Root-mean-squares error of calibration,RMSECV)和预测均方根误差(Root-mean-square error of prediction,RMSEP)分别为0.630和1.116,预测集的相关系数(Correlation coefficient of predication set,Rp)和相对标准偏差(Relative percent deviation,RPD)为0.941和2.956,表明电特性检测技术对红茶发酵中茶多酚含量的快速无损检测是可行的。
Tek_PA1000泰克功率计使用手册
电流量程 (1 A 分流器 ) 2.0 Apeak, 1.0 Apeak, 0.4 Apeak, 0.2 Apeak, 0.1 Apeak, 0.04 Apeak, 0.02 Apeak, 0.01 Apeak,
0.004 Apeak, 0.002 Apeak
测量精度 - 电压
电压精度 , Vrms (45 Hz - 850 Hz)1
Байду номын сангаас
电压量程
1000 Vpeak, 500 Vpeak, 200 Vpeak, 100 Vpeak, 50 Vpeak, 20 Vpeak, 5 Vpeak
电流量程 (20 A 分流器 ) 100 Apeak, 50 Apeak, 20 Apeak, 10 Apeak, 5 Apeak, 2 Apeak, 1 Apeak, 0.5 Apeak, 0.2 Apeak, 0.1 Apeak
/power-analyzer-series/pa1000 5
PA1000 功率分析仪
订货信息
PA1000
标配附件 电压线组 特定国家电源线 USB 通讯电缆 文档光盘
校准证明 五年产品保修
推荐附件 BB1000-NA BB1000-EU BB1000-UK BALLAST-CT CL200 CL1200 PA-LEADSET
通过任何仪器通信端口与 PA1000 通信 远程改变仪器设置 从仪器实时传送、查看和保存测量数据,包括波形、 谐波柱状图和曲线 记录一段时间的测量数据 与多台 PA1000 仪器通信,从多台 PA1000 仪器记录 数据 创建公式,计算功率转换效率和其它值 把测量数据导出到 .csv 格式,以导入其它应用 对特定应用测试,使用设置向导界面,只需点击几下 鼠标,即可自动完成仪器设置、数据采集和报告生成 根据 IEC 62301 第二版低功率待机要求自动执行全 面一致性测试 在未来版本中将增加其它自动测试功能
膜片钳技术及其发展概论
长时程增强(LTP)记录技术
(实验方法、数据分析)
刘振伟 博士
膜片钳技术实验问题答疑 膜片钳实验观摩
刘振伟 博士 刘 斌 博士
膜片钳技术及其发展概述
东乐科技有限公司
2010.8.1 南昌大学
主要内容
一、膜片钳技术的原理 二、膜片钳技术的发展历史
三、膜片钳技术的发展概况
四、膜片钳技术的仪器构成
一、膜片钳技术的原理
离子通道简介
离子通道是镶嵌在动、植物细胞膜上的一类特殊蛋白质, 它们负责转运细胞膜内外的各种离子,参与各种细胞功 能,主要包括:
维持细胞静息膜电位,产生动作电位,从而调节细胞的 兴奋性、不应性和传导性; 调节细胞内Ca2+、cAMP、cGMP等第二信使 的浓度, 触发肌肉收缩、腺体分泌、基因表达等一系列细胞生理 反应; 参与神经元的突触传递; 维持细胞的正常体积。
缓缓提起电极
在低 C中
全细胞记录模式 (Whole-cell recording)
外面向外记录模式 (Outside-out recording)
内面向外记录模式 (Inside-out recording)
膜 片 钳 技 术 的 基 本 记 录 模 式
(7)全自动膜片钳技术的崛起 传统膜片钳技术的局限 ☆每次只能记录一个细胞,是一项耗时耗力的工作 ☆不适合在药物开发初期和中期进行大量化合物的筛选 ☆不适合需要记录大量细胞的基础实验研究。 全自动膜片钳技术的出现在很大程度上解决了这些问题, 它不仅通量高,一次能记录几个甚至几十个细胞,而且记 录质量均已、稳定,此外从找细胞、形成封接、破膜等整 个实验操作实现了自动化,免除了这些操作的复杂与困难。 这些优点使得膜片钳技术的工作效率大大提高了!
标乐精密切割机IsoMet1000
Solutions for Materials Preparation, Testing and AnalysisIsoMet™ 1000精密切割机提供完整的金相制样方案及设备·夹具多样性选择:夹具,卡具,旋转夹具·重力进料系统的设计可重复,并能最小化样品损害·当达到预设的切割深度时,切割机能自动关机·旋转夹具能降低切割产生的热量·切割台面的设计使用户能手动切割大部件·可移动冷却液槽能迅速清洗,便于取出切下的样品·切割片磨料进给设计可在切割时快速进给磨料·支持4in, 5in, 6in, 以及7in直径的切割片·4”–7”切割片·HC,LC,和CBN切割片·配重滑动加载系统·重现的切割效果·可快速调整样品切割长度·夹具安装后可调节·触摸屏控制·用户通过LED显示可快速设定切割参数·可移动夹具来减少接触面积和摩擦产生的热量·磨刀夹具·不规则试样夹具金刚石切割片重力进料加载试样简易样品切割控制简单通用夹具·能夹持多种夹具·某种位置即时停止·透明防护罩为操作者提供保护·切割大样品时防护罩可·手动刻盘控制进料磨刀石·切割时可同时磨切割片样品凹槽封闭的切割室磨刀石进料冷却液槽特点和功能提供完整的金相制样方案及设备Visit our website at for more information.配重臂和显微计控制部分位于切割室外,便于操作。
11-2182 T台面切割附件,能够有效地切割或修整生物材料或电子零部件。
12in [305mm]20.25in [514mm]15.5in [394mm]Approx. Weight: 56 lbs [25kg]• 操作简单,按键面板控制重力进料加载• 旋转夹具适用于较大尺寸样品• 可选的台式切割备件• 0.17Hp马达• 100-975转/分(包括适用于切割电路板的6in[152mm]精切切割刀片,加载系统,修整磨刀石,Cool2润滑液,法兰盘和以下夹具:马鞍状夹具,棒材和管件夹具,不规则夹具和刀片)*请参见页脚的区域注释查看产品供应范围IsoMet 100011-2482 紧固件夹具,易于沿纵向切割螺钉。
随动控制器VT1000用户手册-R1
随动控制器VT1000用户手册版次:2021年09月17日第1版前言首先感谢您选择维宏开发的VT1000随动控制器!本手册对VT1000随动控制器的使用做了详细的介绍,包括功能特性、操作、安装说明等。
在安装和使用本产品前,请您仔细阅读本手册,这将有助于您快速熟悉产品,并能更好地使用它。
为持续提供更专业的产品,我们会不断升级产品功能,所提供的资料如有变更,恕不另行通知。
如您在产品使用中有任何疑问,或对我们的产品和服务有任何意见和建议,欢迎随时与我们联系。
目录前言 (1)1 安全须知 (1)1.1 工作环境要求 (1)1.2 注意事项 (1)1.3 安全警示和提示标志 (2)2 产品介绍 (3)2.1 随动控制器VT1000 (3)2.1.1 产品概述 (3)2.1.2 功能介绍 (4)2.1.3 产品优势 (4)2.1.4 技术特性与标准认证 (5)2.1.5 产品外观及布局说明 (5)2.2 前置电容放大器SE001 (10)2.2.1 产品功能描述 (10)2.2.2 产品外观及布局说明 (11)2.3 VT1000主页面介绍 (11)3 设备安装 (13)3.1 检查配件清单 (13)3.2 安装注意事项 (13)3.3 安装随动控制器 (14)3.4 连接随动控制器系统 (14)4 接口说明 (16)4.1 端口定义 (16)4.1.1 电源接口 (16)4.1.2 抱闸与RS485接口 (16)4.1.3 输入/输出接口 (17)4.1.4 伺服驱动器接口 (17)4.1.5 传感器接口 (18)4.2 端口技术参数 (19)5 调试运行 (21)5.1 设置机械参数 (21)5.2 检测设备 (24)5.3 回机械原点 (26)5.4 执行伺服标定 (27)5.4.1 执行伺服标定(页面菜单) (28)5.4.2 执行伺服标定(控制键) (29)5.5 执行电容标定 (29)5.5.1 执行电容标定(页面菜单) (30)5.5.2 执行电容标定(控制键) (33)5.5.3 执行电容标定(IO端口) (34)5.6 检测跟随与上抬 (34)6 功能操作 (36)6.1 设置参数 (36)6.1.1 设置工艺参数 (36)6.1.2 设置跟随模式 (37)6.1.3 设置速度参数 (39)6.1.4 设置手动参数 (40)6.1.5 设置网络参数 (41)6.1.6 设置报警参数 (42)6.1.7 设置随动参数 (43)6.2 查看示波器曲线 (45)6.2.1 查看标定曲线 (45)6.2.2 查看实时电容曲线 (46)6.2.3 查看动态误差曲线 (47)6.3 维护管理 (47)6.3.1 查看版本信息和注册 (48)6.3.2 查看报警信息 (49)6.3.3 重启随动控制器 (50)6.3.4 设置系统信息 (50)6.3.5 管理配置文件 (51)6.3.6 设置厂商参数 (54)7 常见故障处理 (56)7.1 伺服报警 (56)7.3 软限位报警 (57)7.4 碰板报警 (57)7.5 动态误差过大 (58)7.6 编码器方向不匹配 (59)7.7 注册过期 (59)8 附录 (60)8.1 随动控制系统参数说明 (60)8.1.1 标定参数 (60)8.1.2 工艺参数 (60)8.1.3 速度参数 (61)8.1.4 回零参数 (61)8.1.5 手动参数 (61)8.1.6 机械参数 (62)8.1.7 报警参数 (62)8.1.8 随动参数 (63)8.1.9 厂商参数 (63)8.2 选用不同驱动器的说明 (64)8.2.1 松下伺服 (64)8.2.2 安川伺服 (65)8.2.3 台达A系列伺服 (67)8.2.4 台达B2系列伺服 (68)8.2.5 东元伺服 (69)8.2.6 三菱伺服 (70)8.2.7 施耐德伺服 (72)8.2.8 富士伺服 (74)8.2.9 三洋伺服 (75)8.3 输入/输出端口使用说明 (76)1 安全须知在使用本控制系统前,请你仔细阅读本手册后再进行相关操作。
LIFEPAK 1000 自动外部心脏抓挽器说明书
1000 Product BrochureThe right tool at the right time. Every time.The rugged LIFEPAK 1000 defibrillator is an easy-to-use automated external defibrillator (AED) from the leader in defibrillation technology. But it’s also a defibrillator powerful and adaptable enough for professional responders, featuring advanced capabilities that can help improve lifesaving outcomes and help speed the transition of cardiac patients to the next critical level of care.For every trained responder, the opportunity to make a difference.The LIFEPAK 1000 combines the simplicity of an AED with clear guidance, including on-screen and audio prompts with the flexibility of manual mode operation when indicated. Flexible setup options allow on-screen graphics for the basic rescuer or ECG display and access to manual mode for the more advanced rescuer. This powerful AED combines basic guidance with advanced operational control, enabling responders to deliver fast, appropriate treatment.With the LIFEPAK 1000, BLS-trained responders have the device they need, with powerfuldefibrillation—up to 360 joules—long battery life, and a rugged construction that can standup to severe environments.When an ALS-trained professional does step in—either as a first responder or in transition toadvanced care—the touch of a button puts the 1000 into manual override, with greater control over when to analyze and shock. Its ECG capabilities provide critical information to guide your protocol and deliver timely treatment, and the 1000 also stores this vital data for use in post-event review.Simple. Flexible. Powerful.Rugged, vehicle-friendly constructionh Rigorously drop-tested and includesprotective case and bumpers for durabilityin the harshest environments.h Designed to ride along in vehicle withoutdamage from continuous vibrations andother movement.Powerful and easy to useh Loud voice prompts and on-screengraphics provide clear guidance onapplying electrodes and initiating ashock to help ensure user confidence.h Escalating energy to 360 Joules, biphasic,for difficult-to-defibrillate patients.h Provides flexible power options - choose betweena rechargeable or non-rechargeable battery.Clinically advanced, with robust featuresh Exclusive cprMAX™ Technology minimizes CPR interruptions by allowing respondersto perform pre-shock CPR while the AED charges.h Optional 3-lead ECG monitoring available when needed.h I ncludes features such as a CPR countdown timer, ECG capability, a shock counter,and programmable settings – all on a large, easy-to-read LCD screen.Compatibility and connectivityh Compatibility with other LIFEPAK defibrillators and monitors help speed the transition to thenext level of care. Post-event patient and performance data can be easily viewed, analyzed andmanaged with CODE-STAT data review software – helping to target training needs.The right tool can make all the difference.cprMAX TechnologyThe 1000 features our exclusive cprMAX technology, which gives you the flexibility to choose CPR settings that best accommodate your patient and CPR protocol requirements. The pre-shock CPR option allows adjustment of the CPR interval prior to the first shock, minimizing pre-shock pauses pre-shock pauses by allowing providers to continue compressions while the AED charges. LIFEPAK TOUGH™Built for the harsh environments,the LIFEPAK 1000 is the toughest,most durable AED from Stryker.The device itself withstandsrigorous drop-testing fromany angle, and is enclosed ina highly protective case withbumpers. In addition, the 1000has received an IP55 rating—fordust and water resistance.360 JoulesLike every LIFEPAK defibrillatorfrom Stryker, the 1000 can escalateenergy up to 360J. Studies showthat for difficult-to-defibrillatepatients, repeating 200J shocksyields significantly lower VFtermination rates.2,3 And the2010/2015 AHA Guidelines notethat rescuers may consider usingescalating energy up to 360J ifinitial shocks at a lower dose fail.4ALS Hand-offThe LIFEPAK 1000 is simple to use for trained responders, but it also provides an easy,highly compatible transition to ALS care teams. The shock counter on the 1000 gives nextlevel care teams insight into treatment provided. It has an available 3-lead ECG. And its electrodes are the same ones used on LIFEPAK ALS monitors—the brand of choice for more EMS teams across the country.ProCare® ServicesWhen lives are at stake, you need someone who takes a proactive approach to keeping your equipment up and running.Imagine having someone dedicated to managing your equipment, who truly understands the intricacies of emergency care. We’ll make sure your lifesaving devices and back-saving equipment are ready when you need them. With ProCare Service, you can count on trusted experts dedicated to caring for your equipment, so you can focus on what truly matters – saving lives.ProCare plans include:h Stryker original equipment manufacturer partsh Labor and travel expensesh Unlimited repairs to restore equipment to manufacturer specificationsh Responsive support from your field service representativeh Option to include preventive maintenance inspectionsh Option to include battery service and replacementContact your local Stryker representative today to learn more.Flex Financial ProgramOur financial programs provide a range of smart alternatives designed to fit your organization’s needs. We offer flexibility beyond a cash purchase with payment structures that can be customized to meet budgetary needs and help to build long-term financial stability. Contact your Stryker representative for more information.References1. Christenson J, et al. Chest Compression Fraction Determines Survival in Patients with Out-of-HospitalVentricular Fibrillation. Circulation . 2009; 120: 1241-1247.2. Stiell, I., et al. (2007). “The BIPHASIC Trial: A randomized comparison of fixed lower versus escalatinghigher energy levels for defibrillation in out-of-hospital cardiac arrest.” Circulation . 115: 1511-1517.3. Koster RW, et al., Recurrent ventricular fibrillation during advanced life support care of patients withprehospital cardiac arrest. Resuscitation . 2008; 78: 252-257.4. 2010 American Heart Association guidelines for cardiopulmonary resuscitation and emergency cardiaccare science. Circulation . 2010.Emergency CareThis document is intended solely for the use of healthcare professionals. A healthcare professional must always rely on his or her ownprofessional clinical judgment when deciding whether to use a particular product when treating a particular patient. Stryker does notdispense medical advice and recommends that healthcare professionals be trained in the use of any particular product before using it.The information presented is intended to demonstrate Stryker’s product offerings. A healthcare professional must always refer to operatinginstructions for complete directions for use indications, contraindications, warnings, cautions, and potential adverse events, before using anyof Stryker’s products. Products may not be available in all markets because product availability is subject to the regulatory and/or medicalpractices in individual markets. Please contact your representative if you have questions about the availability of Stryker’s products in yourarea. Specifications subject to change without notice.Stryker or its affiliated entities own, use, or have applied for the following trademarks or service marks: CODE-STAT , cprMAX, DT Express,LIFEPAK, LIFE-PATCH, ProCare Service, REDI-PAK, Stryker. 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LIFEPAK 1000 is to be used in AED mode only on patients who are in cardiopulmonary arrest. The patient must be unresponsive, not breathing normally, and showing no signs of circulation. LIFEPAK 1000 may be used with standard defibrillation pads only on adults and children who are 8 years old or more or who weigh more than 25 kg (55 lbs). LIFEPAK 1000 may be used on children who are less than 8 years old or weigh less than 25 kg (55 lbs) with Infant/Child Reduced EnergyDefibrillation Electrodes. ECG MONITORING is for use on conscious and unconscious patients of all ages for the purpose of ECG rhythm recognition and heart rate monitoring. CONTRAINDICATIONS: NoneOPERATOR CONSIDERATIONS: LIFEPAK 1000 requires operator interaction to defibrillate patient. It is intended for use by personnel who are authorized by a physician or medical director and have, at a minimum, the following skills and training: CPR training, defibrillator training equivalent to that recommended by American Heart Association, and training in use of defibrillator. LIFEPAK 1000 is intended for use in hospital and out-of-hospital environments. Manual mode is intended for use by personnel trained in ECG recognition who want to use defibrillator to deliver a shock independent of AED mode. Operator has control over charging and delivery of shocks. ECG mode provides a nondiagnostic ECG display and is intended for use by personnel trained in ECG recognition to allow for rhythm and heart rate monitoring using standard ECG electrodes. When in ECG mode, the defibrillator’s shock capability is disabled; however, LIFEPAK 1000 continues to analyze patient’s ECG for potentially shockable rhythm.GENERAL/DEFIBRILLATION WARNINGS. Shock Hazards: LIFEPAK 1000 delivers up to 360 joules of electrical energy. Unless properly used, this electrical energy may cause serious injury or death. Do not attempt to operate unless thoroughly familiar with operating instructions and function of all controls, indicators, connections, and accessories. • Clear everyone away from contact with patient, bed, and other conductive material before discharging defibrillator. • When discharging defibrillator, do nottouch electrodes. • Do not immerse defibrillator in water or other fluids. Avoid spilling fluids on device or accessories. • Do not disassemble defibrillator or its batteries. Contact authorized service personnel for repair. Possible skin burns and ineffective energy delivery: Dried out or damaged electrodes may cause electrical arcing and patient skin burns during defibrillation. Do not use electrodes that have been removed from foil package for >24 hours or expired electrodes. Check that electrode adhesive is intact and undamaged. Possible misinterpretation of ECG data: Do not analyze in a moving vehicle or move the AED during analysis. Motion artifact may affect ECG signal resulting in inappropriate shock or no shock advised message. Motion detection may delay analysis. Stop vehicle. • Do not touch the patient or the AED during analysis. ExcessiveEnergy Delivery (AED mode): Do not use Pediatric QUIK -COMBO electrodes; these electrodes do not attenuate the energy delivery by LIFEPAK 1000. Implanted electrical devices: Defibrillation may interfere with implanted devices and cause them to malfunction. Place therapy electrodes away from implanted devices if possible. Possible defibrillator shutdown: Always have access to spare, fully-charged, properly maintained battery to avoid possible device shutdown without warning. Replace batterywhen LIFEPAK 1000 displays warning of REPLACE BATTERY . Possible device failure: Do not modify LIFEPAK 1000 or its batteries. Possible explosion, fire, noxious gas or burns: Do not use device in presence of flammable gases or anesthetics. Use care when operating close to oxygen sources. Turn off gas source or move source away from patient during defibrillation. Possible electrical interference or improper device performance: Use only parts and accessories specified by Physio-Control or Stryker. Using other manufacturers’ accessories may affect performance of device or equipment in close proximity and may invalidate safety agency certification. • Defibrillator may cause electromagnetic interference (EMI) especially during charge and energy transfers which may affect performance of equipment operating in close proximity. • Equipment operating in close proximity may emit strong EMI or radio frequency interference (RFI) which could affect performance of device. Recommended distances of equipment provided in Operating Instructions. Safety risk and possible equipment damage. Keep AED away from magnetic resonance imaging (MRI) equipment as it is unsafe. ECG MONITORING (ECG mode) WARNINGS. Possible delay in therapy: Do not attempt to connect 3-wire ECG cable to QUIK -COMBO therapy cable or any other AED. ECG cable is functional only with LIFEPAK 1000. • Possible misinterpretation of ECG data: Frequency response of screen intended only for basic ECG rhythm identification; it does not provide resolution required for pacemaker pulse visibility, accurate measurements, such as QRS duration, and ST segment interpretation. For such purposes, use ECG monitors with appropriate frequency response.GENERAL CAUTION: Possible equipment damage: Before using LIFEPAK 1000 disconnect all equipment that is not defibrillator-protected from patient.U.S. Federal law restricts this device to sale by or on the order of a physician.Please consult Operating Instructions at or call 800.442.1142 for complete list of indications, contraindications, warnings, cautions, potential adverse events, safety and effectiveness data, instructions for use and other important information.。
VT1000-震荡切片机培训课件
Leica VT1000
概述
徕卡振动式刀片切片机 • Leica VT1000S
Leica VT1000
产品说明
运动: • 样本/ 缓冲液槽上下移动 (最大高度 15 mm) • 刀架进样的线性控制从0.025 到2,5 mm/sec • 刀架回缩速度不变,5 mm/sec • 刀架侧向移动幅度(0.2 - 1mm)和频率 (0-100Hz) 可调
VT1000-震荡切片机
Leica VT1000
概述客户需求
• 根据需要,固定或不固定的新鲜组织的切片,厚度在20至500 µm 之间
• 切片时,样本不受化学或热效应的损伤 • 保护抗原和酶 • 在生理条件下操作 • 切片时可以冷却样本 • 快速工作
Leica VT1000
概述建议方案
• 振动式切片机切片: - 福尔马林固定,不需要 - 石蜡或树脂包埋,不需要 - 费时少 - 无化学和热损伤 - 无冷冻假象 - 在生理条件下保护组织
Leica VT1000
产品说明
在生理条件下工作: • 为防止组织被酶和抗原破坏,样本置于加入生理缓冲液的冷槽
中 • 缓冲液可以用以下方法制冷: • 冰块放在内置的冰槽中 • 或 用双层缓冲液槽
Leica VT1000
产品说明
• 样本自动前进,单一或连续模式. • 频率线性调节 (0-100 Hz) • 幅度可调 (0.2 - 1 mm) • 刀架和缓冲液槽可移走. (防止固定剂污染) • 符合人体工程学的无疲劳操作 • 切片厚度总计 • 样本回缩 • 可配放大镜
明和放大镜 • 样本大小: 60x40x15 mm
Leica VT1000
竞争对手
全自动Vibratome 1500 • 15 mm 垂直距离 • 切窗可调 • 全自动仪器 • 无回缩 • 回退速度 2 mm / s • 双槽系统有排液 • 比Vibratome 1000好的照
化学遗传学调控高血压大鼠室旁核促肾上腺皮质激素释放因子神经元对前交感神经元兴奋性的影响
ComparedwithOGD/Rgroup,thecellsurvivalrateofOGD/R+3 MAgroupsignificantlyincreased(P<0 01),andcellsurvivalrateofOGD/R+3 MAgroupalsohadsignificantdifferencecomparedwithOGD/R+OMTgroupandOGD/R+OMT+3 MAgroup.Conclusions OMThasaprotectiveeffectonOGD/R inducedASinjury,whichisrelatedtotheinhibitionofAMPK/mTORsignalingpathwayandtheameliorationofautophagy.Keywords:oxymatrine;OGD/R;astrocytes;autoph agy;oxidativestress;AMPK/mTORsignalingpathway网络出版时间:2023-12-0116:01:56 网络出版地址:https://link.cnki.net/urlid/34.1086.R.20231130.1323.044化学遗传学调控高血压大鼠室旁核促肾上腺皮质激素释放因子神经元对前交感神经元兴奋性的影响马宏宇,郭鑫淇,张 荧,高 璐,杜梓硕,王浩然,马会杰(河北医科大学基础医学院生理学教研室,河北石家庄 050017)doi:10.12360/CPB202304062文献标志码:A文章编号:1001-1978(2023)12-2338-08中国图书分类号:R 332;R322 81;R338 1;R544 1摘要:目的 观察下丘脑室旁核(paraventricularnucleus,PVN)促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin releasingfac tor,CRF)神经元对正常血压WistarKyoto(WKY)大鼠或自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensiverats,SHR)前交感神经元兴奋性的影响,阐明交感中枢过度兴奋的可能神经环路机制。
gc700x切片机说明书
200km
设备尺寸
4400mm×2000mm×2900mm
设备重量
14000kg
·Байду номын сангаас低切割成本
· 低切割时间
· 高线速度高产能
· 高硅片出片率
三、技术参数:
项目
参数
最大工件尺寸
Max. □156mm×L750mm(Max.850mm)
钢线移动方式
单向/双向
最大线速
1800m/min
轴间距
385mm
使用金刚线直径
50~70μm
线张力
4~20N
切割方式
下切割
切割进给速度
0.1~5mm/min
一、设备简介:
gc700x切片机可达国际先进水平,使用电镀金刚线组成线网,采用硅料向下进给方式,伺服同步控制线网进行高速切割。
设备功能:
· 50-70μm超细电镀金刚线切割
· 伺服同步高速切割
· 切割棒料长度750mm(max850mm)
· 线速度1800m/min
· 小轴距切割
二、设备优点:
· 低刀缝损失
徕卡 震动切片机使用手册中文版(VT1200)
3.
3.1 3.1.1 3.2 3.3 3.3.1 4.1 4.1.1 4.2 4.3 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 6.1 6.2 7.1 7.2 8.1
仪器特性 ................................................................................................................................... 10
Leica VT1200 和 VT1200S 2.1 2.2 2.3
重要说明 ..................................................................................................................................... 5
4.
安装 ............................................................................................................................................ 16
VT1200 标准配置 ............................................................................................................................... 16 VT1200S 标准配置............................................................................................................................. 17 包装和安装仪器 ................................................................................................................................ 18 调试仪器前 ......................................................................................................................................... 19
石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别
石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别一、石蜡切片把修好的蜡块装在旋转切片机上,即可进行切片(sectio n)。
切片必须保持切片刀锐利,切片厚度通常为 5〜7um也可根据染色需要切成不同厚度,一般不旋转式切片机超过10um切好的蜡带,放人40C左右的温水中将蜡片展平。
良好的切片应无刀痕、裂痕,切片厚度均一平整。
切片如有上述问题,在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。
为能得到平整无皱褶的组织切片。
可采用两次展片,即先将组织切片漂浮在 30%的乙醇溶液中进行第一次展片,然后将切片捞起,再次放人45〜50C的水浴中进行第二次展片,乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。
此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。
为防止脱片,载玻片要涂黏片剂。
对HE染色的切片, 可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油,但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应,故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基一乙氧基甲硅烷等处理。
二、冰冻切片冰冻切片(fiozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法,其最突出的优点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性,尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。
新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。
为了得到高质量的冰冻切片,选择好的冰冻切片机和配套的一次性刀架是保证切片质量的关键。
组织在切片前需要冰冻,而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶,从而影响抗原定位。
一般认为,冰晶体积大而量少时,影响较小;冰晶体积小而量多时,对组织结构损害较大。
含水量较多的组织中较易出现冰晶。
1 •防止组织中冰晶形成的方法(1)速冻:使组织温度骤降,减少冰晶的形成。
方法包括:1)干冰一丙酮(乙醇)法:将150〜200ml丙酮(无水乙醇)装入小保温杯内,逐渐加入干冰,直至饱和呈黏稠状,再加干冰不再冒泡时,温度可达-70 C,用一小烧杯内装异戊烷约50ml,将此烧杯缓慢置人干冰一丙酮(或无水乙醇)饱和液内,至异戊烷温度-70 C时即可使用。
兽医公共卫生平台动物病理组织切片制作仪器设备技术规格
8、玻片容量≥30片/台,最多可连接两台,收纳玻片数量≥60片;
9、可无需电源供电,与同品牌摊片机共用电源;
10、所选温度设置值会在设置完后被永久保存;
11、设备长度≤280mm,宽度≤200mm,高度≤98mm。
1
兽医公共卫生平台动物病理组织切片制作仪器设备技术规格
序号
设备名称
技术参数及配件
数量
1
全自动HE染色机
1、能进行非滴染式H&E染色,并提供标准化染色方案;
2、可以支持H&E染色,特染,细胞学染色,大玻片染色等多种染色,可以为科研客户提供足够的自由度;
3、每小时染片数量:≥ 600片;具有连续上载功能;
3、带0位的样本定位系统,可X/Y轴调节,8度水平定位样本;
4、废屑槽可拆卸,具有抗静电功能和磁力吸附功能,方便清洁废屑;
5、具备储物盘功能,方便放置常用工具;
6、刀架带有红色护手,确保操作者安全;
7、具备刀架三点锁定及侧向移动功能,可充分利用刀片全长;
8、手轮有2个独立的安全锁定系统;
9、快速转换样本夹,可单手操作。
1、石蜡出口控制夹可旋转,高度可调;
2、石蜡流出手控,也可包埋夹推动控制夹;
3、旋钮精确调节石蜡的流量;
4、宽大的工作台面可供预热超过20个包埋盒模子;
5、2个预热的废蜡槽可拆卸;
6、石蜡槽,工作台面与内置预热槽的温度范围是:50℃-75℃,调节精度1℃;
7、热台温度范围:50℃-75℃,调节精度1℃;
22.2教学用切片机1台
1
2
全自动脱水机
1、可同时处理包埋盒数量200~600个,脱水缸数量1~4个,且可独立运行,满足用户分类处理不同类型、不同大小组织的需求;
石蜡切片机、磨刀机、冷冻单元
样本夹调向 x/y 轴: 8° z 轴: 360°
石蜡切片机 | SLEE 产品目录
|1
CUT 4062
手动旋转式石蜡切片机
最新款的CUT4062手动旋转式石蜡切片机,符合人体工程学原理,操作舒适、便捷;水平方向样品进/退末端有声音提 示;切割精度极高,可切骨头等硬组织,有强大的修片功能和自动回缩功能。广泛应用于石蜡切片、科研、塑料和工 业领域。
2 | SLEE 产品目录 | 轮转式石蜡切片机
CUT 5062
半自动旋转式石蜡切片机
CUT5062是一款半自动旋转式石蜡切片机,广泛应用于石蜡切片、科研、塑料和工业领域。其独特的模块化设计方 便客户选择配件。
■■ 0-300um电动修片功能,任意编程调节 ■■ 样本电动推进/回缩,两种速度可选 ■■ 具有样本头位置记忆功能,2个样本前后位移记忆位置 ■■ 使用标准样本夹最大样本可达50x50 mm,或通用包埋盒固定夹用于普通包埋盒 ■■ 直观的控制面板 ■■ 回缩功能,可调节 ■■ 切片计数器 ■■ 宽敞、内置的切片废弃物托盘 ■■ 多种配件可选
2个样本前后位移记忆位置
2个样本前后位移记忆位置
自动回缩功能
自动回缩功能
自动回缩功能
可选功能
计数器,通用包埋盒固定夹,标准样品固定夹 通用包埋盒固定夹,标准样品固定夹(样品 通用包埋盒固定夹,标准样品固定夹
(样品最大尺寸50x50 mm),薄片固定夹, 最大尺寸50x50mm),薄片固定夹,棱镜组 (样品最大尺寸up50x50 mm), 薄片固定夹
#28407000 #28408000 #28406000
轮转式石蜡切片机 | SLEE 产品目录 | 5
外置控制面板 CUT5062
VT1000变送器用户手册说明书
__VIBTRANSMITTER VT1000USER MANUALVIBTRANSMITTER VT1000T ABLE OF CONTENTSI.Introduction (3)II.General information (4)III.Module description (5)IV.Front panel description (6)V.Installation and usage (6)V.1.Mounting (6)V.2.Galvanic isolation (7)V.3.Electrical connectors (7)V.4.AC Voltage output (8)V.5.Activation (9)VI.Measurement parameter configuration (9)VII.Technical parameters (10)L IST OF FIGURESFigure 1 » VT1000 dimension (5)Figure 2 » Exemplary installation of 3 modules of VT1000 on a DIN rail (6)Figure 3 » VT1000 isolation (7)Figure 4 » VT1000 connectors (7)Figure 5 » VT1000 current loop (8)Figure 6 » VT1000 AC voltage output (8)Figure 7 » Functions of configuration switches (10)EC SYSTEMS – 2 –U SER M ANUAL __I.INTRODUCTIONThe following paragraph does not apply to countries where legal provisions do not comply to the conditions and terms described herein.EC SYSTEMS DOES NOT TAKE ANY LIABILITY CONCERNING THIS MANUAL, WHETHER EXPLICIT NOR IMPLIED (BUT NOT LIMITED TO); NOR CONCERNING A TYPICAL AVERAGE MARKET QUALITY OR THE FITNESS FOR ANY SPECIAL PURPOSE.In some countries and parts of some countries the exclusion and/or limitation of the duration of explicit or implied warranties concerning certain transactions are not allowed. Therefore the declaration above may be not effective in certain areas. This publication may contain erroneous information and/or typographic errors. The contained information is revised in an on-going process. So later editions can contain changes. Products/software described herein may be changed and improved at any time without any obligation to a prior announcement. Any product and company names mentioned herein may be protected trademarks.© COPYRIGHTThe following document is the property of EC Systems, which reserves all the copyrights,patent-pending law and templates included.Copying or other abuse of this document or its parts, or sharing with third parties requiresthe written permission of EC Systems.– 3 –EC SYSTEMSVIBTRANSMITTER VT1000II.GENERAL INFORMATIONVIBTransmitter VT1000 is a universal module for condition monitoring of rotating machinery with constant and variable rotational speed.The features of VT1000 are as follow:∙ICP® (IEPE) standard accelerometer input,∙ 4..20 mA output proportional to signal estimate,∙vibration velocity or acceleration measurement,∙calculation of RMS or PEAK values,∙built-in connector for the AC voltage signal from the vibration sensor (10 V pp),∙DIN rail mounting.The system is a perfect solution for automated protection systems of rotating machines. The device can be integrated with the controller via the 4..20 mA current output. The 10 V pp AC voltage output allows to control the vibration level using a portable vibration analyzer.EC SYSTEMS – 4 –U SER M ANUAL __ III.M ODULE DESCRIPTIONFigure 1 »VT1000 dimensionThe functionalities of the connectors indicated on the Figure 1 are as follow:1.IEPE sensor circuit signalisation:∙open– open-circuit or sensor failure∙short – short-circuit or sensor failure2.Signal estimate signalisation – one can choose form RMS or PEAK values; the choiceis indicated by appropriate diode3.Measured value signalisation – one can choose form velocity or acceleration4.Alarm output indicators5.Keyboard6.Two-digit LED display7.Power supply and sensor connector8. 4..20 mA current loop and relay-outputs connector9.Set of configurable switches (SW2)10.Set of configurable switches (SW1)11.SMB connector for voltage vibration signal– 5 –EC SYSTEMSVIBTRANSMITTER VT1000EC SYSTEMS – 6 –IV. FRONT PANEL DESCRIPTIONMeasurement chain diagnostics for IEPE sensorRed LEDs – indicator of the sensor status: ∙ open – open circuit or sensor failure ∙ short – short circuit or sensor failure Green LEDs:∙ indicator of the selected estimate:o RMS – RMS value of vibration signalo PEAK – maximum value of vibration signal (0-Peak)∙ indicator of the selected measured value:o acc – acceleration o vel – velocity Scaled diode measurement level indicator.V. INSTALLATION AND USAGE V.1. M OUNTINGVIBTransmitter VT1000 module is designed for mounting on 35mm DIN rail in an upright position. Figure 2 presents the 3 modules of VT1000 mounted on a DIN rail.Figure 2 » Exemplary installation of 3 modules of VT1000 on a DIN railU SER M ANUAL __– 7 –EC SYSTEMSV.2. G ALVANIC ISOLATIONVIBTransmitter VT1000 guarantees full galvanic isolation between power supply of the module with the sensor and the current loop in the case of external supply of the 4..20 mA current loop. Figure 3 presents the schematic block of above mentioned isolation.Figure 3 » VT1000 isolationV.3. E LECTRICAL CONNECTORSDescription of the connectors is presented on theFigure 4.Figure 4 » VT1000 connectorsVIBTRANSMITTER VT10004..20 mA current connection is shown on the Figure5.Figure 5 » VT1000 current loopV.4.AC V OLTAGE OUTPUTThe usage of the voltage output of the module should be performed according to Figure 6.Figure 6 » VT1000 AC voltage outputEC SYSTEMS – 8 –U SER M ANUAL __V.5.A CTIVATIONAfter connecting the power, the VT1000 module enters into testing procedure. Subsequently all LEDs will flash for a short period of time. If everything is operating properly, then LED is pulsing with a frequency of approximately 1 Hz. Once the testing procedure is over, the device is ready to operate. If an error of a sensor circuit is detected, then corresponding LED will lit.VI.MEASUREMENT PARAMETER CONFIGURATIONMeasurement parameter configuration is set by proper set-up of configuration switches SW1 and SW2. Description of switches SW1 and SW2 is presented in the following table and Figure 7:SW1SW2S1: S1:– 9 –EC SYSTEMSVIBTRANSMITTER VT1000Figure 7 » Functions of configuration switchesExample:Monitoring of the RMS of the vibration signal velocity, using 3 Hz high pass filter and 10 KHz low pass filter, for 100 mm/s range and internal power loop. The following configuration of the switches must be set:WARNING!The set-up of the switches configuration should be done on a switched off device. If the set-up was done on an operating module, it needs to be restarted in order to activate the new configuration.VII.TECHNICAL PARAMETERSThe technical parameters of the VT1000 module are as follow:∙power supply ....................................................................................24 VDC (18..36 VDC) ∙power consumption ................................................................................................. <4 WEC SYSTEMS – 10 –U SER M ANUAL __∙sensor type .................................................................... IEPE, 100 mV/g, 4,7 mA @ 20 V ∙measured values ............................................................................. v elocity, acceleration ∙types of estimates ....................................................................................... RMS, 0-PEAK ∙low-pass filter .................................................................. 1/10 kHz, 24 dB/oct., 4th order ∙high-pass filter .................................................................. 3/10 Hz, 12 dB/oct., 2nd order ∙isolation ......................................................................... 1 kVDC (2 or 3 kVDC optionally) ∙current output .......................................................... 2 or 3 wired 4..20 mA current loop ∙voltage output ......................................................................................... A C, 10 V pp max. ∙operating temperature .................................................................................... -20..+60°C ∙operating relative humidity ................................................................................ <95% RH ∙protection class.......................................................................................................... I P40 ∙dimensions ....................................................................... 23 x 100 x 120 mm (W x H x L) ∙weight ...................................................................................................................... 150 g ∙mounting .................................................................................................. 35 mm DIN rail– 11 –EC SYSTEMSVIBTRANSMITTER VT1000 EC SYSTEMS – 12 –EC Systems Sp. z o.o.Lublańska 3431-476 KrakowPOLANDPhone: +48 12 627 77 40 Sales: +48 12 627 77 23 Fax:+48 12 627 77 11 e-mail:******************。
成人神经干细胞脑内移植后突触形成和电生理功能的实验研究
成人神经干细胞脑内移植后突触形成和电生理功能的实验研究第38卷第2期第177页2009年4月华中科技大学学报(医学版)ActaMedUnivSciTechnolHuazhongV01.38No.2P.177Apr.2009成人神经干细胞脑内移植后突触形成和电生理功能的实验研究*杨林周辉王宇倩.朱剑虹.华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科,武汉430022温州医学院附属第二医院神经外科,温州325000.复旦大学附属华山医院神经外科,上海200040摘要目的研究成人神经干细胞(NSCs)脑内移植后新生神经元突触形成和电生理功能.方法从开放性脑损伤患者外露的脑组织中分离培养出成人NSCs,利用病毒基因转移的方法对成人NSCs进行标记.将rAA V—LacZ标记的成人NSCs进行裸鼠脑内移植后行免疫电镜检查,观察新生神经元突触形成情况;重组GFP逆转录病毒标记成人NSCs裸鼠脑内移植后进行脑片的细胞电生理检测.结果免疫电镜检查表明成人NSCs移植后分化的神经元与宿主细胞之间形成突触联系,膜片钳检测显示由成人NSCs分化而来的GFP阳性神经元具有自发的动作电位,全细胞膜片钳模式下可记录到Na,K电流.结论成人NSCs移植后可以与宿主细胞形成突触联系,其分化的神经元细胞具有电生理功能.关键词成人神经干细胞;移植;膜片钳;免疫电镜中图法分类号R329.2DoI:10.3870/j.issn.1672—0741.2009.02.010 SynapseFormationandElectricityPhysiology.ofAdultHumanNeuralStemCells FollowingTransplantatiOnY angLin,ZhouHui,WangY uqian.etalDepartmentofNeurosurgery,UnionHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityof ScienceandTechnology,Wuhan4300222DepartmentofNeurosurgery,theSecondA{{tliatedHospitalofWenzhouMedicalCollege,Wenzhou 325000.DepartmentofNeurosurgery,HuashanHospital,FudanUniversity,Shanghai200040 AbstractObjectiveToinvestigatesynapsefo-rmationandelectricityphysiologyfollowingtransplantationofadulthumanneuralstemcells(NSCs).MethodsAdulthumanNSCswereisolatedandpropagatedfromexposedbrain tissueofpatientswithopenbraininiury,andwerelabeledbyrAA V-mediatedLaeZgenetransductionandretrovirus-mediated greenfluorescentprotein(GFP)transduction.ThesynapticstructureandelectricityphysiologyofNSCswereinvestigatedfollow ingtransplantati0n2months1ater.ResultsSynapticcontactswereformedingraftedcellsderivedfromadulthumanNSCswit hhostbraincellsofnudemice.AndthoseGFPpositivecellsfromadulthumanNSCsprocessedspontaneouselectricityactiv ities,andNa+,Kcur—rentswererecordedbywholecellpatchclampinGFPpositivecells.ConclusionTheelectr0physiologica lpropertiesoftheneu—rODSderivedfromGFP—labeledadulthumanNSCssuggestedthatthesenewgeneratedneuronsweref unctionalinsomecertainaspects.Keywordsadulthumanneuralstemcells;transp1antation;patchclamp;immunohistochemicalelectron microscopy动物实验研究表明移植神经干细胞(nerualstemcells,NSCs)可以有效地改善脑损伤动物的神经行为和运动功能,具有广泛的应用前景[1].NSCs移植后发挥功能作用的机制可能与移植NSCs分泌的神经营养因子对宿主脑细胞的营养作用,以及NSCs分化的新生神经元细胞的替代作用等有关.近年来在NSCs的电生理功能研究方面取得了显着进展,动物体内,体外实验都证实由NSCs生成国家自然科学基金资助项目(No.30270434)杨林,1969年生,副教授,副主任医师,E-mail:linyang@mail.的新生神经元具有电生理功能.然而成人NSCs在大脑内分化形成的新生神经元能否与周围的细胞建立突触联系,并整合到神经环路中去,而且具有电生理功能尚不清楚.在本研究中,我们对成人NSCs脑内移植后分化的新生神经元突触形成和电生理功能进行了初步研究.1材料与方法1.1主要仪器和材料雄性Balb/C裸小鼠由中科院上海分院实验动物中心提供;细胞培养用仪器:CO恒温培养箱178?华中科技大学学报(医学版)2009年4月第38卷第2期(Heraeus公司),倒置相差显微镜,荧光显微镜(Ni—kon公司),一70℃冰箱(Heraeus公司),低温高速离心机(ThermoHybaid3590美国);细胞培养试齐0:DMEM/F12,Neurobasal,hEGF,hbFGF,N2 supplement,B27supplement购自GibcoBRL公司.膜片钳实验中所用的主要仪器:微电极拉制仪(PB-7,日本Narishige公司),膜片钳放大器(Ax—onclamp200B,美国AxonInstrument公司),振动切片机(LeicaVT1000M,德国),pCLAMP8.0分析软件(美国AxonInstrument公司).透射电子显微镜为PhilipsCM120型.1.2成人NSCs的分离和培养成人NSCs的培养参见文献[4].复旦大学附属华山医院神经外科收治的开放性脑损伤患者在伤后6h进行清创,收集暴露的脑组织置于预冷的0.01mol/LPBS溶液中,反复用PBS冲洗去除血块和污物.吸管吹打至单细胞悬液,用含1OFBS,1L一谷氨酰胺,1B27,2N.和20ng/mlEGF,bFGF的DMEM/F12培养液(GibeoBRL公司)调整细胞密度为5x10/ml,接种于培养瓶中,置于37.C,5CO细胞培养箱中悬浮培养,48h后更换新鲜培养液.根据细胞生长速度和培养液的pH变化,3~4d半量更换培养液,7~10d传代1次.单细胞克隆采用有限稀释法,将传代后的神经球悬液转移至离心管中,机械消化直至大部分呈单细胞,然后转移至96孔板中,在培养孑L中观察并选择单个细胞进行扩增培养.1.3病毒介导的NSCs基因转导1.3.1重组腺病毒相关病毒(rAA V)介导的基因转移rAA V—LacZ表达载体由美国哈佛大学基因治疗中心HelenL.Zhang博士提供.克隆培养的成人NSCs以3×10/:fL接种于6孔板中,每孔中加入2OlrAA V—LacZ,感染12h后更换为新鲜的神经干细胞培养液,继续进行传代培养,经过转染LacZ基因的成人NSCs可以表达J3一半乳糖苷酶,移植后2个月行免疫电镜检测.1.3.2GFP重组逆转录病毒标记成人NSCs方法参见文献[5].取1ml病毒液和3ml的NSCs培养液,加人多聚季胺(polybrene)使其终浓度为8ng/ml,形成病毒感染鸡尾酒混合剂.取(2~5)x1O的成人NSCs,500g离心5min,弃上清液;加入病毒感染鸡尾酒混合剂,轻轻吹打重悬细胞,置于37℃,5%CO培养箱中悬浮培养,24h后更换为新鲜的神经干细胞培养液.1.4成人NSCs裸小鼠脑内移植雄性Balb/C裸小鼠体重20~25g,移植时实验室温度保持在20~25℃,同一对照实验选择相同性别小鼠.氯胺酮(Ketamine,50mg/kg)+噻拉嗪(Rompun,25mg/kg)腹腔注射麻醉.将小鼠固定于立体定向仪上,定位为中线右侧1mm,冠状缝后1mm,钻dqL,以颅骨外板高度为零点用微量注射器(Hamilton)垂直刺入脑内,进针深度为2mm,靠近海马.匀速缓慢注人成人NSCs(分别用GFP和LacZ标记)3Fl(5x10/肛1),注入分3点,分别为穿刺点前,后,下1mm处,每点11,3min内完成,留针5min后缓慢拔针.缝合头皮切口.实验结束小鼠在电热垫上保温复苏,回笼饲养.1.5免疫电子显微镜观察突触形成方法参见文献[6—7].取移植灶区脑组织在2多聚甲醛和0.25戊二醛液中固定4h,振动切片机切片,厚约5O~100Ⅱm;免疫组织化学检测经LacZ基因标记的移植细胞,具体过程如下:切片在3过氧化氢+1O甲醇中浸泡30min阻断内源性过氧化物酶活性,每一步骤后均用0.O1mol/LPBS反复冲洗,在1:2O山羊血清中浸泡1h抑制非特异性抗体结合,小鼠抗G一半乳糖苷酶抗体(1:100,Sigma公司)4℃冰箱孵育过夜,羊抗小鼠IgG—HRP(1:200,华美公司)室温下1h,DAB显色.在显微镜下找到阳性细胞区域,切片送电镜检查.在电镜下检查移植细胞和宿主神经细胞之间的突触形成情况.1.6成人NSCs分化的神经元电生理特征检测裸小鼠移植后2个月,腹腔注射水合氯醛麻醉后在冰上快速断头,完整取出裸小鼠全脑并置于4℃人工脑脊液(124mmol/LNaC1,5mmol/LKC1,1.3mmol/LMgC12,0.1mmol/LCaC12,26retool/LNaHCO3,10mmol/LD-glucose,50U/ml青霉素和50~g/ml链霉素)中持续通气(950.,5C0)1~2min,在冰台上显微镜下用刀片快速切选取移植灶附近的脑组织作为检测标本,振动切片机制作200,~,400”m厚的冠状脑片,然后将切好的脑片转移到含有人工脑脊液的浴槽中,室温下平衡1h.微电极(6~8MQ)由硼化玻璃拉制,并充以电极内液(140mmol/L葡萄糖酸钾,11mmol/LEGTA,10mmol/LHEPES,35mmol/LKOH和1mmol/LCaC1,PH8.2,300mOsin).在室温下采用常规高阻抗封接,进行全细胞记录.荧光显微镜下寻找到GFP标记的细胞,分别利用电压钳位,电流钳位记录细胞的电流和电压变化.进行全细胞膜片钳检杨林等.成人神经干细胞脑内移植后突触形成和电生理功能的实验研究?179? 测时,细胞钳制在一8OmV,通过去极化脉冲发射器(100ms)以10mV的阶梯去极化电压脉冲诱发刺激GFP阳性细胞以记录细胞的Na,K电流和动作电位(Actionpotentials,APs),所记录的信号输入膜片钳放大器.记录信号的监测,存储及分析处理由AXON公司的pCLAMP软件完成.2结果2.1成人NSCs脑内移植后分化的新生神经元突触形成情况转染LacZ基因的神经干细胞可以表达J3一半乳糖苷酶,使用X—gal染色后细胞呈蓝黑色.免疫组化检测显示,成人NSCs裸小鼠脑内移植后2个月标记LacZ基因的细胞呈B一半乳糖苷酶染色阳性(DAB显色)(图1),对照组没有发现有DAB显色细胞.透射电镜检查(不染铅,铀)发现LacZ标记的神经元可和宿主细胞形成突触联系(图2).图1脑内移植的LacZ基因标记NSCs呈0一半乳糖苷酶染色阳性(DAB显色,×lOO)图2电镜下观察NSCs分化的神经元与宿主细胞之间的突触联系(箭头所示)2.2成人NSCs脑内移植后分化的新生神经元电生理功能在成人NSCs裸小鼠脑内移植后2个月进行了移植区脑片的膜片钳检测,在荧光显微镜下观察寻找到发出绿色荧光的细胞,记录到GFP阳性细胞的自发动作电位(图3).在实验中观察到电压依赖性Na通道在一70mV即可被激活导致快速的内向Na电流,随着K通道的开放相继出现瞬时外向K电流和持续外向K电流(图4).而另一GFP阳性细胞在电压钳制在一40mV时Na通道才被激活开放,并相继出现瞬时外向K电流和持续外向K电流.图3脑片中GFP阳性细胞的自发动作电位A:内向Na..电流;B:瞬时外向K电流;C:持续外向K电流图4裸鼠移植区脑片中GFP阳性细胞的Na,K电流3讨论目前有关神经干细胞的研究已经从单纯的神经干细胞的体外生物学特性研究转移到对神经干细胞的体内生物学的研究,关于神经干细胞是如何参与神经网络的结构与功能更是研究的热点.在体外实验条件下可以记录到由成年小鼠NSCs产生的新生神经元的兴奋性和抑制性突触后电流,而且这些新生神经元受到刺激后可以产生动作电位l_2].V an18O?华中科技大学学报(医学版)2009年4月第38卷第2期Praag等口通过电生理研究证实了由内源性海马前体细胞分化而来的新生颗粒细胞具有与成熟颗粒样神经元相似或相同的电生理特性,这些细胞具有可重复的动作电位和自发性突触后电流.而且由NSCs分化的神经元还能对邻近神经元的刺激起反应_8],并且能够与周围的神经细胞产生兴奋性和抑制性的突触联系].因而移植的NSCs可以参与海马的正常发育,并且能够功能性地整合到宿主的神经环路中.上述研究充分证明了由NSCs分化而来的神经元具有电生理特征,移植的NSCs分化后可以参与海马的正常发育,并且能够整合到宿主的神经环路中.但从人脑中分离的NSCs移植后能否与宿主组织形成有效的突触联系,同时也具有电生理功能呢? 我们通过病毒基因转移的方法将这些体外培养的成人NSCs标记LacZ基因,然后进行裸小鼠立体定向脑内移植.2个月后进行移植区脑组织的免疫电子显微镜检查.通过脑组织切片的LacZ免疫组织化学染色,在显微镜下找到LacZ阳性细胞,然后在电子显微镜下对LacZ阳性细胞和宿主细胞进行超微结构分析.结果表明我们移植的成人NSCs可以与裸小鼠宿主细胞形成突触联系.我们在实验中同时利用逆转录病毒基因转移的方法对成人NSCs进行了GFP标记,裸小鼠脑内移植后2个月进行移植细胞的膜片钳检测.在荧光显微镜下观察寻找到带有绿色荧光的细胞,并记录了细胞的电生理活动.在没有给予细胞外刺激的情况下,成人NSCs可以产生自发动作电位,具有活细胞的特征.在电压钳全细胞方式下可以记录到GFP阳性细胞的Na,K电流.GFP阳性细胞出现Na,K电流的刺激阈值不同可能是由于细胞的Na..,K通道开放的程度不同所致.其原因可能是移植细胞对于宿主细胞的刺激有着不同的反应_8]. 我们认为脑内移植后成人NSCs分化的神经元可能与宿主细胞建立了突触后的联系Lg].本研究首次从突触形成和电生理功能的角度证实了成人NSCs裸小鼠脑内移植后可以分化为有功能的神经元,这从一定程度上揭示了成人NSCs移植后在脑内形成神经元并发挥功能效应的结构和电生理基础,为将来将成人NSCs应用于脑损伤的临床治疗提供了理论依据和实践指导[1o3.(致谢:感谢美国哈佛大学基因治疗中心He|enL.Zhang博士为本研究提供rAA V—LacZ表达载体.)参考文献LINDV ALLO,KOKAIAZ,MARTINEZ—SERRANOA.St—emcelltherapyforhumanneurodegenerativedisorders—how tomakeitwork口].NatMed,2004,10(Supp1.):$42~50. SONGHJ,STEVENSCF,GAGEFH.Neuralstemcells fromadulthippocampusdevelopessentialpropertiesoffunc—tiona1CNSneurons[J].NatNeurosci,2002,5(5):438~445.V ANPRAAGH,SCHINDERAF,CHRISTIEBR,eta1. Functionalneurogenesisintheadulthippocampus[J].Na ture,2002,415(6875):1030~1034.朱剑虹,周良辅,张丽,等.人神经干细胞的分离,克隆和动物脑内移植及转基因表达[J].中国神经精神疾病杂志.2001. 17(3):183—185.杨林,朱剑虹,王宇倩.绿色荧光蛋白标记神经干细胞的体外研究[J].中华实验外科杂志,2004,21(10):1236—1238. SEKERK0V AG,KA TARoV AZ,ingGAD—lacZtransgeniemiceasamarkersystemforhomotopictrans—plantation[-J’].BrainResB rainResProtoc,1998,3(1):107—118.SEKERK0V AG,KA TAR0V AZ,J0OF,eta1.Visualization ofbeta—galactosidasebyenzymeandimmunohistochemistryin theolfactorybulboftransgenicmicecarryingtheLacZtrans—gene[J].JHistochemCytochem,1997,45(8):1147—1155. AUERBACHJM,EIDENMV,MCKAYRD.Transplanted CNSstemcellsformfunctionalsynapsesinvivo[J].EurJ Neurosci,2000,12(5):l696—1704.ENGLUNDU,BJORKLUNDA,WICTORINK,etal_Graf—tedneuralsterncellsdevelopintofunctionalpyramidalneu—ronsandintegrateintohostcorticalcircuitry[J~.ProcNatl AcadSciUSA,2002,99(26):17089l7094.Y ANGL,ZHUJ.Adultneuralstemcells—functionalpoten—tialandtherapeuticapplicati0ns[J].ProgNatlSci,2004,14 (2):97-104.(2008—0卜22收稿)。
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在生理条件下工作: • 为防止组织被酶和抗原破坏,样本置于加入生理缓冲液的冷槽 中 • 缓冲液可以用以下方法制冷: • 冰块放在内置的冰槽中 • 或 用双层缓冲液槽
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